PLoS One: Mechanizmusok GOLPH3 társult a Progression gyomorrák: előtanulmányt

absztrakt katalógusa

A vizsgálat felépítése katalógusa

Annak vizsgálatára, a specifikus mechanizmus, amivel Golgi foszfoprotein 3 (GOLPH3) befolyásolja a progressziót gyomorrák és tárja fel annak klinikai jelentősége. Katalógusa

módszerek

immunhisztokémiai analízist használtunk, hogy értékelje a korrelációk közötti GOLPH3, foszforilezett mTOR (p-mTOR), foszforilált Akt (p-Akt), foszforilált p70S6 (p-p70S6), foszforilezett 4E-BP1 (p-4E -BP1), és a klinikopatológiai jellemzői gyomorrák. Az mRNS-expressziós szintjének GOLPH3, mTOR, Akt, p70S6 és 4E-BP1 a gyomorrák, a karcinóma-szomszédos és párosítva normális szövet analizáltuk RT-PCR-rel. Western-blot vizsgálatot használták, hogy meghatározzák a fehérje expresszióját GOLPH3, p-mTOR, a p-Akt, a p-p70S6 és p-4E-BP1 a szövetekben.

Eredmények

Magas expressziós fehérje szintje GOLPH3, p-AKT, p-mTOR p70S6, p-4E-BP1 pozitív kapcsolatba hozható szövettani grade ( p katalógusa < 0,05), mélysége invázió ( p katalógusa < 0,05 ), a távoli áttétek ( p katalógusa < 0,05) és a nyirokcsomók érintettsége ( p katalógusa < 0,05). Összehasonlítva carcinoma szomszédos és párosított normál szövetekben, az mRNS expressziós szintjét GOLPH3, AKT, mTOR, p70S6 és 4EBP1 gyomorrákban szövetekben szignifikánsan magasabb volt. A fehérje expressziós szintjét GOLPH3, p-Akt, a p-mTOR, p-p70S6 és p-4E-BP1 gyomorkarcinómában szövetekben is szignifikánsan magasabb volt, mint a karcinóma-szomszédos és párosított normál szövetekben. Egy erős pozitív korreláció volt megfigyelhető GOLPH3, p-mTOR, p-p70S6 és p-4EBP1 kifejezés ( r katalógusa = 0,410, 0,303 és 0,276, illetve p katalógusa < 0,05), de nincs szignifikáns összefüggés a kifejezése GOLPH3 és p-Akt volt megfigyelhető.

Következtetések

a GOPLH3 expressziós szint nagymértékben összefügg az Akt /mTOR jelátvitel humán gyomorrák mintákban. GOLPH3 kombinálva Akt /mTOR jelátviteli aktiválás játszhatnak fontos szerepet a fejlesztés, a differenciálódást, invázió és metasztázis gyomorrák.

bevezető hivatkozás: Peng J, Fang Y, Tao Y, Li K, Su T, Nong Y, et al. (2014) Mechanizmusok GOLPH3 társult a Progression gyomorrák: előzetes tanulmányt. PLoS ONE 9 (10): e107362. doi: 10,1371 /journal.pone.0107362 katalógusa

Szerkesztő: Yuan-Soon Ho, Taipei Orvosi Egyetem, Taiwan katalógusa

Beérkezett: június 13, 2014; Elfogadva: augusztus 7, 2014; Megjelent: október 6, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Peng et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok elérhetősége: A szerzők megerősítik, hogy az összes adatot a megállapításokat alátámasztó teljes mértékben hozzáférhető, korlátozás nélkül. Minden olyan adat, a kézirat és a számok. Katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány által támogatott Research Foundation Guangxi Egészségügyi megfelelő technológia és Fejlesztési Projekt (Grant száma: S201415-01). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

Bár a globális statisztikák azt mutatják, hogy a gyomorrák (GC) a negyedik leggyakoribb rák a férfiak és az ötödik leggyakoribb rákbetegség a nőknél, a halálozási arány gyomorrák a második helyen csak a tüdőrák [1]. A globális előfordulása gyomorrák óta folyamatosan csökken a második világháború [2]. Ugyanakkor a fejlődő országokban, többek között Kínában, a morbiditás és a mortalitás a gyomorrák magas maradt. A gyomorrák kezelésére javult az elmúlt években, de a legtöbb beteg még mindig diagnosztizáltak előrehaladott gyomorrák, gyakran beleértve invázió és távoli áttétek, ami nem megfelelő kezelés hatása arány. Mivel gyomorrák mutat jelentős veszélyt jelent az emberi egészség és élet, nagyon fontos, hogy megértsük a patogenezis gyomorrák a folyamat tumorigenezis, invázió és metasztázis irányítani a korai diagnózis és kezelés. Katalógusa

Általánosan elfogadott tény, hogy tumorképződés magában foglalja a misregulation számos onkogének, tumor szuppresszor gének és metasztázis kapcsolatos gének Golgi foszfoprotein 3 (GOLPH3), amely szintén ismert, mint GPP34, GMx33, vagy MIDAS, egy 34 kD-os membrán fehérje, amely eredetileg azonosított egér Golgi-készülék proteomikai analízis [3]. GOLPH3 tartozik a Golgi-mátrix fehérje család, amely erősen konzerválódott élesztőből emberre [4]. Miután GOLPH3 került transzlációsán módosított, akkor dinamikusan kapcsolódik a negatív Golgi mátrix, gyorsan keresztül szállított transz-Golgi hálózat (TGN) a citoplazmába, és eloszlik a plazma membrán vezikulák és endokrin sejtek [4]. Számos tanulmány igazolta, hogy a GOLPH3 részt vesz anterográd és retrográd Golgi-kereskedelem, receptor újrahasznosítás, és glikozilezés a Golgi-készülék a plazmamembrán; GOLPH3 is szerepet játszik a citoszkeleton kölcsönhatás és karbantartása a Golgi struktúra [4] - [7]. Scott et al. először azonosították az onkogén szerepét GOLPH3 feltárva az a fontos szerepe tumorsejtek differenciálódását és proliferációját, és jelenlétét számos szilárd rákok [8]. Érdekes, hogy néhány tanulmány arra utal, hogy a GOLPH3 szabályozza a rákos sejteket azáltal, hogy fokozzák emlős rapamicin célpont (mTOR) aktivitását. mTOR egy szerin /treonin protein-kináz és a kulcs integrátor foszfatidil-inozit-3-kináz (RTK-PI3K) utak ismert, hogy szabályozza a sejtnövekedést, a proliferációt, és a túlélést a humán rákos sejtek [9] - [10]. Számos tanulmány jelenleg vizsgálja a kapcsolat a GOLPH3 és számos daganatos betegségek azonban nem áll rendelkezésre elegendő bizonyíték támasztja alá azt a feltételezést, hogy a GOLPH3 kifejezés társul az emberi gyomor rák kifejlődésének és a prognózis és a mechanisztikus alapja, amellyel GOLPH3 befolyásolja a tumorigenezis, invázió és metasztázis gyomorrák még tisztázatlan. Ebben a tanulmányban vizsgált klinikai significances a GOLPH3 és AKT /mTOR jelátviteli gyomorrákban. Közben felfedeztük viszonya GOPLPH3 és Akt /mTOR jelátviteli gyomorrákban, hogy felfedje a lehetséges szerepét GOLPH3 szabályozásában mTOR-közvetített gyomorrák tumorigenezis, invázió és metasztázis. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai nyilatkozat katalógusa

a vizsgálatban az eljárásokat felül és hagyja jóvá az intézményi etikai bizottsága az első Affiliated Kórház Guangxi Orvostudományi Egyetem és vezeti elvek szerint kifejezett Helsinki nyilatkozatban. Beleegyezését adta a mentességet a tábla miatt friss mintákat kezelni és névtelenítjük szerint etikai és jogi normákat. Katalógusa

A szövetminták és klinikai adatok kiválasztása katalógusa

A friss szövet gyűjtöttünk nyolcvan beteg a gyomorrák átesett sebészeti kezelés az első Affiliated Kórház Guangxi Orvostudományi Egyetem időszakban 2012. január 2013. január rákos és carcinoma szomszédos szövetek (3 cm-es távolság a rák) és a páros normális szövetekre kapott minden beteg és a páciensnek függetlenül két gyakorlott patológusok szerint American Joint Committee on Cancer feltételeknek [11]. Teljes eredeti klinikai adatok álltak rendelkezésre diagnosztizált betegek gyomorrák. A csoportban 36 nő és 44 férfi, átlag életkor 55,4 ± 13,1 év (27-75 év). További páciens jellemzőit az 1. táblázat mutatja, a 2. táblázatban és a 3. táblázatban a betegek, kemoterápiát vagy sugárkezelést a műtét előtt, vagy akik kórtörténetében más tumorok kizártuk. A következő vizsgálatokat, egy részét a mintából, a műtét során azonnal lefagyasztottuk folyékony nitrogénben, és ezt követően -80 ° C-on, és egy része rögzített 10% -os pufferolt formaiinban 24 órán és paraffinba ágyaztuk.

Immunhisztokémia

paraffinba ágyazott mintákat osztva 3-um vastag metszeteket a rákos, karcinóma szomszédos, és párosítva normális szövet mintákat és üveg tárgylemezekre. A metszeteket először sütött 65 ° C-on 2 órán át. Ezután a metszeteket paraffint 100% xilol és rehidratált csökkenő etanol sorozat (100%, 90%, 80%, és 70% -os etanol), és desztillált vízzel a standard protokollok szerint. Ezt követően a metszeteket átitatott a citrát antigén visszakeresés puffer, melegítünk egy autoklávban, és hagyjuk lehűlni szobahőmérsékletre. Miután a metszeteket PBS-ben mostuk háromszor öt percig, 3% -os hidrogén-peroxidot adunk hozzá, hogy blokkolja az endogén peroxidáz aktivitás és a nem-specifikus antigénkötő szobahőmérsékleten 20 percig keverjük. Mosás után ismét PBS-sel, a metszeteket egy specifikus antitest egy nedves kamrába egy éjszakán át 4 ° C hőmérsékleten. A következő primer antitesteket használtuk: GOLPH3 antitestet 1:100, p-mTOR ellenanyag 1:200, p-Akt ellenanyag 1:200, p-p70S6 ellenanyag 1:100, és a p-4E-BP1 ellenanyag 1 :200. A negatív kontroll, a primer antitest váltotta PBS-sel, és a fennmaradó lépéseket hajtottuk végre az előzőekben leírt. A mintákat ezután PBS-sel mostuk, és egy polimer-erősítő szert adunk a szakaszok szobahőmérsékleten 20 percig keverjük. Mosás után a metszeteket kezeltük HRP-címkézett kecske anti-nyúl IgG, a biotinilezett anti-nyúl immunglobulint, és sztreptavidin-peroxidáz komplex reagenst 30 percig. A metszeteket azután láthatóvá friss 3-3 'diaminobenzidin-oldattal, hematoxilin Counterstain, és 0,1% -os sósavat (segítő színrebontott). Végül a metszeteket szerelt semleges fogínyt, és elemeztük látóterû mikroszkóp. Katalógusa

A mértéke immunfestésével egyes szövetek szakasz értékelték függetlenül két gyakorlott patológusok, akik vakok a betegek klinikai adatok. A fehérje expressziós szinteket alkalmazásával értékeltük félkvantitatív pontozási rendszer alapján az összes százalékos pozitívan festődő tumorsejtek és a festődés intenzitását. A százalékos pozitívan festődő sejtek szerint pontoztuk az alábbi kritériumokat: 0 (≤5% pozitív tumorsejtek festett), 1 (6-25% pozitív tumorsejtek festett), 2 (26-50% pozitív tumorsejtek festett), 3 (≥51% pozitív tumorsejtek festett). A festődés intenzitása pontoztuk egy skála 0-3 a következők: 0 (nincs festés), 1 (gyenge festődés = világos sárga), 2 (közepes festődés = sárga-barna), 3 (erős festődés = barna). Az elemzéshez összesített pontszámok < 4 definiáltuk alacsony expresszió és a pontszámok ≥4 definiáltuk magas expressziós.

Fordított transzkripciós polimeráz-láncreakció

Teljes RNS-t extraháltunk a friss szövetek használatával TRIzol reagenssel (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. Az RT-PCR-primereket alkalmaztunk a vizsgálatban terveztünk és szintetizáltunk Shanghai Sangon biológiai Engineering Technology & Services Co. Ltd. β-aktin használtunk belső referenciaként. Tájékoztatás a primer szekvenciákat a tanulmányban használt mutatja a 4. táblázat Az RT-PCR-t egy kétlépéses eljárás. Egy mikrogramm össz-RNS-t reverz-transzkripcióval cDNS-37 ° C-on 60 percig és 85 ° C-on 5 s. PCR-t, majd szerint végezzük az alábbi körülmények között: melegítés 95 ° C-on 5 percen át; 40 ciklus követett denaturálással 30 másodpercig 95 ° C hőmérsékleten, illesztés 60 ° C-on 30 másodpercig és kiterjesztés 30 s-ig, 72 ° C; és végső lánchosszabbítás 72 ° C-on 7 percig, majd a reakciót 4 ° C-on. Hét mikrogramm a végső PCR-termék felvittünk egy 2% -os agaróz gél elektroforézis és a képalkotó elemzés ultraibolya fényben. A mennyiség egy program (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) mértük a sávok, és a β-aktin szürke értéke a PCR-termékeket. Katalógusa

Western blot katalógusa

A rákos , karcinóma szomszédos és párosított normál szövetmintákat lemértük és felaprítják folyékony nitrogénben. Előhűtött PBS-ben használt mosni a mintákat, amelyeket aztán centrifugáltuk 5000 rpm-mel 4 ° C-on 5 percig. Mosás után háromszor PBS, előhűtött foszfát lízispufferben, és PMSF adunk hozzá. A mintát ultrahanggal kezeljük 180 W 4 ° C-on 5 percig, majd centrifugáljuk 1000 rpm-en, 4 ° C-on 5 percen át; A felülúszót ezután azonnal eltávolítjuk, és a fehérje koncentrációját mennyiségileg a Bradford vizsgálati eljárás segítségével olyan kereskedelmi reagenskészletet vettünk a Bio-Rad Laboratories. A felülúszókat összekevertük mintapufferrel és főtt át 100 ° C-on 5 percig denaturáljuk a fehérjéket. Egyenlő mennyiségű minden egyes minta vittünk a lyukakba egy 4-12% -os nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gél, elektroforézisnek, és átvisszük egy polivinilidén-fluorid membrán. A membránt blokkoltuk 5% BSA-pufferben 1 órán át rázás, majd inkubáljuk 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán át az egyes primer antitestekkel hígítva TBST. A következő primer antitesteket használtuk: poliklonális nyúl anti-humán GOLPH3 (1:1000, ABCAM PLC, Cambridge, Egyesült Királyság), poliklonális nyúl anti-humán p-p70S6 (Thr389) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), poliklonális nyúl anti-humán p-Akt (Ser473) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA) monoklonális nyúl anti-humán p-mTOR (Ser2448) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA) és a monoklonális nyúl anti-humán p-Akt (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA). A membránt ezután mostuk TBST-vel ötször öt percig minden egyes, és a torma-peroxidáz-konjugált kecske anti-nyúl IgG szekunder ellenanyagot (Santa Cruz Biotechnology, SC-2004) adtunk hozzá, az inkubálás előtt szobahőmérsékleten 1,5 órán át rázatjuk. β-aktin használtunk belső kontrollként. Mosás után TBST háromszor öt percig, a sáv az érdeklődés volt kimutatható ECL alkalmazásával elsődleges Western blot kit (Shanghai Pufei Biotechnology, Shanghai, Kína), és a mennyiség egy elemző szoftver (Bio-Rad, CA, USA) használtunk hogy értékelje a denzitometriának adatokat. katalógusa

statisztikai elemzések katalógusa

az összes statisztikai elemzések során a statisztikai csomag a társadalomtudományok, verzió 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Az RT-PCR és Western blot eredményeket átlag ± SE. Az egyirányú ANOVA, majd az LSD többszörös tartomány teszt használtunk, hogy elemezze a csoportok közötti különbségek. Az összefüggések között GOLPH3 és p-mTOR, a p-Akt, a p-4E-BP, és a p-p70S6 expressziós szinteket alkalmazásával becsültük Pearson-féle korrelációs együtthatót. Az egyesületek közötti fehérje expresszióját klinikopatológiai paramétereivel analizáljuk chi-négyzet próba. P < 0,05 (kétfarkú) alkalmaztunk a statisztikai szignifikancia szintjét. Katalógusa

Eredmények katalógusa

közötti kapcsolatok klinikopatológiai változók és a fehérje kifejeződésének mértékét immunhisztokémiai katalógusa

kimutatása immunhisztokémiai módszerrel azt mutatta, hogy GOLPH3, p-Akt, és a p-4E-BP1 voltak leggyakoribb a citoplazmában, és a foszforilezett m-TOR (p-mTOR) is jelen volt a sejtmagban alacsony szinten. Azonban, a p-p70S6 volt festődés csak a citoplazmában. GOLPH3 és foszforilált Akt /mTOR útvonal fehérjék voltak erősen expresszálódik a gyomorrák csoportban, mint a para-karcinóma szövetek és párosított normál nyálkahártya csoportban (1. ábra, 5. táblázat). Továbbá, a kapcsolatot a klinikopatológiai változók és fehérje expresszióját vizsgáltuk, és foglalja össze az 1. táblázat, 2. táblázat és a 3. táblázat A statisztikai elemzés kimutatta, hogy a pozitív expresszióját aránya GOLPH3 A gyomorrák csoport erősen korrelál a szövettani fokozatú ( p katalógusa = 0,011), mélysége invázió ( p = 0,007 katalógusa), a távoli áttétek ( p katalógusa = 0,002), és a nyirokcsomó érintettség ( p katalógusa < 0,004), míg nem korrelál az életkorral vagy nemi ( p katalógusa = 0,801 és 0,833-kal). Érdekes, hogy a magas expressziós szintek p-Akt, a p-mTOR, p-4E-BP1 és p-p70S6 figyeltek összhangban kell lennie a magas GOLPH3 kifejezést.

mRNS expressziója GOLPH3 és mTOR jelátviteli útvonal-kapcsolt gének RT-PCR

extrahált RNS-t a gyomorrák, a para-karcinóma szövet, és kiegyenlített normális szövet mintákat nyolcvan gyomorrákos betegeknél. Az expressziós szintek GOLPH3 és mTOR jelátviteli útvonal kapcsolatos gének, beleértve az Akt, mTOR, eukarióta transzlációs iniciációs faktor 4E-kötő fehérje 1 (4E-BP1) és p70 riboszomális protein S6 kináz (p70S6) értékelték a három csoport RT PCR-. Az expressziós szintek ezen gének gyomor karcinóma magasabbak voltak, mint a karcinóma-szomszédos szövetek és jelentősen magasabb, mint a párosított normál gyomor szövetekben. Az átlagos sűrűséget és kifejezése eloszlása ​​GOPLH3, mTOR, Akt, 4E-BP1 és p70S6 ábrán láthatók 2. statisztikai elemzés kimutatta, hogy az expressziós szintek GOLPH3 és mTOR jelátviteli útvonal kapcsolatos gének szignifikánsan eltérő a különböző gyomor szövetekben ( p
< 0,05).

Protein expresszióját GOLPH3 és mTOR jelátviteli útvonal kapcsolatos fehérjék Western-blottal

Western blot analízis azt mutatta, hogy GOLPH3, p-mTOR, p-Akt1 , p-4EB-P1 és p-p70S6 is expresszálódik a gyomorrák, carcinoma szomszédos, és párosítva normál gyomornyálkahártya csoportok. Érdekes, hogy egy progresszív növekedését figyeltük meg a középérték az említett fehérje expressziós szintek a párosított normál gyomornyálkahártya csoportot a gyomorrák csoport (3. ábra), és nem volt szignifikáns különbség a csoportok között ( p
< 0,05). katalógusa

közötti összefüggés kifejezése GOLPH3 és a jelátviteli jelátviteli útvonal kapcsolódó fehérjék katalógusa

Pearson-féle korrelációs analízis során erős összefüggés GOLPH3 kifejezése, és a jelátviteli (táblázat 6). A statisztikai elemzés kimutatta, hogy a Pearson-féle korrelációs koefficiensek mind pozitívak voltak, a gyomorrák csoport. Érdekes, GOLPH3 kifejezés szoros összefüggést mutatott a p-mTOR, p-4E-BP1 és p-p70S6 ( r katalógusa = 0,410, 0,203 és 0,128, illetve p katalógusa < 0,05) kifejezés és pozitív korreláció GOLPH3 és p-Akt majdnem szignifikáns ( p katalógusa = 0,054). Eközben erős korreláció volt megfigyelhető a kifejezés p-4E-BP1 és a fent említett fehérjék kivételével p-mTOR. Foszforilált mTOR kifejezés szintén pozitív korrelációt p-Akt kifejezés ( r katalógusa = 0,521, p katalógusa = 0,027). Foszforilált p70S6 kifejezése is korrelál a kifejezés a p-Akt ( r katalógusa = 0,274, p katalógusa < 0,001) és p-mTOR ( r katalógusa = 0,451, p katalógusa = 0,007). katalógusa

Vita katalógusa

Bár az előfordulási gyomorrák csökkent az elmúlt években [2], hogy továbbra is komoly veszélyt jelent az emberi egészségre. A legtöbb gyomorrákos betegek diagnosztizáltak előrehaladott, és általában be a tumor invázió és metasztázis. Az elmúlt évtizedben, nem nagy eredményeket értek el kapcsolatos korai diagnózis és a kezelés a gyomorrák. Annak megértése, a molekuláris biológia mögöttes gyomorrák még mindig hiányzik. 2009 óta GOLPH3 jelentős figyelmet kapott, mint egy onkogén. Ez a fehérje lokalizálódik a citoplazmatikus arcát a transz-Golgi és már szorosan összefügg a tumorgenézisre [3], [8]. Nagy tanulmányok azt találták, hogy GOLPH3 túlzott expressziója történik számos emberi rákos megbetegedések, beleértve az epiteliális petefészek karcinóma, vesesejt-karcinóma, glioblasztóma multiforme, nyelőcső pikkelyes sejtes karcinóma, és a szóbeli nyelv rák [12] - [16]. A bizonyítékok arra utalnak, hogy a GOLPH3 szerepet játszik tumorigenezisben és korrelál a gyenge prognózissal. Továbbá, egy tanulmány számolt be, hogy GOLPH3 overexpressziója társított rossz klinikai eredmény a gyomor rákos megbetegedések [17]. Azonban a pontos mechanizmusa ez a kapcsolat nem világosak, és a pontos molekuláris mechanizmus, amely által GOLPH3 részt vesz a gyomorrák tumorigenezis, invázió és metasztázis kevéssé ismert. Hogy vizsgálja meg a lehetséges molekuláris mechanizmust, amellyel GOLPH3 részt vesz a gyomorrák, először használt immunhisztokémiai hogy keresse GOLPH3 kifejezés különböző gyomor szövetekben. Azt találtuk, hogy GOLPH3 elsősorban a citoplazmában volt, és kifejezett gyomorrák, a para-karcinóma és párosított normál gyomor szövetekben. Érdekes, hogy az árak a magas GOLPH3 kifejezés volt 75,00% (60 közül 80) a gyomorrák szövetekben, 43.75% (35 közül 80) a carcinoma szomszédos szövetek és 12,50% (10-ből 80) a normál szövetekben, illetve ( 5. táblázat). Sőt, GOLPH3 túlzott expresszió volt megfigyelhető a gyomor rákos szövetekben, és erősen kapcsolódik gyomor- rák terjedését és áttétét. Eredményeink azt mutatják, hogy a magas GOLPH3 expresszió szignifikáns összefüggést a szövettani grade ( p katalógusa = 0,015), mélysége invázió ( p katalógusa < 0,001), nyirokcsomó áttét ( p
< 0,001), és a távoli áttétek ( p katalógusa = 0,006) a gyomorrák szövetekben (1. táblázat). Ezen túlmenően, Western-blot és RT-PCR végeztünk annak értékelésére GOLPH3 kifejezés a fehérje és mRNS-szintre. Érdekes módon, az eredmények hasonlóak voltak megfigyelhető a immunhisztokémiai elemzést. A fenti eredmények azt mutatják, hogy a megnövekedett GOLPH3 kifejezés szorosan kapcsolódó előfordulásának gyomorrák, és GOLPH3 lehet vonni a gyomorrák invázió és metasztázis. Katalógusa

Az utóbbi időben egyre több jelátviteli utak számoltak be kell vonni a tumor invázió és metasztázis. Mammalian target of rapamycin (mTOR), amely egy szerin /treonin kináz downstream az foszfatidilinozitol 3-kináz (PI3K) /Akt jelátviteli út és magában mTORC1 (mTOR /RAPTOR) és mTORC2 (mTOR /RICTOR), szabályozza a fehérjeszintézist, a sejt proliferáció, a sejtek anyagcseréjét és a differenciálás [18], [19]. Aktivált mTORC1 szekvenciálisan közvetlenül aktiválja a downstream célpontok, beleértve a p70S6-kináz (S6K), és eukarióta iniciációs faktor 4E-kötő fehérje 1 (4E-BP1), és mTORC2 kimutatták, hogy kritikus szerepet játszanak az Akt foszforiláció Ser473, ami a teljes aktiválás Akt [20], [21]. Bár Akt közvetlenül aktiválja mTOR /Raptor, akkor is közvetlenül vagy közvetve aktiválja a p70S6-kináz /4EBP1 útvonal ez az útvonal által foszforiláló a tumorszuppresszor TSC2 [22]. Az Akt /mTOR-útvonal kimutatták, hogy gyakran kell aktiválni a különböző rosszindulatú tumorok, beleértve a mellrák, urothelialis karcinóma, petefészek-rák, hasnyálmirigy neuroendokrin tumorok, humán medulloblasztóma, melanóma, endometriális rák és a hepatocelluláris karcinóma; Ezért ez a reakcióút jelentése egy lehetséges terápiás célpont számos rák [23] - [30]. Vizsgálatunkban RT-PCR és Western blot során kiderült, hogy az mRNS és fehérje expressziós szintjét p-Akt, a p-mTOR, p-4E-BP1 és p-p70S6 A gyomorrák csoport szignifikánsan magasabb volt, mint a para-karcinóma szövetek és párosított normál gyomor szöveti csoportok (2. ábra, 3. ábra). Annak meghatározására, hogy az expressziós szintek a p-Akt, a p-mTOR, p-4E-BP1 és p-p70S6 jártak kritikus klinikopatológiai jellemzőit, végeztünk további elemzéseket. Ebben a vizsgálatban, 81,25% -a 80 gyomorrákos betegeknél volt a magas p-mTOR kifejezés, 77.50% volt a magas p-4E-BP kifejezés, 76,25% volt a magas p-p70S6 kifejezés, és csak 75,00% volt a magas p-Akt expressziója (5. táblázat). Meglepő módon, immunhisztokémiai vizsgálatok során kiderült, hogy a kifejezés ezeknek a proteinkifejeződésekben jelentős összefüggést mutattak a mélysége invázió, nyirokcsomó és távoli áttétek, és a szövettani grade, de nem kötődnek a nemi vagy életkor (1. táblázat, 2. és 3. táblázat) . Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az Akt /mTOR útvonal aktiválódik, a gyomorrák, és fontos szerepet játszanak a gyomorrák tumorigenezis, invázió és metasztázis.

Nemrégiben Scott et al. kiderült, hogy GOLPH3 elősegítheti sejt átalakulás és a tumornövekedést konstitutívan aktiválásával mTOR jelátviteli melanoma sejtekben, és hogy GOLPH3 stimulálja a mTOR jelátviteli úton keresztül mTORC1 és mTORC2 komplexek, ezáltal elősegítik a tumorsejtek növekedését és szaporodását [8]. Azonban nem világos, hogy ez a jelenség is előfordul a gyomorrák szövetekben. Tudomásunk szerint ez a tanulmány az első, hogy vizsgálja meg a patogenezisében GOLPH3 támogatni tumorigenezis, invázió és metasztázis a gyomorrák. Adataink azt mutatják, szignifikáns pozitív kapcsolat a kifejezése GOLPH3 és p-mTOR, p-4E-BP1 és p-p70S6 ( r katalógusa = 0,410, 0,203 és 0,128, illetve p
< 0,05). Ugyanakkor az összefüggés kifejezése GOLPH3 és p-Akt nem volt jelentős ( r katalógusa = 0,258, p katalógusa > 0,05) (6. táblázat). Különösen, jelentősen magasabb, GOLPH3 expressziót kísérte magas expressziós p-mTOR, p-4E-BP1 és p-p70S6 gyomorkarcinómában szövetekben, és ez a kapcsolat szignifikánsan összefüggött a mélysége invázió, szövettani fokozatú, és a nyirokcsomó és a távoli áttétek. Eredményeink szerint a különböző kapcsolatok között GOLPH3 és Akt /mTOR jelátviteli fehérjék, valamint a pozitív összefüggést a GOLPH3 és p-Akt majdnem szignifikáns. A konkrét oka ennek kapcsolatát GOLPH3 és p-Akt nem egyértelműek, és tovább kell vizsgálni. Úgy gondoljuk, hogy a minta mérete már túl kicsi. Emellett GOLPH3 elsõsorban aktiválásához Akt /mTOR jelátviteli útvonal keresztül az aktivált mTORC1 inkább összetettek, mint a mTORC2 komplex, ami p70S6 és 4E-BP1 foszforiláció, ami hatással van a gyomorrák. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy GOLPH3 érintett lehet a gyomorrák tumorigenezis, invázió és metasztázis keresztül abnormális aktivációja a Akt /mTOR jelátviteli útvonal.

Összefoglalva, ez a vizsgálat kimutatható a magas expressziós szintjének GOLPH3, p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 és p-p70S6 a gyomorrák csoport erősen korreláló szövettani grade, mélysége invázió, távoli áttétek, és a nyirokcsomók érintettsége által klinikopatológiai változók elemzése és immunhisztokémia. Továbbá, a kifejezés a GOPLH3 erősen korrelál a aktiválása az Akt aktiválását /mTOR jelátviteli útvonal humán gyomorrák mintákban. Ezen eredmények alapján, azt feltételezzük, hogy GOLPH3 esetleg érintett progresszió és metasztázis gyomorrák aktiválásán keresztül Akt /mTOR jelátviteli útvonal. Sőt, azt javasoljuk, hogy a gátlás a gének expresszióját a GOLPH3 és mTOR jelátviteli útvonal alkalmazásával egy új cél gyomorrák terápiában. Végül az invázió és migrációs mechanizmusai GOLPH3 gyomorrákban még mindig szükség van a további vizsgálatot. Katalógusa

• PLoS One: prognosztikai neutrofil limfocita arány a gyomorrákos betegeknél: A Meta-Analysis
• PLoS One: kifejezése XPG fehérje kifejlesztése, Progression és prognózisa Gyomor- Cancer