PLOS ONE: Återställande av MIR-1228 * Expression Dämpar Epithelial-Mesenkymala Övergång i Gastric Cancer

Abstrakt

oreglerad miRNA spelar kritiska roller under carcinogenes och cancer progression. I den aktuella studien har funktionen av MIR-1228 * vid reglering av cancerutveckling undersöktes i magcancer. Minskad expression av MIR-1228 * observerades i humana magcancer vävnader jämför med normala vävnader. Därefter utvärderades roll MIR-1228 * In vivo
hjälp av tumör xenograft modell. I denna modell, MIR-1228 * uttryck tryckt xenograft tumörbildning. Dessutom visade vi MIR-1228 * negativt regleras NF-kB aktivitet i SGC-7901 gastric cancerceller och fann att CK2A2 var ett mål för MIR-1228 *. Uppreglering av MIR-1228 * minskade uttrycket av mesenkymala markörer och ökad epitelceller markör E-cadherin, vilket tyder på dess potentiella roll i att undertrycka epitel-mesenkymala övergång. Tillsammans står dessa iakttagelser skaffar det första beviset att MIR-1228 * spelar en viktig roll i regleringen av magcancer tillväxt och tyder på att selektiv återställning av MIR-1228 * kan vara fördelaktig för magcancer terapi

Citation. Jia L Wu J, Zhang L, Chen J, Zhong D, Xu S, et al. (2013) Återställande av MIR-1228 * Expression Dämpar Epithelial-Mesenkymala Övergång i magcancer. PLoS ONE 8 (3): e58637. doi: 10.1371 /journal.pone.0058637

Redaktör: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japan

Mottagna: 25 oktober 2012, Accepteras: 5 februari 2013, Publicerad: 12 mars 2013

Copyright: © 2013 Jia et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

Finansiering:. Författarna har inget stöd eller finansiering för att rapportera

konkurrerande intressen:.. författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Inledning

MicroRNAs (miRNA) är en klass av kort ( 20-23 nukleotider i längd), endogena, enkelsträngade RNA som reglerar genexpression genom att orsaka translations repression eller mRNA nedbrytning [1], [2]. Via dessa molekylära mekanismer, miRNA har normala biologiska funktioner, såsom reglering av celltillväxt, differentiering och apoptos. Dessutom har oreglerad miRNA visats spela kritiska roller i regleringen av carcinogenes och cancer progression [3], [4]. Abberant miRNA uttryck har observerats i många typer av maligniteter inklusive magcancer [5].

Epithelial-mesenkymala övergång (EMT) är ett biologiskt omprogrammering händelse som gör att epitelceller att genomgå flera biokemiska förändringar för att förvärva en mesenkymala cell fenotyp. Medan EMT är avgörande för lämplig embryonal utveckling, vilket ökar tyder på att den avvikande aktivering av EMT leder till malign tumörprogression [6]. Det har visats att EMT är en nyckelprocess som bidrar till utvecklingen av cancer, som kännetecknas av förlusten av den epiteliala markör E-cadherin, en ökning av mesenkymala markör Vimentin, och en ökning av den flyttande och invasiva beteendet [7], [8].

i vår tidigare studie, genom att analysera miRNA array av pankreatiska cancersfärer, var miR-1228 * finns som en av cancerrelaterade miRNA (data ej visade). Här, vi fram bevis för att MIR-1228 * var nedregleras i magcancer vävnader jämfört med normala vävnader. Restaurering uttryck av MIR-1228 * i gastric cancerceller hämmar signifikant cellmigration och tumörtillväxt. Mekanistiskt, visade vi att MIR-1228 * hämmar NF-KB-aktivering och potentiellt undertrycker EMT.

Material och metoder

cellodling

Mänskliga gastric cancercellinjer SGC-7901 , AGS och BGC-823 köptes från Institutet för biokemi och cellbiologi (Chinese Academy of Sciences). En normal gastrisk epitelceller linje GES-1 köptes från Beijing Institute for Cancer Research. Dessa celler upprätthölls vid 37 ° C i en 5% CO2 inkubator i RPMI-1640 (SGC-7901 och BGC-823), F-12K (AGS) eller DMEM (GES-1) medium supplementerat med 10% fetalt bovint serum [ ,,,0],9], [10].

kliniska prover

Femtio par magcancer och angränsande icke-cancervävnadsprover erhölls från patienter som genomgick kirurgisk resektion vid andra Anslutna sjukhuset, College of Medicine , Zhejiang University. De matchade icke-cancer angränsande vävnader erhölls vid minst 5 cm avstånd från tumörstället. Ingen av patienterna hade genomgått strålbehandling eller kemoterapi före det kirurgiska ingreppet. Vävnadsprover uppsamlades, snabbfrystes i flytande kväve och lagrades vid -80 ° C tills de användes [11]. Alla vävnader histologiskt bekräftats vara gastric adenokarcinom. Studien godkändes av den andra Anslutna sjukhuset etikkommitté Zhejiang University College of Medicine. Det undertecknade informerat samtycke erhölls från alla deltagare eller från patientföreträdare om inte kunde erhållas direkt medgivande.

RNA-extraktion och Real-time PCR

Totalt RNA extraherades från de odlade cellerna eller vävnader med hjälp av TRIzol (Invitrogen), och koncentrationen av total-RNA bestämdes. Syntes av cDNA och realtids-PCR utfördes med användning av TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems) och TaqMan MicroRNA Assay Kit (Applied Biosystems), respektive. Realtids-PCR utfördes på en Applied Biosystems StepOnePlus ™ realtids-PCR System enligt protokollet. Uttrycksnivån för MIR-1228 * normaliserades till RNU6B. Den realtid PCR-reaktioner utfördes i tre exemplar. Den relativa uttrycket av miRNA beräknades med användning av jämförande Ct metoden [12].

tumörinokulering analys i nakna möss

BALB /c atymiska nakna möss vid en ålder av 4 veckor köptes från Shanghai Laboratory Animal Center (Chinese Academy of Sciences). Alla som deltar i djurförsök godkändes av experimentella djuretikkommittén, College of Medicine, Zhejiang University. MIR-1228 * eller miR-NC stabil transfektion SGC-7901 celler suspensioner (2,5 x 10 ^{7 celler /ml) i 200}

• PLOS ONE: Överuttryck av CD151 förutsäger prognosen i patienter med fri station Gastric Cancer
• PLOS ONE: Superior antitumöraktivitet av Nanopartiklar Albumin-Bound Paclitaxel i Experimental Gastric Cancer