Plos ONE: Mehanizmi GOLPH3 povezana z napredovanje želodčnega raka: predhodni Study

Abstract

Študija Oblikovanje

Da bi raziskali posebne mehanizme, s katerimi Golgi fosfoprotein 3 (GOLPH3) vpliva na napredovanje raka želodca in raziskati svojo klinično pomembne.

Metode

Imunohistokemijsko analiza je bila uporabljena za oceno korelacije med GOLPH3, fosforilirata mTOR (p-mTOR), fosforilirata Akt (p-Akt) , fosforilirata p70S6 (p-p70S6), fosforilirata 4E-BP1 (p-4E-BP1) in clinicopathological značilnosti raka želodca. Ravni mRNA izraz za GOLPH3, mTOR, Akt, p70S6 in 4E-BP1 pri raku želodca, karcinom-sosednji in seznanjenih normalnega tkiva smo analizirali z RT-PCR. Western blot smo ugotavljali izražanje beljakovin GOLPH3, p-mTOR, p-Akt, p-p70S6 in p-4E-BP1 v tkivih.

Rezultati

Visoka raven izražanja proteinske GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p70S6 so p-4E-BP1 pozitivno povezana z histološke zgradbe ( p
< 0,05), globina invazije ( p
< 0,05 ), oddaljene metastaze ( p
< 0,05) in vključevanje bezgavk ( p
< 0,05). V primerjavi s karcinomom-meji in seznanjenih normalnih tkivih, so bile ravni mRNA izraz za GOLPH3, AKT, mTOR, p70S6 in 4EBP1 v želodcu tkivih rakom bistveno višja. Nivoji proteina ekspresijski GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p-p70S6 in p-4E-BP1 v želodcu tkivih rakom, so bile precej višje kot karcinoma-sosednjem in parne normalnih tkivih. Opazili so močna pozitivna korelacija med GOLPH3, p-mTOR, p-p70S6 in p-4EBP1 izražanja ( r
= 0,410, 0,303 in 0,276, oziroma, p
< 0,05), vendar niso opazili pomembne korelacije med izražanjem GOLPH3 in p-Akt.

Sklepi

se je nivo izražanja GOPLH3 dobro sovpada z Akt /mTOR signalizacijo v človeške želodčne vzorcih raka. GOLPH3 kombinaciji z Akt /mTOR signalne aktivaciji lahko igrajo pomembno vlogo pri razvoju, diferenciaciji, invazijo in metastaz raka želodca

Navedba. Peng J, Fang Y, Tao Y, Li K, Su T, Nong Y, et al. (2014) Mehanizmi GOLPH3 povezana z napredovanje želodčnega raka: A predhodne študije. PLoS ONE 9 (10): e107362. doi: 10,1371 /journal.pone.0107362

Urednik: Yuan-Soon Ho, Taipei Medical University, Tajvan

Prejeto: 13. junij 2014; Sprejeto: 7. avgust 2014; Objavljeno: 6. oktober 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Data Zaloga:. avtorji potrjujejo, da so v celoti na voljo brez omejitev vse podatke, na katerih temeljijo ugotovitve. Vsi podatki so na voljo v rokopisu in številk

Financiranje:. Ta študija je bila podprta z Research Foundation of Guangxi zdravstveno ustrezno tehnologijo in razvoj projekta (število Grant: S201415-01). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Čeprav so svetovni statistični podatki kažejo, da je rak želodca (GC), četrti najpogostejši rak pri moških in peti najpogostejši rak pri ženskah, umrljivost zaradi raka želodca, na drugem mestu le za pljučnega raka [1]. Globalna incidenca raka želodca se znižuje že od druge svetovne vojne [2]. Vendar pa v razvijajočih se držav, vključno s Kitajsko, obolevnosti in umrljivosti za rakom želodca so ostala visoka. Želodca zdravljenje raka se je v zadnjih letih izboljšala, vendar je večina bolnikov še vedno diagnozo napredovalega raka želodca, pogosto tudi invaziji in daljni metastaz, ki vodi do nezadostnega stopnjo zdravljenja učinek. Ker je rak želodca predstavlja veliko nevarnost za zdravje in življenje ljudi, je ključnega pomena za razumevanje patogenezo raka želodca v procesu tumorigeneze, invaziji in metastaz za vodenje zgodnje diagnosticiranje in zdravljenje.

To je splošno znano, da tvorba tumor vključuje misregulation številnih onkogenov, zaviralnih genov in povezane z metastazami genov Golgi fosfoprotein 3 (GOLPH3), ki je znan tudi kot GPP34, GMx33 ali MIDAS, je 34-kD membranski protein, ki je bil na začetku identificiran v miših Golgijev aparat, ki ga proteomske analize [3]. GOLPH3 spada v družino proteinov Golgi matrike, ki je visoko ohranjenih iz kvasovk za ljudi [4]. Potem ko je bil GOLPH3 translacijsko prirejena, je dinamično povezan z negativnim Golgi matrico, hitro prepelje skozi trans-Golgi omrežja (TGN) v citoplazmo, in se razdeli v membranskih veziklov v plazmi in endokrinih celic [4]. Številne študije so pokazale, da je GOLPH3 vključen v anterogradno in retrogradno trgovini Golgi, recikliranje receptorja in glikozilacije iz aparata Golgi na plazemske membrane; GOLPH3 igra vlogo tudi pri citoskeletnim interakcije in vzdrževanje strukture Golgi [4] - [7]. Scott et al. najprej opredelila onkogenega vlogo GOLPH3 razkril svojo pomembno vlogo pri diferenciaciji tumorskih celic in proliferacijo in svojo prisotnost v mnogih raka trdnih [8]. Zanimivo je, da so nekatere študije kažejo, da GOLPH3 ureja rakave celice s povečanjem tarča rapamicina pri sesalcih (mTOR) dejavnosti. mTOR je serin /treonin protein kinazo in ključni integrator fosfatidil-inozitol-3-kinaze (RTK-PI3K) poti znano regulirati rast celic, proliferacijo in preživetje v človeških rakavih celic [9] - [10]. Številne študije so trenutno raziskujejo odnos med GOLPH3 in več tumorjev pa ni dovolj dokazov, da podpirajo hipotezo, da je GOLPH3 izraz povezan s človeškim želodčne napredovanje raka in prognozo ter mehanskega podlago, s katero GOLPH3 vpliva na tumorigeneze, invazijo in metastaze raka želodca ostaja nejasna. V tej študiji smo raziskovali klinične pomene za GOLPH3 in AKT /mTOR signalnih raka želodca. Medtem, smo ugotovili, da je razmerje med GOPLPH3 in Akt /mTOR signalizacijo na raka želodca, da razkrije potencialno vlogo GOLPH3 pri urejanju-mTOR posredovano raka želodca tumorigeneze, invazijo in metastaze.

Materiali in metode

Etični kodeks

Vsi postopki študija so bili pregledani in z institucionalno etični presoji odbora prve odvisnimi bolnišnici Guangxi Medical University odobren in izvedena v skladu z načeli, izraženimi v Helsinški deklaraciji. Privolitev je izvzeta s strani uprave zaradi svežih vzorcev je bilo obravnavanih in anonimni po etičnih in pravnih standardov.

Vzorce tkiva in kliničnih podatkov izbor

Vzorci svežega tkiva so bili zbrani od osemdeset bolnikov z rakom želodca, ki je prestal kirurško zdravljenje na prvi odvisnimi bolnišnici Guangxi Medical University v obdobju od januarja 2012 do januarja 2013. rakavih in karcinomom-sosednja tkiva (3 cm oddaljenosti od raka) in seznanjenih normalnih tkiv so bili pridobljeni iz vsakega bolnika in je bil bolnik diagnosticirana neodvisno dve izkušeni patologov glede na Skupni odbor ameriškega o merilih za boj proti raku [11]. Popolni originalni klinični podatki bili na voljo za bolnike z diagnozo raka želodca. Skupina vključenih 36 samic in 44 samcev, s povprečno starostjo 55,4 ± 13,1 let (razpon 27-75 let). Dodatne značilnosti bolnikov so prikazane v tabeli 1, Tabela 2 in Tabela 3. Pri bolnikih, ki prejemajo kemoterapijo ali radioterapijo pred operacijo ali ki je imel v preteklosti drugih tumorjev, so bili izključeni. V naslednjih študijah del osebka sprejeti med operacijo je takoj zaskočno zamrznemo v tekočem dušiku in nato shranimo pri -80 ° C, in odsek je bila določena na 10% zastalega formalinom za 24 h in vgrajeni v parafin.

Imunohistokemija

-Parafinski vgrajeni so bili osebki prerezana v 3-mikrometrov debelih odsekov iz rakastih, običajnih vzorcev tkiva karcinomom-sosednji in v paru in so vgrajeni na steklenih ploščicah. Odseki so bili prvotno pekli pri 65 ° C 2 h. Nato so bili odseki deparaffinized v 100% ksilenu in rehidrirane v seriji padajoče etanola (100%, 90%, 80% in 70% etanola) in destilirano vodo v skladu s standardnimi protokoli. Zatem so odseki namakali v citratnem antigenski pridobivanja pufru, segrevamo v avtoklavu, in pustimo, da se ohladi na sobno temperaturo. Potem, ko so odseki sprali v PBS trikrat pet minut, dodamo 3% vodikovega peroksida, da blokira endogene peroksidaze aktivnost in nespecifično vezavo antigena pri sobni temperaturi 20 minut. Po ponovnem spiranju s PBS, so odseki inkubirali s specifičnim protitelesom v vlažni komori preko noči pri 4 ° C. uporabljeni naslednji primarna protitelesa so: GOLPH3 protitelo po 1:100, p-mTOR protitelo po 1:200, p-Akt protitelo po 1:200, p-p70S6 protitelo po 1:100 in p-4E-BP1 protitelesa na 1 :200. Za negativno kontrolo smo primarno protitelo zamenja s PBS in preostale korake smo izvedli, kot je opisano zgoraj. Vzorce smo nato sprali s PBS, in sredstvo polimer okrepitev dodamo oddelkov pri sobni temperaturi 20 minut. Po pranju so bili odseki tkiva obdelamo s HRP-označila kozjega anti-kunčjega IgG, biotiniliranega anti-kunčjega imunoglobulina in streptavidina peroksidaze kompleksa reagenta za 30 minut. Oddelki so bili nato vizualizira v svežo raztopino 3/3 "diaminobenzidine, Hematoxylin za nasprotno, in 0,1% klorovodikova kislina (za pomoč barvno ločevanje). Na koncu so bili diapozitivi nameščena v nevtralnem gumi in analizirali s svetlo polja mikroskopom.

Stopnja imunskim barvanjem vsakega oddelka tkiva je bila ocenjena neodvisno dva izkušena patologi, ki so bili slepi za kliničnih podatkov pacientov. Stopnje izraženosti proteinske so ovrednotili s semi-kvantitativno točkovanja sistem, ki temelji na celotni odstotek pozitivno obarvanih tumorskih celic in intenzitete barvanja. Odstotek pozitivno obarvanih celic je dosegel po naslednjih kriterijih: 0 (≤5% pozitivne tumorske celice obarvane), 1 (6-25% pozitivne tumorske celice obarvane), 2 (26-50% pozitivne tumorske celice obarvane), 3 (obarvamo ≥51% pozitivne tumorske celice). Intenzivnost obarvanja je dosegel uporabi lestvico od 0 do 3, kot sledi: 0 (ni obarvanja), 1 (šibko obarvanje = svetlo rumeno), 2 (zmeren obarvanje = rumeno-rjave barve), 3 (močna obarvanje = rjavo). Za analizo, skupne rezultate < so 4 opredeljeni kot nizko izražanje in rezultati ≥ 4 so bili opredeljeni kot visoko izražanje

reverzno transkripcijo verižne reakcije s polimerazo

Total RNA je bila vzeta iz svežih tkiv uporabo. TRIzola reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA) po navodilih proizvajalca. Primerji RT-PCR, uporabljene v študiji so konstruirani in sintetizirani z Šanghaj Sangon biološki Engineering Technology & Storitve Co Ltd β-Actin uporabimo kot notranjo referenco. Podatki o temeljni premaz sekvence, ki se uporabljajo v študiji, je prikazano v tabeli 4. RT-PCR smo izvedli po metodi dvostopenjsko. En mikrogram celotne RNA smo reverzno prepisana na cDNA pri 37 ° C za 60 min in 85 ° C za 5 sekund. PCR smo nato izvedli v skladu z naslednjimi pogoji: segrevanje na 95 ° C 5 minut; 40 ciklov denaturacijo za 30 sekund pri 95 ° C, žarjenje pri 60 ° C za 30 sekund, in razširitev za 30 sekund pri 72 ° C; in končno podaljšanje pri 72 ° C 7 minut, preden smo reakcijsko shranili pri 4 ° C. Sedem mikrogramov končnega produkta PCR smo naložili na 2% agaroznem gelu za elektroforezo in analizo slikanje pod ultravijolično svetlobo. Količina En program za programsko opremo (Bio-Rad, Hercules, CA, ZDA) je bila uporabljena za merjenje pasove in beta-aktin sive vrednosti produktov PCR.

Western blot

rakavi so karcinom-sosednji in v parih običajne vzorce tkiva stehtali in zmeljejo v majhne kose v tekočem dušiku. Predhodno ohlajeno PBS smo uporabili za spiranje vzorce, ki so bili nato centrifugiramo pri 5000 obratih na minuto pri 4 ° C 5 min. Po trikratnem spiranju s PBS, smo dodali predhodno ohlajeno fosfatni pufer liza in PMSF. Vzorec sonificiramo v 180 W pri 4 ° C 5 minut in centrifugiramo pri 1000 obratih na minuto pri 4 ° C 5 minut; Supernatant smo nato takoj odstranimo in koncentracijo proteina smo kvantificirali s testom Bradfordu z uporabo komercialne opreme kupljene iz Bio-Rad Laboratories. Supernatante smo zmešali z pufra in kuhamo pri 100 ° C 5 min denaturacije proteinov. Enake količine vsakega vzorca smo naložili v vdolbino 4-12% natrijevega dodecilsulfata-poliakrilamid gel, elektroforezo in prenesemo v poliviniliden fluoridne membrano. Membrana smo blokirali s 5% BSA pufra 1 uro s stresanjem in nato inkubiramo pri 4 ° C preko noči s posameznimi primarnimi protitelesi, razredčenih v TBST. Uporabljena so bila naslednja primarna protitelesa: poliklonalna kunčjega anti-človeški GOLPH3 (1:1000, Abcam plc, Cambridge, Velika Britanija), poliklonalna kunčjega anti-človeški p-p70S6 (Thr389) (1:1000, celična signalizacija Technology, Inc. Beverly, MA, USA), poliklonalna kunčjega anti-humani p-Akt (Ser473) (1:1000, Cell signalnega Technology, Inc. Beverly, MA, ZDA), monoklonsko kunčjega anti-humani p-mTOR (Ser2448) (1:1000, Cell signalizacije Technology, Inc. Beverly, MA, ZDA) in monoklonsko kunčjega anti-človeški p-Akt (1:1000, celična signalizacija Technology, Inc. Beverly, MA, ZDA). Membrana nato speremo s TBST petkrat za vsako pet minut in hrenove peroksidaze konjugiranega kozjega anti-kunčjega IgG sekundarna protitelesa (Santa Cruz Biotechnology, SC-2004) dodamo pred inkubacijo pri sobni temperaturi 1,5 ure ob stresanju. β-aktin uporabimo kot notranjo kontrolo. Po spiranju s TBST trikrat za pet minut, je bila odkrita pas interesa pomočjo ECL prime western-blot komplet (Shanghai Pufei biotehnologija, Šanghaj, Kitajska), in analizo programske opreme Količina One (Bio-Rad, CA, ZDA) je bila uporabljena oceniti podatke denzitometrijo.

statistične analize

Vse statistične analize smo naredili s pomočjo statističnega paketa za družbene vede, verzija 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Na RT-PCR in Western blot Rezultati so prikazani kot povprečje ± SE. Enosmerna ANOVA sledi LSD testov multiple dosega je bil uporabljen za analizo razlik med skupinama. Razmerja med GOLPH3 in p-mTOR, p-Akt, p-4E-BP, in stopnjah izražanja p-p70S6 so bile ocenjene z uporabo koeficient korelacije Pearson je. Združenja med beljakovin izražanja in clinicopathological spremenljivkami smo analizirali s testom hi-kvadrat. P < 0,05 (dvo-tailed) je bil uporabljen kot raven statistične pomembnosti

Rezultati

Odnosi med clinicopathological spremenljivk in koncentracije proteina izražanja imunohistokemični

Imunohistokemijsko odkrivanje. so pokazali, da so bile GOLPH3, p-Akt in p-4E-BP1 najpogostejša v citoplazmi in fosforiliran m-TOR (p-mTOR) je bila prisotna tudi v jedru na nizki ravni. Vendar pa je p-p70S6 obarvanje opazili samo v citoplazmi. GOLPH3 in fosforiliranih Akt /mTOR procesi proteine ​​smo bolj močno izražena v želodčni skupini raka kot v para-karcinom tkiva in parnih normalnih sluznici skupine (slika 1, tabela 5). Poleg tega so bili pregledani razmerja med clinicopathological spremenljivk in beljakovin izražanja in so povzeti v tabeli 1, Tabela 2 in Tabela 3. Statistična analiza je pokazala, da je pozitivna stopnja izraz GOLPH3 v želodčni skupini raka je močno povezana z histološke ( p
= 0,011), globina invazije ( p
= 0,007), oddaljenih metastaz ( p
= 0,002), in sodelovanje bezgavko ( p
< 0,004), medtem ko se ni bistveno korelaciji s starostjo ali spolom ( p
= 0,801 in 0,833, v tem zaporedju). Zanimivo je, da so opazili, da je v skladu z visoko ekspresijo GOLPH3 visoke stopnje izraženosti P-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 in p-p70S6.

mRNA izraz GOLPH3 in mTOR signalne povezane s poti genov z RT-PCR

pridobljeni smo RNA z rakom želodca, para-karcinoma tkiva in izravnanih običajnih vzorcev tkiva iz osemdeset bolnikov z rakom želodca. Je ekspresijski nivoji GOLPH3 in mTOR signalne povezanih potjo gene, vključno Akt, mTOR, evkariontska prevajanja začetni faktor 4E vezni protein 1 (4E-BP1) in p70 ribosomske protein S6-kinazo (p70S6), so ocenili v treh skupinah po RT -PCR. Stopnje izraženosti teh genov v karcinom želodca so bile višje kot v karcinoma-sosednja tkiva in znatno višje kot v parnih normalnih želodčnih tkiva. Gostota srednja in distribucija izraz GOPLH3, mTOR, Akt, 4E-BP1 in p70S6 so prikazani na sliki 2. Statistična analiza je pokazala, da so bile stopnje izraženosti v GOLPH3 in mTOR signalizacije, povezane s procesi genov bistveno razlikujejo v različnih želodčnih tkivih ( p
. < 0,05)

beljakovine izraz GOLPH3 in mTOR signalne povezane poti, proteinov z Western blot

Western blot analiza je pokazala, da GOLPH3, p-mTOR, p-Akt1 p-4EB-P1 in p-p70S6 bili izraženi tudi rak želodca, karcinom-sosednji in paru običajne želodčne sluznice skupin. Zanimivo je, da postopno povečanje srednje vrednosti omenjenih ravneh protein izražanja od seznanjenih normalno želodčne sluznice skupine do želodca skupine raka opazili (slika 3), in je bila pomembna razlika med skupinama ( p
. < 0,05)

korelacije med izražanje GOLPH3 in signalizacijo signalnih proteinov, povezanih s poti,

analiza korelacije Pearson je pokazala močno povezavo med GOLPH3 izražanja in da na signalne poti (Tabela 6). Statistična analiza je pokazala, da so bili vsi Pearson izdelek trenutek Korelacijski koeficienti pozitivni v želodčni skupini raka. Zanimivo je, da je GOLPH3 izražanje močno povezana s skupino p-mTOR, p-4E-BP1 in p-p70S6 ( r
= 0,410, 0,203 in 0,128, v tem zaporedju, p
< 0,05) izražanje in pozitivna korelacija med GOLPH3 in p-Akt je bil skoraj značilna ( p
= 0,054). Medtem so med ekspresijo p-4E-BP1 in omenjenih proteinov z izjemo p-mTOR opazili močne korelacije. Fosforilirata mTOR izraz je bil prav tako v pozitivni korelaciji s p-Akt izražanja ( r
= 0,521, p
= 0,027). Fosforilirata p70S6 izraz je bila povezana tudi z izražanjem p-Akt ( r
= 0,274, p
< 0,001) in p-mTOR ( r
= 0,451, p
= 0,007).

Pogovor

Čeprav se je incidenca raka želodca v zadnjih letih [2] zmanjšala, vendar je še vedno resna grožnja za zdravje ljudi. Večina bolnikov z rakom želodca zboli v poznejših fazah in so nagnjeni k predstavi s tumorsko invazijo in metastaz. V zadnjem desetletju so bili doseženi brez velike izboljšave v zvezi z zgodnjo diagnozo in zdravljenje raka želodca. Razumevanje molekularne biologije osnovni rakom želodca, še vedno ni. Od leta 2009, je GOLPH3 prejel veliko pozornosti kot onkogena. Ta protein lokalizira v citoplazemski ploskvi trans-Golgi in je tesno povezan s tumorjev [3], [8]. Velike študije so pokazale, da se pojavlja GOLPH3 prekomerno v številnih človeških rakavih obolenj, vključno karcinom jajčnikov karcinoma ledvičnih celic, glioblastoma multiforme, požiralnika karcinom skvamoznih celic, raka in ustno jezika [12] - [16]. Dokazi kažejo, da je GOLPH3 vključena v tumorigeneze in povezana s slabo prognozo. Poleg tega je ena od študij so poročali, da je GOLPH3 prekomerno povezana s slabim kliničnim izidom v želodcu raka [17]. Vendar pa natančne mehanizme, na katerih temelji ta odnos so nejasni in natančen molekularni mehanizem, s katerim se GOLPH3 vključen v želodčni rak tumorigeneze, invaziji in metastaz slabo razumljen. Da bi raziskali potencialni molekularni mehanizem, s katerim se GOLPH3 sodeluje pri raku želodca, smo najprej uporabili imunohistokemično poiskati GOLPH3 izraz v različnih želodčnih tkivih. Ugotovili smo, da je GOLPH3 predvsem lokalizirano v citoplazmo, in je bil izražen v raka želodca, para-karcinom in parnih normalnih želodca tkiva. Zanimivo je, da so bile stopnje visoke GOLPH3 izražanja 75,00% (60 od 80) v želodčnih tkiva raka, 43,75% (35 od 80) v karcinomom-sosednja tkiva in 12,50% (10 od 80) v normalnih tkivih, v tem zaporedju ( Tabela 5). Poleg tega GOLPH3 prekomerno ekspresijo opazili želodčnega raka tkiva in je močno povezana z želodčno invaziji raka in metastaz. Naši rezultati kažejo, da je bila visoka GOLPH3 izraz bistveno povezana z histološke ( p
= 0,015), globina invazije ( p
< 0,001), bezgavko metastaze ( p
< 0,001), in oddaljeno metastaze ( p
= 0,006) v želodčnih tkivih raka (tabela 1). Poleg tega smo izvedli Western blot in RT-PCR za ocenjevanje GOLPH3 ekspresijo ob proteina in mRNA. Zanimivo je, da so bili rezultati podobni tistim pri imunohistokemični analizi. Zgoraj navedene ugotovitve kažejo, da se poveča izražanje GOLPH3 tesno povezana z incidenco raka želodca in GOLPH3 lahko sodelujejo v želodčni invaziji raka in metastaz.

V zadnjem času vse več signalov v poti so poročali, da biti vključeni v tumorske invazije in metastaz. Sesalcih tarča rapamicina (mTOR), ki je serin /treonin kinaze dolvodno od fosfatidil 3-kinaze (PI3K) /Akt signalne poti in vključuje mTORC1 (mTOR /RAPTOR) in mTORC2 (mTOR /RICTOR), ureja sintezo beljakovin, celice orožja, metabolizem celic in razlikovanje [18], [19]. Aktivirani zaporedno mTORC1 neposredno aktivira nadaljnjim cilje, vključno p70S6 kinaze (S6K) in evkariontskih iniciacijski faktor 4E-vezavni protein 1 (4E-BP1) in mTORC2 Dokazano je, da imajo ključno vlogo pri Akt fosforilacije na Ser473, zaradi česar je polno aktivacijo Akt [20], [21]. Čeprav Akt neposredno aktivira mTOR /RAPTOR, lahko tudi posredno ali neposredno aktiviranje p70S6 kinaza /4EBP1 poti, to pot s fosforilacije tumor dušenje TSC2 [22]. Akt /mTOR poti Dokazano je, da se pogosto aktivirajo pri različnih malignih tumorjev, vključno z rakom dojke, urotelijskim karcinom, rak jajčnikov, trebušne slinavke nevroendokrinih tumorjev, človeški meduloblastoma, melanom, rak endometrija in hepatocelularni karcinom; Zato je ta pot predstavlja morebitno terapevtsko tarčo v mnogih raka [23] - [30]. V naši raziskavi, RT-PCR in Western blotting pokazala, da so bile mRNA in izražanje proteina ravni p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 in p-p70S6 v želodčnem skupini raka bistveno višja kot v para-karcinoma tkiva in parih običajne skupine želodca tkiva (slika 2, slika 3). Če želite ugotoviti, ali so bile stopnje izraženosti P-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 in p-p70S6 povezan s kritičnimi clinicopathological lastnostmi, smo opravili dodatne analize. V tej študiji je imel 81,25% od 80 bolnikov z rakom želodca visoko p-mTOR ekspresijo, 77,50% imelo veliko p-4E-BP ekspresijo, 76,25% imelo visoke p-p70S6 izražanje in le 75,00% imelo veliko p-Akt izraz (Tabela 5). Presenetljivo je, da imunohistokemični analiza je pokazala, da so bile stopnje izraženosti teh beljakovinskih izrazov značilno povezana z globino invazije, bezgavke in oddaljenih metastaz in histološke pa niso bile povezane s spolom ali starostjo (preglednica 1, preglednica 2 in tabeli 3) . Ti rezultati kažejo, da je Akt /mTOR aktivirana pot na raka želodca in lahko igrajo pomembno vlogo pri želodca tumorigeneze raka, invaziji in metastaz.

V zadnjem času, Scott et al. je pokazala, da lahko GOLPH3 spodbujajo transformacijo celic in rast tumorja, ki konstitutivno aktivacijo mTOR signalne poti v celice melanoma in da GOLPH3 stimulira signalno pot mTOR preko mTORC1 in mTORC2 kompleksov, tako spodbujajo rast tumorskih celic in proliferacijo [8]. Vendar pa ni jasno, ali je ta pojav pojavlja tudi v želodčnih tkivih raka. Za naše znanje, naša študija je prva raziskati patogenezo GOLPH3 spodbuja tumorigeneze, invazijo in metastaz raka želodca. Naši podatki kažejo pomemben pozitiven odnos med izražanjem GOLPH3 in p-mTOR, p-4E-BP1 in p-p70S6 ( r
= 0,410, 0,203 in 0,128, oziroma, p
< 0,05). Vendar pa je korelacija med izražanjem GOLPH3 in p-Akt ni bilo veliko ( r
= 0,258, p
> 0,05) (tabela 6). Še posebej je bila bistveno višja GOLPH3 izraz, ki ga spremlja visoko ekspresijo p-mTOR, p-4E-BP1 in p-p70S6 v želodčnih tkivih raka, in to razmerje je značilno povezana z globino invazije, histološke in bezgavke in oddaljenih metastaz. Naši rezultati pokazala različne odnose med GOLPH3 in Akt /mTOR signalnih proteinov, in pozitivna povezava med GOLPH3 in p-Akt je bil skoraj pomembna. Posebni vzroki tega odnosa med GOLPH3 in p-Akt so nejasne in jih je treba dodatno raziskati. Mi špekulirajo, da bi lahko bil vzorec premajhen. Poleg tega lahko GOLPH3 predvsem aktivirati Akt /mTOR signalne poti preko aktiviranega mTORC1 kompleksa namesto mTORC2 kompleksa, ki izhaja iz p70S6 in 4E-BP1 fosforilacije, da bi to vplivalo raka želodca. Ti rezultati kažejo, da se GOLPH3 lahko sodelujejo želodčnega raka tumorigeneze, invaziji in metastaz preko nenormalno aktivacijo Akt /mTOR signalne poti.

Na koncu študija zaznali visoko raven izražanja GOLPH3, p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 in p-p70S6 v želodčni skupini raka močno, ki sovpada z histološke zgradbe, globina invazije, oddaljenih metastaz in prizadetostjo bezgavk ga clinicopathological analizo spremenljivk in imunohistokemijo. Nadalje je izraz GOPLH3 močno povezana z aktivacijo Akt /mTOR signalne poti v človeške želodčne vzorcih raka. Na osnovi teh rezultatov smo domnevajo, da bi lahko GOLPH3 prizadeta napredovanje in metastaze raka želodca z aktivacijo Akt /mTOR signalne poti. Poleg tega predlagamo, da se lahko inhibicijo ekspresije genov v signalne poti GOLPH3 in mTOR predstavlja nov cilj za terapijo raka želodca. Končno, invazijo in migracije mehanizmi GOLPH3 pri raku želodca še potrebne nadaljnje preiskave.

• Plos ONE: prognostični Pomen nevtrofilcev limfocitne Razmerje pri bolnikih z želodčnim rakom: metaanalizi
• Plos ONE: Izražanje XPG beljakovine v razvoj, napredovanje in prognozo želodčnega raka