PLoS ONE: MUC4 and MUC1 raiška adenokarcinoma skrandžio koreliuoja su laivo invazija ir limfmazgiuose metastazių: An Imunohistocheminiais studija ankstyvosios Skrandžio Cancer

Anotacija

Mes jau anksčiau pranešė, kad MUC4 išraiška yra prastas prognostinis faktorius įvairiose karcinomų. Mūsų Ankstesnis tyrimas taip pat parodė, kad MUC1 išraiška skrandžio vėžio, įskaitant pradžioje ir stadijose yra prastas prognostinis faktorius. Šioje studijoje, ekspresijos profilius MUC4 ir MUC1 išnagrinėjo imunohistocheminis (IHC) ir įlašinkite du anti-MUC4 monokloninius antikūnus (MAB), 8G7 ir 1G8, ir anti-MUC1 MA, DF3 104 pašalintas skrandis egzempliorių pradžioje skrandžio adenokarcinoma su gleivine invazija (pT1b2), įskaitant 197 histologinių potipio pažeidimų. Prieš IHC tyrimo žmogaus egzempliorių, mes įvertino dviejų MA Imunoblotingo metodu ir IHC dviejų MUC4 mRNR išreiškė skrandžio vėžio ląstelių linijas specifiką. MA, 8G7 reagavo aiškiai, o MA, 1G8 neparodė reaktyvumą abiem imunoblotingo ar IHC. Atsižvelgiant į tai, skrandžio vėžio IHC, ekspresijos rodikliai MUC4 /8G7 aptiktų MAB 8G7, MUC4 /1G8 aptiktų MAB 1G8 ir MUC1 /DF3 aptiktų MAB DF3 gerai diferencijuotų tipų (70%, 38/54; 67%, 36/54; 52%, 28/54), buvo gerokai didesnis nei tų prastai diferencijuotų tipų (18%, 10/55; 36%, 20/55; 13%, 7/55) ( P
< 0,0001; P
= 0,0021 P
< 0,0001), atitinkamai. MUC4 /8G7 išraiška buvo susijęs su limfinės invazijos (r = 0,304, P
= 0,033). Kita vertus, MUC4 /1G8 išraiška buvo susijęs su limfinės invazijos (r = 0.395, P
= 0,001) ir limfmazgių metastazių (r = 0.296, P
= 0,045). MUC1 /DF3 išraiška buvo susijęs su limfinės invazijos (r = 0,357, P
= 0,032) ir venų invazijos (r = 0,377, P
= 0,024). Galima daryti išvadą, kad MUC4 išraiška taip pat MUC1 pradžioje skrandžio vėžio yra naudinga žymeklis prognozuoja prastus prognozinius veiksnius, susijusius su laivo invazija

nurodomoji dalis:. Tamura Y Higashi, M, Kitamoto S Yokoyama S Osako M, Horinouchi, M, ir kt., (2012) MUC4 ir MUC1 raiška adenokarcinoma skrandžio koreliuoja su laivo invazija ir limfmazgiuose metastazių: An Imunohistocheminiais studija ankstyvosios skrandžio vėžio. PLoS vieną iš 7 (11): e49251. Doi: 10,1371 /journal.pone.0049251

redaktorius: Fazlul H. Sarkar Wayne State University School of Medicine, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo rugpjūčio 17, 2012 m Priėmė: Balandis 5, 2012 m Paskelbta: Lapkričio 13, 2012

Visos teisės saugomos: © 2012 Tamura et al. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis tyrimas buvo iš dalies remiamą Princes Takamatsu vėžio tyrimų fondo S. Yonezawa; Dotacijos-in-pagalbos moksliniams tyrimams moksliniais tyrimais (B) 23390085 S. Yonezawa; Moksliniai tyrimai (C) 21.590.399 M. Higashi; Jauni mokslininkai (B) 24701008 S. Yokoyama; Moksliniai tyrimai prioritetinėse srityse 239349 S. Kitamoto (JSP stipendijų) iš Švietimo, mokslo, sporto, kultūros ir technologijų, Japonijoje ministerijos; Kasos Mokslinių tyrimų fondas Japonijoje S. Yokoyama; ir Kodama memorialinis fondas, Japonijos M. Higashi. S. Batra yra iš dalies remiamą National Institutes of Health dotacijos (CA78590, CA163120, CA133944 ir CA111294). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį. gauta jokios papildomos išorinės finansavimas šiam tyrimui

konkuruojančių interesų.. Autoriai deklaruoja, kad jie neturi interesų konflikto dėl į tyrimo darbo

Įvadas

Skrandžio vėžys yra ketvirtoji dažniausia vėžio visame pasaulyje ir daugiau nei 90% skrandžio vėžio yra adenokarcinomos [1]. Neseniai Japonijoje, ankstyvas nustatymas pagal įprastinių endoskopinių tyrimų egzaminą Gastroenterologijos klinikos lėmė tikslius diagnozes ir efektyvi chirurginė ar endoskopinius gydymo, todėl santykinai geriau prognozė. Atsižvelgiant į 11,261 pacientų analizės skrandžio vėžio gydoma skrandžio rezekcijos, The TNM 5 metų išgyvenamumas IA etape buvo 91,8%, o už scenos IB išgyvenamumas buvo 84,6% [2]. Dėl pradžioje skrandžio vėžio, endoskopinis Po gleivine skrodimo (ESD) yra pirmasis pasirinkimas gydymas Japonijoje, bet papildomo operacijos kriterijai, įskaitant kriterijus limfmazgių skrodimo po ESD vis dar prieštaringai [3].

Mūsų serija iš imunohistocheminiu (IHC) tyrimai, mucino ekspresiją įvairių žmogaus navikų parodė, kad MUC1 muciną (PAN-epitelio membranos-susijęs muciną) išraiška yra susijusi su apie navikų ir prastos rezultatus pacientų invazinio proliferacijos, kadangi išraiškos MUC2 mucino (žarnyno tipas sekrecijos mucino) yra susijęs su iš navikų ir pacientų ne invazinės platinimu palankios rezultatus [4], [5]. Mūsų Ankstesnis tyrimas parodė, kad MUC1 išraiška skrandžio vėžio yra prastas prognostinis faktorius [6].

MUC4 pirmą kartą buvo pranešta kaip tracheobronchial muciną [7] ir yra membrana susijusių mucino [8]. Mūsų studijų serijos, iš MUC4 išraiška kepenis cholangiokarcinoma, kasos latakų adenokarcinoma, kepenyse tulžies latakų karcinoma, plaučių adenokarcinomos ir burnos suragėjusių ląstelių karcinoma buvo nepriklausoma veiksnys prastos prognozės ir yra naudinga žymeklis prognozuoti pacientų rezultatų [ ,,,0],5], [9], [10], [11], [12], [13]. Deja, yra keletas studijos MUC4 ekspresijos profilio žmogaus skrandžio vėžio. Šioje studijoje, mes išnagrinėjome raiškos profilius MUC4 taip pat MUC1 pradžioje skrandžio vėžio audiniuose, ir nustatė, kad MUC4 and MUC1 išraiška pradžioje skrandžio vėžio taptų prastos prognostiniai veiksniai pagal limfos laivo invazija, kraujagyslių invazija ir limfmazgiuose metastazės.

Kaip anti-MUC4 monokloninius antikūnus (mAB), 8G7 ir 1G8, yra žinoma, kad aptikti skirtingose ​​vietose MUC4 molekulės. MAB 8G7 pripažįsta tandemas pakartoti seka (STGDTTPLPVTDTSSV) žmogaus MUC4α subvieneto [14]. MAb 1G8 yra pakelta prieš žiurkių seka (žiurkė ASGP-2), ir atpažįsta epitopą apie žiurkių ASGP-2 subvieneto, kuris atitinka žmogaus MUC4β subvieneto, ir kryžmiškai reaktyvumo su žmogaus mėginių [15]. Taigi, ypatingas dėmesys buvo skiriamas dviem kovos su MUC4 MA Imunoblotingo metodu ir IHC dviejų skrandžio vėžio ląstelių linijų Palyginimui, prieš IHC tyrimo žmogaus skrandžio vėžio audiniuose. Be to, kadangi yra ginčas dėl prognostinę reikšmę šių anti-MUC4 MA, literatūros apžvalgos MUC4 raiškos įvairių vėžio taip pat buvo atliktas.

Medžiagos ir metodai

Pacientai ir audinių mėginių

"pašalintas skrandis egzemplioriai 104 pirmųjų skrandžio vėžio, kurie rodo, gleivine invazija, pT1b2, su arba be limfmazgių metastazių, buvo gauti iš bylos tarp 1994 ir 2008 m į Kagoshima-shi medicinos asociacijos ligoninėje. Vidutinis pacientų amžius buvo 65,7 (Š.D., 9,8; diapazonas, 39-92 metų; vidutinis amžius 66 metai); 64 atvejų buvo vyrai ir 40 atvejai buvo moterys. Šis tyrimas buvo atliktas laikantis pagrindinių principų Helsinkio deklaraciją ir patvirtino Etikos komiteto Kagoshima-shi medicinos asociacijos ligoninė (KMAH 2011-02-02). Informavo, rašytinis sutikimas buvo gautas iš visų pacientų. Tais atvejais, kai daugiau nei du histologinių tipų sumaišyti viename pažeidimo, kiekvienas histologinis modelis buvo įvertintas savarankiškai, pagal Japonijos klasifikatoriaus Skrandžio vėžio (JCGC) [16].

Įvertinimas monokloninių antikūnų MUC4

elementų ir auginimo sąlygos.

Žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas (SNU-16 ir NVI-N87) ir kasos vėžio ląstelių linijas (PANC1 ir CAPAN1) buvo nupirkta iš Amerikos tipas kultūros kolekcija (Manasasas, VA). Abu skrandžio vėžio ląstelės buvo prižiūrimi RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO); PANC1 ląstelės išliko DMEM (Sigma-Aldrich); Capan1 ląstelės išliko DMEM /F-12 ( "Sigma-Aldrich). Visos terpės buvo papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo (GIBCO, Breda, Nyderlandai) ir 100 V /ml penicilino /100 mikrogramai /ml streptomicino (Sigma-Aldrich). Visos ląstelės buvo inkubuojamos 5% CO2, esant 37 ° C ir palaikoma sub-susiliejantis lygių.

RNR gavybos ir RT-PGR.

bendra RNR buvo išskirta iš ląstelių, naudojant RNeasy mini komplektas (Qiagen, Hilden, Vokietija) ir kiekybiškai NanoDrop ND-1000 spektrofotometru. Gautą iRNR (2ug) buvo atvirkštinis transkripcija į kDNR su Didelės talpos RNR į kDNR komplektas (Applied Biosystems, Foster City, CA). Šie pradmenys buvo skirtas vėlesnio PGR metodu: MUC4, 5'-TGGGACGATGCTGACTTCTC-3 ', 5'-CCCCGTTGTTTGTCATCTTTC-3'; ACTB, 5'-CTCTTCCAGCCTTCCTTCCTG-3 ', 5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'. PGR buvo atliekama su AmpliTaq Gold greitai PGR magistras mišinio (Applied Biosystems) pagal gamintojo protokolą.

Baltymai gavybos ir imunoblotingu.

Iš viso ląstelių fragmentai buvo paruošti naudojant Ripa buferį, kuriame proteazės inhibitorius kokteilis (Nacalai Tesque, Kioto, Japonija). Baltymų koncentracija buvo matuojama pagal BCA tyrime (Thermo Scientific, Rockford, IL). Vienodo dydžio baltymų lizato buvo išspręstas 2% agarozės gelyje, kurių sudėtyje yra SDS ir pasyviai perkeliamas ant PVDF membrana per naktį kambario temperatūroje. Membranos buvo užblokuotas su 1% lieso pieno /PBST per 2 valandas ir atliekami standartinių imunodetekcijos procedūrą, naudojant specifinius pirminius antikūnus. Pirminiai antikūnai yra taip: anti-žmogaus MUC4 MA, 8G7 (1:1000, sukurtas Dr Surinder K. batra, University of Nebraska medicinos centras, Omaha, NE) ir 1G8 (1:1000, įsigytas iš Invitrogen, Camarillo, ĮA) ir anti-žmogaus A-tubulino MA, DM1A (1:2,000, Sigma-Aldrich).

imunocitocheminiais už išaugintų ląstelių.

MUC4 dažymo kultūroje ląstelių, ląstelės buvo pasėjamos į 8 kamerų skaidres (Becton Dickinson and Company ", Franklin ežerai, NJ) ir inkubuojama per naktį. Ląstelės buvo nustatyti su 3,7% formaldehido už 10 min kambario temperatūroje ir nudažomi su mAb 8G7 (1:24,000) ir mAb 1G8 (1:4,000) per naktį 4 ° C, atitinkamai. Signalo aptikimas buvo atliktas kurį imunoperoksidazinis metodu, naudojant Vectastain Elito ABC komplektas (Vector Laboratories, Inc., Burlingame, Kalifornija), pagal gamintojo instrukcijas.

imunohistocheminis žmogaus audinių

IHC žmonėms skrandžio karcinomos buvo atliekama naudojant šiuos antikūnus į maksimalų nupjautų sekcijų kiekvienoje naviko. MUC4 buvo aptikti dviejų MA, 8G7 ir 1G8. Dėl lyginamojo tyrimo, MUC1 išraiška buvo taip pat išnagrinėjo MAB DF3 (pelės IgG, TFB, Tokijas, Japonija). IHC buvo atlikta pagal imunoperoksidazinis metodu, kaip nurodyta toliau. Antigenas paieška atlikta naudojant CC1 antigeno išėmimo buferis (pH8.5 EDTA, 10037 ° C temperatūroje, 30 min., Ventana Medical Systems, Tuksonas, AZ) visų sekcijų. Po inkubacijos su pirminių antikūnų (MAB MUC4 /8G7 atskiesti 1:3000, 37 ° C, 32 min .; MA, MUC4 /1G8 atskiesti 1:500, 37 ° C temperatūroje, 24 min .; MA, MUC1 /DF3 skiesti 1:50, 37 ° C 32 min.) fosfatinio buferio druskų tirpalo pH 7,4 (PBS) su 1% albumino galvijų serumo, skyriai buvo tamsintas ant Benchmark XT automatizuotas skaidrių STAINER naudojant diaminobenzidinas aptikimo rinkinį (Ultraview plekšnės, Ventana Medical Systems). Kad būtų paprasčiau, MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ir MUC1 /DF3 yra naudojamas nurodyti aptikti kiekvienos antikūnų į mucino antigenus.

Balai rezultatų ir statistinės analizės.

Keturi apakinti tyrėjams ( YT, MH, MG SY) įvertino IHC dažymo duomenis savarankiškai. Kai vertinimas skyrėsi tarp keturių, galutinis sprendimas buvo priimtas bendru sutarimu. Rezultatai buvo įvertintas remiantis teigiamai dažytų karcinoma ląstelių procentais, ir procentinės duomenys buvo suskirstyti į šešias klases, naudojant tokią vertinimo sistemą: neigiamas, nė vienas iš karcinoma ląstelių dažytų; silpnumą, < 5% karcinoma ląstelių tamsintas; 1+ ≥5% iki < 25%; 2+, ≥25% iki < 50%; 3+, ≥50% iki < 75%; ir 4+: ≥75% tamsintas. Atvejai su ≥ 5% karcinomos ląstelių tamsintas buvo laikomas teigiamu. Statistinė analizė buvo atlikta neparametrinės metodus naudojant Excel Statistika Ver.3 programinė įranga generuoja Hisae Yanai fakulteto mokslo, Saitamos universiteto (OMS Publishing, Japonija).

Išgyvenimo pacientų buvo lyginami tarp grupės su teigiama MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 arba MUC1 /DF3 išraiška ir grupė su neigiamu išraiška pagal Kaplan-Meier metodu, o skirtumai tarp išgyvenimo kreivių buvo išbandytas naudojant log-rank testą. A P <tikimybė; 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas

Rezultatai

vertinimas Dviejų monokloniniai antikūnai už MUC4

Jei ištirti antikūnų specifiškumo tarp 8G7 ir 1G8, mes skirtumą. vykdoma AT-PGR, imunoblotingu ir IHC analizė, naudojant du skrandžio vėžio ląstelių linijas, SNU-16 ir NVI-N87 ląsteles. MUC4 mRNR buvo aptikta dviejų skrandžio vėžio ląstelių linijų (pav. 1A). Suderinamas su ankstesnėje ataskaitoje [14], mūsų duomenimis, 8G7 pripažinta labai didelės molekulinės masės baltymų (daugiau kaip 500 kd, kuris buvo tikimasi, dydis gimtąja MUC4). Priešingai, 1G8 nerodo jokių imunoreaktyvių juostas (1b pav.). Toks pats rezultatas buvo pastebėtas IHC analizė (1C pav.).

Imunohistocheminis Dažymo ir pašalintas skrandis egzempliorių

Imunohistocheminiais dažymo ne neoplastiniu skrandžio gleivinę.

Ne -neoplastic gleivinė atvejų su skrandžio vėžiu, MUC4 /8G7 buvo išreikštas kartais į paviršių gleivinės epitelio citoplazmoje, ir dažnai, bet silpnai į fundic ir prievarčio liaukų (pav S1 A ir d) citoplazmoje. MUC4 /1G8 buvo dažnai nurodomi ląstelių viršūnės ir citoplazmos paviršiaus gleivinės epitelio, ir dažnai, bet silpnai į fundic ir prievarčio liaukų (pav S1 B ir E) citoplazmoje, ir buvo pastebėtas nuolat tuo kraujagyslių endotelio. MUC1 /DF3 kartais buvo išreikšta paviršiaus gleivinės epitelio, ir visada į fundic liaukų (ypač intensyviai prie ląstelės viršūnių), bet ne į prievarčio liaukų (pav S1 C ir F).

Imunohistocheminis dažymo skrandžio adenokarcinoma.

mes išnagrinėjome pašalintas skrandis egzemplioriams 104 pirmųjų skrandžio vėžio (pT1b2), nes norėjome, kad būtų išvengta didelių degeneracinius pokyčius, kurie dažnai vertinami išplitusiu vėžiu audinių ir reguliuoti etape tiksliai palyginti IHC išvados ir clinicopathologic veiksniai.

daugiau nei du histologiniai tipai buvo maišomas į vieną pažeidimo į pašalintas skrandis egzempliorių 104 pirmųjų skrandžio vėžio, kiekvienas histologinis modelis buvo įvertintas nepriklausomai, atsižvelgiant į JCGC [16]. Todėl, atsižvelgiant į 104 pašalintas skrandis egzempliorių, mes galime įvertinti 197 karcinoma židinių įvairių histologinių tipų iš viso.

Tarp 197 pažeidimų, buvo 15 pažeidimai papilinio adenokarcinoma (PAP) (Figos. 2A-D), 39 gerai diferencijuota kanalėlių adenokarcinoma (tub1) (Fig. 2E-H), 52 saikingai diferencijuoto kanalėlių adenokarcinoma (tub2) (Fig. 2I-L), 6 iš mucininio karcinomų (MUC) (Fig. 2M-P), 8 kietojo tipo blogai diferencijuota adenokarcinoma (por1) (Figos. 2Q-T) 47 ne kietu tipo blogai diferencijuota adenokarcinoma (por2) (Figos. 2U-X) ir 30 Sygnet ląstelių karcinoma (sig) (Figos. 2Y-b), remiantis bendru histologinio klasifikavimo skrandžio vėžio kontekste JCGC [16]. Pasak PSO klasifikaciją navikų pilvo [17], taip pat, kad JCGC [16], PAP ir tub1 buvo suskirstyti į "gerai diferencijuota adenokarcinoma" ir por1 ir por2 buvo suskirstyti į "blogai diferencijuoti kontekste adenokarcinoma. Posakio norma MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ir MUC1 /DF3 duomenys buvo apibendrinti 3 paveiksle Išsamus skaičius ir procentas teigiamai tamsintas navikinių ląstelių, taikant vertinimo sistemą buvo apibendrinti S1 lentelėje.

išraiška profilis MUC4 /8G7.

Tarp 197 adenokarcinoma pažeidimų, MUC4 /8G7 buvo išreikšta 83 pažeidimų (42%). MUC4 /8G7 parodė žymiai didesnį greitį teigiamo išraiškos (≥5% karcinomos ląstelių tamsintas) į gerai diferencijuotų tipų (PAP + tub1: 70%, 38/54) nei blogai diferencijuotų tipai (por1 + por2: 18% , 10/55) ( P
< 0,0001) (pav 3A, rodykles).. MUC4 /8G7 išreiškė daugiausia iš navikinių ląstelių PAP (2b pav.), Tub1 (2F pav.) Ir tub2 (. 2J pav) citoplazmoje, tais atvejais, turinčių teigiamą išraiška.

išraiška aprašymą iš MUC4 /1G8.

Tarp 197 adenokarcinoma pažeidimų, MUC4 /1G8 buvo išreikšta 95 pažeidimų (48%). MUC4 /1G8 parodė žymiai didesnes teigiamo žodžio gerai diferencijuotų tipų (PAP + tub1: 67%, 36/54), nei kad blogai diferencijuotos tipai (por1 + por2: 36%, 20/55) ( P
= 0,0021) (pav. 3B, strėlės). MUC4 /1G8 išreiškė daugiausia ląstelių viršūnių Pap, tub1 (Figos. 2G) ir tub2 (2C pav.) Į grandinės su muciną medžiagos sig (. 2a pav) (2K pav.), Arba, tais atvejais, su teigiamas išraiška.

išraiška profilis MUC1 /DF3.

Tarp 197 adenokarcinoma pažeidimų, MUC1 /DF3 buvo išreikšta 62 pažeidimų (31%). MUC1 /DF3 parodė žymiai didesnes teigiamo žodžio gerai diferencijuotų tipų (PAP + tub1: 52%, 28/54), nei kad blogai diferencijuotos tipai (por1 + por2: 13%, 7/55) ( P
< 0,0001) (pav 3C, strėlės).. MUC1 /DF3 išreiškė daugiausia ląstelių viršūnių Pap, tub1 ir tub2 (2L pav.), Tais atvejais, turinčių teigiamą išraiška.

palyginimas mucino išraiška kiekvienoje histologinis tipas.

Be tub1, išraiškos normos MUC4 /8G7 ir MUC4 /1G8 buvo gerokai didesnis nei MUC1 /DF3 ( P
= 0,0106 ir P
= 0,039, atitinkamai) (3 pav., * 1). Be por2 pasakymas norma MUC4 /1G8 buvo gerokai didesnis nei MUC4 /8G7 ( P
= 0,0286), arba kad MUC1 /DF3 ( P
= 0,0005) (Pav. 3, * 2). Be sig, išraiška rodiklis MUC4 /1G8 buvo gerokai didesnis nei MUC4 /8G7 ( P
= 0,0158), arba kad MUC1 /DF3 (SIG P
= 0,0019) (Pav . 3, * 3). Be kitų histolgical tipų (PAP, tub2, MUC ir por1), ten

Santykiai tarp grupių statistiškai reikšmingai nesiskyrė formuluotę tarifų tarp MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ir MUC1 /DF3 (pav. 3). MUC4 arba MUC1 išraiška ir limfos laivas invazija, kraujagyslių invazija ir limfmazgių metastazės.

pusiau kiekybiniai testo vertinimas limfinės invazijos (LY), venų invazijos (v) ir limfmazgių metastazės statusas (N) apibrėžta JCGC [16]. Limfinės invazija (LY) buvo įvertintas taip; ly0 ne limfinės invazija; ly1, minimalus limfinės invazija; ly2, vidutinio limfinės invazija; ir ly3, pažymėtos limfos invaziją. Dėl venų invazijos (V), panašus vertinimas (v0 į V3) buvo padaryta naudojant elastingą dažymo (Viktorija-Blue), kuri buvo įtraukta į hematoksilinu-eozino dažymo. Iš viso limfmazgių ir susijusių limfmazgių skaičius kiekvienoje mazgo stoties (N), buvo registruojami taip; N0, regioninė limfmazgių metastazių; N1, metastazių 1-2 sritiniuose limfmazgiuose; ir N2, metastazių 3-6 sritiniuose limfmazgiuose. Regioninė limfmazgių metastazės buvo stebimas 55 pacientų (N1, 41 bylas; N2, 14 atvejų). Nebuvo reikšminga koreliacija tarp histologinių tipų ir limfinės invazijos, venų invazijos ar limfmazgių metastazių statusą.

kiekvienu atveju, aukščiausią rezultatą iš šešių IHC klasių (neigiamas, silpnumą, 1+, 2+, 3+ arba 4+) įvairiose histologinių tipų buvo skaičiuojamas kaip IHC partitūros kiekvieno individo, pvz "IHC rezultatas 4+" už bylos su [tub1 rezultatas, 3+; tub2 rezultatas, 4+]. Mes įvertinome tarp IHC rezultatą ir Ly, V ir N veiksnių kiekvienam pacientui koreliaciją. Kaip parodyta 1 lentelėje, MUC4 /8G7 išraiška buvo susijęs su limfinės invazijos (r = 0,304, P
= 0,033). MUC4 /1G8 išraiška buvo susijęs su limfinės invazijos (r = 0.395, P
= 0,001) ir limfmazgių metastazių (r = 0.296, P
= 0,045). MUC1 /DF3 išraiška buvo susijęs su limfinės invazijos (r = 0,357, P
= 0,032) ir venų invazijos (r = 0,377, P
= 0,024).

Be to, mes išnagrinėjo tarp IHC dešimtys MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ir MUC1 /DF3 koreliaciją. Kaip parodyta 2 lentelėje, ten buvo tarp MUC4 /8G7 balo ir MUC4 /1G8 rezultatas koreliacija (r = 0,486, P
< 0,0001). Priešingai, nebuvo koreliacija tarp MUC4 /8G7 balo ir MUC1 /DF3 balas (r = 0,267, P
= 0,202), ir ten buvo ne koreliacija tarp MUC4 /1G8 balo ir MUC1 /DF3 balas (r = 0,245 p
= 0,269).

Santykiai tarp MUC4 arba MUC1 saviraiškos ir išlikimui.

tarp 104 pacientų, tolesnių duomenys buvo gauti 87 pacientų. Mediana iki laikotarpis buvo 47,5 mėnesiai (diapazonas, 0-193 mėnesių). Per 87 pacientų, vienas pacientas mirė nuo skrandžio karcinoma 39 mėnesių po operacijos, vienas pacientas parodė kepenų metastazių, bet išgyveno 78 mėnesių, o du pacientai mirė nuo kitų ligų. 85 pacientų, išskyrus du ligoniai mirė nuo kitų ligų, Kaplan-Meier metodu buvo tiriamas naudojant log-rank testą. Tarp teigiamų grupės ir neigiamas grupės (MUC4 /8G7 + vs -, MUC4 /1G8 + vs - ar MUC1 /DF3 + vs -), log-rank testą bendro išgyvenamumo (MUC4 /8G7, p = 0,27; MUC4 /1G8, p = 0,37; MUC1 /DF3, p = 0,22) ir be ligos progresavimo (MUC4 /8G7, p = 0,85; MUC4 /1G8, p = 0,23; MUC1 /DF3, p = 0,83) neparodė jokių reikšmingų skirtumų. Tolesnė analizė 42 pacientų išgyveno daugiau nei 5 metus, taip pat neparodė jokių reikšmingų skirtumų.

Diskusijos

Neseniai mes pranešė, kad MUC4 išraiška yra nepriklausoma prastos prognozės veiksnys kasos ir tulžies latakus adenokarcinomos [ ,,,0],10], [11], [12], taip pat plaučių adenokarcinomos [13] ir burnos suragėjusių ląstelių karcinoma [9]. MUC1 taip pat buvo pranešta, kad prastas prognostinis faktorius įvairių žmogaus navikų [4], [5]. Mūsų Ankstesnis tyrimas skrandžio vėžio, įskaitant abiejų pirmųjų vėžio ir pažangių vėžio parodė, kad MUC1 yra naudinga prognostinis faktorius prastos rezultatus į [6] pacientų. Šioje tyrimo duomenimis, tarp muciną saviraiškos ir paciento rezultatus santykiai negali būti vertinami, nes skrandžio vėžio yra ankstyvojoje stadijoje pT1b2 ir dauguma pacientų turėjo teigiamą rezultatą. Nepaisant to, buvo gauti šie rezultatai: (1) MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ir MUC1 /DF3 išsireiškimai buvo susiję su limfinės invazijos. (2) MUC4 /1G8 išraiška buvo susijęs su limfmazgių metastazių. (3) MU1 /DF3 išraiška buvo susijęs su venų invazijos. Japonijoje, ESD yra pirmasis pasirinkimas gydymo pradžioje skrandžio vėžio [3]. Išnagrinėjus MUC4 taip pat MUC1 į ESD egzempliorių gali išaiškinti, ar papildomo operacijos, įskaitant limfmazgių skrodimo ar dažnai tolesnių už metastazių yra būtina.

Mūsų ankstesni tyrimai parodė, kad nebuvo siginificant koreliacija tarp MUC4 išraiška ir MUC1 išraiška [10], [11], [12], [13]. Taip pat šiame tyrime skrandžio vėžio anksti, nebuvo siginificant koreliacija tarp išraiškos MUC4 ir MUC1. Tiek MUC4 ir MUC1 išraiška skrandžio vėžio gali būti susiję su prastomis prognozinių veiksnių, tokių kaip limfinės invazijos, venų invazija ir limfmazgių metastazių, pasitelkiant skirtingų mechanizmą.

ankstesnio tyrimo skrandžio vėžio naudojant MA, 8G7, Senapati et al., parodė, kad MUC4 /8G7 išraiška nebuvo susijęs su naviko tipo, stadijos ar diferenciacijos [18] laipsnį. Įdomu tai, kad jų rezultatai rodė 42% išraiška lygis I vėžio (n = 19) etape, kuris pagal mūsų duomenis (MUC4 /8G7: 42% ir MUC4 /1G8: 48%) Šiuo tyrimu nagrinėjant I etapas vėžio (n = 104). Tačiau mūsų tyrimas parodė, kad tiek MUC4 /8G7 ir MUC4 /1G8 išraiška skyrėsi tarp histologinių tipų ir buvo gerokai didesnis gerai diferencijuotų tipų negu blogai diferencijuotu tipo. MUC1 /DF3 sąvoka taip pat buvo reikšmingai didesnis gerai diferencijuotų tipų negu blogai diferencijuotu tipo. Mes "pranešė, kad MUC1 išraiška buvo daug gerai diferencijuota adenokarcinoma skrandžio vėžio, įskaitant pažangių vėžio ir aukštos MUC1 išraiška gali turėti įtakos pacientų išgyvenimą su gerai diferencijuota adenokarcinoma skrandžio [6]. Aukšto išraiška MUC4 į gerai diferencijuota adenokarcinoma taip pat gali turėti įtakos pacientams, sergantiems skrandžio vėžio išgyvenimo. Mūsų ankstesniame tyrime [6], didelės raiškos MUC1 /DF3 lygis buvo gerokai didesnis pažangių skrandžio vėžio nei kad pradžioje skrandžio vėžio. Iš MUC4 išraiškos santykis su skrandžio vėžio invazijos būtų įdomi studijų sritis.

Yra nesutarimų dėl prognostinę reikšmę MUC4 /8G7 ir MUC4 /1G8 išraiška. Taigi, mes peržiūrėjome 19 straipsnius MUC4 IHC tyrimo taikomos įvairių žmogaus vėžinių audinių (3 lentelė). Iš MUC4 /8G7 ir MUC4 /1G8 reikšmė negalėjo būti įvertintas 8 19 tyrimų. Vienas tyrimas naudojant polikloninį kovos su MIUC4 antikūno pranešė, kad MUC4 išraiška yra susijusi su fovorabel rezultatus [19], trys tyrimai rodo, jokios koreliacijos tarp MUC4 saviraiškos ir prognozės [20], [21], [22], kiti trys tyrimai nebuvo turite kokių nors pastabų dėl ryšio tarp MUC4 saviraiškos ir prognozės [18] koreliaciją [23], [24], o likę vienas tyrimas skydliaukės vėžio pranešė neturi MUC4 išraišką vėžio [25]. Kita vertus, kitose 11 straipsniuose, buvo akivaizdus skirtumas prognostinę reikšmę tarp MUC4 /8G7 saviraiškos ir MUC4 /1G8 išraiška. Dauguma tyrimai, naudojant 8G7, kuris buvo sukurtas prieš žmogaus MUC4, MUC4 /8G7 išraiška yra susijęs su agresyvaus naviko elgesio arba prastos rezultatus į žmogaus karcinomų [9], [10], [11], [12], [13], [ ,,,0],26]. Priešingai, dauguma tyrimų, naudojant 1G8, kuri buvo iškelta žiurkių ASGP-2, aprašyta, kad MUC4 /1G8 išraiška yra susijęs su palankaus rezultato [27], [28], [29], [30], nors vienas tyrimas kasos adenokarcinoma aprašyta, kad MUC4 /1G8 išraiška yra susijusi su prasta išlikimo [31]. Tai aiškus skirtumas kelia klausimą, ar 8G7 ir 1G8 turi iš esmės skirtingų charakterių klausimą. MAB 1G8 buvo iškeltas naudojant žiurkių Muc4 epitopą [15]. Žmogaus MUC4 ir žiurkės Muc4 rodo daugiau kaip 60% peptido seka panašumą [32], tačiau jie nėra tapatūs. Reikia pažymėti, kad IHC naudojant MA, 1G8 visada rodo teigiamą dažymo į kraujagyslių endotelio, kuris yra šiek tiek neįprastas kaip MUC4 išraiška, kuri yra vienas iš mucino narių.

Taigi, mes įvertino mAb specifiškumą 8G7 ir MA, 1G8 imunoblotingo metodu ir IHC iš dviejų skrandžio vėžio ląstelių linijų. Mūsų imunoblotingu analizė parodė, kad MA, 8G7 pripažinta labai didelės molekulinės masės baltymų (daugiau kaip 500 kd, kuris buvo tikimasi, dydis gimtąja MUC4), o MA, 1G8 nerodo jokių imunoreaktyviųjų juostas. IHC analizė taip pat parodė, MA, 8G7 teigiamą dažymo bet MA, 1G8 neigiamą dažymo dviejuose skrandžio vėžio ląstelių linijas. MUC4 iRNR taip pat buvo išreikšta abiejų skrandžio vėžio ląstelių linijų Šio tyrimo, kaip parodyta ankstesniame tyrime analizuojant kasos vėžio ląstelių linijas RT-PGR ir Northen blot analizės [33], [34]. Tiek MA, 8G7 ir MA, 1G8 reaguoja su žmogaus skrandžio vėžio audiniuose, nors MUC4 /8G7 ir MUC4 /1G8 išraiškos vietos, rodo žymų skirtumą. Skrandžio vėžio audiniuose, MUC4 /8G7 išreiškė daugiausia iš navikinių ląstelių PAP ir vonia citoplazmoje, o MUC4 /1G8 išreiškė daugiausia ląstelių viršūnių Pap ir vonia ar grandinės su muciną medžiagos sig. Nuo citoplazmos išraiška modelio MUC4 /8G7 yra vertinamas taip pat kasos adenokarcinoma, kepenis cholangiokarcinoma, papildomas kepenų tulžies latakų karcinoma, plaučių adenokarcinomos ir burnos suragėjusių ląstelių karcinoma [9], [10], [11], [12], [13 ], The Intracitoplazminė MUC4 /8G7 išraiška modelis skrandžio vėžio audiniuose gali būti protinga. Priešingai, linijinis išraiška modelio MUC4 /1G8 kartu su ląstelių viršūnių skrandžio vėžio audiniuose gali atspindėti nežinomų funkcijų ar savybių MUC4β subvieneto aptikti MAB 1G8 iškelta žiurkių epitopq [15], nes šis tyrimas parodė, kad MUC4 /1G8 išraiška buvo susiję su limfinės invazija ir limfmazgių metastazių, kad yra prastos prognostiniai faktoriai net ankstyvą skrandžio vėžio. Ypač por2 ir sig pasakymas norma MUC4 /1G8 buvo gerokai didesnis nei MUC4 /8G7 arba kad MUC1 /DF3. Be to, ten buvo siginificant koreliacija tarp MUC4 /8G7 saviraiškos ir MUC4 /1G8 raiškos pacientų tirtų. Taigi, IHC signalas MUC4 /1G8 aptikta pašalintas skrandis egzempliorių gali parodyti didelę prasmę epitopq aptiktą MAB 1G8, nors nebuvo MUC4 /1G8 išraiškos reaktingumas žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijų (SNU 16 ir NCI- N87). Aptiktą MAB 1G8 epitopas yra įdomūs ateities studijų srities.

Taigi, šioje tyrimo pradžioje skrandžio vėžio, MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ir MUC1 /DF3 išsireiškimai buvo pastebėta daugiausia gerai diferencijuotos adenokarcinoma. MUC4 /8G7 išraiška buvo susijęs su limfinės invazijos. MUC4 /1G8 išraiška buvo susijęs su limfinės invazija ir limfmazgių metastazių. MUC1 /DF3 išraiška buvo susijęs su limfinės invazija ir venų invazijos. Iš MUC4 ir MUC1 raiškos egzaminas skrandžio vėžio taptų naudinga žymeklis prognozuoja prastus prognozinius veiksnius, susijusius su laivo invazija, net ankstyvoje stadijoje.

Pagalbinė informacija
S1 paveiksle.
Be ne neoplastiniu gleivinės atvejų su skrandžio vėžiu, MUC4 /8G7 buvo išreikštas kartais į paviršių gleivinės epitelio citoplazmoje, ir dažnai, bet silpnai į fundic ir prievarčio liaukų (A ir D) citoplazmoje. MUC4 /1G8 buvo dažnai nurodomi ląstelių viršūnės ir citoplazmos paviršiaus gleivinės epitelio, ir dažnai, bet silpnai į fundic ir prievarčio liaukų (B ir E) citoplazmoje, ir buvo pastebėtas nuolat tuo kraujagyslių endotelio. MUC1 /DF3 kartais buvo išreikšta paviršiaus gleivinės epitelio, ir visada į fundic liaukų (ypač intensyviai prie ląstelės viršūnių), bet ne į prievarčio liaukų (C ir F). Originalus didinimas × 100 (A, B, C), × 400 (D, E, F)
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0049251.s001
(TIF)
lentelė S1.
Detali skaičius ir procentas teigiamai tamsintas navikinių ląstelių, taikant vertinimo sistemą
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0049251.s002
(DOC)

Padėka

dėkojame p Y. Atsuchi, p K. Matsuo, ponia C. Babą, ponia Y. Nishimura, ponia S. Yoshimura ir ponia I. Houjou jų techninę pagalbą.

• PLoS ONE: didelis aromatiniai amino rūgščių skrandžio sulčių ankstyvajame skrandžio vėžio progresavimo
• PLoS ONE: CYP2E1 RsaI /PstI polimorfizmas ir skrandžio vėžio jautrumą: Meta-analizė remiantis 24 atvejo-kontrolės tyrimai