Ploche ONE: In vitro charakterizácia Rapid cytotoxicity protinádorové peptidov HPRP-A2 membránou ničenia a vnútrobunkové mechanizmu proti Žalúdočné Cancer Cell Lines

abstraktné

V tejto štúdii HPRP-A2, syntetického 15-mer katiónové peptidy s všetkých D-aminokyselín, účinne inhibuje prežitie bunkových línií žalúdočných v spôsobom závislým od dávky. Žalúdočné nádorové bunky zabíjanie HPRP-A2 zahŕňa rýchly kolaps membránové integrity a intracelulárnych dráh. Propidium jodidu (PI) a laktátdehydrogenázy (LDH), testy ukázali, že jedna hodina liečba HPRP-A2 vedie k priepustnosti membrány zmeny BGC-823 bunkách spôsobom závislým od dávky. Okrem toho, HPRP-A2 indukovanú apoptózu v BGC-823 buniek zahŕňa výrazné zvýšenie tvorby reaktívnych foriem kyslíka (ROS), kaspázy-3, -8 a -9 aktivácia, zníženie potenciálu mitochondriálnej membrány (MMP), a bunkového cyklu zatknutie v G1 fáze. Okrem svojej vlastnej cytotoxicity, HPRP-A2 silne sa spojil s doxorubicínom (DOX) zvýšiť účinnosť zabíjať nádorové bunky žalúdočné aj n vitro
. Domnievame sa, že HPRP-A2 s všetkých D-aminokyselín môže byť silným kandidátom protinádorových liečiv, a to najmä v kombinovanej liečbe

Citácia :. Zhao J, Hao X, Liu D, Huang Y, Chen Y (2015 ) In vitro
Charakteristika Rapid cytotoxicity protinádorové peptidov HPRP-A2 membránou ničenia a vnútrobunkové mechanizmu proti žalúdočnej nádorových bunkových línií. PLoS ONE 10 (9): e0139578. doi: 10,1371 /journal.pone.0139578

Editor: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Spojené štáty

prijatá: 02.07.2015; Prijaté: 15.září 2015; Uverejnené: 30. septembra 2015

Copyright: © 2015 Zhao et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje sú v novinách

Financovanie :. Táto štúdia bola podporovaná národná prírodná Science Foundation Číny (No. 81373445, YXC a číslo 21442001, YBH) a Natural Science Foundation of provincii Jilin (č 20150101189JC , YC a č 20140101042JC, YBH). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

v priebehu posledných desaťročí, aj keď bolo dosiahnuté prelomu vo vývoji terapií rakoviny, odolnosť a nešpecifické toxicity konvenčné lieky sú stále problémy hrdlo fľaše pre potenciálnych klinickej praxe [1-3]. Preto je naliehavo potrebné vyvinúť nové lieky s rôznymi mechanizmami účinku, ktorý môže prekonať nedostatky mnohých dostupných liekov.

V súčasnej dobe, potenciálni aplikácie protinádorových peptidov (PKZS) ako terapeutických činidiel pre liečenie rakoviny progresie priťahujú väčšiu pozornosť než konvenčné chemoterapiou hlavne preto, že z nasledujúcich vlastností: (1) vysokej špecifickosti. Kladne nabité peptidy selektívne cieliť na rakovinové bunky, ktoré nesú záporné náboje a majú rôzne membránové komponenty od normálnych buniek [4, 5], (2) nového spôsobu účinku. To by mohlo zabrániť vytvorili mechanizmy mnohopočetné-odpor [5-7]; (3) synergický protinádorový účinok s chemoterapeutikami. Bolo oznámené, že určité ACP môže produkovať synergický protinádorový účinok pri použití v kombinácii s rôznymi konvenčnými protinádorových liečiv [8-10].

všeobecný mechanizmus smrti peptidu indukovanej bunkovej cytoplazme je rozrušenie membrán cez micelizace alebo tvorbu pórov , aj keď niektoré PKZS sú hlásené pre spúšťanie apoptózy dráhou receptora smrti a /alebo mitochondriálnej dráhy [8, 11]. Okrem toho, je tvorba pórov v bunkovej membráne a zmenou priepustnosti membrány môže poskytnúť lepšie kanál pre vstup ďalších protinádorových liečiv do buniek a zvýšiť ich protirakovinové aktivity [8, 12].

Naše predchádzajúce štúdie bolo preukázané, že HPRP-A2 môžu indukovať bunkovú smrť a súčasne zvyšuje DOX /epirubicín (EPI) indukovanej apoptózy v Hela a HepG2 bunkové línie [12]. Okrem toho, vzhľadom k zloženiu D-aminokyseliny, HPRP-A2 je odolný voči proteolytickému štiepeniu a zachováva zodpovedajúce protirakovinové aktivity na svoje enantioméry L [6, 12]. na základe doterajších štúdií, naším cieľom je dosiahnuť dva ciele v tejto štúdii: na definovanie základnej protinádorový mechanizmus HPRP-A2 a skúmať synergický protinádorový účinok na BGC-823 a SGC-7901 buniek v kombinácii HPRP-A2 s DOX.

materiály a metódy

bunkové línie a bunková kultúra

rakovina žalúdka u bunkové línie BGC-823 a SGC-7901 boli získané z American Type Culture Collection, ktorý overuje bunku linky podľa testovanie repeat DNA krátke tandemové, boli použité počas 6 mesiacov po resuscitácii a pestované v DMEM s fetálnym bovinným sérom (FBS, 10% v /v), penicilínom (100 U /ml) a streptomycínom (100 U /ml), vo vlhkom prostredí pri 37 ° C s 5% CO _2.

syntéza peptidu a purifikácia

peptid bol syntetizovaný syntézou peptidov na pevnej fáze za použitia Fmoc (9-fluorenyl -methoxycar-karbonyl) chémie, ako bolo opísané skôr [13]. Ďalšie charakterizácie bol zistený hmotnostný spektrometrie a aminokyselinovú analýzou. DOX HCI bol zakúpený od Meilun biológie Technology Co., Ltd. (Dalian, Čína).

životaschopnosť buniek testy

BGC-823 a SGC-7901 bunky (5 x 10 ^{3) boli nanesené v triplikátech na 96-jamkové mikrotitračné doštičky. Kompletné médium bolo nahradené po 24 hodinách sa 100 ul čerstvého média obsahujúceho rôzne koncentrácie liečiva. Po ďalších 24 hodinách boli bunky inkubované s 3- (4,5-dimetyl-2-thiazolyl) -2,5-difenyl-2H-tetrazoliumbromid (MTT) pri teplote 37 ° C počas 4 hodín. Potom bol pridaný dimetylsulfoxid (DMSO), aby sa vytvoril roztok formazánu kryštály a absorbancia pri 492 nm bola meraná pomocou ELISA readeru (GF-M3000; Gaomi CaiHong analytické nástroje Co., Shandong, Čína). Jin vzorec bol použitý pre ďalšiu kvantifikáciu synergický účinok kombinovanej liečby HPRP-A2 a DOX. Vzorec je nasledujúci: Q = Ea + b /(Ea + Eb-Ea Eb ×), kde Q je kombinácia index; Ea + b predstavuje proliferácia buniek inhibičnej rýchlosť kombinovaného lieky; Ea a Eb sú známky proliferácie buniek inhibičnej rýchlosti každého lieku. Po výpočte :. Q < 0,85, Q > 1,15 a 0,85 < Q < 1,15 indikujú antagonizmus, súčinnosť a aditívne efekt, respektíve [14]
analýza}

Hemolysis aktivita Test

Hemolýza bola aktivita vykonané, ako bolo opísané skôr [13]. Pre získanie červené krvinky, čerstvej ľudskej krvi stabilizovaný EDTAK sa odstreďuje pri 1000 otáčkach za minútu po dobu 5 minút, dvakrát sa premyjú PBS a riedi na konečnú koncentráciu 2% v PBS. 70 ul 2% ľudských erytrocytov bolo pridané k okrúhlym dnom doštičky s 96 jamkami, a následne 70 ul rôznych koncentrácií HPRP-A2. Po inkubácii pri teplote 37 ° C počas 1 h sa doštička potom bola centrifugována pri 3000 rpm po dobu 10 minút a 90 ul supernatantu sa prenesie do plochým dnom 96-jamkové doštičky. Uvoľňovanie hemoglobínu bola stanovená meraním absorbancie supernatantu pri 540 nm. Erytrocytov v PBS a destilovanou vodou (dH _{2O) boli použité ako negatívne a pozitívne kontroly, v danom poradí. Hemolytickej aktivity bola vypočítaná ako percento z experimentálnej skupiny a pozitívne kontroly, po odpočítaní negatívne kontroly, resp. Dáta sú priemer ± SD z troch nezávislých experimentov.}

PI test

BGC-823 bunky (1 x 106 buniek /jamku) boli nasadené na šiestich jamkami. Po inkubácii s HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) po dobu 1 hodiny, boli bunky zhromaždené a potom sa spracuje s 5 ug /ml PI pri teplote 4 ° C počas 10 minút v tme. Bunky boli premyté PBS, trikrát a potom sa detekuje intenzitu fluorescencie PI pomocou prietokovej cytometrie (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA).

uvoľňovanie LDH

uvoľnenie LDH aktivita bola meraná pomocou LDH testu súpravou (Jiancheng bioinžinierstva, Ltd., Čína) podľa inštrukcií výrobcu. BGC-823 bunky boli nasadené v množstve 5 x 10 ^{3 buniek /jamku v 96-jamkové doske. Po inkubácii s HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) po dobu 1 hodiny, uvoľňovanie LDH v supernatante bola meraná čítačkou mikrodoštičiek (GF-M3000, Gaomi CaiHong Analytical Instruments Co., Ltd. Shandong, Čína) na 450 nm. Bunky bez ošetrenia alebo lyžovanie Triton X-100 bola použitá ako negatívne a pozitívne kontroly, v danom poradí. Všetky experimenty boli vykonávané v triplikátech. LDH aktivita bola vypočítaná ako percento z experimentálnej skupiny a pozitívne kontroly, po odpočítaní negatívne kontroly v danom poradí.}

ROS test

ROS Testovacia súprava (BestBio, Co. Shanghai, Čína) bol použitý pre detekovať tvorbu ROS. Bunky (1 x 106) boli ošetrené HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) po dobu 1 hodiny. Nasledujúce postupy sa vykonávali podľa protokolu výrobcu. V stručnosti, bunky štiepený trypsínom boli centrifugovány pri 1500 otáčkach za minútu po dobu 3 minút, trikrát premyté PBS a potom sa suspenduje v 500 ul PBS. Po inkubácii sa 2 ', 7'-dichlorofluorescin diacetát (DCFH-DA), fluorescenčné sondy po dobu 20 min pri 37 ° C, bunky boli premyté PBS, trikrát a detekované na zelenej intenzity fluorescencie (v Geomean) pomocou prietokovej cytometrie. Zelená intenzita fluorescencie v pozitívnej korelácii s úrovňou ROS.

meraní MMP

MMP bola stanovená potenciálu mitochondriálnej membrány testovacie súprave s 5,5 ', 6,6'-tetrachlór -1,1 ', 3,3'-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine jodid (JC-1), ktorá je sondou mitochondriálnej aktivity (BestBio, Co., Shanghai, Čína). JC-1 sa vždy používa na detekciu mitochondriálnej depolarizáciu vyskytujúce sa v raných fázach apoptózy. Keď bunky s vysokým MMP, JC-1 zhromaždili v mitochondriálnej matrix, tvoriace J-agregátov a produkovať červenú fluorescenciu. Naopak, bunky obsahujúce JC-1 monomér monomér monomermonomer majú nízku MMP a ukázať zelenú fluorescenciu. Mitochondriálna depolarizácie sa stanoví poklesom červené (590 nm, FL-2) kanálu /zelené pomer intenzity fluorescencie (530 nm, FL-1 kanál). Stručne povedané, po ošetrení HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) po dobu 1 hodiny, BGC-823 bunky boli zhromaždené a inkubované s 0,5 ml JC-1 pracovný riešenie pre 20 minút pri teplote 37 ° C, a potom dvakrát premyté PBS, suspendované v PBS a analyzované prietokovou cytometriou (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA).

Caspase aktivita test

Bunky boli ošetrené HPRP-A2 (10, 15 uM) po dobu 24 hodín a potom úrovne aktivity kaspázy boli merané za použitia odpovedajúcich kaspázy činnosti detekčnej súpravy (BestBio, Co., Shanghai, Čína), podľa inštrukcií výrobcu. Priemerné údaje sú uvedené ako priemer ± SD aspoň troch nezávislých experimentov.

bunkového cyklu analýza

BGC-823 bunky (1 x 10 ^{6) boli nasadené na 6-jamkových dosky pre 24 hodín. Po indukcii HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) po dobu 24 hodín, distribúcie bunkového cyklu bolo stanovené pomocou FACScan cytometrom a Cell Quest softvéru (FACS Calibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA). Všetky experimenty boli vykonávané v troch vyhotoveniach.}

Štatistická analýza

Dáta sú prezentované ako priemer ± SD z troch nezávislých stanovení. Štatistická významnosť rozdielov medzi skupinami sa analyzovali pomocou t-test
, s význam prijatý na P Hotel < 0,005 (*) a P Hotel < 0,001 (**).

Výsledky

peptidu a cytotoxické

Ako je znázornené na obrázku 1, peptid HPRP-A2 je 15-zvyšok α-helikální amphipathic membrána aktívny peptid zložený zo všetkých D-aminokyselín. Porovnanie selektívne toxicitu HPRP-A2 smerom buniek karcinómu žalúdka a normálnych buniek (ľudských červených krviniek), možno ľahko zistiť, že IC _{50 (koncentrácia liečiva, pri ktorej bola životaschopnosť buniek znížená o 50% v porovnaní s neliečenými bunky), hodnoty sú oveľa nižšie, než je minimálna hemolytickú koncentrácia (koncentrácia liečiva, ktoré malo za následok 20% buniek hemolýzy) z HPRP-A2. Tieto výsledky ukazujú, že HPRP-A2 môže selektívne zabiť žalúdočné rakovinové bunky a ušetriť normálne bunky (obr 2 a 3). Podobné protirakovinové aktivity týchto dvoch bunkových línií (BGC-823 a SGC-7901) je uvedené, že existuje široké spektrum účinku v protinádorové pôsobenie HPRP-A2. Vzhľadom k svojej membráne aktívne charakteristikou, HPRP-A2 ukazuje protinádorovú terapeutický potenciál, pretože je to viac selektívne toxický účinok proti nádorovým bunkám, ako normálne bunky.}

HPRP-A2 indukuje zvýšenie priepustnosti membrány

za účelom overenia, zmenu priepustnosti membrány po inkubácii s HPRP-A2, bunkovým pohltením PI a extracelulárnej uvoľňovanie LDH bola skúmaná s prietokovou cytometriou a mikrodoštičiek smerom BGC-823 buniek. Ako je znázornené na obrázku 4, je prietokové cystometrické grafy PI pohybovať postupne smerom k vysokej intenzite fluorescencie v závislosti od koncentrácie, a zvýšené uvoľňovanie LDH bola tiež pozorovaná v bunkách inkubovaných s HPRP-A2. To znamená, že, HPRP-A2 by mohlo dôjsť k poškodeniu bunkovej membrány a vedie k zvýšeniu permeability bunkovej membrány.

HPRP-A2 spôsobené škody mitochondriálnej funkcie

Intracelulárne reakčnej kyslíkové druhy (ROS) prepustenie a mitochondriálnej membránový potenciál (MMP) boli detekované s FACS, aby odrážala funkciu mitochondrií BGC-823 buniek in vitro
. Ako je znázornené na obr 5A sa prietokovou cytometriou histogram buniek inkubovaných s vyššou koncentráciou HPRP-A2 odhalilo vyššiu intenzitu fluorescencie po inkubácii po dobu 1 hodiny. Zodpovedajúce prietokovou cytometriou kvantitatívne porovnanie intenzity fluorescencie v Geomean v týchto rôznych koncentráciách vykazovali podobný trend, a to, že zvýšené uvoľňovanie ROS v BGC-823 buniek v prítomnosti HPRP-A2 bola závislá na koncentrácii. Podobne závislá na koncentrácii meniace sa trend bol tiež pozorovaný na obr 5B, pomer FL2-H /FL1-H výrazne znížil, čo ukazuje na depolarizáciu MMP.

aktivácia kaspázy a analýzy bunkového cyklu

aktivácia kaspázy-3, -8 a -9 v HPRP-A2-indukovaných buniek bola meraná s použitím pomocou ELISA readeru pri vlnovej dĺžke 405 nm. Ako je znázornené na obr 5C, kaspázy-3, -8 a -9 boli všetky zvyšuje po ošetrení HPRP-A2 po dobu 24 hodín v BGC-823 buniek, čo naznačuje, že indukcia apoptózy u HPRP-A2 môžu byť závislé na kaspázy , Ako je znázornené na obr 6, BGC-823 bunky ošetrené rôznymi koncentráciami HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) po dobu 24 h za následok zvýšenie sub-G1 zástave a vo fáze G1. Tieto zistenia tiež posilnilo zvýšenú aktivitu kaspázy-3 po ošetrení HPRP-A2.

HPRP-A2-indukovanej zvýšenie cytotoxicity DOX

BGC-823 a SGC-7901 bunky boli vybrané študovať synergický protinádorový účinok HPRP-A2 a chemoterapeutického liečiva DOX. Bunky boli ošetrené HPRP-A2 (6 um) a /alebo Dox (1,6 ug /ml) počas 4, 24 a 48 hodín. MTT testy boli použité pre vyhodnotenie kombinačných protirakovinové účinky na bunky. Koncentrácia liekov vybrané v rámci tejto štúdie boli založené na IC _{50 hodnôt samotnej každého lieku. Nebolo jasné, cytotoxicity alebo rast redukcie, kedy bol každý liek používaný samostatne. Naproti tomu, ak je použitý v peptidových /lieková kombinácia (HPRP-A2 /DOX) v rovnakých dávkach používa samostatne, kombinácia vykazovala významnú cytotoxicitu (obrázok 7). Je tiež zrejmé, že protinádorová aktivita HPRP-A2 nebola príliš ovplyvnené inkubačnej doby; Na rozdiel od toho sa zvýšením inkubačnej doby až 48 hodín, DOX vykazuje oveľa väčší protinádorový účinok, ako 4 hodiny, s uvedením dramaticky odlišné mechanizmy pôsobenia medzi AKT a chemoterapeutický liek. Podľa Jin formula, všetky (kombinácia index) hodnoty Q boli väčšie ako 1,15, čo znamená, že tam boli významné synergické efekty medzi alfa-helikální peptid HPRP-A2 a konvenčné protinádorové liečivo DOX v BGC-823 a SGC-7901 buniek .}

Diskusia

proti rakovine peptidy (ACP) v poslednom čase získali veľkej pozornosti ako sľubné chemoterapeutikami, ktoré sa vyhýbajú nevýhody súčasných liekov. Mnoho štúdií bolo overené, že niektoré syntetické a prírodné katiónové peptidy majú rýchle a široké spektrum protinádorovej aktivity proti nádorovým bunkám, skôr ako normálne bunky, ako sú ľudské červené krvinky [4, 15]. Okrem toho ACP boli tiež overené, že majú schopnosť prekonať mechanizmus mnohopočetné-odpor a synergické účinky pri kombinovanej liečbe [11].

HPRP-A2 má rýchle a široké spektrum protinádorovej aktivity však niektoré rozdiely ďalej sa vyskytujú v citlivosti HPRP-A2 na rôzne bunkové línie. Na inom IC _{50 hodnôt pre HPRP-A2 až BGC-823 (8,65 ± 0,38 um), SGC-7901 (10,42 ± 0,30 um), PC3 (21,38 ± 0,56 um) a B16 (19,16 ± 0,38 uM na báze ), rozhodli sme BGC-823 a SGC-7901 bunky sú výskumné ciele. Okrem toho, že protirakovinové aktivity HPRP-A2 do iných nádorových bunkových línií, ako je HeLa a HepG2 boli publikované v našej predchádzajúcej práci [12]. Oba BGC-823 a SGC-7901 bunky patrí bunkové línie žalúdka, a tak sme vybrali BGC-823 ako príklad pre vyšetrovanie protirakovinové mechanizmus HPRP-A2 in vitro
.}

v tejto štúdii sme ukázali, že HPRP-A2 je amfipatické α-helikální peptid s významnou protinádorovou aktivitu na BGC-823 a SGC-7901 bunkových línií. Naše štúdie ukázali, že HPRP-A2 vykazovali toxicitu rakovina selektívne, najmä preto, že rakovinové bunky sú zložené z viacerých aniónových fosfolipidov a obsahujú O-glykozylovaný mucín, ktorý zvyšuje negatívny náboj na povrchu nádorových buniek [16, 17]. Okrem toho, ďalšie mikroklky na rakovinových bunkách môže zvýšiť koncentráciu väzbového peptidu rozšírením povrch membrány a tým ukazujú silnejšie cytotoxicitu proti rakovine bunkových membrán [11, 18].

ACP sú schopné narušiť bunkovú membránu, čo môže spôsobovať zmeny permeability bunkovej membrány. V tejto štúdii je zmena BGC-823 bunkovej membrány bola pozorovaná detekciou PI-permeabilizaci a uvoľnenie LDH. Postupného zvyšovania PI permeabilizací a uvoľnenie LDH sú v koncentračných závislé na správanie po liečbe HPRP-A2. Okrem toho, HPRP-A2-indukovaná bunková smrť je spojená so vznikom reaktívnych kyslíkových radikálov, ako depolarizácie MMP, aktivácia kaspázy a činností bloku v G1 fáze bunkového cyklu.

Okrem cytotoxicita HPRP-A2, sme dokázali, že by to mohlo zvýšiť účinnosť DOX proti BGC-823 a SGC-7901 buniek, čo je v súlade s našou predchádzajúcou štúdiu. V našej predchádzajúcej štúdii sme skúmali kombinačnej protinádorovej terapie pomocou α-helikální peptidy HPRP-A1 a HPRP-A2 s chemickým drogovej DOX a EPI v bunkových líniách Hela a HepG2 [12]. Synergia je znázornené dovoľuje použitie relatívne nízkych koncentráciách peptidov a liečiv dosiahnuť významné protirakovinové účinky in vitro stroje a in vivo
. Toto zníženie dávky liekov minimalizuje vedľajšie účinky na normálne bunky a umožňuje efektívne apoptózu sprostredkovanú protinádorový účinok. Naša súčasná štúdia má vplyv v tejto HPRP-A2 môže byť sľubným protirakovinovým terapeutickým činidlom s vysokou selektivitou a protirakovinovým silný synergický účinok pri kombinovanej terapii. Naše štúdie ukazujú predovšetkým mechanizmus HPRP-A2-indukovanú bunkovú smrť, a môžu byť užitočné pri návrhu chemoterapeutík proti bunkových línií žalúdka.

Závery

HPRP-A2 má silnú protirakovinovú aktivitu BGC- 823 a SGC-7901 bunkové línie a nízku toxicitu voči ľudskej červenej krvinky. HPRP-A2 smrť indukovaná karcinóm ako prostredníctvom priameho membránovo deštruktívny účinok a intracelulárnymi mechanizmy, vrátane dramatické zvýšenie kaspázy-3, -8 a -9 aktivácia, zníženie potenciálu mitochondriálnej membrány (MMP), a generovanie a ROS bunkového cyklu v G1. Okrem toho, HPRP-A2 silne sa spojil s DOX na zvýšenie účinnosti zabíjať nádorové bunky žalúdočné in vitro
. Naše výsledky podčiarkujú široký protinádorový potenciál HPRP-A2 a objasnenie jeho mechanizmus účinku. Sme presvedčení, že dotovať PKZS s účinnejších a tumor zacielenie vlastností otvoria nové spôsoby boja s rakovinou úspešne.

• Ploche ONE: Intra-nádorové Rôznorodosť HER2, FGFR2, cMet a bankomatu v rakoviny žalúdka: Optimalizácia individuálnejšie starostlivosť prostredníctvom inovatívnych patologické a štatistic…
• Ploche ONE: Kvantifikácia obsah jódu z Perigastric tukového tkaniva duálny energie ČT: novú metódu pre predoperačné diagnostike T4-Stage rakoviny žalúdka