PLOS ONE: Mécanismes de GOLPH3 associés à la progression du cancer gastrique: une étude préliminaire

Résumé

Conception
étude

Pour étudier les mécanismes spécifiques par lesquels Golgi phosphoprotéine 3 (GOLPH3) affecte la progression du cancer gastrique et d'explorer sa signification clinique.

Méthodes

l'analyse immunohistochimique a été utilisé pour évaluer les corrélations entre GOLPH3, mTOR phosphorylée (p-mTOR), phosphorylée Akt (p-Akt), p70S6 phosphorylée (p-p70S6), phosphorylée 4E-BP1 (p-4E -BP1) et les caractéristiques clinico de cancer gastrique. Les niveaux d'expression de l'ARNm de GOLPH3 mTOR Akt p70S6 et 4E-BP1 dans le cancer gastrique, le cancer adjacent et les tissus normaux appariés ont été analysés par RT-PCR. Western blot a été utilisé pour déterminer l'expression de la protéine de GOLPH3, p-mTOR, p-Akt, p-p70S6 et p-4E-BP1 dans les tissus.

Résultats

niveaux de protéines de haute expression GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p70S6, p-4E-BP1 ont été positivement associé avec le grade histologique ( p
< 0,05), la profondeur de l'invasion ( p
< 0,05 ), métastases à distance ( p
< 0,05) et l'implication des ganglions lymphatiques ( p
< 0,05). Par rapport à un carcinome adjacents et les tissus normaux appariés, les niveaux d'expression d'ARNm de GOLPH3, AKT, mTOR, et p70S6 4EBP1 dans les tissus de cancer gastrique étaient significativement plus élevés. Les niveaux d'expression des protéines de GOLPH3, p-Akt-mTOR p, p-p70S6 et le p-4E-BP1 dans les tissus de cancer gastrique ont également été significativement plus élevée que dans le carcinome adjacents et les tissus normaux appariés. Une forte corrélation positive a été observée entre GOLPH3, p-mTOR, p-p70S6 et d'expression p-4EBP1 ( r
= 0,410, 0,303 et 0,276, respectivement, p
< 0,05), mais pas de corrélation significative entre l'expression de GOLPH3 et p-Akt a été observée.

Conclusions

le niveau d'expression GOPLH3 est fortement corrélée avec la signalisation Akt /mTOR dans les échantillons de cancer de l'estomac humain. GOLPH3 combiné avec Akt /mTOR activation de signalisation peut jouer un rôle important dans le développement, la différenciation, l'invasion et les métastases du cancer gastrique

Citation:. Peng J, Fang Y, Y Tao, Li K, Su T, Nong Y, et al. (2014) Mécanismes de GOLPH3 associée à la progression du cancer gastrique: une étude préliminaire. PLoS ONE 9 (10): e107362. doi: 10.1371 /journal.pone.0107362

Editeur: Yuan-Soon Ho, Université médicale de Taipei, Taiwan

Reçu: Juin 13, 2014; Accepté: 7 Août 2014; Publié 6 Octobre, 2014

Droit d'auteur: © 2014 Peng et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données:. La auteurs confirment que toutes les données sous-jacentes les résultats sont entièrement disponibles sans restriction. Toutes les données sont disponibles à partir du manuscrit et les chiffres

Financement:. Cette étude a été soutenue par la Fondation pour la recherche du Guangxi Santé Technologie Appropriée et Projet de développement (numéro Grant: S201415-01). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

Bien que les statistiques mondiales montrent que le cancer gastrique (GC) est le quatrième cancer le plus fréquent chez les hommes et le cinquième cancer le plus fréquent chez les femmes, la mortalité par cancer de l'estomac est le deuxième seulement pour le cancer du poumon [1]. L'incidence mondiale du cancer gastrique a diminué depuis la Seconde Guerre mondiale [2]. Cependant, dans les pays en développement, dont la Chine, la morbidité et la mortalité du cancer gastrique sont restés élevés. le traitement du cancer gastrique a amélioré ces dernières années, mais la plupart des patients sont encore diagnostiqués avec un cancer gastrique avancé, y compris souvent invasion et métastases à distance, ce qui conduit à un taux d'effet du traitement insatisfaisant. Parce que le cancer gastrique présente une menace importante pour la santé humaine et de la vie, il est crucial de comprendre la pathogenèse du cancer gastrique dans le processus de tumorigenèse, l'invasion et les métastases pour guider le diagnostic et le traitement précoce.

Il est communément admis que la formation de tumeurs comprend la dérégulation de plusieurs oncogènes, des gènes suppresseurs de tumeur et les gènes liés à des métastases Golgi phosphoprotéine 3 (GOLPH3), qui est également connu sous le GPP34, GMx33 ou MIDAS, est une protéine membranaire de 34 kD qui a été identifié initialement chez la souris, l'appareil de Golgi par analyse protéomique [3]. GOLPH3 appartient à la famille des protéines de la matrice de Golgi, qui est hautement conservée de la levure à l'homme [4]. Après GOLPH3 a été modifié en translation, il est relié dynamiquement à la matrice de Golgi négative, transporté rapidement à travers le réseau trans-Golgi (TGN) vers le cytoplasme, et répartie dans des vésicules membranaires plasmatiques et les cellules endocrines [4]. Plusieurs études ont démontré que GOLPH3 est impliqué dans le trafic antérograde et rétrograde Golgi, le recyclage des récepteurs, et la glycosylation de l'appareil de Golgi à la membrane plasmatique; GOLPH3 joue également un rôle dans les interactions du cytosquelette et le maintien de la structure de Golgi [4] - [7]. Scott et al. d'abord en évidence le rôle oncogénique de GOLPH3 en révélant son rôle important dans la différenciation cellulaire et la prolifération tumorale et sa présence dans de nombreux cancers solides [8]. Fait intéressant, certaines études ont suggéré que GOLPH3 régule les cellules cancéreuses en renforçant la cible mammalienne de la rapamycine (mTOR) activité. mTOR est une protéine kinase de sérine /thréonine et un intégrateur clé de kinase (RTK-PI3K) voies-3 phosphatidylinositol connu pour réguler la croissance cellulaire, la prolifération et la survie des cellules cancéreuses humaines [9] - [10]. De nombreuses études étudient actuellement la relation entre le GOLPH3 et plusieurs cancers solides Cependant, il n'y a pas suffisamment de preuves pour soutenir l'hypothèse que l'expression de GOLPH3 est associée à la progression humaine gastrique du cancer et le pronostic et la base mécanique par laquelle GOLPH3 affecte la tumorigenèse, l'invasion et les métastases du cancer gastrique reste incertaine. Dans cette étude, nous avons étudié les significations cliniques de GOLPH3 et AKT /mTOR de signalisation dans le cancer gastrique. Pendant ce temps, nous avons découvert la relation de GOPLPH3 et Akt /signalisation mTOR dans le cancer gastrique pour révéler le rôle potentiel des GOLPH3 dans la régulation de mTOR médiée par cancer gastrique tumorigenèse, l'invasion et les métastases.

Ethical déclaration

Toutes les procédures d'étude ont été examinés et approuvés par le conseil d'administration du premier hôpital affilié de l'Université médicale de Guangxi examen éthique institutionnelle et menés conformément aux principes énoncés dans la déclaration d'Helsinki. Le consentement éclairé a été exempté par le conseil en raison des échantillons frais ont été manipulés et anonymisées selon les normes éthiques et juridiques.

Des échantillons de tissus et de données cliniques sélection

Les échantillons de tissus frais ont été prélevés sur quatre-vingts patients avec le cancer gastrique qui a subi un traitement chirurgical au premier hôpital affilié de l'Université médicale de Guangxi au cours de la période allant de Janvier 2012 Janvier 2013. les tissus cancéreux et carcinome adjacents (3 cm de distance du cancer) et les tissus normaux appariés ont été obtenus à partir de chaque patient , et le patient a été diagnostiqué de façon indépendante par deux pathologistes expérimentés selon l'American Joint Committee sur les critères de cancer [11]. Complete données cliniques initiales étaient disponibles pour les patients diagnostiqués avec un cancer gastrique. Le groupe comprenait 36 ​​femmes et 44 hommes, avec un âge moyen de 55,4 ± 13,1 années (extrêmes 27-75 ans). Des caractéristiques supplémentaires de patients sont présentés dans le tableau 1, tableau 2 et le tableau 3. Les patients recevant une chimiothérapie ou une radiothérapie avant la chirurgie ou qui avaient des antécédents d'autres tumeurs ont été exclus. Dans les études ci-après, une partie de l'échantillon prélevé pendant l'intervention chirurgicale a été immédiatement soumis à une congélation dans l'azote liquide puis conservé à -80 ° C, et une partie a été fixée à 10% de formol tamponné pendant 24 h et inclus dans de la paraffine.

immunohistochimie

spécimens enrobés de paraffine ont été sectionnés en 3-um d'épaisseur des sections à partir des échantillons cancéreux, carcinome adjacent, et appariés normales tissus et montées sur des lames de verre. Les sections sont d'abord cuits à 65 ° C pendant 2 h. Ensuite, les coupes ont été déparaffinées dans 100% de xylène et réhydratées dans une série descendante de l'éthanol (100%, 90%, 80% et 70% d'éthanol) et d'eau distillée selon les protocoles standards. Ensuite, les coupes ont été trempées dans le tampon d'extraction antigénique du citrate, on le chauffe dans un autoclave et on le laisse refroidir à la température ambiante. Une fois les coupes ont été lavées dans du PBS trois fois pendant cinq minutes, 3% de peroxyde d'hydrogène a été ajouté pour bloquer l'activité de peroxydase endogène et de l'antigène non spécifique à la liaison à la température ambiante pendant 20 min. Après un nouveau lavage avec du PBS, les sections ont été incubées avec un anticorps spécifique dans une chambre humide pendant une nuit à 4 ° C. Les anticorps primaires suivants ont été utilisés: anticorps GOLPH3 à 1:100, anticorps p-mTOR à 1:200, anticorps p-Akt à 1:200, anticorps p-p70S6 à 1:100 et anticorps-BP1 p-4E à 1 :200. Pour le contrôle négatif, l'anticorps primaire a été remplacé par du PBS, et les étapes restantes ont été réalisées comme décrit précédemment. Les échantillons ont ensuite été lavées avec du PBS, et un agent polymère de renforcement a été ajouté aux sections à la température ambiante pendant 20 min. Après lavage, les coupes de tissu ont été traités avec la chèvre HRP étiquetée IgG anti-lapin biotinylé anti-immunoglobuline de lapin et la peroxydase streptavidine complexe réactif pendant 30 min. Les sections ont ensuite été visualisées dans une solution fraîche 3-3 'de diaminobenzidine, hématoxyline de contraste, et de l'acide chlorhydrique à 0,1% (pour faciliter la séparation des couleurs). Enfin, les lames ont été montées dans la gomme neutre et analysées avec un microscope à champ clair
.

Le degré d'immunocoloration de chaque section de tissu a été évaluée indépendamment par deux pathologistes expérimentés qui étaient aveugles aux données cliniques des patients. Les niveaux d'expression de protéines ont été évaluées en utilisant un système de notation semi-quantitative sur la base du pourcentage total de cellules tumorales colorées positivement et l'intensité de la coloration. Le pourcentage de cellules colorées positivement a été marqué selon les critères suivants: 0 (cellules ≤5 de% positives tumorales colorées), 1 (cellules tumorales positives 6-25 de% colorées), 2 (cellules tumorales positives 26-50 de% colorées), 3 (cellules tumorales positives ≥51% de tachés). L'intensité de la coloration a été marqué à l'aide d'une échelle allant de 0 à 3 comme suit: 0 (pas de coloration), 1 (faible coloration = jaune clair), 2 (coloration modérée = jaune-brun), 3 (forte coloration = marron). Pour l'analyse, les scores globaux < 4 ont été définis comme une faible expression, et les scores ≥4 ont été définis comme une expression élevée

transcription inverse polymerase chain reaction

L'ARN total a été extrait des tissus frais à l'aide. réactif Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) selon les instructions du fabricant. Les amorces de RT-PCR utilisés dans l'étude ont été conçus et synthétisés par Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Services Co. Ltd. β-actine a été utilisé comme référence interne. Les informations concernant les séquences d'amorces utilisées dans l'étude sont présentés dans le tableau 4. La RT-PCR a été réalisée en utilisant un procédé en deux étapes. Un microgramme d'ARN total a été transcrit en inverse en ADNc à 37 ° C pendant 60 min et 85 ° C pendant 5 s. PCR a ensuite été réalisée selon les conditions suivantes: chauffage à 95 ° C pendant 5 min; 40 cycles de dénaturation pendant 30 s à 95 ° C, un annelage à 60 ° C pendant 30 s et une extension pendant 30 secondes à 72 ° C; et une extension finale à 72 ° C pendant 7 min avant que la réaction a été stocké à 4 ° C. Sept microgrammes du produit final de PCR ont été chargées sur un gel d'agarose à 2% pour l'électrophorèse et l'analyse d'imagerie sous une lumière ultraviolette. Le One logiciel Quantité (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) a été utilisé pour mesurer les bandes et la valeur de gris β-actine des produits de PCR.

Western blot

La cancéreuse carcinome adjacents et des échantillons de tissus normaux appariés ont été pesés et broyés en petits morceaux dans de l'azote liquide. Prérefroidi PBS a été utilisé pour laver les échantillons, qui ont été ensuite centrifugés à 5000 tpm à 4 ° C pendant 5 min. Après trois lavages avec du PBS, prérefroidi tampon phosphate de lyse et PMSF ont été ajoutés. L'échantillon a été traité par ultrasons à 180 W à 4 ° C pendant 5 minutes et on centrifuge à 1000 tpm à 4 ° C pendant 5 min; le surnageant a ensuite été immédiatement retiré, et la concentration en protéine a été mesurée par l'essai de Bradford en utilisant un kit commercial acheté chez Bio-Rad Laboratories. Les surnageants ont été mélangés avec un tampon de charge et fait bouillir à 100 ° C pendant 5 minutes pour dénaturer les protéines. Des quantités égales de chaque échantillon ont été chargés dans les puits d'un gel de 4 à 12% de polyacrylamide-dodécylsulfate de sodium, soumis à une électrophorèse et transférés sur une membrane de fluorure de polyvinylidène. La membrane a été bloquée avec un tampon de BSA à 5% pendant 1 h sous agitation, puis mis à incuber à 4 ° C pendant une nuit avec les anticorps primaires individuels dilués dans du TBST. Les anticorps primaires suivants ont été utilisés: lapin polyclonaux GOLPH3 anti-humain (1:1000, Abcam plc, Cambridge, Royaume-Uni), le lapin polyclonaux anti-humain p-p70S6 (Thr389) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), le lapin polyclonaux anti-humain p-Akt (Ser473) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), le lapin monoclonal anti-humain p-mTOR (Ser2448) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA) et monoclonal de lapin anti-humain p-Akt (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA). La membrane a ensuite été lavée avec du TBST cinq fois pendant cinq minutes à chaque fois et la chèvre Peroxydase de raifort anti-lapin conjugué anticorps IgG secondaire (Santa Cruz Biotechnology, SC-2004) a été ajouté avant incubation à température ambiante pendant 1,5 h sous agitation. β-actine a été utilisée comme contrôle interne. Après lavage avec TBST trois fois pendant cinq minutes, la bande d'intérêt a été détecté en utilisant le premier kit ECL Western blot (Shanghai Pufei biotechnologie, Shanghai, Chine), et le logiciel Quantity One d'analyse (Bio-Rad, CA, USA) a été utilisé pour évaluer les données de densitométrie.

analyses statistiques

Toutes les analyses statistiques ont été réalisées à l'aide du logiciel de statistiques pour les sciences sociales, la version 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Les résultats blot RT-PCR et de l'Ouest sont présentées comme la moyenne ± SE. Une ANOVA à sens unique suivie par des tests multiples de gamme LSD a été utilisé pour analyser les différences entre les groupes. Les relations entre les niveaux d'expression de la p-p70S6 GOLPH3 et le p-mTOR, le p-Akt, le p-4E-BP et ont été estimées en utilisant le coefficient de corrélation de Pearson. Les associations entre l'expression des protéines et des variables clinicopathologiques ont été analysées en utilisant le test du chi carré. P < 0,05 (bilatéral) a été utilisé comme le niveau de signification statistique

Résultats

Les relations entre les variables clinicopathologiques et les niveaux d'expression de protéines par immunohistochimie

Détection immunohistochimique. ont montré que GOLPH3, le p-Akt et le p-4E-BP1 étaient les plus répandues dans le cytoplasme, et phosphorylées m-TOR (p-mTOR) était également présent dans le noyau à un niveau bas. Cependant, le p-p70S6 coloration n'a été observée que dans le cytoplasme. GOLPH3 et protéines /mTOR Akt phosphorylée étaient plus fortement exprimé dans le groupe de cancer de l'estomac que dans le tissu para-carcinome et des groupes de la muqueuse normale par paires (figure 1, tableau 5). En outre, les relations entre les variables clinicopathologiques et l'expression des protéines ont été examinés et sont résumés dans le tableau 1, tableau 2 et le tableau 3. Une analyse statistique a révélé que le taux d'expression positive de GOLPH3 dans le groupe de cancer gastrique fortement corrélé avec le grade histologique ( p
= 0,011), la profondeur de l'invasion ( p
= 0,007), métastases à distance ( p
= 0,002), et l'implication des ganglions lymphatiques ( p
< 0,004), alors qu'il n'a pas de corrélation significative avec l'âge ou le sexe ( p = 0,801
et 0,833, respectivement). Fait intéressant, les niveaux d'expression élevés de p-Akt, le p-mTOR, le p-4E-BP1 et de p-p70S6 ont été observés pour être compatibles avec une expression à haut GOLPH3.

L'expression d'ARNm de GOLPH3 et mTOR la ​​signalisation liée à la voie, gènes par RT-PCR

Nous avons extrait l'ARN d'un cancer gastrique, le tissu para-carcinome, et des échantillons de tissus normaux appariés de quatre-vingts patients atteints de cancer gastrique. Les niveaux de GOLPH3 et mTOR signalisation gènes liés à la voie, y compris Akt, mTOR, traduction facteur d'initiation eucaryote 4E protéine de liaison 1 (4E-BP1), et la protéine p70 S6 kinase ribosomique (p70S6) expression, ont été évalués dans les trois groupes par RT -PCR. Les niveaux de ces gènes dans le cancer de l'estomac d'expression étaient plus élevés que dans les tissus de carcinome adjacents et sensiblement plus élevés que dans les tissus gastriques normaux appariés. La densité moyenne et la distribution de l'expression de GOPLH3 mTOR, Akt, 4E-BP1 et p70S6 sont représentés sur la figure 2. Une analyse statistique a révélé que les niveaux de signalisation des gènes liés à la voie-GOLPH3 et mTOR expression étaient significativement différents dans les différents tissus gastriques ( p
<. 0,05)

L'expression des protéines de GOLPH3 et mTOR voie de signalisation liés protéines par Western blot

L'analyse Western blot a montré que GOLPH3, p-mTOR, p-Akt1 , p-4EB-P1 et le p-p70S6 ont été également exprimés dans le cancer gastrique, le cancer adjacents et des groupes de muqueuse gastrique normale appairés. Fait intéressant, une augmentation progressive a été observée dans les valeurs moyennes mentionnées ci-dessus des niveaux d'expression des protéines du groupe de la muqueuse gastrique normale couplé au groupe de cancer de l'estomac (figure 3), et il y avait une différence significative entre les groupes ( p
<. 0,05)

les corrélations entre l'expression de GOLPH3 et de la signalisation des protéines liées à la voie-

l'analyse de corrélation de Pearson a révélé une forte corrélation entre l'expression de GOLPH3 et celle de la voie de signalisation de signalisation (Tableau 6). Une analyse statistique a montré que le moment du produit de Pearson coefficients de corrélation étaient tous positifs dans le groupe de cancer gastrique. Fait intéressant, l'expression de GOLPH3 était fortement associée à p-mTOR, p-4E-BP1 et p-p70S6 ( r
= 0,410, 0,203 et 0,128, respectivement, p
< 0,05) expression et une corrélation positive entre GOLPH3 et p-Akt était presque significative ( p = 0,054
). Pendant ce temps, une forte corrélation n'a été observée entre l'expression de la p-4E-BP1 et les protéines mentionnées ci-dessus, à l'exception du p-mTOR. expression de mTOR phosphorylée a également été positivement corrélée avec l'expression de p-Akt ( r
= 0,521, p = 0,027
). expression phosphorylée p70S6 a également été corrélée avec l'expression de p-Akt ( r
= 0,274, p
< 0,001) et p-mTOR ( r
= 0,451, p
= 0,007).

Discussion

Bien que l'incidence du cancer gastrique a diminué au cours des dernières années [2], il reste une menace sérieuse pour la santé humaine. La plupart des patients atteints d'un cancer de l'estomac sont diagnostiqués à un stade avancé et ont tendance à présenter une invasion tumorale et les métastases. Au cours de la dernière décennie, pas de grands progrès ont été accomplis en ce qui concerne le diagnostic précoce et le traitement du cancer gastrique. Une compréhension de la biologie moléculaire du cancer gastrique sous-jacente est toujours défaut. Depuis 2009, GOLPH3 a reçu une attention considérable comme un oncogène. Cette protéine se localise à la face cytoplasmique de la trans-Golgi et a été étroitement associé à la tumorigénicité [3], [8]. De vastes études ont montré que la surexpression GOLPH3 se produit dans plusieurs cancers humains, y compris le carcinome epithelial de l'ovaire, un carcinome à cellules rénales, un glioblastome, un carcinome à cellules squameuses de l'œsophage, et le cancer de la langue orale [12] - [16]. Les preuves suggèrent que GOLPH3 est impliqué dans la tumorigenèse et est en corrélation avec un mauvais pronostic. En outre, une étude a rapporté que GOLPH3 surexpression est associée à des résultats cliniques pauvres dans les cancers gastriques [17]. Cependant, les mécanismes précis qui sous-tendent cette relation ne sont pas claires, et le mécanisme moléculaire exact par lequel GOLPH3 est impliqué dans la tumorigenèse du cancer gastrique, l'invasion et la métastase est mal comprise. Pour étudier le mécanisme moléculaire par lequel le potentiel GOLPH3 est impliqué dans le cancer gastrique, nous avons utilisé la première immunohistochimie pour localiser l'expression GOLPH3 dans différents tissus gastriques. Nous avons constaté que GOLPH3 est principalement localisée dans le cytoplasme, et cela a été exprimé dans le cancer gastrique, le para-carcinome et les tissus gastriques normaux appariés. Fait intéressant, les taux d'expression élevé GOLPH3 étaient 75,00% (60 sur 80) dans les tissus de cancer gastrique, 43,75% (35 sur 80) dans les tissus de carcinome adjacents et 12,50% (10 sur 80) dans les tissus normaux, respectivement ( tableau 5). De plus, GOLPH3 surexpression a été observée dans les tissus du cancer de l'estomac et a été fortement liée à l'invasion du cancer de l'estomac et les métastases. Nos résultats suggèrent que l'expression élevée de GOLPH3 était significativement liée au grade histologique ( p
= 0,015), la profondeur de l'invasion ( p
< 0,001), métastase ganglionnaire ( p <<0,001) et de métastases à distance (em> p
= 0,006) dans les tissus de cancer gastrique (voir le tableau 1); br> <. En outre, transfert de Western et RT-PCR ont été réalisées pour évaluer l'expression de GOLPH3 au taux d'ARNm de la protéine et. Fait intéressant, les résultats étaient similaires à celles observées dans l'analyse immunohistochimique. Les résultats ci-dessus indiquent que l'augmentation de l'expression de GOLPH3 est étroitement associée à l'incidence du cancer gastrique et GOLPH3 peuvent être impliqués dans l'invasion de cancer de l'estomac et les métastases.

Récemment, un nombre croissant de voies de signalisation ont été signalés à être impliqué dans l'invasion tumorale et les métastases. la cible mammalienne de la rapamycine (mTOR), qui est une sérine /thréonine kinase en aval de la phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) /Akt signalisation et comprend mTORC1 (mTOR /RAPTOR) et mTORC2 (mTOR /RICTOR), régule la synthèse de la protéine, une cellule prolifération, le métabolisme et la différenciation cellulaire [18], [19]. Activé mTORC1 séquentiellement active directement des cibles en aval, y compris p70S6 kinase (S6K) et facteur d'initiation eucaryote 4E-binding protein 1 (4E-BP1), et mTORC2 a été montré à jouer un rôle crucial dans la phosphorylation de Akt à Ser473, ce qui entraîne l'activation complète Akt [20], [21]. Bien que l'Akt active directement mTOR /RAPTOR, il peut également activer directement ou indirectement la p70S6 kinase /4EBP1 voie de cette voie en phosphorylant le gène suppresseur de tumeur TSC2 [22]. La voie Akt /mTOR a été montré pour être fréquemment activées dans diverses tumeurs malignes, y compris le cancer du sein, le carcinome urothélial, cancer de l'ovaire, les tumeurs neuro-endocriniennes du pancréas, le médulloblastome humain, le mélanome, le cancer de l'endomètre et le cancer hépatocellulaire; Par conséquent, cette voie représente une cible thérapeutique possible dans de nombreux cancers [23] - [30]. Dans notre étude, la RT-PCR et transfert de Western a révélé que l'ARNm et l'expression protéique des niveaux de p-Akt, le p-mTOR, le p-4E-BP1 et de p-p70S6 dans le groupe du cancer gastrique étaient significativement plus élevés que dans le para-carcinome des tissus et des groupes appariés de tissu gastrique normale (figure 2, figure 3). Afin de déterminer si les niveaux de p-Akt-mTOR p, p-4E-BP1 et de p-p70S6 expression ont été associés à des caractéristiques clinico-pathologiques importants, nous avons effectué des analyses plus poussées. Dans cette étude, 81,25% des 80 patients atteints de cancer gastrique avait une expression élevée p-mTOR, 77,50% avaient une expression élevée p-4E-BP, 76,25% avaient élevé p-p70S6 expression, et seulement 75,00% avaient une expression de haut p-Akt (Tableau 5). Étonnamment, une analyse immunohistochimique a révélé que les niveaux de ces expressions de protéines d'expression étaient significativement associés à la profondeur de l'invasion, les ganglions lymphatiques et les métastases à distance, et le grade histologique, mais ne sont pas associés avec le sexe ou l'âge (tableau 1, tableau 2 et le tableau 3) . Ces résultats suggèrent que la voie Akt /mTOR est activée dans le cancer gastrique et peut jouer un rôle important dans la tumorigenèse du cancer gastrique, l'invasion et les métastases.

Récemment, Scott et al. a révélé que GOLPH3 peut favoriser la transformation cellulaire et la croissance tumorale par l'activation constitutive de la voie de signalisation de mTOR dans les cellules de mélanome et que GOLPH3 stimule la voie de signalisation de mTOR par l'intermédiaire mTORC1 et des complexes de mTORC2, favorisant ainsi la croissance des cellules tumorales et la prolifération [8]. Cependant, on ne sait pas si ce phénomène se produit également dans les tissus du cancer de l'estomac. À notre connaissance, notre étude est la première à explorer la pathogenèse de GOLPH3 promu tumorigenèse, l'invasion et les métastases du cancer gastrique. Nos données montrent une relation positive significative entre l'expression de GOLPH3 et p-mTOR, p-4E-BP1 et p-p70S6 ( r
= 0,410, 0,203 et 0,128, respectivement, p
lt &; 0,05). Cependant, la corrélation entre l'expression de GOLPH3 et p-Akt n'a pas été significative ( r
= 0,258, p
> 0,05) (tableau 6). En particulier, significativement plus élevé expression GOLPH3 a été accompagnée par une forte expression de p-mTOR, p-4E-BP1 et p-p70S6 dans les tissus de cancer gastrique, et cette relation était significativement associée à la profondeur de l'invasion, le grade histologique, et des ganglions lymphatiques et métastases à distance. Nos résultats ont révélé diverses relations entre GOLPH3 et protéines /signalisation de mTOR Akt, et l'association positive entre GOLPH3 et p-Akt était presque significative. Les causes spécifiques de cette relation entre GOLPH3 et p-Akt ne sont pas claires et devraient être étudiés. Nous supposons que la taille de l'échantillon peut avoir été trop faible. En outre, GOLPH3 peut principalement activer le /mTOR Akt via le mTORC1 complexe activé plutôt que le complexe mTORC2, résultant en p70S6 et 4E-BP1 phosphorylation, affectant ainsi le cancer gastrique. Ces résultats indiquent que GOLPH3 peut être impliqué dans l'estomac tumorigenèse du cancer, l'invasion et la métastase via l'activation anormale de la voie de signalisation Akt /mTOR.

En conclusion, cette étude a détecté des niveaux de GOLPH3 d'expression élevés, p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 et p-p70S6 dans le groupe de cancer gastrique fortement corrélés avec le grade histologique, la profondeur de l'invasion, métastases à distance, et l'implication des ganglions lymphatiques par clinicopathologique analyse des variables et immunohistochimie. En outre, l'expression de GOPLH3 est fortement corrélée à l'activation de la voie de signalisation Akt /mTOR dans les échantillons de cancer de l'estomac humain. Sur la base de ces résultats, nous pensons que GOLPH3 pourrait être affecté la progression et les métastases du cancer gastrique par l'activation de Akt /mTOR voie de signalisation. Par ailleurs, nous proposons que l'inhibition de l'expression des gènes dans la voie de signalisation de mTOR GOLPH3 et peut représenter une nouvelle cible pour le traitement du cancer gastrique. Enfin, les mécanismes d'invasion et de migration de GOLPH3 dans le cancer gastrique ont encore besoin d'une enquête plus approfondie.

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