PLoS One: A kompenzáló szerepét az NF-kB p53 a válasz az 5-FU-alapú kemoterápia gyomorrák Cell Lines

absztrakt katalógusa

Annak ellenére, hogy jelentős javulást a posztoperatív 5-FU-alapú adjuváns kemoterápia, a visszaesés mértéke gyomorrákos betegek, akik alávetik kuratív rezekció követ adjuváns kemoterápia jelentős marad. Ezért fontos, hogy azonosítani predikciós markerek a kemoterápiás hatékonyság az 5-FU. Nemrég azonosítottak NF-kB jelöltként visszaesés előrejelzést biomarker gyomorrákban. Hogy értékeljék a biológiai jelentőségét az NF-kB összefüggésben az 5-FU-alapú kemoterápia, elemeztük a NF-kB-függő biológiai válasz függ az 5-FU kezeléssel a gyomor rákos sejtvonalak. Hét gének által kiváltott 5-FU kezeléssel egy NF-kB-függő módon azonosítottak, öt amelyek ismert p53 célokat. Kiütése RELA katalógusa, amely kódolja a p65 alegység az NF-kB, csökkent mind a p53 és p53 célfehérje szinten. Ezzel ellentétben, az NF-kB-t nem befolyásolta TP53
knockdown. Azt is kimutatták, hogy a sejtvonalak csapágy Pro /Pro homozigóta a codon72 p53 exon4, ami fontos az NF-kB kötődését a p53, jobban ellenállnak az 5-FU, mint azok, Arg /Arg homozigóta. Arra a következtetésre jutottunk, hogy az NF-kB fontos szerepet játszik a válasz az 5-FU kezeléssel a gyomor rákos sejtvonalak, egy lehetséges kompenzációs funkciója a p53. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az NF-kB egy lehetséges 5-FU-kemoszenzitivitás becslés marker, amely tükrözi az 5-FU által kiváltott stressz-választ utat, beleértve a p53. Katalógusa

Citation: Endo F, Nishizuka SS, Kume K, Ishida K, Katagiri H, Ishida K, et al. (2014) A kompenzációs szerepe az NF-kB p53 a válasz az 5-FU-alapú kemoterápia gyomorrák sejtvonalakon. PLoS ONE 9 (2): e90155. doi: 10,1371 /journal.pone.0090155 katalógusa

Vágó: Thomas G. Hofmann, Német Rákkutató Központ, Németország katalógusa

Beérkezett: október 17, 2013; Elfogadva: január 28, 2014; Megjelent: február 27, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Endo és mtsai. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatott MIAST (Medical Innovation Advanced Science and Technology) projekt Grant-in-támogatás stratégiai Medical Science Research Center Minisztérium Oktatási, Kulturális, Tudományos és Technológiai Japán, 2010-2014 (SSN K.Ku. GW); és Grant-in-Aid for Scientific Research (C) (11863286) (S.S.N.) és (12877914) (K.Ko.). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a legtöbb gyomorrák a világon diagnosztizálnak Kelet-Ázsiában [1], ahol a standard terápia előrehaladott gyomorrák marad a műtét és a kemoterápia. A közelmúltban kifejlesztett adjuváns kemoterápiás után gyógyító gastrectomián előrehaladott gyomorrák figyelemre méltó előrelépést kontrolling visszaesés és betegségmentes túlélés, különösen a japán populációban [2], [3]. Ugyanakkor 30-40% -ánál még mindig relapszus ellenére kemoterápiában részesülő után gyógyító gastrectomián [3], ami arra utal, hogy a betegek kiválasztása a molekuláris információ potenciálisan nagyon hatékony növelésére kemoterápiás közvetített, nem a visszaesés és a túlélési arányok. Katalógusa

kiválasztásához gyomorrák betegek számára előnyös lehet a kemoterápia, fontos, hogy megértsük egyedi érzékenységek kemoterápia előtt [4]. Posztoperatív adjuváns kemoterápia Gyomorrák lehetőséget ad arra, hogy teszteljék a beteg-eredetű tumorok előtt kapnak kemoterápiát. Arra törekszik, hogy a potenciális biomarkerek ezt a beállítást a fehérje szintje, amit korábban bejelentett egy sejtvonal panel szűrési rendszer segítségével kvantitatív fehérje expressziós profil a fordított fázisú protein array (RPPAs) [5], [6] együtt sejt- alapú növekedési vizsgálati rendszer koncepciója alapján NCI-60 sejtvonal szűrőbizottságot [7], [8]. Vont biomarkerek izoláltunk alapuló korrelációs együtthatók a fehérje expresszióját és a hatóanyag-érzékenység mátrix, majd tovább segítségével validált sebészetileg eltávolították példányok [9]. E megközelítés alapján azonosítottunk két biomarkerek fehérje szinten, beleértve az NF-kB és JNK, melynek szintjét volt jó korrelációt kemoterápiás választ. A magasabb expressziós az NF-kB úgy tűnt, hogy korrelálnak rosszabb prognózist, míg a JNK mutatott inverz korreláció. Ezek a markerek is validált molekuláris szinten segítségével emésztőrendszeri rák sejtvonalak. Kimutatták, hogy az siRNS-közvetített kiütése p65 szinte kizárólag befolyásolja az 5-FU-érzékenység között jelenleg alkalmazott kemoterápiás gyógyszerek; de nem ez a helyzet a JNK knockdown [9]. Ezért arra a következtetésre jutottunk, hogy az NF-kB meghatározó szerepet tölt be az 5-FU kezelés és JNK mutatója lehet a krónikus gyulladás a gyomor nyálkahártyája háttérben [10]. Kiterjesztéseként ezen hitelesítési vizsgálat, igyekeztünk felfedezni ezen fehérjék funkcionálisan és szerepének tisztázása az NF-kB a stressz-indukálható transzkripciós faktor alatt 5-FU kezelés. Azt is értékelték a szerepe a p53 után az 5-FU által közvetített transzaktivációt az NF-kB [10], [11], mert jól ismert, hogy a p53 aktiválása válaszként erre genotoxikus szer [12]. Ebben a tanulmányban számolunk potenciális kompenzáló szerepét az NF-kB p53 elemzése révén a p53-NF-kB kötő polimorf hely, kodon 72 p53. Együttesen ezek az eredmények arra utalnak, hogy az NF-kB /p53-codon72 lehet robusztus biomarker 5-FU érzékenységet. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

sejtvonalak

Kilenc emberi gyomor rákos sejtvonalak, ideértve a Kato-III, KE39, MKN74, MKN7, NUGC4, GSS, GCIY, és MKN45 kaptuk a RIKEN Bioresource középső cella Bank. IWT-1 volt, de novo katalógusa sejtvonal létre a laboratóriumban egy japán férfi gyomor rákos beteg, akiknél relapszus hashártyagyulladás carcinomatosa. Használata IWT-1 sejtvonal által jóváhagyott Iwate Orvostudományi Egyetem Intézményi Review Board (H25-116 és HG H25-15), valamint a családi donor beteg halt idején létrehozása a sejtvonal írásos beleegyezését adta tekintetében a mintavételt, és így a sejtvonal. A sejteket 70-80% -os összefolyásig RPMI-1640 kiegészítve 10% magzati borjúszérummal (FBS), 37 ° C-on jelenlétében, 5% CO _2.

előállítása A sejtlizátum

a sejteket centrifugálással összegyűjtöttük, és a sejtüledéket lizáljuk Pink puffer, amely 9 M urea (Sigma-Aldrich, St. Louis, MI, USA), 4%, 3 - [(3-kolamido-propil) -dimetil-ammónio] -1 -propanesul-szulfonát (CHAPS; Calbiochem, Merck, Darmstadt, Németország), 2% pH 8,0-10,5 pharma-Lyte (GE Healthcare Japán, Tokió, Japán), és 65 mM DTT (GE Healthcare Japán, Tokió, Japán), mint korábban leírt [5], [13].

Western blot

SDS-PAGE segítségével végeztük 4-12% -os Bis-TrisGel elektroforézis (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), XCell Sure Lock Mini-cella (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), és a Power PAC HC (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). A rezolvált fehérjéket a gélen átvisszük egy nitro-cellulóz-membránra visszük iBlot Száraz Blotting rendszer (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). A kapott membránokat blokkoltuk 5% iBlot (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) és 0,1% Tween-20 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) TBS (TBST) 1 órán át. A membránokat ezután inkubáljuk a jelzett primer antitestek, beleértve a pán-aktin, p53 (Thermo Scientific, Kalamazoo, MI, USA); P21, TIGAR, és PUMAα /β (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA); és az NF-kB, α-tubulin, és PCNA (Cell Signaling Technology Japán, Tokió, Japán). Ezután a membránokat kétszer mostuk 5 percig TBST, inkubáltuk egy HRP-konjugált másodlagos antitesttel 1 órán át, majd kétszer mossuk 5 percig TBST-ben. Kemilumineszcencia kimutatási reagenseket inkubáltuk a membránokat 1-5 percig, majd a képeket szerezték az Image Quant LAS500 (GE Healthcare Japán, Tokió, Japán). A fehérje indukció 5-FU, Western-blot mennyiségi meghatározását ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/). Katalógusa

immuncitokémiája katalógusa

A sejteket 70-80 % -os összefolyásig RPMI-1640 kiegészítve 10% FBS-ben 4-kamrás polisztirol edény szövettenyészet-kezelt üveglemezek és ezután 5-FU-jelzett minden egyes kísérletben. Miután a sejteket tettünk ki 50 uM 5-FU 4 órán látni egy korai transzkripciós válasz, azokat fixáltuk 4% paraformaldehiddel, permeabilizált 0,2% Triton X-100 PBS-ben, és megfestettük DAPI-t (0,6 umol DAPI, 50 ul RN-áz, és 5 ml PBS-ben) szobahőmérsékleten 12 percig. A sejteket ezután inkubáljuk a következő primer antitestekkel: anti-NF-kB p65 foszfo-NF-kB p65 (Ser536) és foszfo-p53 (Ser15) (Cell Signaling Technology Japán, Tokyo, Japán), és a p53 (Thermo Scientific , Kalamazoo, MI, USA). Végül a sejteket vagy Alexa Fluor488- vagy 568-konjugált másodlagos antitesttel (Life Technologies Japán, Tokió, Japán). A BX43 fluoreszcens mikroszkóppal (Olympus, Tokió, Japán) használtunk képalkotási.

génexpressziós

MKN45 sejteket összegyűjtöttük a kezelés után, vagy anélkül 50 uM 5-FU-on 4 órán . Az RNS-t ezután kiszedik az összegyűjtött sejteket és génexpressziós profiling szerint végeztük a gyártó utasításai (SURE nyomtatása G3 Emberi GE8 × 60 K, Agilent Technologies Japán, Tokió, Japán). Nyers adatokat először normalizáltuk elosztjuk minden egyes próba jel a 75 ^{th percentilise a teljes jel. Mindegyik microarray kísérletet végeztünk, két példányban eredményező két vezérlő és két 5-FU kezelés microarray adathalmazokat. Gének azonosítására, amelyek eltérően expresszált válaszul az 5-FU, minden kontroll adatrekord összehasonlítottuk külön-külön minden egyes 5-FU-kezelés készlet (4 összehasonlításokat). Differenciáltan expresszálódó gének azok voltak, hogy volt egy változás a kifejezés > 2-szeres minden összehasonlítást. Meghatároztuk az utolsó szett 10 differenciáltan expresszálódó gének alapján azok gyakoriságát a 4. összehasonlítások [14]. Annak igazolására, reprodukálhatóságának ezek expressziós változások, kvantitatív valós idejű RT-PCR az 5-FU-val kezelt mintákban 0, 4, 8, 12, és 24 óra végeztünk minden egyes gén. A primer szekvenciák táblázatban felsorolt ​​S1. A gének által kiváltott 5-FU, elemzése a promoter kötőhelyek alkalmazásával végeztük JASPAR algoritmus (JASPAR, http://jaspar.genereg.net/). Egy 1000 bp promoter szekvencia specifikus megfelelő gének kapunk transzkripciós szabályozó elem Database (http://rulai.cshl.edu/cgi-bin/TRED/tred.cgi?process=home). Kötőhelyet megjósolt pásztázó promoter szekvenciák a konszenzus szekvenciák az NF-kB és a p53 70% -os profil pontszám küszöbértéket.}

RELA és TP53 Gene Knockdown

A sejteket 70-80 % -os összefolyásig RPMI-1640 volt egészítve 10% FBS-sel 6 lyukú sejttenyészet lemezekre, majd hozzáadjuk az NF-kB p65 vagy p53 siRNS (Cell Signaling Technology Japán, Tokió, Japán) 48 órán át. Röviden, a knockdown végeztünk Trans IT-TKO (Mirus Bio Corporation, Madison, WI, USA) koncentrációban 3% 10 percig, szobahőmérsékleten. Megfelelő koncentrációjú siRNS-ek az egyes sejtvonalak összekevertük a Trans IT-TKO megoldások, majd 20 percen át szobahőmérsékleten inkubáltuk. A siRNS alkalmazott koncentrációk a következők voltak: 100 nm p65 siRNS számára MKN45, és MKN74 sejtek, és 150 nM GSS és Kato-III-sejtek; és 100 nM p53 siRNS számára MKN45, és GSS-sejtek, és 50 nM a MKN74 sejteket. 48 óra múlva a sejteket összegyűjtöttük, és protein szinteket vizsgáltuk Western-blottal. Két siRNS-konstrukciókat, amelyek különböző szekvenciák ugyanazt a cél gént használunk minden egyes gén a megerősítéshez knockdown specificitás. Sejtciklus eloszlás alkalmazásával vizsgáltuk a tali Image-alapú citométerrel (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Hogy a maximális hatás siRNS az 5-FU-válasz, a gyógyszert adtunk hozzá 48 óra elteltével siRNS transzfektáltuk, és a megfelelő sejtciklus után mértük 24 óra inkubáció 5-FU. Minden kísérletet megismételtük legalább három alkalommal.

TP53 állapota és Codon72 Variant

DNS-t extraháltunk gyomor rákos sejtvonalak felhasználásával QIAmp DNA Mini Kit (Qiagen Japán, Tokió, Japán). PCR amplifikáció a p53 katalógusa exon4 codon72 variáns (táblázat S1) és a p53 katalógusa exon5-9 mutációt végeztünk a leírtak szerint [15], [16]. Mindegyik PCR-terméket szekvenáltuk az ABI PRISM 3030xl genetikai analizátor (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) alkalmazásával a gyártó protokollja. Szekvenálás eredményeket analizáltuk FinchTV (Perkin-Elmer Japán, Tokyo, Japán) és MEGA 5.1 Beta 3 [17].

Növekedés elnyomása Assay

Tízezer sejt per lyuk oltottunk 96 lyukú microplate. Huszonnégy órával később a sejteket kezeltük az 5-FU 24 órán át. Miután az 5-FU kezeléssel, a frakció élő sejtek alkalmazásával mértük a sejtszámlálás Kit-8 (Dojindo molekuláris technológiák, Kumamoto, Japán), és egy TriStartól LB 941 mikrolemez leolvasó (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Németország). Ötven százalékos növekedés gátlási koncentráció (GI _{50) számoltuk Prism szoftverrel (Graph Pad Software, La Jolla, CA, USA). A GI 50 értékek meghatározására használták közötti összefüggések 5-FU hatásosságát és fehérje szintje alapján Pearson-féle termék-idő korrelációs együttható ( r katalógusa).}

Eredmények katalógusa

fluorouracil Előidéz NF-kB

Annak igazolására, tipikus NF-kB viselkedését mutatják az 5-FU kezeléssel, azt követte a szubcelluláris lokalizációját az NF-kB a MKN45 (p53 vad típus), MKN74 (p53 mutáns ), GSS (p53 mutáns) és Kato-III (p53 homozigóta törölve) sejtvonalak. Western-blot analízis a nukleáris és citoplazmatikus frakciókat kimutatták, hogy az 5-FU által kiváltott NF-kB mindkét rekesz MKN45 de nem volt megfigyelhető a p53 mutáns sejtvonalak (ábra. Az 1A-D). Megvizsgáltuk a hatását az 5-FU NF-kB lokalizáció a sejtekben immuncitokémiai (ábra. 1E-H). NF-kB a citoplazmában a kezeletlen MKN45, míg az 5-FU-kezelés fokozta a NF-kB nukleáris lokalizációs (ábra. 1E); Azonban nincs növekedés volt megfigyelhető a p53 mutáns sejtvonalak (ábra. 1F-H). Azt is megfigyelték, egy drasztikus növekedése foszforilezett NF-kB (p65 Ser536) a sejtmagban a MKN45 kezelt 5-FU, jelezve, NF-kB-t transactivated 5-FU (ábra. 1E). Konstitutív nukleáris lokalizációs és alkalmi foszforiláció p53 volt megfigyelhető MKN74 de nem úgy tűnik, hogy indukálja az 5-FU (ábra. 1 g). Nukleáris lokalizációs a p53 által kiváltott 5-FU GSS, de az aktivált jel gyenge volt (ábra. 1 H).

p53 Targets indukált upon 5-FU-kezelés

Mivel az NF-kB egy transzkripciós faktor (TF), a nukleáris lokalizációs upon 5-FU-kezelés erősen azt sugallja, transzaktivációs. Azonosítottuk a felső 7 transzkriptumok között több mint 60.000, amelyek indukált 4 óra eltelte után az 5-FU kezelés MKN45 felhasználásával génexpressziós profilok (1. táblázat). Érdekes, hogy az öt 7 átiratok, azaz BBC3 katalógusa (kódoló p53 fel szabályozott modulátor apoptózis, PUMA), BTG2, C12orf5 katalógusa (kódoló valószínű fruktóz-2,6-bifoszfatáz TIGAR), CDKN1A és GPR87 katalógusa, ismert p53 célok [18] - [22]. A jelenléte promoter kötőhelyeket megjósolt pásztázó promoter szekvenciák a konszenzus szekvenciák az NF-kB és a p53 alkalmazásával JASPAR algoritmus (1. táblázat) [23].

Azt találtuk, hogy a p53 szintek indukált a sejtmagban hasonló azoknak az NF-kB, válaszul az 5-FU kezelés (ábra. 1E). Kezelés Az 5-FU is emelkedett szintje p53 foszforiláció Ser15, arra utal, hogy transzaktiváló (ábra. 1E, ref. [24]). Tény, hogy a legtöbb teljes p53 által kiváltott 5-FU úgy tűnt, hogy foszforilált. Mérôjének időfüggő indukciós gének, köztük C12orf5 (TIGAR) hotelben, BBC3 (PUMA) hotelben, CDKN1A (p21) hotelben, és a BTG2
5-FU segítségével RT-PCR (ábra. 1I). Összefoglalva, ezek az eredmények arra utalnak, hogy a celluláris válasz az 5-FU kezelés magában mind az NF-kB és a p53 transzkripciós aktiválását ebben az összefüggésben, MKN45.

RELA Knockdown van egy nagyobb hatással p53 célfehérjék mint TP53 Gene Knockdown

értékeli a szabályozó hatása az NF-kB és a p53 válaszul 5-FU-kezelés, elemeztük a fehérje szintje a p65, p53, valamint az ismert p53 célokat, p21, TIGAR, és PUMA, western blot következő RELA katalógusa és TP53 katalógusa knockdown a MKN45, MKN74, GSS és Kato-III. RELA
knockdown okozott jelentős csökkenést p53 szint minden sejtvonalakban. Ahogy az várható volt, a szintek a p21, TIGAR, és a PUMA is csökkentek (2A.). Ezzel szemben, míg a TP53 katalógusa kiütése csökkent p53-szint, nem befolyásolta p65 szintet. Ahogy az várható volt, a szintek a p53 megcélzott fehérjék csökkent TP53
knockdown; azonban ez a csökkenés kisebb volt a csökkenés okozta RELA katalógusa kiütése (ábra. 2B). A sejtciklus analízis, a MKN74, GSS, és Kato-III-sejtvonalak enyhe növekedést mutatott az S vagy G2 fázisában frakció mivel MKN45 mutatott növekedése a G1 frakció 24 óra elteltével az 5-FU a p65 és a p53 knockdown hasonló a megfelelő összekuszálja (ábra. 2C). Ezek az eredmények arra utalhat, a robusztusság a celluláris stressz gép, amely fenntartja a sejtciklus eloszlása ​​ellenére kiütése p65 és p53. Katalógusa

TP53 Codon72 Pro változat Exhibits Alacsony 5-FU érzékenység és nagy NF-kB szintje

Gene knockdown kísérleti eredmények azt mutatták, hogy a kölcsönhatás a NF-kB és a p53 fehérjék fontos lehet összefüggésben az 5-FU kezeléssel. Annak vizsgálatára, annak lehetőségét, hogy a TP53
codon72 variáns befolyásolhatja sejtes válaszok 5-FU-kezelés, mi szekvenáltuk TP53
codon72 valamint mutációk a DNS-kötő domént kódoló régiók (azaz exonok 5-8) 9-gyomor rákos sejtvonalak (2. táblázat). Az állapot a codon72 variáció és TP53 katalógusa mutáció nem bizonyítják egyértelműen egyesületek. Katalógusa

A következőkben megvizsgáltuk, milyen kapcsolatban 5-FU érzékenységet és TP53 katalógusa állapot (3A. ), valamint az endogén szintje az NF-kB és a p53 (ábra. 3B). GSS, GCIY, és MKN45 vonalak, amelyek rendelkeznek a Pro homozigóta variáns, mutatott alacsony érzékenység az 5-FU, míg a KE39, MKN74, MKN7, NUGC4, és IWT1 vonalak rendelkező Arg allélt mutatott viszonylag magas érzékenység. Kato-III, amely egy nagy TP53
törlés [25], ez volt a legérzékenyebb az 5-FU. NF-kB protein szinteket különösen korrelált 5-FU-érzékenység ( R
= 0,68; p
= 0,04; 3C.); azonban nem volt egyértelmű összefüggés a p53-szint és az 5-FU-érzékenység ( r katalógusa = -0,04; p katalógusa = 0,95; ábra. 3D). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a Pro homozigóta társított 5-FU-rezisztenciát, miközben sem p53-mutációt, sem az endogén p53-szint közvetlenül érinti az 5-FU-érzékenység.

Discussion

Mi már korábban azonosított NF-kB mint potenciális előrejelzést marker posztoperatív 5-FU-alapú kemoszenzitivitás előrehaladott gyomorrák [9]. NF-kB egy indukálható transzkripciós faktor álló p65 (RelA), C-Rel, Rel-B, p50 /NF-κB1, és p52 /NF-κB2 [26], és központi szerepet játszik az immunválaszban és a gyulladásos citokin rendelet [27] - [29]. Chang és munkatársai korábban kimutatták, hogy az NF-kB indukált felfelé vagy lefelé szabályozása differenciálisán expresszált gén 5-FU által kiváltott intesztinális mucositis indukálásával proinflammatorikus citokinek, mint az IL-6, TNF-α és IL-1β [10]. Ezek az 5-FU által kiváltott gyulladásos válaszokat részének tekintik a stressz-elkerülve folyamatok vezethet deszenzitizáció az 5-FU hatásosságát gyomornyálkahártya [30]. Bár azt javasolták, hogy a NF-kB nem közvetlenül kapcsolódik a tumor kialakulásában és fejlődésében [31], az NF-kB tartották, hogy egy nagyobb biomarker és terápiás cél [32]. A közvetlen bizonyíték csökkentett kemorezisztenciájának 5-FU siRNS az RELA
együtt nagy megkülönböztető erejét az NF-kB nukleáris festéssel terápiás eredmények a sebészileg eltávolított szöveteket arra ösztönzött minket, hogy végre további érvényesítését az NF-kB-re egy biológiai szempontból.

transzkripciós profilozási eredmények azt mutatták, hogy számos p53 downstream gének up-szabályozott válaszul az 5-FU, amelyben transzaktiváló az NF-kB is történt. Ez a két fő transzkripciós faktorok korábban kimutatták, hogy ko-regulált válaszul genotoxikus ágensek [33] - [35], és a TNF-α [36], [37]. Ezen túlmenően, azt javasolták, hogy a társ-aktiválás a p53 és NF-kB a tumorokban kezelt genotoxikus ágensek vezethet terápiás meghibásodása miatt a NF-kB által közvetített túlélési jeltovábbítási [38].

Egyedi kiütése ezen transzkripciós faktorok kiderült gének downstream p53 érintette p65 knockdown, míg a hatás korlátozott volt a p53 leütést. Korábbi jelentések szerint egy kooperatív közötti kapcsolat p53 és NF-kB keretében autofágia, az apoptózis, és az S-fázisú ellenőrzési pont aktiválását [34], [39] - [41]. Eredményeink azt is jelezték, hogy az NF-kB is kompenzálja a transzkripciós aktivitását p53, amikor a sértetlen funkció elvész válaszul az 5-FU kezeléssel. Tény, hogy egy nagy része a gyomor rák viselik mutációk a p53-DNS-kötő domént, ezáltal azt transzkripcionálisan inaktív [42]. Egy nemrégiben készült tanulmány szerint Frank és munkatársai katalógusa. számolt be, hogy codon72 polimorfizmusa TP53
jelentősen befolyásolják a p53, hogy együttműködik az NF-kB a gén transzaktivációs, különösen az apoptózis indukcióját keresztül kaszpáz 4/11 [40]. Együtt a jelen megállapítást, hogy néhány transzkripciós aktivitását p53 igényelnek NF-kB, válaszul az 5-FU, p53 kodon 72 polimorfizmus annak NF-kB kötő lehet nagyobb befolyással mint mutációs állapotát TP53 katalógusa vagy fehérje expressziós állapotának p53. katalógusa

a hatás az codon72 polimorfizmus spontán rák kockázata már korábban vizsgálták, de nem meggyőzően miatt korlátozott emberi népesség és állati modellek [40], [43] - [45]. Azonban a codon72 polimorfizmus szerepet játszhat fenntartásában létrehozott rákos sejtekben, mint kiváltó sejtes malignus transzformáció. Tény, hogy a korábbi tanulmány arról számolt be, hogy a pro /Pro allél rezisztenciával összefüggő kemoterápia és rossz prognózissal a szájüregben [46], valamint a colorectalis [47], emlő [48] és a gyomor [49] rákok és neuroblasztómák [ ,,,0],43]. Egy sor in vitro
tanulmányok is alátámasztják ezt a hipotézist mutatja, hogy az Arg allél egy hatásosabb apoptózist indukáló, mint a Pro allél [40], [50], [51]. Az apoptózis az egyik fő mechanizmus által indukált 5-FU és így ésszerű azt feltételezzük, hogy a hatásosság az 5-FU-alapú kemoterápia van társítva specifikus p53 polimorfizmusok [49]. A in vitro katalógusa eredmények alátámasztják ezeket az epidemiológiai és kísérleti adatok és azt sugallják, egy lehetséges mechanizmusát az 5-FU-közvetített p53-NF-kB kölcsönhatás a p53-codon72 kötőhely. Katalógusa

Ahogy az várható , a mi tanulmány bizonyította, hogy sejtvonalak a Pro allél voltak rezisztensek az 5-FU, mint azok a Arg allélt. A növekedés elnyomása profilja 9 gyomor rákos sejtvonalakban mutatott jó korrelációt az NF-kB protein szinteket. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az Arg /Arg genotípus erősebb apoptózis indukciója mint a Pro /Pro genotípus jelenlétében 5-FU. Között a sejtvonalak (összes származik japán gyomorrák beteg), az arány a Arg /Arg: Arg /Pro: Pro /Pro volt 04:01:03, míg az egészséges japán betegeknél volt 4.5:4.4:1 [52] . Ez tükrözheti kiválasztási folyamat során fellépő tumor fejlődését és a létesítmény, mint egy sejtvonalon. Előző metaanalízisre a rák kockázata és a p53-codon72 polimorfizmusok arra utalnak, hogy a Pro /Pro genotípus magasabb a rák kockázata (alacsonyabb az Arg /Arg genotípus) az ázsiai populációban [45], [53]. Azonban a jelentősége "rák kockázatát" rák rosszindulatú daganat vagy a kezelésre adott válasz még nem tisztázott, mert általában nehéz, hogy végezzen egy klinikai vizsgálat által dominált genetikai polimorfizmusok és értékeli a valódi genetikai kezelés hatásának. Eddig a legtöbb jelentés leírja közötti társulás p53 codon72 polimorfizmus és a kemoterápiás válaszok azt mutatták, hogy az Arg /Arg genotípus kedvező választ sokféle rák konvencionálisan kezelt genotoxikus szerek [49], [54], [55] . Javasoljuk egy feltételezett mechanizmust válasz az 5-FU-n keresztül az NF-kB és a p53-protein kötődést társított p53 polimorfizmus, és így egy összetett diagnózis az NF-kB protein expresszióját és codon72 lehet egy hasznos indikátor a műtét utáni adjuváns kemoterápiát. Eltekintve néhány nagy léptékű adatkészletek [52], [56], a mértéke demográfiai és etnikai eloszlások a polimorfizmus tisztázatlan marad. Gyűjtött adatok az etnikai különbségek a polimorfizmus megmagyarázhatja a különbségeket a rák kockázata vagy kemoterápiás válaszadási arány a betegcsoportban. Katalógusa

Összefoglalva, eredményeink azt mutatják, hogy az NF-kB szabályozza p53 transzkripciós aktivitást reagálva 5-FU, ami összefüggésben lehet a polimorf helyén p53 codon72. További klinikai és epidemiológiai vizsgálatok értékelnie kell a közüzemi egyidejű kóros /genetikai értékelését az NF-kB /p53-codon72 sebészetileg eltávolított gyomorrák példányok hogy meg lehessen becsülni a hatékonyságát posztoperatív 5-FU-alapú adjuváns kemoterápiát.

alátámasztó információk katalógusa táblázat S1.
primer szekvenciák. katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0090155.s001 katalógusa (DOCX) hotelben

• PLoS One: Változás a testsúly és a makrofágok citokin-1 alatt Kemoterápia előrehaladott gyomorrákban: Mi klinikai jelentőségük?
• PLoS One: Az interakciós hatás a pri-let-7a-1 rs10739971 a PGC és ERCC6 génpolimorfizmusok gyomorrákban és sorvadásos gyomorhurut