Plos ONE: makrofagov infiltracijo povzroča Rak želodca invazivnosti Aktiviranje β-Catenin Peš-pot

Povzetek

Ozadje

Kljub temu, da je aktivirani makrofagi delujejo na vnetne mikrookolja za spodbujanje želodčne tumorigeneze preko β-catenin signalizacijo, učinki β-catenin signalizacijo na rakave celice metastaz želodca in odnos teh celic z okoliškimi tumorskih povezano makrofagi niso neposredno preučevali.

Metode

Imunohistokemijsko je bila uporabljena za analizo 103 bolnikov. Invazija test je bil uporabljen za ovrednotenje razmerja med makrofagov in želodčnih rakavih celic. beta-catenin dobiček-of-funkcijo in izguba-of-funkcijo pristopov bile izvedene. Za oceno mehanizma urejanja β-catenin v želodčnih rakave celice, Western blot in obratno prepisovanje verižni reakciji s polimerazo smo uporabili.

Rezultati

Povečana gostota makrofagov je bila povezana s fazi in slabe preživetje . Želodčne rakave celične linije co-kultivirani z makrofagov kondicioniranega medija so pokazale povečano jedrsko kopičenje P-catenin in povečala preplavljajo sposobnosti. AKT vendar ne ERK reguliran β-catenin translokacijo. MMP7 in CD44, tako β-catenin nižji stopnji geni, so bili vključeni v-makrofagov aktivira želodčni rak celic invazijo.

Zaključek (i)

S kolektivno, klinični podatki kažejo, da makrofagov infiltracija, povezana z povečano stopnjo in slaba prognoza za bolnike želodca z rakom, ki so doživeli radikalno resekcijo. Makrofagi lahko povzroči invazivnosti z aktiviranjem β-catenin pot na

Navedba sklicevanja. Wu MH, Lee VC, Hua KT, Kuo ML, Lin MT (2015) infiltracija z makrofagi povzroča Rak želodca invazivnosti Aktiviranje beta-Catenin Peš-pot . PLoS ONE 10 (7): e0134122. doi: 10,1371 /journal.pone.0134122

Urednik: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanità, ITALIJA

Prejeto: September 16, 2014; Sprejeto: 6 julij 2015; Objavljeno: 30. julij 2015

Copyright: © 2015 Wu et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Razpoložljivost podatkov: Vsi pomembni podatki so v papir in njene dodatne informacije datotek

Financiranje:.. To delo je podprta s sredstvi iz National Science sveta, Tajvan (NSC 98-2314-B-002-055-MY2)

konkurenčni interesi: avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca (GC) je eden izmed najbolj pogostih rakov po svetu in skoraj dve tretjini teh bolnikov bo umrl od. njihova bolezen. [1] GC je tesno povezan z Helicobacter pylori
okužba, ki vodi do kroničnega vnetja. [2] Ta vnetna mikrookolje je značilna prisotnost gostiteljskih levkocitov s pretežno makrofagov v obeh nosilno strome in tumor tkiva. [3] Raziskave kažejo, da so povezane s tumorjem vnetni odziv, tako na lokalni in sistemski, pomembni neodvisni dejavniki pri napredovanja tumorja in metastaz. [4, 5] Vendar pa so povezave med temi molekularnih mediatorjev in kroničnega vnetja ne razumemo v celoti .

Aktivacija NT poti je pomemben korak v rakotvornost. Mutacije vzdolž NT-β-catenin steze pojavijo pri približno 90% debelega črevesa in hepatocelularnih karcinomov, in pri približno 30% od GK. [6, 7] Poleg tega, dejavnik tumorske nekroze-α (TNF-α) pridobljen iz aktiviranih makrofagov spodbuja β-catenin dejavnost GC celic. [8, 9] Vendar pa kljub dokazom, da aktivirani makrofagi delujejo na vnetne mikrookolja za spodbujanje želodčne tumorigeneze preko β-catenin signalizacijo, učinkih aktivnega β-catenin signalizacijo na GC celice metastaz in razmerja teh celic z okoliškimi tumorskih povezana makrofagov (TAMs) niso bile neposredno proučevali.

na podlagi zgoraj navedenih ugotovitev, smo predpostavili, da lahko β-catenin pot sodelujejo tudi pri urejanju-makrofagov povzroča GC metastaz. V tej raziskavi smo najprej preučil gostoto infiltrirana makrofagov in izražanje beta catenin v želodcu karcinomom tkivih uporabo imunohistokemično (IHC). Dokazali so se clinicopathological značilnosti želodčnega raka in prognozo. Poleg tega smo ugotovili, da makrofagi povzročijo jedrsko translokacijo P-catenin in povečanje invazijo sposobnost GC celic. Naše ugotovitve kažejo, in še naprej podpirati pomembno povezavo med TAM in njenega nadaljnjega signalne posrednika, P-catenin, pri urejanju GC metastaze.

Material in metode

Bolniki in Osebki

študija je odobril Institutional Review Board in Human Odbor za etiko na National Taiwan University Hospital. Pisno soglasje za uporabo vzorcev za raziskovalne namene smo dobili od vseh bolnikov pred operacijo. Podatki o bolniku so anonimni in anonimno pred analizo.

Študija naknadno vključenih 205 bolnikov z ugotovljenimi GC, ki so prejeli radikalno kirurško resekcijo na Oddelku za splošne kirurgije, National Taiwan University od januarja 1998 do januarja 2002. Od tega je bilo 102 bolnikov, ki niso poznale nadaljnje podatke ali ki so umrli od perioperativnem zapletov izključena, ostali 103 bolnikov, so bili vključeni v analizo. Clinicopathological spremenljivke so bili razvrščeni po klasifikaciji TNM (5. izdaja, 1997) in značilnosti so povzete v tabeli 1. celokupno preživetje (OS) je bilo opredeljeno kot interval med operacijo in smrt ali med operacijo in zadnji spremljanje za preživetje bolnikov.

monoklonska protitelesa in IHC

odstranjenimi osebki GC so bile določene s formalinom in vgrajeni v parafin. Oddelki so bili pregledani za TAM infiltracijo in beta-catenin uporabo monoklonsko anti-CD68 protitelesa (klon KP1, DakoCytomation, Glostrup, Danska) in monoklonsko β-catenin protitelesa (klon 15B8, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), v tem zaporedju.

Vrednotenje imunskim barvanjem

za oceno gostote CD68 + makrofagov tkiv infiltracije, so odseki tkiva pregleda z krovu certificirano patolog (CI Jan) z nizko močjo (100 ×) in pet najbolj reprezentativne polja so bile izbrane pri 400-kratni povečavi. Rezultati so bili prešteti ročno in so izražene kot vsota števila celic v petih 400 × mikroskopskih polj za vsako območje vsakega osebka.

Cell Culture

GC celice AGS, N87 (kupljena od American Type Culture Collection (Manassas, VA)), MKN45 (kupljen od Health Science Research virov banke (Osaka, Japonska)) in TSGH (kupljene od Bioresource Zbiranje in Research Center (Hsinchu, Tajvan)) in človeškega monocitnega celice linije THP-1 (kupljena od American Type Culture Collection (Manassas, VA)) celice, gojene v mediju RPMI-1640 (Life Technologies, Inc., Rockville, MD) s 10% fetalnega govejega seruma (FBS, Life Technologies, Inc. ) in 2 mM L-glutamina (Life Technologies, Inc.).

celice THP-1 smo zasejali v kulturi posode in inducirane za diferenciacijo v makrofagov z inkubacijo s 100 ng /ml 12-O-tetradecanoylphorbol-13 -acetat (TPA, Sigma-Aldrich) za 24 h. Na makrofage smo sprali trikrat z RPMI medija, ki vsebuje 10% FBS, inkubirani v tem mediju za nadaljnjih 24 ur, da se odpravi učinek TPA in inkubirani v mediju brez seruma za nadaljnjih 24 ur. Požeta in združene kulture supernatante smo uporabili kot makrofagov pogojene medij (CM), kot je opisano zgoraj. [5, 10]

Proliferation /Viabilnost Vsebnost

GC Celice smo zasejali v 96 vdolbinami in co-gojimo z ali brez makrofagov CM. Širjenje /preživetja je bila določena s kolorimetričnim testom z uporabo 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolijevega bromida (MTT) (Sigma-Aldrich).

In Vitro vdora Vsebnost

invazija test je bil izveden s pomočjo transwell celične kulture komore (Millipore Corp, Billerica, MA). Vdrla celic so pri 400-kratni povečavi na 10 različnih področjih, za vsak vložek. Poskus smo ponovili trikrat.

RNA Pridobivanje in RT-PCR

Po stimulaciji z ali brez makrofagov CM za 6 ur, GC celice smo zbrali in skupno RNA, pridobljeni z uporabo reagenta komplet TRIzola ( Invitrogen, Carlsbad, CA), po navodilih proizvajalca. cDNA smo pomnožili s verižni reakciji s polimerazo (PCR), s pomočjo začetnih oligonukleotidov za MMP7 (naprej: 5'AGTCAATCCTGCCTTCTTAGCC, obratno: 5'GCTCCCACCTTCCCTCTTGG), CD44 (naprej: 5'TGCCGCTTTGCAGGTGTAT, obratno: 5'TCCCATGTGAGTGTCTGGTAGC), ciklin D1 ( naprej: 5'CCCAGCCATGGAACACCA, obratno: 5'GGAGGGCGGATTGGAAATGA), c-myc (naprej: 5'AAAGAAGGTGTTGGGGTCGG, obratno: 5'TGGCTCCCCCTGTTATTTGG) in GAPDH (naprej: 5'GGGTGATGCAGGTGCTACTT, obratno: 5'GGCAGGTTTCTCAAGACGGA) .

Jedrska in citoplazme Frakcioniranje

po stimulaciji z ali brez makrofagov CM 6 ur, so GC celice lizirali v 300 ul lize odbojnikom na ledu in centrifugirajo pri 5.400 vrtljajih na minuto. Supernatant smo zbrali kot citosolnega frakcije. Jedrske frakcije smo zbrali, nato pa teče v natrijevega dodecil sulfata poliakrilamidno gelsko elektroforezo (SDS-PAGE) za Western blot analizo.

Western blot analiza

Po stimulaciji z makrofagov CM, celice sprali s PBS , postrgajo v RIPA pufra in centrifugira. V lizati celic so bili izpostavljeni 10% SDS-PAGE in prenesli v poliviniliden fluorid (PVDF) membrano (Millipore Corp.) Membrana je zaznati uporabo primarnih protiteles za beta-catenin, AKT, ERK, JNK (SC1496, SC8312, SC154, SC474, santa Cruz Laboratories, santa Cruz, Kalifornija, ZDA), MMP7 (MAB3322, Chemicon, Temecula, CA, ZDA), CD44 (ab51037, Abcam, Cambridge, MA, ZDA), c-myc (GTX103436, GeneTex, Hsinchu mesto , Tajvan), ciklin D1 (SC246, santa Cruz Laboratories, santa Cruz, CA), β-aktin (ab8226, Abcam), HDAC1, p-AKT, p-ERK, p-JNK (SC7872, SC7985-R, SC7383, SC6254, santa Cruz Laboratories, santa Cruz, CA) in sekundarna protitelesa (santa Cruz Biotechnology).

imunocitokemija

Anti-skupno β-catenin protitelo uporabimo kot primarno protitelo in anti- miš Imunoglobulin G (IgG) Alexa 594 smo uporabili kot sekundarno protitelo. Cover zdrsne so nato pritrdi s pomočjo montažne medij, ki vsebuje DAPI za jedrsko barvanjem.

lentivirusni proizvodnja in okužba

Kratek Ostra RNA (shRNAs) so bile kupljene iz osnovnega instrumenta National RNAi na Academic sinica (Taipei, Tajvan). Ciljna sekvenca beta-catenin shRNA 1 je 5'CCGGTCTAACCTCACTTGCAATAATCTCGAGATTATTGCAAGTGAGGTTAGATTTTTG-3 '; da iz beta-catenin shRNA 2 je 5'-CCGGTTGTTATCAGAGGACT-AAATACTCGAGTATTTAGTCCTCTGATAACAATTTTTG-3 ". Lentivirusni Vektor in njegove embalaže vektorji transfektirali v 293T pakirnih celic, kalcijevega fosfata transfekciji. Na kratko, so bili razdeljeni 293T celice (10 ^{6), v 10 cm 2 jedi 1 dan pred transfekcijo. Nato smo celice transfektirali s 10 ug shRNA vektorjev in 10 ig pCMVΔR8.91 (vektor embalaža) in 1 ig pMD.G (ovojnica vektorsko). Po 5 urah inkubacije smo transfekcijski medij nadomestimo s svežim gojišča. Oseminštirideset ur kasneje smo medij, ki vsebuje lentivirusni zbrane iz transfekciji in se vrti navzdol pri 1500 obratih 5 minut na pelete celično naplavin, je bil supernatant filtriramo skozi filter 0,45-im in ciljne celice so bile okužene s svežo lentivirusni vsebujejo medij (dopolnjeno z 8 g /ml polybrene) za 24 ur.}

Statistična analiza

Statistična analiza kliničnih značilnosti, je bilo izvedeno z uporabo χ ^{2 testa in stopnjo infiltracije med dve skupini smo primerjali s pomočjo t-testa. Krivulji preživetja so bili zgrajeni po metodi Kaplan-Meier in statistična značilnost smo analizirali s testom log-rang. A p-vrednost manjša od 0,05 smo upoštevali kot statistično značilne.}

Rezultati

Korelacija imunohistokemicne spremenljivk z Clinicopathologic funkcije v PK pacientovih

imunohistokemičnim analiza je pokazala citoplazme CD68 obarvanje vzorec za makrofagov. CD68 + makrofagi so porazdeljene po peritumoral in intratumorska tkiv, vendar le redko raztresene na normalni sluznici (slika 1A-1C). Gostota CD68 + makrofagov je bil še posebej visoka v patološko tumorskih fazi 4 (PT4) tumorskih žarišč v primerjavi z PT1 lezije (slika 1D). Če želite ugotoviti povezavo med kliničnimi značilnostmi in CD68 + makrofagov gostoto, so grofje CD68 + makrofagov razdeljena na tiste, nad in pod mediano vrednosti. Ugotovljeno je bilo število CD68 + makrofagov, da je povezana z globino tumorja in fazo (p = 0,001 in p = 0.043 oz) (tabela 1). Ta ugotovitev kaže, da lahko CD68 + makrofagov pomembno pri spodbujanju tumorsko invazijo. Za nadaljnjo analizo, so bile narisane Kaplan-Meier krivulje preživetja za določitev združenje makrofagov s preživetjem (slika 2). Gostota CD68 + makrofagov v tumorskem tkivu je negativno povezana s celokupno preživetje (p = 0,0073). Bolniki z velikim številom tumorskih CD68 + makrofagov imela krajšo skupno preživetje kot tisti z majhnim številom CD68 + makrofagov.

Povečano izražanje in močnejši signal beta catenin jih IHC barvanjem v tumorjih opazili. V večini primerov so β-catenin izraz nahajajo predvsem v citoplazmi (slika 3A). Zanimivo je, da je močna jedrska obarvanje β-catenin GC celic, povezana z CD68 + makrofagov v tumorskih lezij, zlasti pred tumorske invazije (slika 3B). Na osnovi teh rezultatov smo hipotezo, da lahko makrofag infiltracija aktivira β-catenin signalizacije v želodčnih tumorskih celic, ki nato lahko vodi do vdora v želodčni malignosti.

Zahteva makrofagov za tumorska invazija v GC in Aktivirani -makrofagov inducirane Invazija GC celice

Da bi še dodatno potrjujejo naše klinične ugotovitve in vitro
smo prvi co-kultivirani makrofagov z različnimi GC celičnih linijah (AGS, N87, podjetja MKN-45 in TSGH) . Vse GC celične linije testirani bi zaposliti makrofage za migracijo in makrofag-rekrutiranje sposobnost je odvisna od stopnje malignosti rakavih celic, kot jih njihove invazivnosti (slika 4A) določi. [11] Za oceno, ali invazivnost ali proliferacije GC celic lahko ureja makrofagov, so AGS, N87, MKN45 in TSGH co-gojili z in brez makrofagov ali CM iz makrofagu za 24 ur in njihovih invazijo in orožja sposobnosti testiranih. Vse vrste celic sočasno kultivirane s makrofaga ali CM iz makrofaga pokazala bližini 2-kratno povečanje števila vdrla celic (v primerjavi z negativnimi kontrolami, p < 0,05), ki niso povezane z njihovo sposobnostjo proliferacije (slika 4B-4D ).

Jedrska Translocation iz beta-catenin v GC celic z aktivnim Makrofagi

izvedli smo poskus in vitro razumeti, ali je β-catenin signalizacijo, vključenih v-makrofagov aktivira GC celični invaziji. Kot je prikazano na sliki 5A, je β-catenin radioinkorporacijo najdemo v jedrskem frakciji N87 celic tako zgodaj, kot je 15 minut po zdravljenju makrofagov cm, in količine β-catenin proteina jedrske povečala v odvisnosti od časa način. V skladu s temi ugotovitvami, imunofluorescenčni pokazala kopičenje in jedrsko lokalizacijo beta catenin v GC celicah co-kultiviranih z makrofagov CM v primerjavi s kontrolno skupino cocultured v N87 (slika 5B). Ti rezultati jasno kažejo, da so topni dejavniki, ki izhajajo iz makrofagov pomaga posredovanje kopičenju in jedrsko translokacijo beta catenin v GC celicah. Mi prehodno podrli beta-catenin s shRNA in ugotovila zmanjšala izražanje β-catenin beljakovin v 24 urah. Genetsko ablacijo beta catenin v N87 celicah ne povečajo svojo invazivno sposobnost po zdravljenju makrofagov CM. Nasprotno, non-transfekcije in nadzor shRNA imela nobenih sprememb v invazivni zmogljivosti v N87 celic pod zdravljenju makrofagov CM (slika 5C). Znesek β-catenin beljakovin jedrskega se je povečal tudi v letnem pregledu rasti in MKN45 celic po obdelavi makrofagov CM (S1 slika).

Učinki makrofagne na izražanje P-catenin in Nadaljnji Geni v N87 celice

smo ovrednotili na nižji stopnji gene tradicionalni NT /β-catenin MMP7, CD44, c-myc in ciklin D1 do dolo če se aktivira makrofagov. Ravni mRNA in proteinske MMP7, CD44 in c-myc genov so pri N87 celic inkubiranih z makrofagov CM in stopnjami ciklina D1 nekoliko povečalo (slika 6a) vse bistveno povečala. Po česar zmanjšal invazijo dejavnost iz podreti beta-catenin, MMP7, CD44 in ciklin D1, ne c-myc pokazala protein navzdol uredbe (slika 6B). Da bi potrdili povezavo med invazijo sposobnosti in MMP7 in CD44, smo testirali sposobnost protiteles nevtralizacije za blokiranje MMP7 in CD44 dejavnost. Invazija sposobnost je bila bistveno ogrožena s predhodno obdelavo z 2,5 ug /ml anti-MMP7 in 10 g /ml anti-CD44 (slika 6C) oziroma, kar kaže na vpletenost obeh genov v-makrofagov aktivira GC celični invaziji. Ugotovili smo, da količina beljakovin iz CD44 in ciklin D1 geni so bili v drugih GC celičnih linijah (AGS in MKN45) inkubiranih z makrofagov CM pa MMP7 in c-myc niso bile pomembno spremenila (S2 Fig) povečala.

Drugo so poročali o možni presečišče MAPK poti z NT /β-catenin signalne poti je. [12, 13], zato smo izvedli študijo, ko hodi in ugotovila, da so bile le fosfo-AKT in fosfo-ERK izražanje molekul pri zdravljenju z makrofagov CM (S3A slika). Za potrditev interakcijo med AKT /ERK poti in beta-catenin smo obdelamo celice bodisi zaviralec ERK (U0126) ali zaviralcem AKT (LY294002). Zmanjšanje β-catenin premestitve v jedru je bilo samo v celicah, zdravljenih z zaviralcem AKT, vendar ne zavira ERK, kar kaže, makrofagov avtivated NT /β-catenin signalno pot lahko ureja AKT (S3B slika). V GC celicah, se zdi, da je prevladujoč v makrofaga aktivnega NT /β-catenin signalizacijo pot Akt učinek. Prejšnje študije tudi kažejo, da je TNF-α proizvaja makrofagov ključni mediator za vnetje in lahko spodbujajo β-catenin aktivnost v tumorskih celicah. Ugotovili smo, da z uporabo nevtralizacijskih protiteles proti TNF-a v N87 aktivacijo zatreti β-catenin pod izpostavljenosti makrofagov CM (S4 slika).

Pogovor

mikrookolje tumorja je ključnega pomena pri določanje funkcije levkocitov in fenotip. Nasprotujoče si podatke, je pokazala antitumorigenic ali protumorigenic funkcije makrofagov, zlasti pa naši podatki kažejo, makrofagi igrajo protumorigenic vlogo pri bolnikih GC. V večini tumorjev, Blagajniške naprave proizvajajo nešteto dejavnikov, ki spodbujajo rast tumorja in angiogenezo. [14, 15] Stopnja makrofagov infiltracijo v rakave celice gnezdo je tudi pomemben napovednik preživetja pri bolnikih z GC. [16-18] ugotovitve IHC v tej študiji, jasno kažejo, da se gostota makrofagov v GC tkiva v korelaciji s stopnjo klinične faze (zlasti v tumorju [T] stopnja) in preživetju bolnikov. Sedanje študije tudi kažejo, da se lahko makrofagi igrajo škodljive vloge v naprednih GC. Ta ugotovitev je v harmoniji s študijami, ki kažejo, da lahko imunski mikrookolje protumoral namesto protitumorsko, kljub nekaterim nasprotujočih si podatkov. [19, 20]

Jedrska akumulacija beta catenin so poročali pri približno eni tretjini želodčnih adenokarcinomov, tako črevesne in razpršenih vrste. [18] β-catenin je 92 kDa protein, ki deluje neposredno na adhezijo celic v celici. [21] Mutacije beta-catenin in odklonskega izražanje njegovega proteina so bili vpleteni v tumorske invazije in metastaze. [22, 23] v naših ugotovitvah IHC, β-catenin je nahajal v jedru na invazivno sprednji tumorskih celic, ne pa tudi v najbolj osrednjem območju primarnih tumorjev, kjer se lokalizira na plazemski membrani . Takšne ugotovitve je mogoče najti tudi v debelega črevesa in tumorjev osebkov. [24] NT /β-catenin aktivacija na rakave celice, ki se nahajajo na invazivno spredaj je domnevali, da gre za pomemben korak pri rasti tumorja in napredovanje. [25]

zanimivo je, da smo našli tudi beta-catenin nahaja v jedru tumorskih celic z makrofagov, ki se nahajajo sosednje, kar kaže na možno povezavo med makrofagov in jedrsko translokacijo beta catenin v tumorskih celicah. β-catenin je na invazivno pred GK delno pojasniti z interakcijami v mikrookolje tumorja. Potrdili smo in vitro
ki makrofagov povečati invazijo sposobnost GC celic. Uporaba Imunofluorescenčni konfokalno mikroskopijo smo ugotovili, lokalizacijo in kopičenje beta catenin v jedru v tretiranih makrofagov. Tako, sumimo, da citokini makrofagi izločajo povzroči β-catenin jedrsko translokacijo v GC celic, s čimer se poveča njihovo invazijo sposobnosti. Invazivnega sprednji epitelijskih tumorjev predstavlja mikrookolje v katerem makrofagov interakcijo z parenhimskih celic, ki proizvajajo zunajcelični matriks in jih izločajo citokine in rastne dejavnike, ki na lokalni ravni spodbujajo celično proliferacijo in invazijo. [26, 27] Vendar pa je v naši raziskavi, povečana β-catenin izraz in vitro
ni spremenila širjenje, kar pomeni, da je sama po sebi ne zadostuje za bogatenje tumorja malignosti. Ta ugotovitev se že kaže tudi, da je β-catenin spodbuja le oprijem strani, da tvorijo focally in spodbuja smerno migracije in vdor celic raka kolona, ​​vendar ne sodeluje pri širjenju želodčnih in prostate rakavih celic. [28-30] Kljub temu, stromalni celico parakrin modulacija NT signalizacijo v epitelnih celic je verjetno usklajeno z bolj zapleteno mrežo pospeševanje in zaviranje izločanja faktorjev. učinki nadaljnji različnih ravneh NT /β-catenin signalizacijo (in zlasti tistih, ki vplivajo na celično proliferacijo, EMT in lokalna invazija), so doslej slabo razumljen. β-catenin premikanjem v jedro, kjer se veže na transkripcijskih faktorjev na T-celični faktor /limfocit spodbujevalcev faktorja (TCF /LEF) družine in sproži transkripcijo ciljnih genov kot ciklin D1
C- myc
in MMP-7
[31, 32], vključenih v proliferacije, tumorske invazije in metastaz. [33, 34] Naše ugotovitve kažejo, da je signalni poti, preko katerih makrofagov povzroči beta-catenin tudi spodbuditi, izražanje tarčnih genov. V skladu z našim prejšnjim delom, [5] MMP-7 in CD44 bili dve PCR nizi opredeljeni po coculture z makrofagov so različno izraženih genov, povezanih z metastazami GC celic. Degradacijo zunajceličnega matriksa posredovane z matriksnih metaloproteinaz (MMP) je ključen mehanizem med tumorske invazije in metastaz. Takšna razgradnja je treba ustvariti mikrookolje, ki podpira rast primarnih tumorjev in metastaz. β-catenin /TCF kompleks nato aktivira številne onkogenov, vključno VEGF, c-myc, c-jun, fra-1 in gastrin, ki so lahko vključene tudi v spodnjem toku dogodkov makrofagov aktivira β-catenin. [35]

različne poti lahko modulira NT /β-catenin pot in ureditev β-catenin signalizacijo, se lahko prav tako zapletena. Nedavne raziskave so pokazale, da makrofagov CM sproži ERK poti in NT aktivira ERK v endotelijskih celicah. [36, 37] Pri tem smo ugotovili, da makrofagi povzroči fosforilacijo tako ERK in AKT v GC celicah. Pokazali smo, da je zdravljenje z zaviralcem AKT, vendar ne zavira ERK zmanjšuje β-catenin translokacijo. Ti rezultati kažejo, da Akt igra vlogo v makrofagov aktivira β-catenin signalizacijo v vrstah želodčnih celic.

Sklepi

S kolektivno, klinični podatki kažejo, da je makrofagov infiltracija v korelaciji s povečano stopnjo in slabšo prognozo za bolniki, GC, ki so šli skozi radikalno resekcijo. Makrofagi lahko povzroči GC invazivnosti z aktiviranjem β-catenin pot je. V skladu s tem zatiranje makrofagov infiltracije in zatiranju aktivacije β-catenin poti pomenita možne strategije za zdravljenje GC.

Podpora Informacije
S1 Sl. . Učinek makrofagov SP na β-catenin poti
β-catenin kopiči v jedru po zdravljenju z makrofagov CM za 30 minut v letnem pregledu rasti in MKN45 celic
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s001
(TIFF)
S2 sl. Učinek makrofagov SP na beljakovin izražanje beta-catenin navzdol tok gene AGS in MKN45 celic
doi:. 10.1371 /journal.pone.0134122.s002
(TIFF)
S3 Sl. (A) Makrofag CM inducirane AKT in aktivacije ERK v N87 celicah. (B) N87 celice so predhodno obdelamo z 10 mikrometrov inhibitorjev β-catenin:. LY294002 ali U0126 za 1 uro, nato kultiviranih v prisotnosti makrofagne CM za 1 dodatno uro
AKT, ERK in β-catenin protein izraz so bile določene z Western blot
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s003
(TIFF)
S4 sl. . Nevtralizacijskih protiteles proti TNF-a
N87 celic v prisotnosti makrofagne CM 24 urah smo predhodno obdelali z ali brez TNF-alfa zaviralca 1 uro
doi. 10,1371 /journal.pone.0134122.s004
(TIFF)

• Plos ONE: PRR11 Je prognostični Marker in potencial Oncogene pri bolnikih z želodčnim Cancer
• Plos ONE: limfnih vozlov metastaze, Unique Independent prognostični dejavnik pri Early želodca Cancer