PLoS ONE: Targeting Cadherin-17 Inaktiviert Ras /Raf /MEK /ERK-Signal und hemmt die Zellproliferation in Magenkrebs

Abstrakt

Cadherin-17 (CDH17), ein Mitglied der 7D-Cadherin-Superfamilie, wurde in Magenkrebs überexprimiert (GC) und wurde mit einer schlechten Überleben, Tumorrezidiv, Metastasierung und fortgeschrittenen Tumorstadium. Bisher ist die zelluläre Funktion und Signalmechanismus von CDH17 in GC bleibt unklar. In dieser Studie haben wir gezeigt, dass über 66% der GC-Zelllinien (20/30) wurden CDH17 positiv. Tissue Microarray (TMA) Test zeigte, dass 73,6% Chinesen GC Gewebe (159/216) waren CDH17 positiv, während 37% jeweils benachbarten normalen Geweben waren CDH17 positiv. Knockdown von CDH17 hemmte die Zellproliferation, Migration, Adhäsion und Koloniebildung und auch ein Zellzyklusarrest und Apoptose in menschlichen AGS GC-Zellen induziert. Auf der anderen Seite, die Überexpression von CDH17 erleichtert MGC-803 GC Tumorwachstum in Nacktmäusen. Antikörper-Array und Western-Blot-Test zeigte, dass die Zuschlags von CDH17 in AGS-Zellen nach unten reguliert Integrin β Serie Proteine ​​inaktiviert weiter die Ras /Raf /MEK /ERK-Weg und führte zu p53 und p21 Akkumulation, die in Proliferationshemmung führte, Zell-Zyklus Verhaftung und Apoptoseinduktion. Zusammenfassend unsere Daten zunächst die Kapazität CDH17 zeigen die Aktivität von Ras /Raf /MEK /ERK-Weg für die Zellproliferation in GC zu regulieren, und legen nahe, dass CDH17 als attraktives therapeutisches Ziel für die zukünftige Forschung dienen kann.

Zitat: Lin Z, Zhang C, Zhang M, Xu D, Fang Y, Z Zhou et al. (2014) Targeting Cadherin-17 Inaktiviert Ras /Raf /MEK /ERK-Signal und hemmt die Zellproliferation in Magenkrebs. PLoS ONE 9 (1): e85296. doi: 10.1371 /journal.pone.0085296

Editor: Claude Prigent, Institut de Génétique et Développement de Rennes, Frankreich

Received: 10. Juni 2013 beginnen; Akzeptiert: 26. November 2013 beginnen; Veröffentlicht: 20. Januar 2014

Copyright: © 2014 Lin et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Die Autoren keine Unterstützung oder Finanzierung zu berichten

Interessenkonflikt: Alle Autoren sind Mitarbeiter oder ehemalige Mitarbeiter von Roche R & D Center (China), mit Ausnahme Yanfen Fang, die Mitarbeiter der East China normal University, Shanghai, China.. Dabei werden nicht die Einhaltung der Autoren ändern, um alle Politiken PLoS ONE auf den Austausch von Daten und Materialien.

Einführung

Magenkrebs (GC) als zweithäufigste Ursache für globale Krebssterblichkeit Platz und die vierthäufigste Krebsart weltweit [1], [2]. Die mediane Überlebenszeit von Patienten GC ist 7~10 Monate. Die meisten Patienten mit GC Gegenwart mit späten Stadium der Erkrankung mit einer Gesamt 5-Jahres-Überleben von etwa 20% und objektiven Ansprechraten zu herkömmlichen chemotherapeutischen Bereich Schemata können von 20% bis 40% verbessert werden [1], [3]. Derzeit ist noch Cisplatin-basierte Therapie weithin für fortgeschrittene und metastasierende GC im klinischen Umfeld eingesetzt. Zusätzlich zur Behandlung von HER2-neu Magenadenokarzinomen überexprimieren, Trastuzumab (Herceptin) in Kombination mit einer Chemotherapie verlängert die mediane Überlebenszeit von 11,1 Monate (Chemotherapie allein) auf 13,8 Monate [4]. In Anbetracht der hohen Mortalitätsrate von GC, gibt es nach wie vor große medizinische Bedarf die empfindliche und zuverlässige Biomarker für die Früherkennung von GC und potente therapeutisches Ziel für die Behandlung von GC zu finden.

CDH17, ein Mitglied von 7D-Cadherin -Superfamilie, präsentiert in der fötalen Leber und Magen-Darm-Trakt während der Embryonalentwicklung, so auch als Leber-Darm-Cadherin (LI Cadherin) gestattet. CDH17 in hepatozellulärem Karzinom überexprimiert [5], [6], Magenkrebs [7], duktale Pankreaskarzinom [8] und Darmkrebs [9] - [11]. Wie berichtet, war CDH17 hauptsächlich die auf der Zellmembran und abwesend in normalen Magen-Gewebe und die Positiv-Rate war fast 78,4% [12]. Das Expressionsniveau von CDH17 war charakteristisch für den fortgeschrittenen Magenkarzinom, die mit einer schlechten Prognose assoziiert war [13]; und es wurde auch mit dem Lymphknotenmetastasen bei Magenkrebs [14] signifikant assoziiert. Knockdown CDH17 mit Lentivirus-vermittelte miRNA hemmte die Proliferation, Adhärenz, Tumorwachstum und Metastasierung von BGC823 menschlichen Magenkrebszellen sowohl in vitro als auch in vivo [15] - [17]. CDH17 wurde als ein Onkogen und ein nützlicher Marker für die Diagnose von Magenkarzinome [18] vorgeschlagen. Es wurde nachgewiesen, dass CDH17 vermittelte onkogene Signaltransduktion bei HCC mit Wnt-Signalweg verbunden ist [5]. Vor kurzem wurde berichtet, dass CDH17 Tumorigenese und lymphatische Metastase in GC durch Aktivierung von NFKB Signalweg induziert [19]. CDH17 regulierte Signal α2β1 Integrin-spezifischen focal adhesion kinase und Ras-Aktivierung zu induzieren, die bei der Zelladhäsion und -proliferation in Dickdarmkrebszellen [11] zur Erhöhung führte. Allerdings bleibt die Hauptrolle und Signalmechanismus von CDH17 in GC unklar. In dieser Studie CDH17 als potentielles therapeutisches Ziel für GC zu validieren und den Signalisierungsmechanismus von CDH17 in GC zu untersuchen, dadurch gekennzeichnet wir die Expression von CDH17 in menschlichen Zelllinien GC und GC Chinese Gewebe, geprüft den Einfluss von CDH17 Zuschlags oder Über Ausdruck auf tumorigene und metastatische Wirkung von GC-Zelllinien, und erforscht die möglichen Signalkaskaden zu CDH17 bezogen. Wir beobachteten eine hohe CDH17 Expression in menschlichen Zelllinien GC und GC chinesischen Gewebe, und eine deutliche Hemmung der Zellproliferation, Migration, Adhäsion, Koloniebildung, Induktion der Apoptose und Zellzyklusarrest, nachdem in den Zeilen menschlichen GC Zelle von CDH17 zum Schweigen zu bringen. Darüber hinaus zeigen unsere Ergebnisse zum einen die Kapazität von CDH17 die Aktivität von Integrin-Ras /Raf /MEK /ERK-Weg für die Zellproliferation in GC zu regulieren, und legen nahe, dass CDH17 als attraktives therapeutisches Ziel für die zukünftige Forschung dienen kann.

Materialien und Methoden

Ethik-Anweisung

die Verwendung und Pflege von Versuchstieren durch die Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC), Roche R &genehmigt wurde; D Center (China). Die menschlichen GC Gewebeblöcke mit entsprechenden benachbarten Gewebeblöcke wurden aus Shanghai Biochip Company, einer CRO-Service-Unternehmen. Alle menschlichen Gewebe wurden mit schriftlicher Zustimmung von der Quelle Patienten gesammelt. Alle Zelllinien wurden von ATCC, USA, Japanische Sammlung von Forschung Bioresources und Shanghai Institute für Biochemie und Zellbiologie, Chinese Academy of Science erworben.

Die Zelllinien und Reagenzien

Alle Zelllinien von American Typische Zell Collection (ATCC), japanische Sammlung von Forschung Bioresources und Shanghai Institute für Biochemie und Zellbiologie, chinesische Akademie der Wissenschaften wurden in den jeweiligen Wachstumsmedium gehalten wird, die von den Herstellern empfohlen wurden. PMD-18T-CDH17 Plasmid von Sino Biological Inc. Tetracycline (Tet) wurde von Sigma, war Zellzählung Kit-8 von Dojindo Molecular Tech war. Menschlichem Plasma Fibronectin wurde von R & D-Systeme. Transwell-Kammer war von Corning (6,5 mm Durchmesser, 8-um Porengröße). CDH17 Oligo siRNA war von Genepharma Co. mit der Sequenz 5'AAGGCCAAGAACCGAGUCATT 3 '. Scram RNA-Steuerung (Allstar®) war von QIAGEN.

Tissue Micro Array Immunhistochemie

Zweihundert und sechzehn Paraffin eingebettet zusammen Magenkrebs Gewebeblöcke mit benachbarten Gewebeblöcke entspricht (benachbartes Gewebe wurde mindestens abgetastet 5 cm vom Primärtumor entfernt) wurden von Shanghai Biochip Firma gesammelt und abgeschieden. Die Gewebe wurden geschnitten und zufällig auf drei Mikro-Array-Folien hergestellt. Das Alter der Patienten waren 32 bis 84 Jahre (Durchschnittsalter 65) mit Inszenierung von 1A-4 gemäß American Joint Committee on Cancer (AJCC) Richtlinien ver.7. Alle Fälle wurden von zwei erfahrenen Pathologen mit erfahrenen Spezial bei Magenkrebs Pathologie diagnostiziert. über Nacht bei 4 ° C, (D MAB1032 1:2000 in TBS /T R &) die Objektträger in Blockierungsserum für 20 min inkubiert, dann mit 100 &mgr; l anti-human Affinität Cadherin-17 gereinigter monoklonaler Ab, Maus-IgG überzogen. Die Objektträger wurden mit 100 &mgr; l DAKO Envision + /HRP, Kaninchen /Maus bedeckt nach gründlich mit TBS gewaschen. Einhundert Mikroliter Substrat-Chromogen-Lösung (DAB) wurden auf die Objektträger aufgebracht und bei Raumtemperatur für 10 min inkubiert. Stained Dias wurden mikroskopisch von zwei Immunhistochemie Experten untersucht. Der normale Maus-IgG wurde als negative Kontrolle verwendet. Die Färbung wurde als negativ zu sein, wenn keine positive Zelle Membranfärbung identifiziert und positiv werden könnte, wenn mehr als 10% der Tumorzellen zeigten Zellmembran-positive Immunfärbung.

TR stabilen Zelllinien

Die pLenti6 /TR-Vektor (Invitrogen, Kat. Nr V48020) und pLenti3.3 /TR-Vektor (Invitrogen, Kat. Nr A11114) wurden verwendet, um stabile Zelllinien zu erzeugen, die konstitutiv hohe Mengen des Tet-Repressor exprimieren. Diese Expressionsplasmide enthalten Elemente, die des Konstrukts in Virionen und Blasticidin oder Geneticin-Resistenz-Marker zur Selektion von stabil transduzierten Zelllinien ermöglichen die Verpackung. Kurz gesagt, 293FT Verpackungszellen (Invitrogen, Kat. Nr R700-07) wurden mit dem pLenti6 /TR oder pLenti3 /TR und der ViraPower ^{TM Verpackungsmix transfiziert (Invitrogen, Kat. Nr K4975-00) Lentiviren zu produzieren Partikel. Die Lentivirus verwendet wurden AGS Zellen oder MGC-803 und das Blasticidin (8 &mgr; g /ml, Invitrogen, Kat. Nr R210-01) oder Geneticin (200 &mgr; g /ml, Invitrogen, Kat. Nr 10.131-027) zur Transduktion war AGS-Zellen zu wählen, für eine stabile TR-exprimierenden namens TR-AGS stabile Zelllinie oder TR-exprimierenden MGC-803-Zellen namens TR-MGC-803 stabile Zelllinie verwendet. Diese TR-exprimierenden Zelllinien wurden als Wirte für die Expressionskonstrukte verwendet, die Tet-regulierte Expression von shRNA CDH17 (short hairpin RNA) oder CDH17 Gen erleichtern, beziehungsweise.}

Stabile AGS-Zellen mit Tet-regulierte Expression shRNA von CDH17 Gen

Vier miRNA-Oligonukleotide Targeting CDH17 Gen ([Homo sapiens] Gene ID: 1015) wurden ein Internet-Anwendungssystem entwickelt, mit (Invitrogen). Diese doppelsträngige DNA wurden in den pcDNA6.2 ligiert ™ -GW /EmGFP-miR-Expressionssystem (Invitrogen, Kat. Nr K4936-00), die wurden dann transient in AGS-Zellen durch die Lipofectamine 2000 Standardverfahren (Invitrogen, Cat Nr. 11668-027). Nach Echtzeit-PCR-Analyse, die Sequenz 90-2 (Forward Primer: 5'-TGCTGTGTACTTCACACCAAACACTAGTTTTGGCCACTGACTGACTAGTGTTTTGTGAAGTACA-3 '; Reverse-Primer: 5'-CCTGTGTACTTCACAAAACACTAGTCAGTCAGTGGCCAAAACTAGTGTTTGGTGTGAAGTACAC-3') von miRNAs zeigte die höchste Effizienz und wurde pro Form BP Rekombination gewählt pENTR-miRNA zu erhalten. Dieser Eintrag Vektor wurde dann verwendet, in LR-Rekombination mit pLenti4 /TO /V5 (Invitrogen, Kat. Nr K4920-00) pLenti4 /TO /V5-miRNA Lentiviren mit Gateway® Technologie (Invitrogen, Cat.No.12535-019 zu erhalten ). Die Lentiviren wurden verwendet, um TR-AGS stabile Zellen und 200 ug /ml Zeocin (Invitrogen, Kat. Nr R250-05) transduzieren wurde verwendet für eine stabile Tet-regulierte CDH17 shRNA-Expressionszellen TR-AGS-CDH17_KD stabile Zelle namens auswählen Linie.

Stabile MGC-803-Zellen mit Tet-regulierte Überexpression von Gen
CDH17

kurz gesagt, wurde von PMD-18T-CDH17 Plasmid (Sino Biological Inc.) und subkloniert in IRES CDH17 Sequenz verstärkt -EGFP Vektor CDH17-IRES-EGFP zu erhalten, indem Primer verwendet: Forward Primer: 5'-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTCGCCACCATGATACTTCAGGCCCATCTTCAC-3 '; Reverse-Primer: 5'-TAGGGGGGGGGGAGGGAGAGGGGCGGATCCTCACCTTCTCAGAGGTTTGACTTCA-3 '). Dieses Konstrukt wurde verwendet, BP-Rekombination durchführen pENTR-CDH17-IRES-EGFP zu erhalten. Dann wird der Eingangsvektor und pLenti6.3 /TO /V5 (Invitrogen, Kat. Nr V370-06) Vektor wurden in LR-Rekombination verwendet pLenti6.3 /TO /V5-CDH17-IRES-EGFP zu erhalten. Dann wurden die Lentiviren produziert TR-MGC-803 stabil Zellen und 4 ug /ml Blasticidin wurde verwendet, um auszuwählen, für eine stabile Tet-regulierte CDH17 Genexpression Zellen namens TR-MGC-803-CDH17_Over stabile Zelllinie transduzieren.

Zellproliferationsassays

Für siRNA transiente Transfektion Assays Zellen mit einer Dichte von 5 in 10 cm-Schale ausgesät × 10 ^{6 Zellen /Schale und transfiziert mit 20 nM siCDH17 oder Gerangel siRNA. Nach 48 h Inkubation wurden die Zellen dissoziiert und auf 96-Well-Platte bei einer Dichte von 3000 transferierten Zellen /well, anschließend für weitere 72 h inkubiert. Die Lebensfähigkeit der Zellen wurde mit CCK-8-Kit (Donjindo, Japan) untersucht. Für TR-induzierbaren AGS-CDH17_KD stabilen Zellen wurden die Zellen in 60 mm × 15 mm-Schale ausgesät und mit oder ohne Tet (0, 2,5 und 5,0 &mgr; g /ml) für verschiedene Zeit. Die Zellen wurden nach 2, geerntet 3, 4, 5 und 6 Tage und die Zellzahl wurden durch ScepterTM Hand Automatische Zellzähler (Millipore) gezählt. Für Proliferation Rettungs Test wurden TR-induzierbaren AGS-CDH17_KD stabile Zellen ausgesät in 60 mm × 15 mm-Schale und kultiviert für 10 Tage mit oder ohne 5,0 ug /ml Tet. Rettungsgruppe wurde das Kulturmedium Tet enthält, durch frisches Medium an Tag 4 ersetzt, und die Zellen wurden weiter auf 10. Die Zellen in jeder Gruppe zu Tag kultiviert werden, wurden am Tag 2 geernteten, 4, 6, 8 und 10 für die Zellenzahl Zählen und Western-Blot-Analyse.}

Die Zellmigration Test

TR-AGS-CDH17_KD stabile Zellen wurden in 10-cm-Schale ausgesät und mit oder ohne Tet (5 ug /ml). Nach 120 h der Kultur, gesammelt und gezählt Zellen wurden. 0,1 ml der Zellsuspension (1, 2, 3 × 10 ^{4 Zellen /ml) wurde in das obere Kompartiment der Kammer zugegeben. 0,6 ml 10% FBS-Medium wurde zu der unteren Kammer als chemo Lockstoff zugefügt. Nach 24 h Inkubation bei 37 ° C wurden die Zellen bei 4 ° C für 30 min mit 90% EtOH fixiert und dann mit 0,1% Kristallviolett für 15 min gefärbt. Die Nicht-Migranten Zellen wurden von der oberen Fläche der Membran Transwell mit einem Wattestäbchen entfernt. Die gefärbten Zellen wurden anschließend unter Lichtmikroskopie fotografiert und gezählt.}

Zelladhäsionsassay

TR-AGS-CDH17_KD stabile Zellen wurden in 10-cm-Schale ausgesät und mit oder ohne Tet (5 ug /ml). Vorbeschichtung von 96-Well-Platten wurden über Nacht bei 4 ° C durch Inkubation Vertiefungen mit 25 ug /ml Fibronektin durchgeführt wird. Zur Verringerung nicht-spezifischer Bindung, 1% Rinderserumalbumin (BSA) wurde zu jeder Vertiefung zugegeben und für 60 min bei 37 ° C inkubiert wurde BSA zweimal mit sterilem PBS gewaschen. 120 h nach der Zuschlags CDH17 mit Tet wurden die Zellen gesammelt und in ausgesät vorbeschichteten 96-Well-Platten mit 4 x 10 ^{4 Zellen /Vertiefung. 2 h später nicht-adhärenten Zellen wurden durch zweimaliges Waschen mit sterilem PBS entfernt. Die anhaftenden Zellen wurden von der CCK-8-Kit getestet.}

Koloniebildungstest

Zum einen 6-Well-Platten mit Boden-Agar-Schicht (0,6% Gel) wurden hergestellt. Dann TR-AGS-CDH17_KD Zellen oder siCDH17-Zellen, die (als Proliferationsassay) in komplettem Medium suspendiert wurden, die 0,3% -0,4% Edel-Agar (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) und entkernt in vorbereitete 6-Well-Platte und kultiviert für 7 oder 14 Tage. Die Zellen wurden für 2 h mit Thiazolyl Blau-Tetrazolium-Bromid (MTT) gefärbt. Die Anzahl der Zellkolonien wurde gezählt.

Zellzyklusanalyse

TR-AGS-CDH17_KD stabile Zellen in einem Sechs-Well-Platte ausgesät wurden bei 1,0 x 10 ^{5 Zellen /Vertiefung und behandelt mit 5 ug /ml Tet. 120 h später wurden die Zellen bei 4 ° C für 3 h mit Trypsin und fixiert mit EtOH geerntet. Dann wurden die Zellen bei 1500 g für 5 min gewaschen und mit PBS zentrifugiert. Resuspendierten Zellen in RNase /PBS Lösung (20 ug /ml), inkubiert bei 37 ° C für 15 min, dann zugegeben PI /PBS-Lösungen (20 &mgr; g /ml) und bei RT inkubiert für 30 min, inspiziert die gefärbten Zellen mit BD FACS Calibur und analysiert die Daten mit BD Cellquest Pro Software.}

Apoptosis Analyse

TR-AGS-CDH17_KD stabile Zellen wurden in einem sechs-Well-Platte ausgesät bei 1,0 × 10 ^{5 Zellen /gut und mit 5 ug /ml Tet behandelt. 120 h später wurden die Zellen einmal mit vorgekühltem PBS mit Trypsin und gewaschen geerntet. Zellen wurden in 500 &mgr; l 1 × Bindungspuffer und 5 ul PI und 5 ul AnnexinV (BD) zugegeben resuspendiert. Nach der Inkubation in der Dunkelheit (Raumtemperatur) für 10 Minuten wurden die gefärbten Zellen mit BD FACS Calibur inspiziert. Die gesammelten Daten wurden mit BD Cellquest Pro Software analysiert.}

Western-Blot-Analyse

Zellen durch RIPA lysiert Puffer [150 mM NaCl, 1% NP40, 0,25% Desoxycholat und 10 mM Hepes (pH 7,4)], enthaltend ein Protease-Inhibitor-Cocktail (Roche Molecular Biochemicals). Proteinkonzentrationen wurden unter Verwendung des Bicinchoninsäure (BCA) Methode (Pierce) quantifiziert. Dreißig Mikrogramm pro Probe Protein wurde in Ladepuffer gekocht und in 8-12% Gradienten-SDS-Polyacrylamidgelen (Invitrogen) und übertragen auf Nitrocellulosemembranen elektrophoresiert. Die Membranen wurden mit Antikörpern (CDH17, Integrin β1, Integrin β4, Integrin β5, p-p53, p53 sondiert, p21 von R &waren; D, Raf, p-MEK, MEK, p-ERK, ERK von Cell Signaling waren und K-Ras wurde von Santa Cruz) und einem Peroxidase-konjugiertem Immunglobulin gefolgt. Western-Blots wurden mit einer verstärkten Chemilumineszenz (ECL) Kit (GE, Gesundheitswesen) sichtbar gemacht

Antikörper-Arrays Assay

Drei Arten von Antikörper-Arrays wurden erhalten von R &. D Systems, Inc. für Antikörper Arrays Test. Menschliche Phospho-Kinase-Array-Kit (Kat. Nr ARY003) enthält 43 verschiedene Kinasen. Menschliche löslichen Rezeptor Array Kit nichthämatopoetischen Panel (Kat. Nr ARY012) enthält 119 verschiedene lösliche Rezeptoren. Menschliche Apoptosis Array Kit (Kat. Nr ARY009) enthält 35 verschiedene Apoptose-Antikörper. http://www.rndsystems.com/: D Systems; Ausführlichere Informationen zu diesen Arrays können in der Verbindung von R &gefunden werden. TR-AGS-CDH17_KD stabilen Zellen wurden nach 120 h geerntet, behandelt mit oder ohne Tet (5 ug /ml), und die Proteine ​​wurden durch Lyse-Puffer mit den Proteaseinhibitoren lysiert, Zellextrakte wurden verdünnt und inkubiert mit den drei Typen von Antikörper-Arrays über Nacht . Die Arrays wurden gewaschen, um ungebundene Proteine ​​zu entfernen, gefolgt von einer Inkubation mit einem Cocktail von biotinylierten Detektionsantikörper. Alle Vorgänge werden entsprechend der Anweisung des Kits. Blots wurden durch Densitometrie analysiert, und die Proteinexpression wurde auf eine positive Kontrolle normiert, die in jeder Membran vertreten.

Die Messung der in-vivo-Aktivität

TR-MGC803-CDH17_Over-Zellen (1 × 10 ^{7-Zellen in 0,2 ml PBS) wurden in die linke Achselhöhle von 5~6-Woche Balb /c injiziert nu /nu athymische weibliche Maus (Sino-British SIPPR /BK Lab. Tier Ltd, China). Tumorvolumen (mm 3) wurde mit einer Schieblehre gemessen und berechnet als (W 2 × L) /2, wobei W die Breite und L die Länge. Wenn das Tumorvolumen etwa 100 mm erreicht 3 wurden die Mäuse in zwei Gruppen randomisiert (9 Mäuse in jeder Gruppe). Tetracylcine Induktions (Invitrogen, 0,2 mg /ml, in sterilisierte Trinkwasser versorgt 2,5% Saccharose enthält) wurde auf die Gruppierung Tag initialisiert. Sterilisierte Trinkwasser 2,5% Saccharose enthielt, wurde in nicht-induzierten Gruppe an die Mäuse geliefert. Die Tumorvolumina wurden aufgezeichnet alle 3 Tage, bis die Tiere getötet wurden. Nach 35 Tagen Induktion wurden Xenograft Tumorgewebe gesammelt und für die relative Proteinexpression Western-Blot-Analyse unterzogen.}

Die statistische Analyse

Daten ausgedrückt wurden als Mittelwert ± Standardabweichung und statistisch im Student-ungepaarten t-Test unterzogen. Ein Niveau von P < 0,05 wurde als signifikant angesehen

Ergebnisse

• PLoS ONE: MicroRNA 135a Unterdrückt Lymphknotenmetastase durch Down-Regulation von ROCK1 in Magenfrüh Cancer
• PLoS ONE: Klinische Ergebnisse für Magenkrebs folgende adjuvante Radiochemotherapie Verwendung Intensity Modulated gegen Dreidimensionale Conformal Radiotherapy