Zilsetzung VerfÜgung
D'Zil vun dëser Etude war d'proteomics-baséiert Kollaboratioun Räich Aktivitéit Geographie reaktiv (CEER) immunoassay FAQ tyrosine phosphorylations als diagnostic lues zu gastric Cancers (GCs). VerfÜgung
hun Design VerfÜgung
Protein lysates aus frësch-gefruer 434 avancéiert Etapp GCs ze ermëttelen sech fir phosphorylation analyséiert vun HER1, HER2, p95HER2, HER3, cMET, IGF1R an PI3K. D'Passerelle Aktivéierung Musteren baséieren op der entholl HER2 Status gefall. Hierarchie Käre war Passerelle coactivations zu GCs ze bestëmmen geheescht. Prognostic Wäert vun Passerelle Aktivéierung Musteren war vun correlating Krankheet-gratis Iwwerliewe Mol vun de verschiddenen GC subgroups benotzt Kaplan-Meier Iwwerliewe Analyse alles. CEER war och d'Presenz vun tyrosine sécher CASCADES zu libre entholl Zellen (CTCs) an ascites entholl Zellen (ATCs).
Ech schreiwen e Roman Diagnos immunoassay, CEER, mir der Presenz vun p95HER2 an concomitantly ageschalt sécher Weeër an GC entholl Stoffer hindeiten, CTCs an ATCs vom GC Patiente fir déi éischte Kéier. p95HER2 ass zu ~77% vun HER2 (+) GCs ausgedréckt. Ongeféier 54% vun GCs hunn eng Noutbrems HER1, HER2, HER3, cMET oder IGF1R a beweisen engem aarmen hätt wéi déi wou dës receptor tyrosine kinases (RTKs) net ageschalt ginn. Hierarchie Käre vun RTKs verréid Co-Käre vun phosphorylated HER1: cMET, HER2: HER3 an IGF1R-PI3K. Coactivation vun HER1 mat cMET sot GCs mat engem kuerz Krankheet-gratis Iwwerliewe als Verglach zu nëmmen cMET GCs ausgeléist. VerfÜgung
Konklusiounen VerfÜgung
Eis studéieren der Déngscht vun engem Roman Begleeder Diagnos Technologie Akzenter, CEER dat huet staark Implikatioune fir Drogenofhängeger Entwécklung an therapeutesch iwwerwaacht. CEER ass benotzt eng fräi Versteesdemech vun ageschalt sécher Weeër an fortgeschratt GCs fir datt vill hire Krankheete Gestioun duerch korrekt Patient Auswiel fir cibléiert therapeutics verbesseren kann VerfÜgung
Fro:. Lee J, Kim S, Kim P, Liu X, Lee T, Kim kM, et al. (2013), eng Verfilmung Proteomics-Opgrond Séminairen kinnt Technology identifizéiren Heterogeneity zu ageschalt sécher Weeër an Gastric Cancers. PLoS NËMMEN 8 (1): e54644. Doi: 10.1371 /journal.pone.0054644 VerfÜgung
Redakter: Anthony W. I. Lo, D'Chinese Universitéit vun Hong Kong, Hong Kong VerfÜgung
Arnaque: 20 September 2012; Akzeptéiert: 13. Dezember 2012; Publizéiert: 25. Januar 2013 zu
Copyright: © 2013 Lee et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung
Funding:. D'Auteuren hu keng Ënnerstëtzung oder Fonge fir Rapport VerfÜgung
Wettsträit Interessen:. Iwwerdeems PK, XL, TL, NH, wann, AK, AJ, GM, GL an SS vun Prometheus Laboratoiren agestallt ginn, dat "d'Auteuren net vergréisseren onvergläichleche un der all Politiken PLOS NËMMEN op sharing Daten a Material. VerfÜgung
hunn Molecularly geziilte Agenten den Terrain vun Zukunft denke. Tatsaach, datt ronn d'Halschent vun de tyrosine kinase Volet vun de Mënscherechter kinome zu Mënsch Cancers agebonne gëtt, ass et net aussergewéinlech, datt e groussen Deel vun der aktueller therapeutics Zil- verschidde kinases [1], [2]. Coactivation vun receptor tyrosine kinases (RTKs) gouf am subsets vu multiple Cancers wéi Gehirtumoren multiforme [3], Broscht Kriibs [2], [4], [5], [6], [7], haett Kriibs observéiert [8 ], [9], Kapp an Hals Kriibs [7] an gastric Kriibs [4], [5], [6] also hinnen als néideg fir entholl Werdegang an Iwwerliewe SREL. Dës Observatioune genuch Medeziner rationale fir ageschalt RTKs zu Cancers Duerchmusterung datt dann therapeutesch gezielt Guide hätt an déi potenziell Wëssen fir konsequent combinatorial therapeutesch Strategien. Ee analyséiert, einfach d'Expressioun oder Aktivéierung Status vun enger eenzeger RTK datt de spezifeschen Zil FAQ fir eng bestëmmte therapeutesch Patiente wéi oft genuch kann fir Auswiel ass mol Patienten wessen Therapien trotz den Ausdrock vun der Zil- dodran. E puer potentiell Problemer aus geziilte Agenten, zB, 1) concomitant Aktivatioun vun parallel oder alternativ Weeër responsabel fir esou e Manktem vun therapeutesch profitéieren déi den Ufank cibléiert FAQ (s) Contournement gin hätt, a 2) kontinuéierlech Verfall vun molekulare an pathologic Charakteristike vun neoplastic Stoffer während Kriibs Werdegang. Dofir, géif et ideal sinn e Begleeder diagnostic Instrument ze hunn, datt op limitéiert Montanten vun de Medeziner uplanzen applizéiert hätt d'ëmfaassend Komplexitéit vun phosphorylated sécher Netzwierker an der neoplastic Otemschwieregkeeten Nieft der direkter Zil- RTK FAQ ze knipsen déi "evoluéiert" Krankheet ze kontrolléieren . VerfÜgung
geziilte phosphorylation Analyse vun de Medeziner Echantillon huet wéinst dem Manktem vun erhale villsäiteg Medeziner assays ënnerbonne ginn, datt op limitéiert Quantitéite vu Krankheete Stoffer sensibel genuch sinn ze fonktionnéieren. Mir hunn am Rapport virdrun d'Entwécklung vun engem Roman Atomkraaftwierk-baséiert immunoassay, Kollaboratioun Aktivitéit Geographie reaktiv-immunoassay (CEER; Dorënner S1) [6], déi fir analyséiert souwuel de ganzen Ausdrock an Aktivéierung Status vun FAQ sécher CASCADES gëeegent ass. CEER kann op Medeziner Echantillon direkt zu engem multiplexed Moud gesuergt ginn, datt zu limitéiert Quantitéiten sinn kann. D'CEER assay funktionéiert d'Équipe vun engem eemolege Jonker-Komplex ugemoossen Co-Lokalisatioun vun zwee heescht Aktivitéit-conjugated-antibodies eemol d'Zilscheif Proteinen hunn op engem microarray ageholl ginn. Dat Format erméiglecht de efficace a sensibel erkennen RTKs souwéi d'afgerappt Passerelle Proteinen erof op d'Single Zell Niveau (eng Empfindlechkeet vun iwwer 100 zeptomoles). An dëser Etude hu mir d'CEER assay ze studéieren der sécher Passerelle Komplexitéit an gastric Cancers (GC) geheescht. VerfÜgung
GCs sinn den Haaptfiguren Ursaach vum Kriibs Doud weltwäit mat enger Heefegkeet vun 18,9 /100.000 Fäll pro Joer an engem veruerteelt Taux vun 14,7 /100.000 pro Joer [10] a sinn déi gemeinsam malignancy zu Korea [11]. Metastatic GC bleift eng therapeutesch Erausfuerderung fir medezinesch oncologists wéinst sengem aarm hätt. Moment, ass Stad déi nëmmen aktiv cibléiert Agent datt zu engem zoufälleg Phase III Prozess [12] fir GC gin efficacious bewisen huet. Iwwerdeems Aktivatioun vun e puer RTKs huet an GCs, hiren Impakt op GC hätt gemellt ginn ass onbekannt. Dat ass wichteg fir d'Entwécklung an d'Applikatioun vun therapeutics fir de Medeziner Gestioun vun GCs. VerfÜgung
An dëser Etude, hu mir d'multiplexed CEER Plattform benotzt Niveau vun ageschalt RTKs (HER1, HER2, gekierzt Varianten vun HER2 ze bestëmmen, dh, p95HER2, HER3, cMET, PI3K, an IGF1R) an 434 frësch gefruer GC Stoffer a versicht GC Patienten an Potential subgroups Musteren baséiert op hir FAQ Passerelle Aktivéierung zu Kategorie. Mir hu verschidde Signal FAQ activations zu subgroups vun GC erhéijen observéiert datt mat Krankheet-gratis Iwwerliewe (DFS) vun dëse Patienten vergläichen. Dofir, hypothesize mir dat iwwerflësseg Passerelle Aktivéierung Tounagang Reschtofall afgerappt sécher an GCs Féierung kéint, also d'Anti-entholl Efficacitéit vun monotherapies limitéieren géint eenzel RTKs cibléiert. Endlech, hu mir eng potenziell mächteg Methodik entwéckelt déi clinicians aktivéiert kann baseline an entwéckele hire Restaurant zu entholl RTK Aktivéierung Profiler am Laf vun enger Behandlung mat libre entholl Zellen (CTCs) an malignant Zellen aus peritoneal Flesseggassystem (ascites entholl Zellen oder ATCs isoléiert ze kontrolléieren ). Geholl zesummen, eiser Etude stellt Beweiser fir concomitant RTK Aktivéierung am GC Mënsch Stoffer niewt mise CEER wéi eng efficace Medeziner Hëllefsprogramm fir depressiv an Monitor RTK Aktivéierung während GC Behandlung oder Krankheet Werdegang. VerfÜgung
Patienten- Kohort a Ray Specimen Opträg VerfÜgung
d'Etude no Akraafttriede vun der Samsung Medical Center Finanzpolitiker Kritik Verwaltungsrot (SMC IRB) fir Awëllegung waiver benotzt Archivmaterial Stoffer mat Retrospektiv Medeziner Donnéeën gehaal. Der Primärschoul entholl Echantillon waren all aus Samsung Medical Center gesammelt. All Patienten mécht gastrectomy mat radikal lymph Node dissection mat curative beduecht. Vum Mäerz 2001 bis Februar 2005, 447 frësch aus 434 Patiente kritt gefruer Stoffer sech aus surgically resected Primärschoul gastric erhéijen gesammelt an sech fir läschter Analyse sinn. All frësch gefruer Stoffer sech gesammelt (bannent &Si besteet; 30 Minutten) um chirurgesch Terrain an huet direkt virgezunnen gefruer an zu flëssegem Stéckstoff bis spéit benotzen gespäichert. Entholl uplanzen sech fir d'Präsenz vu > confirméiert; 70% entholl Beräich vun der pathologist. Fir d'Analyse, ware kleng Stécker vun gefruer Stoffer (10 μm Rubrik X 3) bereet prechilled Raséierapparat Baumaschinn déi benotzt a vun 100 μL vun lysis gefiermt lysed. Déi doraus resultéierend lysates sech bei -80 ° C bis nächster Analyse gespäichert VerfÜgung
Histopathology Kritik a HER2 Status Determinatioun VerfÜgung
All sinn H &. E-Kierchefënster drënner Mëtt vun zwee pathologists (ID gekuckt huet, KKM ) bei der experimentell wirklech Kär vun der Samsung Cancer Research Institut. All entholl uplanzen sech aus surgically resected Primärschoul gastric erhéijen. HER2 Zoustand war vun IHC an FISH alles. IHC Analyse gouf mat der HercepTest ™ (Dako, Glostrup, Dänemark) gesuergt. HER2 FAQ Ausdrock Niveauen sech den 0 zu Iwwer 3 Faarwen, laut dem Konsens Rot Recommandatiounen op HER2 fir GC spillen [13], [14]. Fir FISH, PathVysion HER2 DNA Studiebäihëllefe Kit (Abbott, Des Plaines, IL) benotzt gouf. Ariol Bild Analyse System benotzt gouf de hybridization Signaler (Genetix, San Jose, USA) ze zielen. All Echantillon mat nennen vun HER2 /CEP17 tëscht 1,8 an 2,2 goufen manuell Faarwen déi méi wéi 60 Net-phpNuke Zellen Zielen. Nennen vu > 2,2, 1,8 an 2,2, oder &Si besteet; 1,8 sech als positiv kléngen, equivocal, oder negativ fir amplification, bzw.. Chromosomal 17 polysomy war als CEP17 Signal definéiert déi iwwert der Moyenne pro Zell méi wéi sechs Kopien haten. Vun der 447 uplanzen, 434 uplanzen sech an der läschter Analyse abegraff. VerfÜgung
Kollaboratioun Aktivitéit Geographie reaktiv-immunoassay (CEER) VerfÜgung
CEER drënner waren gedréckt, mam GC lysates incubated an Filteren wéi virdrun beschriwwen [ ,,,0],6]. Drënner waren op véier photomultiplier (PMT) gewannen Astellungen gescannt innepolitesch dynamesch Rei ze klammen. Date goufen fit fir e fënnef-Parameter Equatioun ofgeleet wéi eng Funktioun vun knipsen-antibody Konzentratioun an PMT an berechnen Eenheeten (CU) virgestallt. VerfÜgung
knipsen antibodies waren gedréckt op nitrocellulose-Beschichtete Glas drënner (ONCYTE®, Grace Bio-Laboe) mat Net-Kontakt Dréckeren (Nanoplotter, GeSiM). De Spot Duerchmiesser huet ongeféier 175 μm. Drënner waren an engem desiccated ëmkomm bei 4 ° C huet. Ongeféier 500 pl vun knipsen Abs sech zu triplicate bei Serien dilution Konzentratioune vun 1 mg /ML, 0,5 mg /ML, an 0,25 mg /ML gedréckt. Sidd Maus-IgGs als negativ kontrolléiert. Jonker-Gamme Rutsch Konstellatioun sinn zu Dorënner S1 gewisen. VerfÜgung
Target-spezifesch antibodies (Maus monoclonal géint spezifesch epitopes op mënschlech Signal transduction Proteinen) an den entspriechende heescht Enzymen, Zocker oxidase (bEI) oder horseradish peroxidase (HRP), waren mat bi-funktionell Kräiz-linker, succinimidyl-4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate (SMCC) ausgeléist, an zesummen antibody-Aktivitéit conjugates noginn. Conjugates sech duerch HPLC sidd. Antibody Aktivitéiten am sidd conjugates sech duerch Concours Elisa alles an der Post-unhéier Aktivitéit Aktivitéiten waren déi funktionell assays spezifesch fir all heescht Aktivitéit fonnt. VerfÜgung
Jonker-microarray drënner waren rinsed 2x mat TBST (50 mm Tris /150 mm NaCl /0,1% Tween-20, pH 7.2-7.4), konnt mat 80 μL Whatman erauszesichen Respektiv fir 1 HR um RT, dann gewäsch 2x mat TBST. Serially lysate Kontrollen oder Echantillon verdënntem zu 80 μL dilution Prellbock (2% BSA /0,1% TritonX-100 /TBS, pH 7.2-7.4) sech un designéierte sub-flamenden Ofgrond op drënner notéiert a fir 1 Stonn op RT incubated. Drënner waren 4X (3 min. All) gewäsch, an heescht Abs sech zu 80 μL vun Reaktioun gefiermt an incubated fir 2 Stonnen um RT notéiert. Nom Wäschen drënner mat TBST unbound heescht Abs ze protégéieren, 80 μL vun biotin-tyramide Léisung (5 μg /ml vun 50 mm Zocker /PBS) virbereet vun 400 μg /ML zu Ethanol Léisung (Perkin-Elmer Life Science) ugebaut an incubated fir 15 min an donkel. BEI /HRP-mediated tyramide Signal amplification Prozess war vun wäschen mat TBST 4X kom- men, 3 min all. Lokal Oflagerung vun biotin-tyramide vun incubation fonnt gouf mat streptavidin (SA) -Alexa647 (Invitrogen) op 0,5 μg /ML zu 2% BSA /0,1% Triton /TBS fir 40 min. Beim Réalisatioun vun incubation, sech drënner 4X mat TBST gewäsch, gedréchent an gehaalen an donkel bis si via e microarray Scanner Radioberäich goufen. VerfÜgung
Fir CEER Donnéeën Analyse, sech op véier PMT gewannen Astellungen gescannt drënner innepolitesch dynamesch ze klammen Gamme. Hannergrond-korrigéiert Signal intensities sech fir Flecken an triplicate gedréckt averaged. Puer Critèren sech fir weider analyséiert Donnéeën ze filter benotzt, dorënner Limitatioun op Plaz Stroossebau, souguer gemaach vun Variant fir Plaz gefaart, an allgemeng d'Heft Hannergrond. Fir all assay, war e Liewesniveau rop aus serially verdënntem Kontroll Zell lysates aus Zell Linnen mat gutt-Zeeche Signal transduction Proteinen bereet entsteet. Date goufen fit fir e fënnef-Parameter Equatioun wéi eng Funktioun vun knipsen-antibody Konzentratioun an PMT ofgeleet. D'Norm rop fir all Lakonien war als Funktioun vun Logbuch Signal Intensitéit fit, gemooss als Familjenmember fluorescence Eenheet (RFU) vs. Logbuch Konzentratioun vun Zell lysates an de Standard Zell Linnen referenzéiert. Zum Beispill, war Standard rop vun serially verdënntem Zell lysates bereet aus BT474 benotzt HER2 Ausdrock an den Ofschloss vun phosphorylation an all Prouf (Dorënner S2) ze normaliséieren. Dofir, huet eng Prouf mat 1 CU vun HER2 Ausdrock der RFU Wäert entsprécht RFU Wäert vun 1 Standard Referenzmaterial BT474 Zell. Als Referenz Zellen hunn 1~2 × 10 gekierzt HER2 Beräicherung VerfÜgung Full-Längt p185-HER2 kenne sech aus entholl Otemschwieregkeeten lysates do benotzt Magnéitfeld-kuerze Been kräftegen antibodies spezifesch un extracellular public (ECD) vun HER2 wéi zu Dorënner S3 gewisen. Doraus p185-HER2 do lysates, déi gekierzt HER2 (t-HER2) receptor Proteinen beräichert aus der ECD suivéiert, sech fir spéider quantification vun T-HER2 Ausdrock an phosphorylation mat de respektiven CEER assays benotzt. A frecken Wäert vun 500 CU benotzt gouf fir p95HER2 hir, stoung pro 20 μg vun Otemschwieregkeeten analyséiert. D'total p95HER2 assay readout war relativ zu de Signaler vun der Norm Kéiren entsteet eng Kontroll Zell lysate aus der Broscht Kriibs Zell Linn BT474 generéiert benotzt. VerfÜgung Zell Kultur an reagents VerfÜgung CEER assay Kontroll Zell Linnen , MDA-MB-468, T47D, mat HCC827 an BT474 Zellen Grad vun ErbB-RTK Ausdrock sech aus ATCC an ugebaut bei 37 ° C an 5% CO kritt 2 verännerlech - fir MDA-MB-468 (Dulbecco d'minimal wesentleche mëttel- (DMEM) + 10% FBS), BT474 (DMEM + 10% FBS), an HCC827 an T47D (RPMI 1640 + 10% FBS, 0,2 U /ml Bovine Insulin). Zellen sech mat 1 × PBS virun Wuesstem Faktor Stimulatioun gezielt an gewäsch. MDA-MB-468 Zellen mat 100 nm epidermal Wuesstem Faktor (EGF) oder transforméiert Wuesstem Faktor engem (TGFα) stimuléiert huet, sech T47D Zellen mat 20 nm heregulin β (HRGβ) oder 100 Dummeldéng /ML Insulin-wëll Wuesstem Faktor-1 stimuléiert (IGF1) zu serum-gratis Wuesstem Medien fir 5 oder 15 min. Stimuléiert Zellen sech mat 1 × PBS zou an dann lysed (lysis gefiermt: 50 mm Tris, pH 7.4, 150 mm NaCl, 1% Trition X-100 an 2 mm Na 3VO 4) an huet op Äis fir 30 min virun der supernatant fir eng Kierzunge assay oder huet bei -80 ° C huelen. VerfÜgung CEER Bewaacher Determinatioun a Hëtzt Kaart Käre VerfÜgung komm, fir eng bestemmten uweist wéi grouss wéi d'drëtt quartile definéiert gouf fir individuell uweist an de Patient Populatioun vun dëser Etude. Patienten sech baséiert op der CU Wäert vun der CEER assay fir eng bestemmten uweist klasséiert. Deene Patienten méi grouss wéi d'drëtt quartile cutoff sech um héchste Risiko als nik uweist Niveauen ze hunn an dofir eventuell ausgeléist Signal Weeër. Kierzunge Iwwerliewe Analyse gemaach gouf de predicative Qualitéit vun dësen cutoffs ze bewäerten. VerfÜgung D'uweist Profil vun der entholl Echantillon gouf vun engem Hëtzt Plang vertrueden. Vunenee war baséiert op der decile Geleeënheet vun der Aktivatioun vun deem Bewaacher gemoolt. All Lakonien war vun deciles Tunique, déi vun engem z'ënnerscheedde Hallefschiet representéiert, mat der Skala déi besot d'Faarf. Souwuel de hannertenee (Patient) a Kolonne (Tandel) Käre huet gewisen. Déi komplett linkage sind war benotzt enger Hierarchie Stärekoup (oder dendrogram) ze kréien, déi vun Rei déi soll Observatioune Glidderung der hclust Funktioun am R, genannt, déi vun der heatmap.2 Funktioun sinn mat der gplots Bibliothéik vun der statistescher Ëmwelt R benotzen: A Sprooch an Ëmwelt fir statistique Rechenzäit (http://www.r-project.org/). Subgroups vun lues sech duerch d'Käre definéiert, datt Vergläicher vu Lakonien Profiler fir Patiente erlaabt. VerfÜgung CTC an ATC Isolatioun VerfÜgung Fir CTC Evaluatioun, 7.5 ml vu Blutt Echantillon waren an 10-ml evakuéiert ethylenediamine zréckgräifen tetraacetic Seier (héich) Krunn. D'CellSearch System (Veridex) war fir Jonker-Magnéitfeld CTC Isolatioun benotzt no de Protokoll virdru beschriwwen [6] ferrofluids benotzt conjugated zu Ab géint epithelial Zell Haftung Protein. Fir ATC Evaluatioun, sech bewosst Inhalter vun 50 bis 100 ml vun ascites Valoriséierung vun centrifugation a Jonker-Magnéitfeld entholl Zell Isolatioun beräichert huet an engem ähnleche Moud gesuergt. Multiple baut vun ATCs sech mat Cocktailer vum Wuesstem Faktoren behandelt (EGF, HRG, HGF an IGF1) mat oder ouni lapatinib an PHA-665,752 inhibitor geschéckt. VerfÜgung Patienten- Charakteristiken Charakteristiken vun 434 GC Patienten an Table 1. scho All Patienten gëtt si gastrectomies mat Node dissection D2 lymph mat 242 (55.8%) Patienten Erhalen subtotal gastrectomies. Laut AJCC 2002 Stadium System, no 86 Patiente pathologic Etapp ech, II an 116 Etapp no 126 Etapp III an 106 hu Etapp IV (35 Patiente mat metastatic M1) GC. An der Zäit vun der Analyse, sech 226 Patienten Doudeger an 237 Patienten hu Terrain dokumentéiert. 70 Patienten hu Zell carcinoma signet Ring. De 5-Joer allgemeng a Krankheet-gratis Iwwerliewe Tariffer sech 52,4% an 50,0%, respektiv. All Primärschoul GC Stoffer an der Zäit vun Agrëff procured sech an direkt fir Zukunft molekulare Analyse gefruer briechen. VerfÜgung CEER-baséiert assays definitiven heterogeneity zu HER2 Ausdrock a Präsenz vun HER2 gekierzt Variant, p95HER2, an HER2 (+) gastric Cancers VerfÜgung Mir hu virdrun d'Entwécklung vun Jonker-microarray baséiert CEER assays gemellt [6], [15]. Mir ginn de CEER-baséiert HER2 assay der HER2 Status vun der HER2 (+) an HER2 ze ermëttelen (-) Echantillon vun eiser GC Patient Kohort datt baséiert op Norm IHC HercepTest /FISH Analyse gefall waren. De Virdeel vun CEER-baséiert assays ass hir héich Empfindlechkeet a Spezifizitéit als Verglach zu IHC-baséiert assays [6]. Baséierend op déi aktuell HER2 (+) Definitiounen fir GCs [13], [14], dh Echantillon mat engem HER2-IHC Virsprong vun Iwwer 3 oder 2+ an engem positive HER2 VerfÜgung Gentherapie amplification Zoustand, 50 vun 434 (11,5%) Echantillon vun eiser GC Patient Kohort sech HER2 (+) vun IHC HercepTest /FISH Analyse (Table S1). Am Géigesaz, laut der IHC Richtlinnen spezifesch fir Broscht Cancers, nëmmen 78% (39/50) vun dëse Patienten goufen HER2 (+) (Table S1) d'Oneenegkeet ukomm Critèrë fir HER2 komm tëscht gastric an Broscht Cancers ugëtt. Eng Majoritéit vun de HER2 (+) GCs (36 aus 50 Echantillonen (72%)) sech vun der intestinal subtype anstatt den diffusen oder deer Zort GCs am Accord mat publizéiert Rapporten [13], [16], [17]. VerfÜgung CEER-baséiert HER2 assay bewisen méi héich HER2 Ausdrock Niveauen am IHC /FISH HER2 (+) erhéijen, well fir déi, am Verglach zu der HER2 (-) erhéijen (mat engem schwätzen Wäert vun 77,9 CU vs. 4,3 CU, p-Wäert 8.18E-10) wéi zu Dorënner 1A gewisen. D'CEER-baséiert HER2 Daten zu CU virgestallt gëtt, eng Norm funktionell Eenheet baséiert op Zell Linn Kontrolle mat bekannt HER2 Ausdrock [6], datt Verglach vun HER2 Ausdrock ganze Echantillon erlaabt. Nëmmen 32/50 oder 64% vun IHC /FISH HER2 (+) GCs bewisen HER2 Ausdrock vun CEER an et gouf e groussen Niveau vun heterogeneity zu HER2 Ausdrock vun dësen Echantillon wéi déi grouss CEER readouts verroden. Heterogeneity zu HER2 Ausdrock kann de Grond fir nëmmen e mëttelméissegen Ofschloss vun concordance (87.5%) tëscht der IHC an FISH readouts fir HER2 an der ToGA Prozess [12] erklärt. Dës Ënnerscheeder géif erofgoen direkt d'Resultat vun HER2-geziilte therapeutics wéi Stad am GCs. Desweideren, wéinst der héich Empfindlechkeet vun der CEER assay, war et gemierkt dass ~20% vun der IHC /FISH HER2 (-) GCs nach total HER2 dato bei gemaach ënneschten Niveau wéi de HER2 (+) Patient Populatioun ausgedréckt VerfÜgung. deems de CEER-baséiert p95HER2 assay Plattform, gekierzt Formen vun HER2 waren nieft voll Längt HER2, an GCs fir d'éischte Kéier speziell fonnt,. (-) Echantillon), datt e groussen voll Längt HER2 Ausdrock vun CEER (Dorënner 1B) Gewise p95HER2 Ausdrock war an 31/50 HER2 (+) Echantillonen an 27/384 HER2 analyséiert. D'Heefegkeet vun p95HER2 zu HER2 (+) GCs war ~77% (an 24/31 Echantillon) (Table S1). Ähnlech zu voll Längt HER2 Ausdrock, d'Majoritéit vun p95HER2 Ausdrock (79% vun p95HER2 zu HER2 ausgedréckt (+)) war an intestinal Typ GCs fonnt. (-) GCs (37% oder 10/27 Echantillon) déi voll Längt HER2 Ausdrock bewisen p95HER2 Ausdrock ass och zu engem klenge Prozentsaz vun HER2 observéiert. Allerdéngs war d'Moyenne p95HER2 Ausdrock vun HER2 (+) GC Echantillon bedeitend méi héich wéi déi vun HER2 observéiert (-) GCs (5083.6 CU zu HER2 (+) vs 437,0 CU zu HER2 (-), p-value = 1.27e-05 ). p95HER2 kënne bäidroen Net-Réceptivitéit am GC erhéijen ze Stad wéi et an 70-80% vun HER2 overexpressing Broscht Cancers heescht [18]. Stad plus Standard Chimiotherapie sprachlos eng global Äntwert vun nëmmen 47% zu HER2 (+) GCs an der ToGA Prozess [12] besot Existenz vu méigleche Stad Resistenz Mechanismen an eiser Daf Stad datt zu wourop wielt. Fir klinesch p95HER2 Ausdrock mat Stad Resistenz validéieren, déi virun allem wéinst de rezenten contraire Conclusiounen aus der GeparQuattro Broscht Kriibs Studien kontrovers gouf [19], genau p95HER2 assay refinement hinsichtlech vun klinesch-relevant diagnostic assay präventive alles an Dës zu Medeziner Astellungen ass néideg. Eng Confirmatioun vun p95HER2 Ausdrock ass zu enger Phas II neoadjuvant lapatinib plus Chimiotherapie Medeziner Prozess zu GC Patienten geplangt Verschidde Studie der Benotzung vun lapatinib zu p95HER2 (+) Cancers [20] schloen, [21]. VerfÜgung deelgeholl zesummen , eisen Daten kloer d'HER2 Status vun GCs definéieren an den Déngscht vun CEER-baséiert HER2 Diagnos am GC Patient Echantillon Bestëmmung hir richteg voll Längt a gekierzt HER2 Ausdrock beweisen. D'Entwécklung vun esou Diagnos wäert betraff der korrekt Auswiel vun HER2 (+) GCs Impakt datt datt zu Stad an aner HER2 gezielt Agenten sinn. Mir hunn am Rapport virdrun de Gebrauch vun CEER-baséiert HER2 Diagnos an Patienten Broscht Kriibs [6], [15] dat eng héich Empfindlechkeet a Spezifizitéit hien als Verglach zu IHC-baséiert Diagnos. VerfÜgung Gastric Cancers beweisen concomitant Aktivéierung vun sécher Weeër VerfÜgung Mir der CEER assay der Präsenz vun insgesamt an phosphorylated (Noutbrems) Formen vun e puer sécher Molekülle datt bekannt ginn Drogenofhängeger Ziler direkt op GC Echantillon benotzt ze bewäerten: dës abegraff puer RTKs (HER1, HER2, HER3, cMET, IGF1R) an PI3K. Vertrieder Biller vun multiplexed CEER Passerelle-flamenden Ofgrond vun aacht verschiddene Echantillon sinn zu Dorënner 2A gewisen. Dës Biller weisen kloer d'heterogeneity zu ageschalt Passerelle Ënnerschrëfte datt verwandelt an GCs ass. Zum Beispill, souwuel HER1 /HER2 sinn zu Echantillon 1 a 6 coactivated hierkommen HER2 nëmmen zu Prouf 2 ageschalt ass obwuel HER1, HER2 an cMET ze héijen Niveauen ausgedréckt ginn. Sample 5 Sarkasmus Aktivatioun vun all 5 analyséiert RTKs dorënner de afgerappt PI3K an Shc Weeër. Déi folgend Rubrik der sécher Passerelle heterogeneity an eiser GC Patient Kohort observéiert beschreift wéi déi CEER assays alles. VerfÜgung Saachen aus 202 Patienten (46.5%) hu keng Magnéitfeld Aktivatioun vun der an eiser Etude getest RTKs. Passerelle Aktivéierung Musteren fir de Rescht vun der erhéijen, wéi an enger Passerelle Käre Analyse (Dorënner 2B) duergestallt, variéiert dicht mat e puer GCs concomitant Aktivéierungscode vu multiple RTKs wéi HER2 /HER3, HER1 /2/3, HER1 /3 /cMET Musiktherapie- oder HER3 /cMET anerer sech nëmmen op enger eenzeger FAQ phosphorylated. D'entholl Inhalt vun all de analyséiert Echantillon war > 70% baséiert op hir histological Examen. Allerdéngs, d'Pan-cytokeratin (Pan-CK) Ausdrock war gemaach Variabel suggeréiert heterogeneity an der epithelial Inhalt vun GCs. Baséierend op dësem profiling, kategoriséiert mir d'Kohort 434 GC Prouf no hirem RTK Aktivéierung Ënnerschrëfte an HER2 Status VerfÜgung mannst ee receptor Member vun der KLENGE Achs war zu 41% vun de GC Patienten ausgeléist. HER2 phosphorylation war net nëmmen zu 50% vun HER2 (+) GC Patienten fonnt mä och zu ~22% vun HER2 (-) Cancers am Accord mat der observéiert total HER2 Ausdrock virdrun beschriwwen. 16/25 HER2 (+) Echantillon datt HER2 ageschalt bewisen ausgedréckt och p95HER2. Anerersäits, HER3 war och zu engem héichen Prozentsatz vun HER2 (+) GCs (36%) phosphorylated als Verglach zu HER2 (-) Cancers (~24%). Allerdéngs, phosphorylated HER1 net e sou Preferenze gemaach hunn a Wéi war an zwou GC Zorte ageschalt (26% zu HER2 (+) an 25% vun HER2 (-)). Doriwwer eraus, hien huet déi meescht vun de KLENGE Member ageschalt GC erhéijen (~64%) eng concomitant Aktivatioun vun anere RTKs, i.e., cMET oder IGF1R. Histologically, eng Majoritéit vun der HER2 (+), intestinal Typ GCs ausgedréckt eng Noutbrems HER2 (an 22/36 oder ~61%) duerno HER3 (an 13/36 oder ~36%) mat engem globale 36% vun intestinal Typ GCs enger Noutbrems HER2 Passerelle ausdrécken. Insgesamt war HER2 Aktivéierung méi konzentréiert an intestinal Typ (55/154 oder 35,7%) wéi am Verglach zu den diffusen-Typ Cancers (43/225 oder 19,1%). Am Géigesaz, war ageschalt HER1 gläich an zwou intestinal-Typ observéiert (38/154 oder 24,7%) an diffusen Typ (58/225 oder 25,8%) GCs. Ageschalt HER3 war och Wéi präsent (29.9% an 21,8%) tëscht béide Klassifikatioun bestemmt d'Lauren. VerfÜgung Wéi der sécher Funktioun vun der KLENGE kinase Achs op ageschalt receptor dimerization ofhängeg ass, hu mir eis bei de verschidde Puer vun hirem Member coactivations. HER3 ageschalt GCs ouni HER1 coactivation: Coactivation vun HER2 mat HER3 war zu HER2 (+) Cancers (13/50 oder 26%) mat 7/13 HER2 bevirdeelegt. Ongeféier 54% vun de HER2: HER3 coactivated HER2 (+) GCs coexpressed p95HER2. (: HER2, HER1: HER3 an HER2: HER3 HER1) ausgedréckt an ~15% all vun HER2 - Wéinst dem HER2 () GCs rauszesichen eng Virléift fir eng spezifesch KLENGE kinase dimer hien huet misse mat all dräi méiglech Aktivatioun dimer Puer weisen (-) Echantillon. (-) Triple Aktivatioun vun HER1 /2/3 kenne war an 11,1% vun GCs mat engem liicht méi héich Verdeelung vun HER2 observéiert Cancers VerfÜgung Ähnlech zu HER1, cMET phosphorylation war wéi tëscht HER2 (+) (22%) an HER2 verdeelt. Ausserdeem, Verdeelung iwwert d'Lauren baséiert cMET ageschalt histotype war ähnlech tëscht intestinal (48/154 oder 31,2%) an diffusen-Typ (55/225 oder 24,4%) GCs. VerfÜgung Majoritéit vun cMET ageschalt GC Echantillon (~ 71% oder 77/108) Gewise engem concomitant Aktivatioun vun KLENGE kinase receptor Memberen. All Echantillon mat engem phosphorylated cMET bewisen enger cMET VerfÜgung amplification (Donnéeën net gewisen). Mir propagéieren der KLENGE Achs kenne léifste datt Kräiz-Diskussioun mat der cMET Passerelle. Vun der 77 GC Echantillon engem cMET coactivation mat engem KLENGE Member Musiktherapie-, 66 Echantillonen (~86%) waren mat HER1. Allgemeng zevill, war cMET zéien coactivated wéi mat HER1 (15.2%) ze HER2 Verglach (10,1%) oder HER3 (9.7%). Dës Observatioune proposéiere eng méiglech Kräiz-Diskussioun tëscht dem cMET an HER1 sécher Weeër an GCs. cMET Aktivéierung ni Co-vierdrun mat ageschalt HER3 ausser HER1 an /oder HER2 och an der selwechter Prouf phosphorylated goufen. Ronn 7% vun GC Patienten bewisen engem coactivation vun all dräi KLENGE Achs receptor Memberen mat cMET. Ageschalt cMET Co-vierdrun mat p95HER2 ausdrécken Echantillon vun 5/24 an 1/10 HER2 (+) an HER2 (-) GCs, bzw. VerfÜgung Ähnlech zu HER3 Aktivéierung, déi sécher Passerelle vun der IGF1 receptor Hausse gouf aktiv vun enger héijer Prozentsaz vun HER2 (+) GCs (30%) wéi der HER2 (-) GCs (24.7%). Doriwwer eraus, war wéi mat phosphorylated HER3 observéiert, ausgeléist IGF1R Wéi tëscht der intestinal (26%) an diffusen-Typ (~24%) GCs verdeelt. Dëst Verdeelung Féierung eis ze ermëttelen, ob et eng IGF1R war: HER3 coactivation am GC Patient Kohort. HER3 coactivation: IGF1R war jo mat p-HER3 besonnesch an HER2 (+) GCs wou 22% oder 11/50 HER2 (+) GCs bewisen eng IGF1R maximally coactivated. Allerdéngs, an HER2 (-) GCs, Prozentsaz vun IGF1R coactivation mat HER3 (an 51/384 Echantillon oder 13,8%) ass ähnlech ze IGF1R coactivation mat HER1 (an 53/384 Echantillon oder 13,3%). IGF1R: HER2 coactivation (an 45/384 Echantillon oder 11.7%) duerno no hannen. Am Allgemengen, 34/434 GC Echantillon bewisen coactivation vun all de Membere vun der KLENGE kinase Achs mat IGF1R vun deenen 28 Echantillonen och eng cMET coactivation bewisen. Allerdéngs war cMET seelen mat IGF1R an dem Fehlen vun enger KLENGE kinase receptor Member coactivation Co-ausgeléist. Ausserdeem, c-begéint: IGF1R coactivations sech virun allem an HER2 observéiert (-) GCs VerfÜgung GC Echantillon waren hierarchically Strooss baséiert op hir decile-baséiert Bewaacher Aktivéierung Profiler (Dorënner 2B).. D'Analyse bewisen, dass cMET: HER1, HER2: HER3 an IGF1R: PI3K Aktivéierung Musteren huet enk mat der cMET soll: HER1 Stärekoup eng eegestänneg Ziel ze grënnen.
Resultater an Diskussiounen VerfÜgung
KLENGE Achs an gastric Cancers. (Table 2 & Table S1). VerfÜgung
cMET gastric Cancers (Table 3 & Table S1) ausgeléist. VerfÜgung. (-) (~25%) GCs
IGF1R ageschalt gastric Cancers (Table 4 & Table S1)..
Benotzt FLUOstar Omega fir nei Darmbakterien ze studéieren déi eis Gesondheet beaflosse kënnen
Gutt Nouvelle fir IBS Leider wéi d'Fuerscher "Darm Jucken" identifizéieren
Fungi a Bakterien am Darm kënne gläichméisseg mënschlech Gesondheet a Krankheet Gravitéit beaflossen
Kuerzkette Fettsäure -Ergänzung verbessert den Erhuelung vum Schlag,
Ass de Coronavirus duerch Feeën verbreet?
Bestëmmung vun der sauerneutraliséierender Kapazitéit fir OTC Antaciden
Crohn d'Krankheet
Crohns Krankheet verursaacht Entzündung vum Magen -Darmtrakt. Et kann duerchernee ginn mat ulzerative Kolitis an irritablen Darmsyndrom, awer Crohn dKrankheet ass eenzegaarteg fir sech selwer. Bei Ogd
Mëttelmier Diät fördert e gesonde Alterung mat engem méi gesonde Darmmikrobiom
Eng nei Studie online am Journal publizéiert Gutt am Februar 2020 bericht déi markant gesondheetlech fördert Effekter vum Wiessel op eng mediterran Diät fir nëmmen ee Joer. DResultater ware wéinst e
Rot Fleesch auswiesselen fir Planzbaséiert Fleeschalternativen senkt de kardiovaskuläre Risiko
Kardiovaskulär Krankheet ass e Regenschirmbegrëff benotzt fir Konditiounen ze definéieren déi dHäerz a Bluttgefäss beaflossen an ass normalerweis verbonne mat der Opbau vu Fettablagerungen an engem er