PLoS ONE: Mechanismen van GOLPH3 geassocieerd met de progressie van maagkanker: A Preliminary Study

De abstracte

Study Ontwerp

Om de specifieke mechanismen die Golgi fosfoproteïne 3 (GOLPH3) invloed op de te onderzoeken progressie van maagkanker en de klinische relevantie verkennen.

Methods

immunohistochemische analyse werd gebruikt om correlaties tussen GOLPH3 evalueren, gefosforyleerde mTOR (p-mTOR), gefosforyleerde Akt (Akt-p) gefosforyleerd p70S6 (p-p70S6), gefosforyleerd 4E-BP1 (p-4E-BP1) en de klinische en pathologische kenmerken van maagkanker. Het mRNA expressieniveaus van GOLPH3, mTOR, Akt, p70S6 en 4E-BP1 bij maagkanker, carcinoom-aangrenzende en gekoppeld normaal weefsel werden geanalyseerd met RT-PCR. Western blotting werd gebruikt om de eiwitexpressie van GOLPH3, p-mTOR, p-Akt, p-p70S6 en p-4E-BP1 in weefsels te bepalen.

Resultaten

High expressie eiwitniveaus van GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p70S6, p-4E-BP1 waren positief geassocieerd met histologische waardering ( p Restaurant < 0,05), de diepte van de invasie ( p Restaurant < 0,05 ), ver metastase ( p Restaurant < 0,05) en de betrokkenheid van de lymfeklieren ( p Restaurant < 0,05). Vergeleken met carcinoom-aaneengrenzende en gepaarde normale weefsels, de mRNA-expressieniveaus van GOLPH3, AKT, mTOR, en p70S6 4EBP1 bij maagkanker weefsels significant hoger. Het eiwit expressieniveaus van GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p-p70S6 en p-4E-BP1 bij maagkanker weefsels waren ook significant hoger dan in carcinoom en aangrenzende gepaarde normale weefsels. Een sterke positieve correlatie waargenomen tussen GOLPH3, p-mTOR, p-p70S6 en p-4EBP1 expressie ( r
= 0,410, 0,303 en 0,276, respectievelijk p Restaurant < 0,05), maar geen significante correlatie tussen de expressie van GOLPH3 en p-Akt werd waargenomen.

Conclusies

de GOPLH3 expressie niveau is sterk gecorreleerd met Akt /mTOR signalering in menselijke maagkanker monsters. GOLPH3 gecombineerd met Akt /mTOR signaleringsactiviteit kunnen een belangrijke rol spelen bij de ontwikkeling, differentiatie, invasie en metastase van maagkanker

Citation:. Peng J, Fang Y, Y Tao, Li K, Su T, Nong Y, et al. (2014) Mechanismen van GOLPH3 geassocieerd met de progressie van maagkanker: een voorstudie. PLoS ONE 9 (10): e107362. doi: 10.1371 /journal.pone.0107362

Editor: Yuan-Soon Ho, Taipei Medical University, Taiwan

Ontvangen: 13 juni 2014; Aanvaard: 7 augustus 2014; Gepubliceerd: 6 oktober 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Data Availability:. De auteurs bevestigen dat alle gegevens waarop de bevindingen zijn volledig beschikbaar zonder beperking. Alle gegevens zijn beschikbaar vanaf het manuscript en cijfers

Financiering:. Deze studie werd ondersteund door de Research Foundation van Guangxi Health Passende Technology and Development Project (Grant nummer: S201415-01). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Hoewel de wereldwijde statistieken tonen aan dat maagkanker (GC) is de vierde meest voorkomende kanker bij mannen en de vijfde meest voorkomende kanker bij vrouwen, de sterfte aan maagkanker gelederen tweede alleen voor longkanker [1]. De wereldwijde incidentie van maagkanker is gedaald sinds de Tweede Wereldoorlog [2]. Echter, in ontwikkelingslanden, waaronder China, de morbiditeit en mortaliteit van maagkanker zijn hoog gebleven. Maag kankerbehandeling is de laatste jaren verbeterd, maar de meeste patiënten nog gediagnosticeerd met gevorderde maagkanker, waaronder vaak invasie en metastasen, wat leidt tot een onvoldoende behandelingseffect rate. Omdat maagkanker presenteert een belangrijke bedreiging voor de menselijke gezondheid en het leven, is het cruciaal om de pathogenese van maagkanker in het proces van het ontstaan ​​van tumoren, invasie en metastase te begrijpen om een ​​vroege diagnose en behandeling begeleiden.

Het is algemeen aanvaard dat tumorvorming behelst de misregulation talrijke oncogenen, tumorsuppressorgenen en metastase gerelateerde genen Golgi fosfoproteïne 3 (GOLPH3), ook bekend als GPP34, GMx33 of MIDAS, een 34-kD membraaneiwit dat oorspronkelijk werd geïdentificeerd in de muis Golgi-apparaat van proteomics analyse [3]. GOLPH3 behoort tot de Golgi matrix eiwitfamilie, die sterk geconserveerd van gist tot mens [4]. Nadat GOLPH3 translationeel is gemodificeerd, wordt deze dynamisch verbonden met de negatieve Golgi matrix snel getransporteerd door het trans-Golgi netwerk (TGN) naar het cytoplasma, en verdeeld over plasmamembraan vesikels en endocriene cellen [4]. Verschillende studies hebben aangetoond dat GOLPH3 betrokken is bij anterograde en retrograde Golgi handel, receptor recycling en glycosylering van het Golgi apparaat naar de plasmamembraan; GOLPH3 speelt ook een rol in het cytoskelet interacties en onderhoud van het Golgi structuur [4] - [7]. Scott et al. eerst geïdentificeerd de oncogene functie van GOLPH3 door de onthulling van zijn belangrijke rol bij tumorcel differentiatie en proliferatie en de aanwezigheid in vele solide tumoren [8]. Interessant is, hebben sommige studies gesuggereerd dat GOLPH3 regelt kankercellen door het versterken van zoogdieren doelwit van rapamycin (mTOR) activiteit. mTOR is een serine /threonine proteïne kinase en een belangrijke integrator fosfatidyl-inositol-3-kinase (RTK-PI3K) trajecten bekend celgroei, proliferatie en overleving in menselijke kankercellen te reguleren [9] - [10]. Veel studies zijn op dit moment onderzoek naar de relatie tussen de GOLPH3 en verschillende vaste kankers Echter, er is onvoldoende bewijs om de hypothese te ondersteunen dat GOLPH3 expressie wordt geassocieerd met menselijke maagkanker progressie en prognose, en de mechanistische basis waarop GOLPH3 van invloed op de tumorvorming, invasie en metastase van maagkanker blijft onduidelijk. In deze studie onderzochten we de klinische betekenissen van GOLPH3 en AKT /mTOR signaling bij maagkanker. Ondertussen, ontdekten we de relatie van GOPLPH3 en Akt /mTOR signalering in maagkanker de mogelijke rol van GOLPH3 bij het reguleren mTOR-gemedieerde tumorigenese maagkanker, invasie en metastase onthullen.

Materialen en Werkwijzen

ethische verklaring

Alle studie procedures werden beoordeeld en goedgekeurd door de Institutional Ethics review Board van de First Affiliated Hospital van Guangxi Medical University goedgekeurd en uitgevoerd volgens de principes die in de verklaring van Helsinki. Informed consent werd vrijgesteld door het bestuur als gevolg van de nieuwe monsters werden behandeld en anoniem op basis van ethische en wettelijke normen.

weefselmonsters en klinische gegevens selectie

De weefselmonsters vers werden verzameld van tachtig patiënten met maagkanker die gedurende de chirurgische behandeling bij de eerste Affiliated Hospital van Guangxi Medical University onderging van januari 2012 tot januari 2013. Cancerous en carcinoma-aangrenzende weefsels (3 cm afstand van de kanker) en gepaarde normale weefsels werden verkregen van elke patiënt , en de patiënt werd onafhankelijk gediagnosticeerd door twee ervaren pathologen volgens de American Joint Committee on Cancer criteria [11]. Volledige originele klinische gegevens waren beschikbaar voor patiënten met maagkanker. De groep bestond uit 36 ​​vrouwen en 44 mannen, met een gemiddelde leeftijd van 55,4 ± 13,1 jaar (range 27-75 jaar). Patiënt extra eigenschappen worden weergegeven in Tabel 1, Tabel 2 en Tabel 3. Patiënten die chemotherapie of radiotherapie vooraf aan operatie of die een geschiedenis van andere tumoren werden uitgesloten. In de volgende studies werd een deel van het monster die tijdens de operatie werd direct snel bevroren in vloeibare stikstof en vervolgens bij -80 ° C bewaard, en een gedeelte werd gefixeerd in 10% gebufferde formaline gedurende 24 uur en ingebed in paraffine.

Immunohistochemie

paraffine ingebedde monsters werden verdeeld in 3-urn dikke secties van de kankercellen, carcinoom-aangrenzende, en gepaarde normale weefselmonsters en gemonteerd op glasplaatjes. De secties werden aanvankelijk gebakken bij 65 ° C gedurende 2 uur. Vervolgens werden de secties van paraffine ontdaan in xyleen en 100% gerehydrateerd in een dalende ethanol reeks (100%, 90%, 80% en 70% ethanol) en gedestilleerd water volgens standaardprotocollen. Daarna werden de secties gedrenkt in citraat antigene ophalen buffer, verwarmd in een autoclaaf, en afgekoeld tot kamertemperatuur. Nadat de onderdelen in PBS driemaal werden gewassen gedurende vijf minuten werd 3% waterstofperoxide toegevoegd om endogene peroxidase activiteit en niet-specifieke antigeen binding te blokkeren bij kamertemperatuur gedurende 20 min. Na opnieuw wassen met PBS werden de secties geïncubeerd met een specifiek antilichaam in een vochtige kamer gedurende de nacht bij 4 ° C. De volgende primaire antilichamen werden gebruikt: GOLPH3 antilichaam bij 1:100, p-mTOR antilichaam bij 1:200, p-Akt antilichaam bij 1:200, p-p70S6 antilichaam bij 1:100 en p-4E-BP1 antilichaam bij 1 :200. Voor de negatieve controle werd het primaire antilichaam vervangen door PBS en de overige stappen werden uitgevoerd zoals eerder beschreven. De monsters werden vervolgens gewassen met PBS, en een polymeer versterkingsmiddel is aan de gedeelten toegevoegd bij kamertemperatuur gedurende 20 min. Na wassen werden de weefselcoupes behandeld met HRP-gelabeld geit anti-konijn IgG, gebiotinyleerd anti-konijn immunoglobuline, en streptavidine peroxidase complex reagens voor 30 min. De coupes werden vervolgens zichtbaar in vers 3-3 'diaminobenzidine oplossing hematoxyline tegenkleuring en 0,1% zoutzuur (op steun kleurscheiding). Tenslotte werden de dia's in neutrale gom gemonteerd en geanalyseerd met een helder-veld microscoop.

De mate van immunokleuring van elk weefsel sectie werd onafhankelijk beoordeeld door twee ervaren pathologen die blind aan klinische gegevens van de patiënten waren. Het eiwit expressie niveaus werden geëvalueerd onder toepassing van een semi-kwantitatieve scoringssysteem gebaseerd op het totale percentage van positief gekleurde tumorcellen en de kleuringsintensiteit. Het percentage van positief gekleurde cellen werd gescoord volgens onderstaande criteria: 0 (≤5% positieve gekleurde tumorcellen), 1 (6-25% positief gekleurde tumorcellen), 2 (26-50% positief gekleurde tumorcellen), 3 (≥51% positieve tumorcellen gekleurd). De intensiteit van kleuring werd gescoord op een schaal van 0 tot 3 als volgt: 0 (geen kleuring), 1 (zwakke kleuring = lichtgeel), 2 (matig kleuring = geel-bruin), 3 (sterke kleuring = bruin). Voor de analyse, globale score < 4 werden gedefinieerd als lage expressie en scores ≥4 werden gedefinieerd als hoge expressie

Reverse transcriptie-polymerasekettingreactie

Totaal RNA werd geëxtraheerd uit verse weefsels gebruikt. TRIzol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) volgens de instructies van de fabrikant. De RT-PCR-primers die in de studie werden ontworpen en gesynthetiseerd door Shanghai Sangon bio-engineering Technology & Services Co. Ltd. β-actine werd gebruikt als een interne referentie. Informatie over de primersequenties gebruikt in de studie wordt weergegeven in tabel 4. De RT-PCR werd uitgevoerd met een tweestapsmethode. Eén microgram totaal RNA werd reverse getranscribeerd in cDNA bij 37 ° C gedurende 60 min en 85 ° C gedurende 5 s. PCR werd vervolgens uitgevoerd volgens de volgende voorwaarden: verwarmen tot 95 ° C gedurende 5 minuten; 40 cycli van denaturatie gedurende 30 seconden bij 95 ° C, hybridisatie bij 60 ° C gedurende 30 s en verlenging gedurende 30 seconden bij 72 ° C; en laatste verlenging bij 72 ° C gedurende 7 minuten voordat de reactie werd opgeslagen bij 4 ° C. Zeven microgram van het uiteindelijke PCR-product werd geladen op een 2% agarose gel voor elektroforese en beeldanalyse onder ultraviolet licht. De Quantity One software (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) werd gebruikt om de banden en de β-actine grijswaarde van de PCR-producten te meten.

Western blotting

De kankercellen , carcinoom en aangrenzende normale monsters gepaarde weefsel werd gewogen en vermalen tot kleine stukjes in vloeibare stikstof. Voorgekoeld PBS werd gebruikt om de monsters, die vervolgens bij 5000 rpm gecentrifugeerd wassen bij 4 ° C gedurende 5 minuten. Na driemaal wassen met PBS, voorgekoeld fosfaat lysisbuffer en PMSF toegevoegd. Het monster werd gesonificeerd bij 180 W bij 4 ° C gedurende 5 minuten en gecentrifugeerd bij 1000 rpm bij 4 ° C gedurende 5 minuten; het supernatant werd vervolgens onmiddellijk verwijderd, en de eiwitconcentratie werd gekwantificeerd door de Bradford assay met behulp van een commerciële kit gekocht bij Bio-Rad Laboratories. De supernatanten werden gemengd met ladingsbuffer en gekookt bij 100 ° C gedurende 5 minuten om de eiwitten te denatureren. Gelijke hoeveelheden van elk monster werden in de putjes van een 4-12% natriumdodecylsulfaat-polyacrylamide gel elektroforese en overgebracht naar een polyvinylideen fluoride membraan. Het membraan werd geblokkeerd met 5% BSA buffer gedurende 1 uur onder schudden en vervolgens geïncubeerd bij 4 ° C geïncubeerd met de individuele primaire antilichamen verdund in TBST. De volgende primaire antilichamen werden gebruikt: polyklonaal konijn anti-humaan GOLPH3 (1:1000, plc Abcam, Cambridge, UK), polyklonaal konijn-anti-humaan p-p70S6 (Thr389) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), polyklonaal konijn-anti-humaan p-Akt (Ser473) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), monoklonaal konijn anti-humaan p-mTOR (Ser2448) (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA) en monoklonale konijnen anti-humaan p-Akt (1:1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA). Het membraan werd daarna met TBST gewassen vijf keer vijf minuten elk, en mierikswortel peroxidase-geconjugeerd geiten anti-konijn IgG secundair antilichaam (Santa Cruz Biotechnology, SC-2004) werd vóór incubatie bij kamertemperatuur gedurende 1,5 uur onder schudden. β-actine werd gebruikt als een interne controle. Na wassen met TBST driemaal gedurende vijf minuten, de betreffende band werd gedetecteerd met de ECL prime Western blot kit (Shanghai Pufei Biotechnology, Shanghai, China), en de hoeveelheid One analyse software (Bio-Rad, CA, USA) werd gebruikt de densitometrie gegevens

evalueren.
statistische analyses

Alle statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van het statistisch pakket voor de sociale wetenschappen, versie 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). De RT-PCR en Western blotting resultaten worden weergegeven als het gemiddelde ± SE. Een eenzijdige ANOVA gevolgd door LSD meervoudige bereik test werd gebruikt om de verschillen tussen groepen te analyseren. De relaties tussen GOLPH3 en p-mTOR, p-Akt, p-4E-BP en p-p70S6 expressieniveaus werden geschat met Pearson correlatiecoëfficiënt. De associaties tussen eiwit expressie en clinicopathologische variabelen werden geanalyseerd met behulp van de chi-kwadraat-test. P < 0,05 (tweezijdig) werd gebruikt als het niveau van de statistische significantie

Resultaten

De betrekkingen tussen de klinisch-pathologische variabelen en de eiwit expressie levels door immunohistochemie

Immunohistochemische detectie. bleek dat GOLPH3, p-Akt en p-4E-BP1 kwamen het meest voor in het cytoplasma en gefosforyleerde m-TOR (p-mTOR) was ook aanwezig in de kern op een laag niveau. Echter, werd p-p70S6 kleuring alleen waargenomen in het cytoplasma. GOLPH3 en gefosforyleerd Akt /mTOR route eiwitten werden sterker tot expressie gebracht in de maagkanker dan in de para-carcinoomweefsel en gepaarde normale mucosa groepen (Figuur 1, Tabel 5). Bovendien is de relatie tussen de klinische en variabelen en eiwitexpressie werden onderzocht en worden samengevat in Tabel 1, Tabel 2 en Tabel 3. Een statistische analyse bleek dat de positieve expressiesnelheid van GOLPH3 in de maagkanker groep sterk gecorreleerd met histologische waardering ( p
= 0,011), de diepte van de invasie ( p
= 0,007), metastasen op afstand ( p
= 0,002), en de betrokkenheid van de lymfeklieren ( p
< 0,004), terwijl het niet significant correleren met de leeftijd of geslacht ( p
= 0,801 en 0,833, respectievelijk). Interessant is dat de hoge expressieniveaus van p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 en p-p70S6 waargenomen consistent met hoge GOLPH3 expressie zijn.

mRNA expressie van GOLPH3 en mTOR signaleringsroute gerelateerde genen door RT-PCR

We geëxtraheerde RNA uit maagkanker, para-carcinoom weefsel en normale monsters voldoen weefsel tachtig patiënten met maagkanker. De expressieniveaus van GOLPH3 en mTOR-signalerende route genen, waaronder Akt, mTOR, eukaryotische translatie-initiatie factor 4E bindend eiwit 1 (4E-BP1) en p70 ribosomale proteïne S6 kinase (p70S6) werden onderzocht in de drie groepen van RT -PCR. De expressieniveaus van deze genen in maagcarcinoom hoger dan in carcinoma-aangrenzende weefsels en significant hoger dan in gepaarde normale gastrische weefsels. De gemiddelde dichtheid en expressie distributie van GOPLH3, mTOR, Akt, 4E-BP1 en p70S6 worden getoond in figuur 2. Een statistische analyse bleek dat de expressieniveaus van GOLPH3 en mTOR-signalerende route genen waren significant verschillend in verschillende gastrische weefsels ( p
. < 0,05)

Eiwit expressie van GOLPH3 en mTOR signaleringsroute verwante eiwitten door Western blotting

Western blot analyse toonde aan dat GOLPH3, p-mTOR, p-Akt1 , p-4EB-P1 en p-p70S6 werden uitgedrukt in maagkanker, carcinoom-aangrenzende en gepaarde normale maagslijmvlies groepen. Interessant is dat een geleidelijke stijging in de gemiddelde waarden van de genoemde proteïne expressieniveaus van gepaarde normale maagslijmvlies groep de maagkanker groep (figuur 3), en er was een significant verschil tussen de groepen ( p
<. 0,05)

de correlaties tussen de expressie van GOLPH3 en het signaleren signaling pathway-gerelateerde eiwitten

Pearson's correlatie analyse bleek een sterke correlatie tussen GOLPH3 expressie en die van de signaleringsroute (Tabel 6). Een statistische analyse bleek dat de Pearson correlatiecoëfficiënten positief waren in de groep maagkanker. Interessant, werd GOLPH3 expressie sterk geassocieerd met de p-mTOR, p-4E-BP1 en p-p70S6 ( r
= 0,410, 0,203 en 0,128, respectievelijk p Restaurant < 0,05) expressie en een positieve correlatie tussen GOLPH3 en p-Akt was bijna significant ( p
= 0,054). Ondertussen werden sterke correlaties waargenomen tussen de expressie van p-4E-BP1 en de bovengenoemde eiwitten met uitzondering van p-mTOR. Gefosforyleerd mTOR expressie werd ook positief gecorreleerd met de p-Akt expressie ( r
= 0,521, p
= 0,027). Gefosforyleerd p70S6 expressie werd ook gecorreleerd met de expressie van p-Akt ( r
= 0,274, p Restaurant < 0,001) en p-mTOR ( r
= 0,451, p
= 0,007).

Discussie

Hoewel het aantal gevallen van maagkanker is afgenomen in de afgelopen jaren [2], het blijft een ernstige bedreiging voor de gezondheid van de mens. De meeste maagkanker patiënten worden gediagnosticeerd in een vergevorderd stadium en de neiging om met tumor invasie en metastase te presenteren. In het afgelopen decennium, hebben geen grote verbeteringen bereikt met betrekking tot de vroegtijdige diagnose en behandeling van maagkanker. Een goed begrip van de moleculaire biologie onderliggende maagkanker ontbreekt nog. Sinds 2009 is GOLPH3 aanzienlijke aandacht gekregen als een oncogen. Dit eiwit lokaliseert aan de cytoplasmatische gezicht van het trans-Golgi en is nauw verbonden met tumorgeniciteit [3], [8]. Grote studies hebben aangetoond dat GOLPH3 overexpressie optreedt in verschillende menselijke kankers, waaronder epitheliaal ovariumcarcinoom, niercelcarcinoom, glioblastoma multiforme, esophageal plaveiselcelcarcinoom en orale tongkanker [12] - [16]. Er zijn aanwijzingen dat GOLPH3 is betrokken bij het ontstaan ​​van tumoren en correleert met een slechte prognose. Bovendien, een onderzoek meldde dat GOLPH3 overexpressie wordt geassocieerd met een slechte klinische uitkomst bij maagkanker [17]. Echter, de precieze mechanismen die ten grondslag liggen aan deze relatie zijn onduidelijk en de precieze moleculaire mechanisme waardoor GOLPH3 is betrokken bij maagkanker ontstaan ​​van tumoren, invasie en metastase is slecht begrepen. Om het potentieel moleculaire mechanisme waardoor GOLPH3 is betrokken bij maagkanker te onderzoeken, hebben we voor het eerst gebruikt immunohistochemie om GOLPH3 expressie in verschillende maag weefsels te lokaliseren. We vonden dat GOLPH3 was primair gelokaliseerd in het cytoplasma, en werd uitgedrukt in maagkanker, para-carcinoom en gepaarde normale gastrische weefsels. Interessant is dat de tarieven van de hoge GOLPH3 expressie waren 75,00% (60 van de 80) bij maagkanker weefsels, 43,75% (35 van de 80) in carcinoma-aangrenzende weefsels en 12,50% (10 van de 80) in normale weefsels, respectievelijk ( tabel 5). Bovendien GOLPH3 overexpressie werd waargenomen bij maagkanker weefsel en is sterk gerelateerd aan maagkanker invasie en metastase. Onze resultaten suggereren dat de hoge GOLPH3 expressie was significant gerelateerd aan histologische graad ( p
= 0,015), de diepte van de invasie ( p Restaurant < 0,001), lymfeklier metastase ( p
< 0,001), en verre metastase ( p
= 0,006) bij maagkanker weefsels (tabel 1). Bovendien, Western blotting en RT-PCR werd uitgevoerd om GOLPH3 uitdrukking uit het eiwit en mRNA niveaus. Interessant is dat de resultaten waren vergelijkbaar met die waargenomen in de immunohistochemie analyse. De bovenstaande bevindingen tonen aan dat verhoogde GOLPH3 expressie nauw verbonden met de incidentie van maagkanker en GOLPH3 betrokken kan zijn bij de maagkanker en metastase.

Onlangs, steeds signaaltransductiewegen is melding betrokken bij tumorinvasie en metastase. Zoogdieren Doelwit van rapamycine (mTOR), een serine /threonine kinase benedenstrooms van de fosfatidylinositol 3-kinase (PI3K) /Akt signaalweg en omvat mTORC1 (mTOR /RAPTOR) en mTORC2 (mTOR /rictor), regelt eiwitsynthese, cel proliferatie, celmetabolisme en differentiatie [18], [19]. Geactiveerde mTORC1 achtereenvolgens activeert direct benedenstroomse targets, waaronder p70S6 kinase (S6K) en eukaryote initiatiefactor 4E-bindend eiwit 1 (4E-BP1) en mTORC2 is aangetoond dat het een cruciale rol in Akt fosforylering van Ser473 te spelen, waardoor er een volledige activatie van Akt [20], [21]. Hoewel Akt activeert direct mTOR /RAPTOR kan ook direct of indirect activeren p70S6 kinase /4EBP1 pathway deze route door fosforylatie van het tumor suppressor TSC2 [22]. De Akt /mTOR route is aangetoond frequent geactiveerd verschillende kwaadaardige tumoren, waaronder borstkanker, urotheelcarcinoom, eierstokkanker, pancreas neuro-endocriene tumoren, menselijke medulloblastoom, melanoom, endometriumkanker en hepatocellulair carcinoom; dus deze route een mogelijke therapie bij vele vormen van kanker [23] - [30]. In onze studie, RT-PCR en Western blotting toonde aan dat de mRNA en eiwitexpressie niveaus van p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 en p-p70S6 in de maagkanker groep waren significant hoger dan in de para-carcinoom weefsels en gepaard normaal maagweefsel groepen (figuur 2, figuur 3). Om te bepalen of de expressie van p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 en p-p70S6 geassocieerd met klinisch-pathologische kenmerken kritische voerden we verdere analyses. In deze studie, 81,25% van de 80 patiënten met maagkanker hadden hoge p-mTOR expressie, 77,50% had hoge p-4E-BP expressie, 76,25% had hoge p-p70S6 expressie, en slechts 75,00% had hoge p-Akt expressie (Tabel 5). Verrassenderwijs een immunohistochemische analyse bleek dat de expressieniveaus van deze eiwitexpressies waren significant geassocieerd met de diepte van de invasie, lymfeklieren en metastasen op afstand en histologische graad, maar leidde niet tot een geslacht of leeftijd (Tabel 1, Tabel 2 en Tabel 3) . Deze resultaten suggereren dat de Akt /mTOR route wordt geactiveerd bij maagkanker en kan een belangrijke rol spelen bij maagkanker tumorigenese, invasie en metastase spelen.

Onlangs, Scott et al. bleek dat GOLPH3 celtransformatie en tumorgroei kunnen bevorderen door het constitutief activeren mTOR signaling pathway in melanoomcellen en GOLPH3 stimuleert de mTOR signaalweg via mTORC1 en mTORC2 complexen, waardoor bevorderen tumor celgroei en proliferatie [8]. Het is echter onduidelijk of dit fenomeen komt voor bij maagkanker weefsels. Voor zover wij weten, onze studie is de eerste om de pathogenese van GOLPH3 bevorderd tumorigenese, invasie en metastase van maagkanker verkennen. Onze gegevens tonen een significant positieve relatie tussen de expressie van GOLPH3 en p-mTOR, p-4E-BP1 en p-p70S6 ( r
= 0,410, 0,203 en 0,128, respectievelijk p
< 0,05). De correlatie tussen de expressie van GOLPH3 en p-Akt was niet significant ( r
= 0,258, p
> 0,05) (Tabel 6). In het bijzonder werd significant hoger GOLPH3 expressie gepaard met hoge expressie van p-mTOR, p-4E-BP1 en p-p70S6 bij maagkanker weefsels, en deze relatie was significant geassocieerd met de diepte van de invasie, histologische graad, en lymfeklier en verre metastase. Onze resultaten lieten verschillende relaties tussen GOLPH3 en Akt /mTOR signaaleiwitten en de positieve associatie tussen GOLPH3 en p-Akt bijna significant. De specifieke oorzaken van deze relatie tussen GOLPH3 en p-Akt onduidelijk en moet verder worden onderzocht. We speculeren dat de steekproef te klein zijn geweest. Bovendien kunnen GOLPH3 voornamelijk activeren Akt /mTOR signaleringsroute via het geactiveerde complex mTORC1 plaats van mTORC2 complex, wat resulteert in p70S6 en 4E-BP1 fosforylatie, waardoor maagkanker beïnvloeden. Deze resultaten geven aan dat GOLPH3 betrokken kan zijn bij maagkanker tumorigenese, invasie en metastase via abnormale activatie van Akt /mTOR signaleringsroute.

Kortom, deze studie gedetecteerd hoge expressieniveaus van GOLPH3, p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 en p-p70S6 in de maagkanker groep sterk die gecorreleerd met histologische graad, de diepte van de invasie, metastasen op afstand, en de betrokkenheid van de lymfeklieren door klinisch-pathologische variabelen analyse en immunohistochemie. Voorts wordt de expressie van GOPLH3 sterk gecorreleerd met de activering van Akt /mTOR signaleringsroute in menselijke maagkanker monsters. Op basis van deze resultaten, speculeren we dat GOLPH3 kunnen worden getroffen en metastase van maagkanker door de activering van Akt /mTOR signaleringsroute. Bovendien stellen wij voor dat de remming van de expressie van genen in de GOLPH3 en mTOR signaleringsroute een nieuw doelwit voor maagkanker therapie vormen. Tot slot, de invasie en migratie mechanismen van GOLPH3 bij maagkanker moeten nog verder onderzoek.

• PLoS ONE: prognostische betekenis van neutrofielen lymfocyt Ratio bij patiënten met maagkanker: een meta-analyse
• PLoS ONE: Expressie van XPG Eiwit in de ontwikkeling, de progressie en prognose van maagkanker