PLoS ONE: Mechanismen der GOLPH3 im Zusammenhang mit der Progression von Magenkrebs: Eine vorläufige Study

Abstrakt

Studiendesign

die spezifischen Mechanismen zu untersuchen, mit dem Golgi Phosphoprotein 3 (GOLPH3) wirkt sich auf die Progression von Magenkrebs und ihre klinische Bedeutung zu erforschen.

Methoden

immunhistochemischen Analyse verwendet wurde, um die Korrelationen zwischen GOLPH3, phosphoryliert mTOR (p-mTOR), phosphoryliert Akt (p-Akt) zu bewerten , phosphoryliert p70S6 (p-p70S6), phosphoryliert 4E-BP1 (p-4E-BP1) und die klinisch-pathologischen Eigenschaften von Magenkrebs. Die mRNA-Expression von GOLPH3, mTOR, Akt, p70S6 und 4E-BP1 bei Magenkrebs, Karzinom benachbarte und gepaart normalem Gewebe wurden RT-PCR analysiert. Western-Blot wurde verwendet, um die Proteinexpression von GOLPH3, p-mTOR, p-Akt, p-p70S6 und p-4E-BP1 in Geweben zu bestimmen.

Ergebnisse |

Hohe Proteinexpressionsniveaus GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p70S6, p-4E-BP1 positiv mit histologischen Grad assoziiert waren ( p
< 0,05), Tiefe der Invasion ( p
< 0,05 ), Fernmetastasen ( p
< 0,05) und Beteiligung der Lymphknoten ( p
< 0,05). Im Vergleich mit Karzinomen benachbarte und gepaart normalen Geweben, die mRNA-Expression von GOLPH3, AKT, mTOR, p70S6 und 4EBP1 in Geweben Magenkrebs signifikant höher. Die Proteinexpressionsniveaus von GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p-p70S6 und p-4E-BP1 in Magenkrebsgewebe waren auch signifikant höher als in Karzinom benachbarte und gepaart normalen Geweben. Eine starke positive Korrelation zwischen GOLPH3, p-mTOR, p-p70S6 und p-4EBP1 Ausdruck ( r
= 0.410, 0.303 und 0.276 bzw. p
< 0,05) beobachtet, aber keine signifikante Korrelation zwischen der Expression von GOLPH3 und p-Akt beobachtet.

Schlussfolgerungen

der GOPLH3 Expressionsniveau ist hoch korreliert mit Akt /mTOR-Signalweg in menschlichen Magenkrebsproben. GOLPH3 kombiniert mit Akt /mTOR Signalisierung Aktivierung kann eine wichtige Rolle bei der Entwicklung, Differenzierung, Invasion und Metastasierung von Magenkrebs spielen

Citation:. Peng J, Fang Y, Tao Y, Li K, Su T, Nong Y, et al. (2014) Mechanismen der GOLPH3 im Zusammenhang mit der Progression von Magenkrebs: eine Vorstudie. PLoS ONE 9 (10): e107362. doi: 10.1371 /journal.pone.0107362

Herausgeber: Yuan-Soon Ho, Taipei Medical University, Taiwan

Empfangen: 13. Juni 2014; Akzeptiert: 7. August 2014; Veröffentlicht am: 6. Oktober 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Datenverfügbarkeit. Die Autoren bestätigen, dass alle Daten, die Ergebnisse sind in vollem Umfang zur Verfügung, ohne Einschränkung zu Grunde liegen. Alle Daten sind von der Handschrift und Zahlen

Finanzierung:. Diese Studie wurde von der Forschungsgemeinschaft von Guangxi Gesundheit Angemessene Technologie und Entwicklungsprojekt (: S201415-01 Zuschussnummer) unterstützt wurde. Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Obwohl die globale Statistiken zeigen, dass Magenkrebs (GC) bei Männern die vierthäufigste Krebs ist und die fünfthäufigste Krebserkrankung bei Frauen, stuft die Sterblichkeit von Magenkrebs an zweiter Stelle nur zum Lungenkrebs [1]. Die weltweite Inzidenz von Magenkrebs hat sich seit dem Zweiten Weltkrieg rückläufig [2]. Doch in den Entwicklungsländern, darunter China, die Morbidität und Mortalität von Magenkrebs hoch geblieben. Magenkrebsbehandlung hat sich in den letzten Jahren verbessert, aber die meisten Patienten sind nach wie vor mit fortgeschrittenem Magenkrebs, häufig einschließlich der Invasion und Metastasierung diagnostiziert, was zu einem unbefriedigenden Behandlungswirkungsrate. Da Magenkrebs stellt eine erhebliche Gefahr für die menschliche Gesundheit und das Leben, ist es entscheidend, die Pathogenese von Magenkrebs in den Prozess der Tumorgenese, Invasion und Metastasierung führen frühe Diagnose und Behandlung zu verstehen.

Es ist allgemein anerkannt, dass Tumorbildung die Fehlregulation von zahlreichen Onkogene, Tumorsuppressorgene und Metastase-verwandte Gene Golgi Phosphoprotein 3 (GOLPH3) umfasst, die auch als GPP34, GMx33 oder MIDAS bekannt ist, ist ein 34 kD Membranprotein, das ursprünglich in der Maus identifiziert wurde, Golgi-Apparat durch Proteomanalyse [3]. GOLPH3 gehört zum Golgi Matrix-Proteinfamilie, die stark von der Hefe bis zum Menschen konserviert ist [4]. Nach GOLPH3 translational modifiziert wurde, wird sie dynamisch mit dem negativen Golgi Matrix verbunden ist, rasch die trans-Golgi-Netzwerk (TGN) in das Cytoplasma transportiert, durch und in die Plasmamembran-Vesikel und endokrine Zellen verteilt [4]. Mehrere Studien haben gezeigt, dass in GOLPH3 anterograden und retrograden Golgi Handel, Rezeptor-Recycling beteiligt ist, und Glykosylierung vom Golgi-Apparat zur Plasmamembran; GOLPH3 spielt auch eine Rolle in Zytoskelett-Interaktionen und die Wartung des Golgi-Struktur [4] - [7]. Scott et al. zuerst identifiziert die onkogene Rolle der GOLPH3 durch seine wichtige Rolle bei der Tumorzelldifferenzierung und Proliferation und seine Präsenz in vielen soliden Tumoren [8] enthüllt. Interessanterweise haben einige Studien vorgeschlagen, dass GOLPH3 Krebszellen reguliert durch mammalian target of rapamycin (mTOR) -Aktivität erhöhen. mTOR ist eine Serin /Threonin-Proteinkinase und ein Schlüssel Integrator von Phosphatidyl-Inositol-3-Kinase (PI3K-RTK) Wege bekannt Zellwachstum, Proliferation und das Überleben in menschlichen Krebszellen zu regulieren [9] - [10]. Viele Studien sind derzeit jedoch die Beziehung zwischen dem GOLPH3 und mehreren soliden Tumoren zu untersuchen, gibt es nicht genügend Beweise, um die Hypothese zu stützen, dass GOLPH3 Ausdruck mit menschlichen Magenkrebsprogression und Prognose assoziiert ist, und die mechanistische Grundlage von denen GOLPH3 die tumorigenesis beeinflusst, Invasion und Metastasierung von Magenkrebs, bleibt unklar. In dieser Studie untersuchten wir die klinische Wertigkeiten von GOLPH3 und AKT /mTOR bei Magenkrebs zu signalisieren. Inzwischen haben wir das Verhältnis von GOPLPH3 und Akt /mTOR-Signalisierung bei Magenkrebs entdeckt die mögliche Rolle von GOLPH3 offenbaren bei der Regulierung der Magenkrebs Tumorentstehung, Invasion und Metastasierung von mTOR-vermittelten.

Materialien und Methoden

Ethical Aussage

Alle Studienverfahren wurden von der Institutional Review Board Ethik des Ersten Affiliated Hospital der Guangxi Medical University und durchgeführt, geprüft und genehmigt nach den Grundsätzen in der Deklaration von Helsinki zum Ausdruck gebracht. Die Einwilligungserklärung durch den Vorstand aufgrund der frischen Proben wurden behandelt und anonymisiert nach ethischen und rechtlichen Standards befreit wurde.

Gewebeproben und klinischen Daten Auswahl

Die frischen Gewebeproben wurden von achtzig Patienten gesammelt mit Magenkrebs, die chirurgische Behandlung bei der ersten Affiliated Hospital der Guangxi Medical University in der Zeit von Januar 2012 bis Januar 2013 Cancerous und Karzinom benachbarte Gewebe (3-cm Abstand vom Krebs) und gepaart normalen Geweben unterzogen wurden von jedem Patienten erhalten und wurde der Patient unabhängig von zwei erfahrenen Pathologen nach dem American Joint Committee on Cancer Kriterien [11] diagnostiziert. Vollständige originale klinische Daten zur Verfügung standen für Patienten mit Magenkrebs diagnostiziert. Zu der Gruppe gehörten 36 Frauen und 44 Männer mit einem Durchschnittsalter von 55,4 ± 13,1 Jahre (Bereich 27-75 Jahre). Weitere Eigenschaften der Patienten sind in Tabelle 1 gezeigt, Tabelle 2 und Tabelle 3. Patienten eine Chemotherapie oder Strahlentherapie vor der Operation erhalten oder die eine Geschichte von anderen Tumoren hatten ausgeschlossen waren. In den folgenden Untersuchungen wurde ein Teil der während der Operation entnommen Probe sofort in flüssigem Stickstoff schockgefroren und anschließend bei -80 ° C gelagert, und ein Teil wurde bei 10% gepuffertem Formalin für 24 h fixiert und in Paraffin eingebettet.

Immunhistochemie

Paraffin eingebettete Proben in 3 um dicke Abschnitte von den Krebs, Karzinom benachbarte geschnitten wurden, und normalen Gewebeproben und montiert auf Glasobjektträger gepaart. Die Schnitte wurden zunächst bei 65 ° C für 2 h gebrannt. Dann werden die Schnitte wurden in 100% Xylol und rehydriert in einer absteigenden Ethanolreihe (100%, 90%, 80% und 70% Ethanol) und destilliertem Wasser nach Standardprotokollen entparaffiniert. Danach wurden die Schnitte in der citrate antigener Abrufpuffer, erhitzt in einem Autoklaven, und man ließ sie auf Raumtemperatur abkühlen getränkt. Nachdem die Schnitte in PBS dreimal für fünf Minuten gewaschen worden waren, wurde 3% iges Wasserstoffperoxid zugegeben, um 20 min endogene Peroxidase-Aktivität und unspezifische Antigenbindung bei Raumtemperatur zu blockieren. Nach erneutem Waschen mit PBS wurden die Schnitte mit einem spezifischen Antikörper in einer feuchten Kammer über Nacht bei 4 ° C inkubiert. Die folgenden primären Antikörper wurden verwendet: GOLPH3 Antikörper bei 1:100, p-mTOR-Antikörper bei 1:200, p-Akt-Antikörper bei 1:200, p-p70S6 Antikörper bei 1:100 und p-4E-BP1-Antikörper bei 1 :200. Für die negative Kontrolle wurde der primäre Antikörper mit PBS ersetzt, und die restlichen Schritte wurden wie zuvor beschrieben durchgeführt. Die Proben wurden dann mit PBS gewaschen und ein Polymer-Verstärkungsmittel wurde 20 min auf die Abschnitte bei Raumtemperatur zugegeben. Nach dem Waschen wurden die Gewebeschnitte mit HRP-markiertem Ziegen-IgG, biotinylierter anti-Kaninchen-Immunglobulin, und Streptavidin-Peroxidase-Komplex-Reagens Anti-Kaninchen für 30 min behandelt. Die Schnitte wurden dann in frischem 3-3 'Diaminobenzidin Lösung, Hämatoxylin Gegenfärbemittel visualisiert und 0,1% Salzsäure (Farbtrennung zu unterstützen). Schließlich wurden die Objektträger in neutralen Gummi montiert und mit einem Hellfeld-Mikroskop analysiert.

Der Grad der Immunfärbung eines jeden Gewebeschnitt wurde unabhängig voneinander von zwei erfahrene Pathologen untersucht, die durch klinische Daten zu den Patienten blind. Die Proteinexpressionsniveaus wurden eine semi-quantitative Scoring-System bewertet auf der Gesamtanteil auf Basis unter Verwendung von positiv gefärbten Tumorzellen und die Färbungsintensität. Der Anteil der positiv gefärbten Zellen wurde nach den folgenden Kriterien bewertet: 0 (≤5% positive Tumorzellen gefärbt), 1 (25.6% positive Tumorzellen gefärbt), 2 (26-50% positive Tumorzellen gefärbt), 3 (≥51% positive Tumorzellen gefärbt). Die Färbungsintensität erzielt wurde eine Skala von 0 bis 3 wie folgt verwendet: 0 (keine Färbung), 1 (schwache Färbung = hellgelb), 2 (mäßige Anfärbung = gelb-braun), 3 (starke Färbung = braun). Für die Analyse Aggregat Partituren < 4 wurden so günstig Ausdruck definiert, und Partituren ≥4 wurden als hohe Expression definiert

Reverse Transkription-Polymerase-Kettenreaktion

Gesamt-RNA wurde aus frischem Gewebe extrahiert. TRIzol Reagenz (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers. Die RT-PCR-Primer in der Studie verwendet wurden entwickelt und synthetisiert von Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Services Co. Ltd. β-Actin wurde als interne Referenz verwendet. Informationen bezüglich der Primersequenzen die in der Studie ist in Tabelle 4 Die RT-PCR wurde durchgeführt, ein zweistufiges Verfahren unter Verwendung gezeigt. Ein Mikrogramm Gesamt-RNA wurde revers transkribiert in cDNA bei 37 ° C für 60 min und 85 ° C für 5 s. PCR wurde dann nach den folgenden Bedingungen durchgeführt: Erhitzen auf 95 ° C für 5 min; 40 Zyklen Denaturierung für 30 s bei 95 ° C, Annealing bei 60 ° C für 30 s und Verlängerung für 30 s bei 72 ° C; und abschließende Extension bei 72 ° C für 7 min, bevor die Reaktion wurde bei 4 ° C gelagert. Sieben Mikrogramm des endgültigen PCR-Produkt, wurden auf einem 2% Agarosegel zur Elektrophorese und Bildanalyse unter ultraviolettem Licht geladen. Die Quantität Ein Software-Programm (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) verwendet wurde, um die Bänder und die β-Actin-Grauwert der PCR-Produkte zu messen.

Western-Blot

Die Krebs , Karzinom benachbarte und gepaarte Proben normales Gewebe wurden in kleine Stücke in flüssigem Stickstoff gewogen und gemahlen. Vorgekühltem PBS wurde verwendet, um die Proben zu waschen, die dann bei 5000 rpm bei 4 ° C für 5 min zentrifugiert. dreimal mit PBS, vorgekühltem Phosphat Lysepuffer und PMSF Nach dem Waschen wurden zugegeben. Die Probe wurde bei 180 W bei 4 ° C für 5 min zentrifugiert und bei 1000 rpm bei 4 ° C für 5 min mit Ultraschall behandelt; der Überstand wurde dann sofort entfernt, und die Proteinkonzentration wurde durch das Bradford-Assay unter Verwendung eines kommerziellen Kits von Bio-Rad Laboratories gekauft quantifiziert. Die Überstände wurden mit Ladepuffer gemischt und 5 min bei 100 ° C gekocht, um die Proteine ​​zu denaturieren. Gleiche Mengen von jeder Probe wurden in die Vertiefungen einer mit einer Polyvinylidenfluorid-Membran 4-12% Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gel elektrophoretisch behandelt und übertragen geladen. Die Membran wurde für 1 h mit 5% BSA-Puffer blockiert unter Schütteln und dann bei 4ºC über Nacht mit den einzelnen primären Antikörpern, verdünnt in TBST inkubiert. Die folgenden primären Antikörper wurden verwendet: polyklonaler Kaninchen-anti-human GOLPH3 (1:1000, Abcam plc, Cambridge, UK), polyklonalem Kaninchen-anti-human-p p70S6 (Thr389) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), polyklonalem Kaninchen-anti-human p-Akt (Ser473) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), monoklonaler Kaninchen-anti-human p-mTOR (Ser2448) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA) und monoklonale Kaninchen-anti-human p-Akt (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA). Die Membran wurde dann mit TBST fünfmal für fünf Minuten jeweils, und Meerrettich-Peroxidase-konjugiertem Ziege-anti-Kaninchen-IgG-Sekundärantikörper (Santa Cruz Biotechnology, SC-2004) wurde unter Schütteln für 1,5 h vor der Inkubation bei Raumtemperatur zugegeben gewaschen. β-Actin wurde als interne Kontrolle verwendet. Nach dem Waschen mit TBST dreimal für fünf Minuten wurde das Band von Interesse erfaßt, um die ECL-Prime Western-Blot-Kit (Shanghai Pufei Biotechnologie, Shanghai, China) verwendet und die Menge Eine Analyse-Software (Bio-Rad, CA, USA) wurde verwendet, die Densitometrie Daten.

statistische Analysen

Alle statistischen Analysen wurden unter Verwendung des Statistical Package für Sozialwissenschaften durchgeführt, Version 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) zu bewerten. Die RT-PCR und Western-Blotting-Ergebnisse sind als Mittelwert ± SE dargestellt. A one-way ANOVA gefolgt von LSD wurde mehrere Streckentests verwendet, um die Unterschiede zwischen den Gruppen zu analysieren. Die Beziehungen zwischen GOLPH3 und p-mTOR, p-Akt, p-4E-BP und p-p70S6 Expressionsniveaus wurden unter Verwendung von Pearson-Korrelationskoeffizient geschätzt. Die Assoziationen zwischen Proteinexpression und klinisch-pathologischen Variablen wurden mit dem Chi-Quadrat-Test analysiert. P < 0,05 (two-tailed) wurde als das Niveau der statistischen Signifikanz verwendet

Ergebnisse |

Beziehungen zwischen den klinisch-pathologischen Variablen und den Proteinexpressionsniveaus durch Immunhistochemie

immunhistochemischen Detektion. zeigten, dass GOLPH3, p-Akt und p-4E-BP1 im Zytoplasma häufigsten waren und phosphorylierte m-TOR (p-mTOR) war im Zellkern auf niedrigem Niveau auch vorhanden. Jedoch wurde p-p70S6 Anfärben nur im Zytoplasma beobachtet. GOLPH3 und phosphoryliert Akt /mTOR-Signalweg-Proteine ​​wurden höher in der Magenkrebs-Gruppe zum Ausdruck als in der para-Karzinomgewebe und gepaart normalen Schleimhaut Gruppen (Abbildung 1, Tabelle 5). Weiterhin wurden die Beziehungen zwischen der klinisch-pathologischen Variablen und der Proteinexpression untersucht und sind in Tabelle 1, Tabelle 2 und Tabelle 3 zusammengefasst Eine statistische Analyse ergab, dass die positive Expressionsrate GOLPH3 in der Magenkrebs-Gruppe stark mit histologischen Grad korreliert ( p
= 0,011), Tiefe der Invasion ( p
= 0,007), Fernmetastasen ( p
= 0,002) und Beteiligung der Lymphknoten ( p
< 0,004), während sie nicht signifikant mit dem Alter oder Geschlecht ( p
= 0,801 und 0,833, jeweils) korrelierte. Interessanterweise waren die hohen Expressionsniveaus von p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 und p-p70S6 beobachtet mit hoher GOLPH3 Ausdruck konsistent.

mRNA Expression von GOLPH3 und mTOR-Signalweg bezogenen Gene mittels RT-PCR

RNA aus Magenkrebs, para-Karzinomgewebe und abgestimmt normalen Gewebeproben von achtzig Patienten mit Magenkrebs extrahiert. Die Expressionsniveaus von GOLPH3 und mTOR-Signalweg-Genen, einschließlich Akt, mTOR, eukaryontischen Translationsinitiationsfaktor 4E binding protein 1 (4E-BP1) und p70 ribosomal protein S6 kinase (p70S6) wurden in den drei Gruppen von RT beurteilt -PCR. Die Expressionsniveaus dieser Gene in Magenkarzinom waren höher als in Karzinom benachbarte Gewebe und signifikant höher als in normalem Magengewebe gepaart. Die mittlere Dichte und Expressionsverteilung GOPLH3, mTOR, Akt, 4E-BP1 und p70S6 sind in Abbildung 2 gezeigt, eine statistische Analyse zeigte, dass die Expressionsniveaus von GOLPH3 und mTOR-Signalweg-Genen in verschiedenen Geweben Magen signifikant unterschiedlich waren ( p
. < 0,05)

die Proteinexpression von GOLPH3 und mTOR-Signalweg verwandte Proteine ​​durch Western Blot

Western-Blot-Analyse zeigte, dass GOLPH3, p-mTOR, p-Akt1 , p-4EB-P1 und p-p70S6 wurden auch in der Magenkrebs, Karzinom benachbarte und gepaarte normale Magenschleimhaut Gruppen ausgedrückt. Interessanterweise ist eine progressive Erhöhung wurde in den Mittelwerten der genannten Proteinexpressionsniveaus von der paarigen normalen Magenschleimhaut Gruppe an die Magenkrebs Gruppe (Abbildung 3), und es gab einen signifikanten Unterschied zwischen den Gruppen ( p <. 0,05)

die Korrelationen zwischen der Expression von GOLPH3 und den Signalisierungs-Signalweg-verwandte Proteine ​​

Korrelationsanalyse der Pearson eine starke Korrelation zwischen GOLPH3 Ausdruck und die des Signalwegs ergab (Tabelle 6). Eine statistische Analyse zeigte, dass die Pearson Produkt-Moment-Korrelationskoeffizienten alle positiv in der Magenkrebs-Gruppe. Interessanterweise wurde GOLPH3 Expression stark mit p-mTOR, p-4E-BP1 und p-p70S6 ( r
= 0,410, 0,203 und 0,128 bzw. p
< 0,05), die Expression und eine positive Korrelation zwischen GOLPH3 und p-Akt war fast signifikant ( p
= 0,054). Inzwischen starke Korrelationen zwischen der Expression von p-4E-BP1 und die oben genannten Proteine, mit Ausnahme von p-mTOR beobachtet. Phosphorylated mTOR-Expression wurde auch mit p-Akt Ausdruck positiv korreliert ( r
= 0,521, p
= 0,027). Phosphorylated p70S6 Expression wurde auch mit der Expression von P-Akt korreliert ( r
= 0,274, p
< 0,001) und p-mTOR ( r
= 0,451, p
= 0,007).

Diskussion

Obwohl die Häufigkeit von Magenkrebs in den letzten Jahren zurückgegangen ist [2], bleibt es eine ernsthafte Bedrohung für die menschliche Gesundheit. Die meisten Patienten mit Magenkrebs im fortgeschrittenen Stadium diagnostiziert und neigen dazu, mit der Tumorinvasion und Metastasierung zu präsentieren. Im Laufe des letzten Jahrzehnts haben sich keine großen Verbesserungen in Bezug auf die Früherkennung und Behandlung von Magenkrebs erzielt. Ein Verständnis der Molekularbiologie zugrunde liegenden Magenkrebs fehlt noch. Seit 2009 hat GOLPH3 beträchtliche Aufmerksamkeit als Onkogen erhalten. Dieses Protein lokalisiert an der zytoplasmatischen Seite des trans-Golgi und hat eng mit Tumorigenität assoziiert [3], [8]. Große Studien haben herausgefunden, dass GOLPH3 Überexpression in verschiedenen humanen Krebserkrankungen auftritt, einschließlich epithelialen Ovarialkarzinom, Nierenzellkarzinom, Glioblastom, Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus und orale Zungenkrebs [12] - [16]. Hinweise darauf, dass GOLPH3 beteiligt in tumorigenesis ist und korreliert mit einer schlechten Prognose. Des Weiteren berichtete eine Studie, dass GOLPH3 Überexpression mit einer schlechten klinischen Ergebnis in Magenkrebs assoziiert ist [17]. Allerdings sind die genauen Mechanismen dieser Beziehung zugrunde liegenden unklar, und die genaue molekulare Mechanismus, mit dem GOLPH3 bei Magenkrebs Tumorentstehung, Invasion und Metastasierung beteiligt ist wenig bekannt. Um das Potenzial molekularen Mechanismus zu untersuchen, mit denen GOLPH3 bei Magenkrebs beteiligt ist, wir verwendet erste Immunhistochemie GOLPH3 Expression in verschiedenen Magen-Gewebe lokalisieren. Wir fanden, dass GOLPH3 in das Zytoplasma hauptsächlich lokalisiert war, und es wurde in Magenkrebs, para-Karzinom und gepaarte normalen Magengeweben exprimiert. Interessanterweise waren die Raten der hohen GOLPH3 Ausdruck waren 75.00% (60 von 80) bei Magenkrebs Gewebe, 43.75% (35 von 80) in Karzinom benachbarte Gewebe und 12,50% (10 von 80) in normalen Geweben, bzw. ( Tabelle 5). Darüber hinaus wurde im Magenkrebsgewebe und wurde stark im Zusammenhang mit Magenkrebs Invasion und Metastasierung GOLPH3 Überexpression beobachtet. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass hohe GOLPH3 Expression signifikant zu histologischen Grad verwandt war ( p
= 0,015), Tiefe der Invasion ( p
< 0,001), Lymphknotenmetastasen ( p
< 0,001) und Fernmetastasen ( p
= 0,006) bei Magenkrebs Gewebe (Tabelle 1). Zusätzlich wurden Western-Blot und RT-PCR durchgeführt GOLPH3 Expression auf der Protein und mRNA-Spiegel zu untersuchen. Interessanterweise waren die Ergebnisse ähnlich denen in der Immunhistochemie Analyse beobachtet. Die obigen Ergebnisse zeigen, dass eine erhöhte GOLPH3 Expression eng mit dem Auftreten von Magenkrebs assoziiert ist, und GOLPH3 kann in der Magenkrebs Invasion und Metastasierung beteiligt sein.

Vor kurzem haben eine zunehmende Zahl von Signaltransduktionswege berichtet worden werden bei der Tumorinvasion und Metastasierung beteiligt. Mammalian target of rapamycin (mTOR), die eine Serin /Threonin-Kinase stromabwärts der Phosphatidylinositol-3-Kinase ist (PI3K) /Akt-Signalweg und umfasst mTORC1 (mTOR /RAPTOR) und mTORC2 (mTOR /RICTOR), reguliert die Proteinsynthese, Zell Proliferation, Zellstoffwechsel und die Differenzierung [18], [19]. Aktiviert mTORC1 sequentiell aktiviert direkt nachgeschaltete Ziele, einschließlich p70S6 kinase (S6K) und eukaryontische Initiationsfaktor 4E-binding protein 1 (4E-BP1) und mTORC2 wurde eine kritische Rolle in Akt-Phosphorylierung an Ser473, was zur vollständigen Aktivierung spielen gezeigt der Akt [20], [21]. Obwohl sie direkt Akt mTOR /RAPTOR aktiviert, kann sie auch aktivieren direkt oder indirekt die p70S6 Kinase /4EBP1 Weg diesen Weg durch den Tumor-Suppressor-TSC2 phosphorylating [22]. Der Akt /mTOR-Signalweg wurde in verschiedenen bösartigen Tumoren häufig aktiviert angezeigt werden, einschließlich Brustkrebs, Urothelkarzinom, Ovarialkrebs, neuroendokrinen Tumoren der Bauchspeicheldrüse, menschlichen Medulloblastom, Melanom, Endometriumkarzinom und hepatozelluläres Karzinom; Daher ist dieser Weg eine mögliche therapeutische Ziel in vielen Krebsarten darstellt, [23] - [30]. In unserer Studie, RT-PCR und Western Blotting ergab, dass die mRNA und Proteinexpressionsniveaus von p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 und p-p70S6 in der Gruppe, Magenkrebs waren signifikant höher als in der para-Karzinom Gewebe und gepaarte normalen Magengewebe Gruppen (Abbildung 2, Abbildung 3). Um festzustellen, ob die Expression von P-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 und p-p70S6 mit kritischen klinisch-pathologischen Eigenschaften verbunden waren, führten wir weitere Analysen. In dieser Studie wurden 81,25% der 80 Patienten mit Magenkrebs hoch p-mTOR Ausdruck hatte, 77.50% hoch p-4E-BP-Expression hatte, hatte 76,25% hoch p-p70S6 Ausdruck, und nur 75,00% hatten hohe p-Akt Ausdruck (Tabelle 5). Überraschenderweise ergab eine immunhistochemische Analyse, dass die Expressionsniveaus dieser Protein Ausdrücken signifikant mit der Tiefe der Invasion assoziiert waren, Lymphknoten und entfernte Metastase und histologischen Grad wurden aber nicht mit dem Geschlecht oder Alter (Tabelle 1, Tabelle 2 und Tabelle 3) zugeordnet ist . Diese Ergebnisse legen nahe, dass der Akt /mTOR-Signalweg ist in Magenkrebs aktiviert und kann eine wichtige Rolle bei Magenkrebs Tumorentstehung, Invasion und Metastasierung spielen.

Vor kurzem Scott et al. zeigten, dass GOLPH3 durch konstitutiv Aktivierung des mTOR-Signalweg in Melanomzellen und dass GOLPH3 stimuliert die mTOR-Signalweg über mTORC1 und mTORC2 Komplexe, wodurch die Förderung des Tumorzellwachstums und der Proliferation [8] Zelltransformation und Tumorwachstum fördern. Es ist jedoch unklar, ob dieses Phänomen tritt auch in Magenkrebsgewebe. Um unser Wissen, unsere Studie ist die erste, die Pathogenese von GOLPH3 gefördert tumorigenesis, Invasion und Metastasierung von Magenkrebs zu erkunden. Unsere Daten zeigen eine signifikante positive Beziehung zwischen der Expression von GOLPH3 und p-mTOR, p-4E-BP1 und p-p70S6 ( r
= 0,410, 0,203 und 0,128 bzw. p
< 0,05). die Korrelation zwischen der Expression von GOLPH3 und p-Akt war jedoch nicht signifikant ( r
= 0,258, p
> 0,05) (Tabelle 6). Insbesondere war signifikant höher GOLPH3 Expression durch hohe Expression von p-mTOR, p-4E-BP1 und p-p70S6 in Magenkrebsgewebe begleitet, und diese Beziehung war signifikant mit der Tiefe der Invasion, histologischen Grad und Lymphknoten assoziiert und Fernmetastasen. Unsere Ergebnisse zeigen verschiedene Beziehungen zwischen GOLPH3 und Akt /mTOR Signalproteine ​​und die positive Assoziation zwischen GOLPH3 und p-Akt war fast signifikant. Die spezifischen Ursachen dieser Beziehung zwischen GOLPH3 und p-Akt sind unklar und sollten weiter untersucht werden. Wir vermuten, dass die Probengröße zu klein gewesen sein mag. Darüber hinaus aktivieren kann GOLPH3 in erster Linie den Akt /mTOR-Signalweg über die aktivierte mTORC1 Komplex statt des mTORC2-Komplex, was zu p70S6 und 4E-BP1 Phosphorylierung, wodurch Magenkrebs zu beeinflussen. Diese Ergebnisse zeigen, dass GOLPH3 kann bei Magenkrebs Tumorentstehung, Invasion und Metastasierung über abnormale Aktivierung des Akt /mTOR-Signalweg beteiligt sein.

Abschließend diese Studie die hohe Expressionsniveaus von GOLPH3, p-Akt erkannt, p-mTOR, p-4E-BP1 und p-p70S6 in der Magenkrebs-Gruppe stark, die korreliert mit histologischen Grad, Tiefe der Invasion, Fernmetastasen und Lymphknotenbefall durch klinisch-pathologischen Variablen-Analyse und Immunhistochemie. Ferner wird die Expression von GOPLH3 stark mit der Aktivierung von Akt /mTOR-Signalweg in menschlichen Magenkrebsproben korreliert. Basierend auf diesen Ergebnissen, spekulieren wir, dass GOLPH3 könnte Progression und Metastasierung von Magenkrebs durch die Aktivierung von Akt /mTOR-Signalweg beeinflusst werden. Außerdem schlagen wir vor, dass die Hemmung der Expression von Genen im GOLPH3 und mTOR-Signalweg ein neuartiges Ziel für Magenkrebstherapie darstellen. Schließlich müssen die Invasion und Migration Mechanismen GOLPH3 bei Magenkrebs noch weitere Untersuchungen.

• PLoS ONE: prognostische Bedeutung der Neutrophilen-Lymphozyten-Verhältnis bei Patienten mit Magenkrebs: Eine Meta-Analyse
• PLoS ONE: Expression von XPG Protein in der Entwicklung, Progression und Prognose von Magenkrebs