PLOS ONE: Associação entre Polimorfismos em genes EGFR exons, estilo de vida e risco de câncer gástrico com diferenças de género nos assuntos chineses Han

Abstract

Fundo

O receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR) gene desempenha um papel fundamental na sobrevivência do tumor, invasão, angiogênese e metástase. Estudos recentes mostraram que o câncer gástrico (GC) foi associada a polimorfismos do gene EGFR e influências ambientais, tais como fatores de estilo de vida. Neste estudo, sete SNPs conhecidos em exons EGFR foram investigados em uma população chinesa de alto risco na província de Jiangsu para testar se as variantes genéticas de exons EGFR e estilo de vida estão associados com um risco aumentado de GC.

Metodologia /Principais achados

Um estudo de caso-controle de base hospitalar foi realizada na província de Jiangsu. Os resultados mostraram que fumar, beber e preferência por alimentos salgados foram significativamente associados com o risco de GC. As diferenças de estilo de vida entre machos e fêmeas poderia ser como a razão de taxas de incidência maior no sexo masculino do que aqueles em mulheres. Sete SNPs exão foram genotipados rs2227983, rs2072454, rs17337023, rs1050171, rs1140475, rs2293347, e rs28384375. Notou-se que as variantes rs2072454 alelo T e TT genótipo foram significativamente associados com um risco aumentado de GC. Curiosamente, o nosso resultado sugeriu o haplótipo ACAGCA pode ser associado com diminuição do risco de GC. No entanto, nenhuma associação significativa foi analisada entre os outros seis SNPs e o risco de GC tanto na população total e da população em idade de correspondência, mesmo com as diferenças de género.

Conclusões

Fumar, beber e preferência por alimentos salgados foram significativamente associados com o risco de GC, na província de Jiangsu, com diferenças de género. Apesar de apenas um SNP (rs2072454) foi significativamente associada com um risco aumentado de GC, combinou o exão seis EGFR SNPs em conjunto pode ser útil para predizer o risco de GC

Citation:. Zhang J, Zhan Z, Wu J , Zhang C, Yang Y, Tong S, et al. (2013) Associação entre Polimorfismos em genes EGFR exons, estilo de vida e risco de câncer gástrico com diferenças de género nos assuntos chineses han. PLoS ONE 8 (3): e59254. doi: 10.1371 /journal.pone.0059254

editor: Eithne Costello, The Cancer Research UK Liverpool Centre, Reino Unido

Recebido: 19 de setembro de 2012; Aceito: 13 de fevereiro de 2013; Publicação: 29 de março de 2013

Direitos de autor: © 2013 Zhang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi apoiado por Prioridade Academic Programa de Desenvolvimento das Instituições de Ensino Superior Jiangsu (PAPD), Jiangsu Natural Science Foundation (BK2008461), National Natural Science Foundation da China (30.973.715 e 81.001.502), Fundo de Investigação para o Programa de Doutorado de Educação Superior da China (20103237110011) , jovens professores em Universidade de Nanjing de Medicina tradicional chinesa. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Embora a incidência e mortalidade do cancro gástrico (GC) têm diminuído nos últimos anos, GC foi a quarta neoplasia maligna mais comum no mundo em 2008, com cerca de 989.600 novos casos. Homens geralmente desenvolvem GC duas vezes mais que as mulheres e cerca de 72% dos novos casos ocorrem em países em desenvolvimento. Em geral, as maiores taxas de incidência estão na Ásia, particularmente em países do leste da Ásia, como a Coréia, Japão e China [1].

Na verdade, quase 40% de todos os casos de GC ocorre na China, e há uma variação geográfica notável nas taxas de GC em toda a China [2]. Mais de dois terços dos pacientes com diagnóstico de GC na China têm a doença irressecável e uma sobrevida média de seis a nove meses. Além disso, em pacientes com tumores ressecáveis, as taxas de recorrência local e distantes são elevados, ea taxa de sobrevivência de 5 anos é inferior a 30% [3]. Sun et al.
[4] avaliou o impacto do GC sobre a população chinesa pela análise epidemiológica de sua distribuição mortalidade 1990-1992, os resultados mostraram que GC foi a principal causa de mortalidade relacionada ao câncer na China .

é agora geralmente aceite que a patogênese da GC envolve uma interação multi-factorial entre gatilhos ambientais e susceptibilidade genética. Estudos epidemiológicos têm identificado idade, as diferenças de género e um número de factores ambientais que podem contribuir para o desenvolvimento de GC, incluindo uma dieta salgada, tabagismo, consumo de álcool e Helicobacter pylori
infecção [5] - [8] . Outros estudos têm identificado fatores do hospedeiro e alterações genéticas que também desempenham um papel importante no desenvolvimento e progressão da GC através de interações gene-ambiente [9], [10].

O receptor do factor de crescimento epidérmico gene (EGFR) situa-se no braço curto do cromossoma humano 7 e produz uma glicoproteina com um peso molecular de 170 kDa, que tem uma afinidade elevada para os seus ligandos, incluindo o factor de crescimento epidérmico (EGF) e factor de transformação de crescimento alfa (TGF-α). EGFR participa em vários mecanismos tumorigénicas essenciais, tais como a sobrevivência do tumor, invasão, angiogénese e metástase. expressão de EGFR tem sido observada em muitos tumores humanos, e vários estudos demonstraram que a sobre-expressão de EGFR correlaciona-se com um resultado pobre [11]. No GC, EGFR superexpressão correlaciona-se com o estágio do tumor avançado e um mau resultado clínico [12]. No entanto, os papéis que a sobre-expressão de EGFR e alterações genéticas desempenham na carcinogênese gástrica permanecem obscuros. Além disso, apenas alguns polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) foram encontrados para associar com o desenvolvimento GC e os resultados [11], [13].

Neste estudo, a hipótese de que as exposições ambientais e as diferenças de gênero atuam como modificadores de efeito em um fundo da variação genética em exons EGFR que possa afectar a função EGFR, moldando assim a susceptibilidade GC. Para testar esta hipótese, um estudo de base hospitalar foi realizado no qual 387 casos de GC e 392 controles sem câncer em uma população chinesa de alto risco foram genotipados para sete SNPs conhecidos em exons EGFR, ou seja, rs2227983 A > G, rs2072454 C > T, rs17337023 A > T, G rs1050171 > A, rs1140475 C > T, G rs2293347 > A, e rs28384375 T >. C

Materiais e Métodos

Recrutamento de Casos e participantes de controle

Inicialmente, casos 401GC e 420 controles foram identificados; 3 casos de falta de câncer de questionários, bem como 11 tumores diferentes do adenocarcinoma foram excluídos; 18 controles foram excluídos por biomarcadores relacionados ao câncer de soro imoderado e 10 controles foram excluídos por desvio geográfica. No geral, uma população total com 387 casos e 392 controles estavam disponíveis para o estudo em curso sobre a base do poder prospectivo analisa, é uma pena que os controles foram cerca de 10 anos mais jovem do que os casos, portanto, uma população em idade de correspondência com 294 casos e 294 controles foi extraído da população total para a colação de idade correspondente. Todos os indivíduos eram geneticamente relacionado étnicos chineses han. Os pacientes com GC primário foram recrutados a partir do Departamento de Gastroenterologia Cirúrgica do Hospital Provence Jiangsu de Medicina Tradicional Chinesa (MTC), entre janeiro de 2008 e julho de 2010 na cidade de Nanjing, província de Jiangsu. Os controles saudáveis ​​livres de câncer foram consecutivamente recrutados a partir de Jiangsu Hospital do TCM, e eles eram visitantes do hospital para um check-up anual durante o mesmo período. Para ser incluído no estudo, os pacientes (a) machos ou fêmeas mais de 20 anos de idade, mas com menos de 80 anos, (b) tinha de ser de etnia chinesa Han (auto-referida), (c) vieram de três regiões de Jiangsu província e tinha que ser um residente local por pelo menos 5 anos, (d) tinha que ter GC primária recém-diagnosticados histopatologicamente, (e) teve que falta tumores malignos anteriores em outros órgãos, e (f) não tinha terapia antitumoral antes do recrutamento , incluindo quimioterapia e radioterapia. entrevistadores treinados utilizado um questionário pré-testado para recolher dados epidemiológicos dos participantes, ou seja, fatores demográficos, como idade e sexo, e os fatores de risco conhecidos para o GC (como tabagismo, consumo de álcool, e uma história familiar de cancro do aparelho digestivo) . Indivíduos que fumavam um ou mais vezes por dia durante mais de um ano foram definidos como fumantes e aqueles que consumiam três ou mais bebidas alcoólicas por semana durante 6 meses foram considerados bebedores crônicos [14], [15]. Depois de assinar formulários de consentimento informado, cada participante doou 3-5 ml de sangue periférico a ser utilizado para a extração de DNA genômico. O protocolo de pesquisa foi aprovado pelo conselho de revisão institucional de Jiangsu Provence Hospital do TCM.

Isolamento DNA genômico de células do sangue periférico

Um kit de extração comercial de DNA no sangue (AxyPrep-96 kit, Axygen, CA, EUA) foi utilizado para extrair ADN genómico a partir das amostras de sangue. Os DNAs purificados foram armazenados a -20 ° C até serem utilizadas para teste de genotipagem. A qualidade do ADN foi avaliada por electroforese em gel de agarose.

A genotipagem

reacção em cadeia da polimerase a detecção da reacção de ligação-(PCR-LDR) métodos foram utilizados para a genotipagem [16]. Iniciadores foram sintetizados por Engineering Technology Shanghai Sangon Biológica e Serviços (No.698, Xiangmin Rd, distrito de Songjiang, Shanghai, China). Cada conjunto de sondas de detecção de reacção ligase composta uma sonda comum e duas sondas que discriminam para os dois tipos (Tabela S1).

O alvo sequências de DNA foram amplificadas utilizando um método de PCR multiplex. PCRs para cada sujeito foram realizadas num volume final de 20 ul contendo 1 × tampão de PCR, 3,0 mmol /l de MgCl _{2, 2,0 mmol /L de trifosfatos de desoxinucleótidos, 1 iniciadores ul, 0,2 ul QIAGEN HotStarTaq Polimerase (QIAGEN, China ), 4 ul de 1 × Q-solução e 10-20 ng de ADN genómico. ciclagem térmica foi realizada durante cinco SNPs (rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs2293347 e rs2072454) no sistema de PCR Gene Amp 9600 (Perkin Elmer) com uma desnaturação inicial durante 15 min a 95 ° C, seguido por 35 ciclos de desnaturação a 94 ° C durante 30 s, hibridação a 59 ° C durante 1 min, e extensão a 72 ° C durante 1 min, seguido por uma extensão final a 72 ° C durante 7 min. O protocolo para a amplificação rs28384375 consistiu de uma desnaturação inicial durante 15 min a 95 ° C, seguido por 35 ciclos de desnaturação a 94 ° C durante 30 s, emparelhamento a 56 ° C durante 1 min, e extensão a 72 ° C durante 1 min , seguido por uma extensão final a 72 ° C durante 7 min. O protocolo para rs1050171 consistiu de uma desnaturação inicial durante 15 min a 95 ° C, seguido por 35 ciclos de desnaturação a 94 ° C durante 30 s, hibridação a 53 ° C durante 1 min, e extensão a 72 ° C durante 1 min, seguido por uma extensão final a 72 ° C durante 7 min.}

A reacção de ligação para cada sujeito foi realizada num volume final de 10 ul contendo 1 × tampão de ligase de NEB polimerase Taq de ADN, 12,5 pmol de cada mistura de sondas , 0,05 mL de ADN Taq ligase [NEB Biotecnologia (Beijing)], e 1 ml de produto multi-PCR. As sequências de sondas são mostrados na Tabela S2. No total, foram realizados 35 ciclos consistindo de 95 ° C durante 2 min, 94 ° C durante 30 s, e 60 ° C durante 2 min. Os produtos fluorescentes das reacções de detecção de ligase foram diferenciadas por 377 num sequenciador ABI (Figura S1). Para confirmar o rigor do método de genotipagem de PCR-LDR, foi efectuada sequenciação directa de ADN de produtos de PCR seleccionados aleatoriamente. A proporção das amostras de sequenciação foi de cerca de 5%. Os resultados de genotipagem PCR-LDR mostrou concordância completa com os resultados diretos de sequenciamento de DNA.

Análises Estatísticas

Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software SPSS versão 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA). Para comparar as freqüências genotípicas observadas no grupo controle com as frequências esperadas, o equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) foi testado por um χ ^{2-teste goodness-of-fit. Casos e controles foram comparados em termos de características demográficas, fatores de estilo de vida, e as frequências de alelos de cada SNP utilizando o χ 2
-teste. Para cada polimorfismo, odds ratio (OR) e intervalos de confiança de 95% (IC) foram calculados a partir de modelos de regressão logística condicional para estimar o efeito principal de cada polimorfismo com GC, enquanto o ajuste para fatores contínuos idade, sexo e estilo de vida. análises de regressão logística usando o alelo principal como referência foram empregadas para estimar OR ajustados, IC de 95%, e P valores
. No entanto, descobrimos que a variável sexo e idade não se conformava com o pressuposto da proporcionalidade. Assim, a estratificação sexo e idade de correspondência foram usados ​​para medir RUP e ICs de 95%. Para variáveis ​​de estilo de vida que mostraram relações significativas com GC em análises controlados por apenas fatores combinando, avaliamos ainda mais a sua independência em análises ajustadas para fatores de confusão potenciais adicionais (ou seja, fumar, beber, alimentos salgados, comer tempo e comer o pequeno almoço) na idade de correspondência população. E software FASE pacote versão 2.0 foi utilizado para inferir frequências de haplótipos com base nos genótipos observados EGFR. Todos P valores
eram de dois lados e um P
valor. ≪ 0,05 foi considerado estatisticamente significativo}

Resultados

Características dos sujeitos do estudo

As características desses sujeitos do estudo foram consistentes com descrito anteriormente [17], [18]. Neste trabalho, a população total com 387 casos e 392 controles e uma população em idade de correspondência com 294 casos e 294 controles foram incluídos nas análises atuais. Sexo, idade, e distribuição região geográfica dos sujeitos do estudo são apresentados na Tabela 1.

Para examinar as diferenças na incidência GC entre machos e fêmeas, as distribuições das variáveis ​​de estilo de vida selecionados foram analisados ​​com diferenças de género. Os resultados mostraram que seis fatores de estilo de vida (ou seja, tomando regularmente as refeições, a preferência por alimentos salgados, comer tempo, tabagismo, status de beber, e comer o pequeno-almoço) foram significativamente correlacionados com o risco de GC, e seus efeitos podem ser modificados por sexo e idade. Quatro fatores de estilo de vida, ou seja, preferência por alimentos salgados, comer tempo, tabagismo e estado bebendo, foram significativamente diferentes entre homens e mulheres ( P Art < 0,05) (Tabela 2). Notou-se que as percentagens dos homens que transportam hábitos alimentares pouco saudáveis, como a preferência por alimentos salgados, comer tempo curto, fumar e beber, foram significativamente maiores do que os das fêmeas ( P Art < 0,05), o que pode ser como a razão de taxas de incidência maior no sexo masculino do que aqueles em mulheres. Na população total, tendo regularmente refeições e comer o pequeno almoço diminuiu o risco de GC fêmea, enquanto beber poderia aumentar o risco de GC macho (Tabela 3). Além disso, tanto preferência por alimentos salgados e tabagismo aumenta o risco de GC masculino e feminino ( P Art < 0,05). Resultados semelhantes também foram encontrados após a idade de correspondência que tomar regularmente refeições diminuiu o risco de GC e preferência por alimentos salgados e tabagismo aumenta o risco de ambos os sexos masculino e feminino GC ( P Art < 0,05, Tabela 4). No entanto, houve duas exceções, que estava bebendo aumentou o risco de GC masculino ( P Art < 0,05), mas não GC feminina ( P Art > 0,05) talvez devido à fêmea limitada população, enquanto comer pequeno-almoço diário diminuiu o risco de GC do sexo feminino ( P Art < 0,05), mas não GC masculino ( P Art > 0,05). (Tabela 4)

Distribuição de Genotipagem e Risco de GC

no presente estudo, foi detectado apenas o alelo T do rs28384375 missense lócus. Em relação aos seis SNPs restantes, as freqüências genotípicas observadas nos controles estavam em HWE. Uma vez que nenhuma significância estatística foi perdido, apenas os resultados estatísticos ajustados foram mostrados nas tabelas. Na população total, a associação entre a distribuição dos alelos do gene EGFR, genótipos e o risco de GC foi mostrado na Tabela 5. Apenas foi observada uma pequena diferença em termos de distribuição de alelos de rs2072454 ( χ ^{2
= 3,844, P =
0,050), e regressão logística análises revelaram que a variante desse alelo pode ser associada com o risco de GC (OR ajustado = 1,23, IC 95% = 1,00-1,50). No entanto, não foram observadas diferenças significativas entre casos e controles em termos de distribuição dos alelos com as diferenças de género. O polimorfismo rs2293347 foi associado a casos de GC do sexo masculino, porque 73,0% dos casos GC realizado um alelo G comparação com 29,5% dos controles de saúde (OR ajustado = 6,45, 95% CI = 4,89-8,51, P Art < 0,001 ), mas não genótipos foram significativamente associados com o risco de GC. Na população feminina contrário o genótipo GA poderia diminuir o risco de GC feminino porque de 34,5% dos casos GC transportando um genótipo GA em comparação com 38,9% dos controles de saúde, mas não há diferenças significativas entre a distribuição das freqüências alélicas e genotípicas ( P
> 0,05). Além disso, não houve diferenças significativas foram examinados em outros quatro SNPs ( P Art > 0,05)., Ou seja, rs2227983, rs17337023, rs1050171 e rs1140475 entre casos e controles, mesmo com diferenças de género}

Em a população em idade de correspondência, a associação entre a distribuição dos alelos do gene EGFR, haplótipos e o risco de GC foi mostrada na Tabela 6. foi observada uma diferença significativa em termos de distribuição de alelos ( χ ^{2
= 4,795, P =
0,029) e distribuição dos genótipos ( χ 2
= 6,668, P = 0,036
) do rs2072454, além dos resultados em tabela 5. Além disso, análises de regressão logística revelou que a variante do alelo T rs2072454 poderia aumentar o risco de GC (OR ajustado = 0,77, IC 95% = 0,61-0,97; P
< 0,05). De acordo com a distribuição dos genótipos, também foi observada uma diferença significativa na população masculina ( χ 2
= 7,914, P = 0,019
) em vez de população feminina ( χ 2
= 0,452, P =
0,798). No entanto, não houve diferenças significativas entre casos e controles, mesmo com diferenças de género para os SNPs restantes, ou seja, rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs1050171 e rs2293347 ( P Art > 0,05).}

para excluir a influência ambiental, foi investigada a associação entre as potenciais três SNPs relacionados com o GC e o risco de GC da população em idade de correspondência de transportar estilo de vida de saúde (Tabela 7). Uma nítida diferença foi examinado em termos da distribuição dos genótipos de rs2072454 ( χ ^{2
= 6,036, P =
0,049). Especialmente, análises de regressão logística revelou que o genótipo TT aumentou significativamente o risco de GC na população com comer pequeno-almoço diário (OR ajustado = 1,92; IC95% = 1,07-3,44, P Art < 0,05).}

os exões não só codificar a sequência de aminoácidos da proteína, mas também contêm sequências que influenciam a tradução ou a degradação de ARNm [19]. Os loci foram combinados e submetidos a análise de haplótipos utilizando o programa de inferência FASE 2.0. Havia quatro haplótipos possíveis na população total e três possíveis haplótipos na população em idade de correspondência, com uma frequência de > 4% (Tabela 8, Tabela 9). Em comparação com o haplótipo GTTGCG, regressão logística análises revelaram que o haplotipo ACAGCG foi associada com uma redução significativa do risco de GC (OR = 0,67, IC 95% = 0,49-0,92, P
< 0,05 ajustados para a idade, gênero e estilo de vida fatores) na população total (Tabela 8), em vez de a população em idade de correspondência (OR = 0,83, 95% CI = 0,58-1,19, P Art > 0,05 ajustado para idade, sexo e estilo de vida fatores) (Tabela 9). Os outros haplótipos foram associados com um risco significativamente reduzido de GC (OR ajustado = 0,69, 95% CI = 0,52-0,90 para a população total; OR ajustado = 0,74, 95% CI = 0,56-0,99 para a população em idade de correspondência). Em comparação com o haplótipo ACAGCG, o ACAACG poderia diminuir o risco de GC (OR = 0,61, 95% CI = 0,40-0,94 ajustado para idade, sexo e estilo de vida) na população total, mas o P
valor fez não atingiu significância estatística pela correção de Bonferroni (Tabela 8).

Discussão

Apesar de um grande número de novos casos de GC foram vistos em todo o mundo nas últimas décadas, a carcinogênese gástrica mecanismos exatos subjacente são ainda não totalmente compreendido. Semelhante a pesquisas anteriores [20], [21], o nosso resultado mostrou que os homens em geral têm vindo a desenvolver GC duas vezes mais que as mulheres na China. Foi sugerido por Michael et al.
Que grande parte da variação global na incidência de câncer tem sido atribuída às influências ambientais, incluindo as preferências alimentares e fatores de estilo de vida pouco saudáveis ​​[22]. No presente estudo, portanto, estávamos interessados ​​para testar se alguns fatores de estilo de vida pouco saudáveis ​​pode aumentar o risco de GC, com diferenças de género na China. Seis fatores de estilo de vida, incluindo a tomar regularmente refeições, preferência por alimentos salgados, comer tempo, tabagismo, status de beber, e comer o pequeno-almoço, foram identificados a ser influenciado o risco de GC, com diferenças de género, o que era consistente com os estudos anteriores no leste da China [20], [23], [24]. Especialmente, a preferência por salgado alimentos, beber e fumar foram os fatores mais fortes e consistentes de risco para GC.

ressentem pesquisas sugerem que uma alta ingestão de sal (sódio) pode aumentar o risco de GC [21], [ ,,,0],24] - [26]. Também foi evidenciado pela nossa observação de que os pacientes do GC, na província de Jiangsu foram preferência por alimentos salgados, como carnes salgadas, legumes em conserva, e suco de vegetais em conserva, que possam estar contaminadas por compostos N-nitrosos. No entanto, os compostos N-nitrosos são mais frequentemente proposto relacionado com o aumento do risco de cancros do trato gastrointestinal superior [27]. Beber e fumar, outros dois fatores de risco dominantes para GC no mundo [28], foram também examinados neste estudo. Encontramos uma associação significativa entre o consumo eo risco GC na província de Jiangsu. Foi evidência por um estudo de laboratório que fumar pode aumentar a apoptose na mucosa gástrica do rato por um aumento na actividade de XO [29], e o álcool também pode exercer uma influência sobre a secreção de ácido, o esvaziamento gástrico, e certas doenças relacionadas com o ácido, tal como gastrite acompanhada com dano da mucosa gástrica, e a seguir reacção inflamatória, por sua vez promover a proliferação e diferenciação de células gástrica [30]. No processo, os compostos de N-nitroso e de micotoxinas alguns alimentos salgados pode induzir mutações genéticas [31], [32], assim preferência por alimentos salgados pode ser o risco inicial de GC. E evidências apontaram para uma associação com vias envolvidas nos processos de desenvolvimento [33]. moléculas-chave destas vias foram as tirosina-quinases receptoras, que se verificou ser sobre-expresso de forma aberrante activado ou numa variedade de tumores e, portanto, representam alvos promissores para intervenção terapêutica [13].

EGFR era um dos principais moléculas , e muitas linhas de evidência sugerem que a GC altamente invasiva está associada com a activação aberrante ou sobreactivação de EGFR, devido à amplificação do gene ou alterações estruturais [13]. Muito recentemente, um estudo de 61 casos e 20 controles na província de Henan, localizada no meio China de caso-controle, mostrou que o EGFR rs28384375 polimorfismo C /T pode promover a ocorrência e desenvolvimento de GC [34]. Além disso, outro estudo de 138 casos e 170 controles na província de Jiangxi, localizada no sudeste da China de caso-controle, revelou que o EGFR rs763317 G /A polimorfismo pode associar-se com um risco aumentado de GC [35].

EGFR é um factor de crescimento de tirosina-quinase receptora que pertence à superfamília de receptores de tirosina-quinase, cujos membros são caracterizados por um domínio extracelular (em que os ligandos de ligação de ligandos tem lugar), um domínio transmembranar lipofílico curta, e um domínio intracelular que abriga a quinase de tirosina actividade [36]. EGFR podem ser activados por ligandos de ligação, tais como EGF e TGF-α, e que desempenha um papel central no desenvolvimento, diferenciação e proliferação. A activação do EGFR podem contribuir para a transformação de fenótipos celulares e proporcionar células tumorais com o crescimento e sobrevivência vantagens substanciais [37]. Muitos tumores humanos apresentam superexpressão de EGFR, que está correlacionada com um estágio de tumor avançado ou um mau resultado clínico, tais como a não-pequenas células de pulmão [38], o cancro colorectal [39], o cancro da mama [40], câncer de cabeça e pescoço [ ,,,0],41], o cancro da bexiga [42], e GC [43].

Não existe actualmente um interesse crescente em mutações de EGFR em SNP, dado que eles poderiam afectar a eficácia do tratamento de EGFR inibidor de tirosina cinase (TKI) em várias cancros [44], cancro colorrectal [39], cancro do pulmão de não pequenas células [45], GC [46] - [49]. É bem conhecido que os exões não só codificar a sequência de aminoácidos da proteína, mas também contêm sequências que influenciam a tradução ou a degradação de ARNm [19]. Assim, os SNPs de EGFR exão poderia influenciar a expressão do gene de EGFR e /ou actividade da proteína e, assim, alterar a afinidade para o EGFR de não apenas os seus ligandos, mas também para os agentes anticancerígenos que têm como alvo esta proteína. Com efeito, Puyo et ai., Achou que as mutações nos exões 18-21 de EGFR aumentam a actividade de TKI, enquanto a deleção dos exões 2-7 está associado com o glioblastoma oncogénese [49]. Além disso, dois estudos clínicos mostraram que os SNPs em exões EGFR 18, 19, 21 e 25 afectam a eficácia clínica de tratamento com gefitinib e podem ser potenciais biomarcadores para a previsão da evolução clínica de pacientes tratados com gefitinib com cancro do pulmão de não pequenas células avançado (NSCLC) [50], [51].

no presente estudo, os seis exons SNPs em EGFR foram ligeiramente associado com o risco de GC tanto na população total e da população em idade de correspondência, mesmo com sexo diferenças. Notou-se que os rs2072454 SNP foi significativamente associada com o risco de GC. Especialmente, o alelo T variante rs2072454 e genótipo TT foram associadas com um risco aumentado de GC. No entanto, os rs2227983, rs17337023, rs1050171 e rs1140475 SNPs não se relacionam com o risco GC. No que diz respeito ao locus de rs28384375 missense, apenas o alelo T foi detectado em casos e controlos. Muitos relatórios sugeriram que vários EGFR SNPs, incluindo rs2227983 (também designado como Arg521Lys ou R497K) [39], [52], [53], rs1050171 (também designado como Q787Q) [54], [55] e rs2293347 (C2982T) [ ,,,0],56], tinham maior probabilidade de afetar o comportamento biológico dos tumores (como o crescimento do tumor, invasão, metástase, e progressão) do que para definir a susceptibilidade ao desenvolvimento de câncer. Desde EGFR, um mediador chave da angiogênese, pode regular seus genes-alvo, tais como VEGF, que podem afetar diretamente o comportamento biológico do tumor. Estes resultados também explicam por que EGFR SNPs podem servir como determinantes-chave de uma resposta à quimioterapia baseada em TKI EGFR [11]. Portanto, essas mutações genéticas podem conferir a complexidade e constrangimento para o tratamento GC e sobrevivência [57].

Quando Puyo et al
. [49] analisaram a associação entre os polimorfismos funcionais EGFR específica e actividade do medicamento anticancerígeno em 60 linhas de células tumorais humanas estabelecidas pelo Instituto Nacional do Câncer, a frequência da rs28384375 SNP nonsynonymous (também designado como Val592Ala) foi de 0,5, enquanto a freqüência de heterozigotos da -216G > t SNP (também designado como rs287129) foi 0,346. As linhas de células que eram heterozigóticos e homozigóticos para a variante -216 G > T SNP mostraram significativamente maior expressão do gene de EGFR do que as linhas de tipo selvagem homozigóticos. Além disso, em comparação com linhas celulares sem um alelo variante, as linhas de células com alelos, pelo menos, uma variante de t na -216 G > T SNP foram mais sensíveis ao erlotinib e menos sensível à geldanamicina, topoisomerase I e os inibidores II, e agentes alquilantes. Curiosamente, nossos resultados mostraram que o haplótipo GTTGCG foi mais prevalente nos casos de GC do que nos controles sem câncer, e que os haplótipos ACAGCG foram associados a uma redução significativa do risco de GC (OR ajustado = 0,67, 95% CI = 0,49-0,92 para ACAGCG, ajustado OR = 0,69, 95% CI = 0,52-0,90 para os outros) na população total (Tabela 8). No entanto, na população em idade de correspondência, nenhuma associação significativa foi analisada entre ACAGCA haplótipo e risco de GC (OR ajustado = 0,83, IC 95% = 0,58-1,19) (Tabela 9). Assim, os alelos T de rs2072454 e rs17337023, especialmente a primeira, pode ser associada com o risco de GC. Portanto, a análise combinada dos seis SNPs, especialmente os alelos T de rs2072454 e rs17337023, pode ser útil para predizer o risco de GC

Várias limitações do presente estudo devem ser abordadas:. 1) o seu tamanho da amostra pode não ter sido grande o suficiente para detectar SNPs com baixa frequência variante, como rs28384375; 2) os polimorfismos que foram investigados neste estudo foram selecionados com base em seus efeitos sobre a função EGFR e não podem dar uma visão abrangente da variabilidade genética em exons EGFR; 3) informações detalhadas sobre os casos de GC não foi coletado, incluindo a sobrevida do paciente, se os tumores eram do tipo intestinal ou difuso, se houve metástase, e qual o efeito da terapia medicamentosa foi.

Em conclusão, a presente estudo sugeriu que as diferenças de estilo de vida entre machos e fêmeas poderia ser como a razão de taxas de incidência maior no sexo masculino do que aqueles em mulheres. Embora apenas um SNP (rs2072454) foi significativamente associado com um risco aumentado de GC, análise combinada outro exão seis EGFR SNPs em conjunto, podem ser úteis para prever o risco de GC. Mais estudos são necessários para estabelecer esses achados e abordar os mecanismos subjacentes.

Informações de Apoio
Figura S1.
Os produtos fluorescentes de LDR foram diferenciados por ABI sequenciador 377 para os sete SNPs em exons EGFR. No total, mais de 90% dos produtos foram diferenciadas com sucesso pelo sequenciador ABI 377.
doi: 10.1371 /journal.pone.0059254.s001
(TIF)
Tabela S1.
As sequências de iniciadores de PCR para os sete loci no gene EGFR. Os iniciadores foram desenhados por 6 software Primer Premier e sintetizados pela Shanghai Sangon Tecnologia Engenharia Biológica e Serviços
doi:. 10.1371 /journal.pone.0059254.s002
(DOC)
Tabela S2. sequências
sonda do sete SNPs no gene EGFR. Os iniciadores foram sintetizados por Engineering Technology Shanghai Sangon Biológica e Serviços
doi:. 10.1371 /journal.pone.0059254.s003
(DOC)

Reconhecimentos

Nós reconhecemos Mestre Jingye Wang e Haixia Xu para a assistência com o isolamento de ADN.

• PLOS ONE: um polimorfismo (rs2295080) em mTOR Promotor Região e sua associação com câncer gástrico em um chinês Population
• PLOS ONE: valor prognóstico do cancro do Stem Cell marcador CD133 expressão no câncer gástrico: A Systematic Review