Plos ONE: zaviralnega učinka Pseudolaric Acid B na Rak želodca in rezistenco po Cox-2 /PKC-alfa /P-gp Pathway

Povzetek

Cilj

Da bi raziskali zaviralni učinek pseudolaric kisline B na podkožne presadkov človeškega adenokarcinomom želodca in osnovnih molekularnih mehanizmov, ki sodelujejo pri njenem rezistenco.

metode

človekove želodčni adenokarcinom SGC7901 celice in SGC7901 /ARS celice drog odporna smo injicirali v golih miših vzpostaviti podkožno modela ksenotransplantskih. Učinki kisline B pseudolaric z ali brez adriamicinsko obdelavo smo primerjali z določanjem velikosti tumorja in težo. Ciklooksigenaze-2, so bile beljakovine kinaseC-α in P-glikoproteina stopnje izraženosti določi imunohistokemijo in zahodni blot.

Rezultati

Pseudolaric kislina B močno zavre rast tumorja, ki ga SGC7901 celice pogojeno in SGC7901 /ADR celice. Kombinacija pseudolaric kisline B in tradicionalni adriamicin kemoterapijo drog razstavljene močnejše zaviralni učinek na rast raka želodca in vivo kot zdravljenju z obeh pseudolaric kisline B ali adriamicin samega. Ravni Protein izraz za ciklooksigenaze-2, so bile beljakovine kinaseC-α in P-glikoproteina zavira samostojno ali v kombinaciji z adriamicin v celičnih presadkov SGC7901 /ARS kisline B pseudolaric.

Zaključek

Pseudolaric kislina B ima pomembno zaviralni učinek in aditiven zaviralni učinek v kombinaciji z adriamicin na rast raka želodca in vivo, ki se obrne odpornost mnogovrstnimi želodčnega neoplazme s kemoterapijo drog z downregulating Cox-2 /PKC-α /P gp /MDR1 signalne poti

Navedba. ne Q, Li Y (2014) je za zaviralni učinek Pseudolaric Acid B na rak želodca in rezistenco po Cox-2 /PKC-α /P-gp Pathway. PLoS ONE 9 (9): e107830. doi: 10,1371 /journal.pone.0107830

Urednik: Soumitro Pal, Otroška bolnišnica Boston & Harvard Medical School, Združene države Amerike

Prejeto: 15. maj 2014; Sprejeto: 20. avgust 2014; Objavljeno: 24. september 2014

Copyright: © 2014 Sun, Li. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Data Zaloga:. avtorji potrjujejo, da so v celoti na voljo brez omejitev vse podatke, na katerih temeljijo ugotovitve. Vsi pomembni podatki so v dokumentu

Financiranje:. To delo je podprl znanstvena fundacija Program Shenyang občinskega znanost in tehnologijo urad (1091136-9-02). Financer imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca je eden najpogostejših rakov po svetu [1], in kemoterapija je pomembna strategija pred rakom želodca [2]. Ker je več kemoterapevtskih drog različnih razredov se uporabljajo za zdravljenje raka na želodcu, občutljivost zdravil proti raku za raka želodca zmanjšuje postopno in lahko pride odpornost na različnih zdravil z različnimi kemijskimi strukturami in različnimi mehanizmi delovanja. Ta vrsta odpora se imenuje multidrug odpornost (MDR) in znatno zmanjša učinkovitost zdravljenja za rakom želodca. MDR postaja velik problem za uspešno zdravljenje raka [3]. Odkrili smo, da je glavni razlog za MDR raka prevelike količine P-glikoproteina (P-gp), proizvod gena človeškega MDR1. P-gp je ATP-odvisne iztočne črpalke, ki lahko zmanjšajo kopičenja zdravila v rakavih celicah. Predlaga se, da naj bi P-gp, dobro sprejeta, biološkega označevalca MDR, šteje tudi kot molekularne tarče pri raku multiplo odporna [4]. Nedavne študije so pokazale, da je pri rakavih celic z MDR so ekspresijski nivoji ciklooksigenaza-2 (COX-2) in izoforma proteina kinaseC (PKC-a) sta molekul in njihova inhibicija lahko obrne neoplastična MDR [5] -. [10]

Pseudolaric kislina B (PAB, slika 1), ki je diterpena kisline, izolirane iz korena in debla skorje drevesa Pseudolarix kaempferi
Gordon (PINACEAE), ki se uporablja v tradicionalne kitajske medicine za svoje širok spekter bioloških funkcij, kot so anti-glivične učinkov in anti-plodnosti učinkov. Poleg tega je njegova anti-angiogenih učinki so bili tudi postopoma priznana v zadnjih letih [11], [12]. Nedavne študije so pokazale, da PAB povzroči inhibicijo rasti, aretacijo celičnega ciklusa in apoptozo. Poleg tega PAB obrne odpornost mnogovrstnimi rakavih celic [13], [14]. CTB zavira rast želodčne neoplastične celične linije AGS in inducira apoptozo [15]. Naše prejšnje raziskave so pokazale, da ima PAB tudi dramatičen zavira človeške želodčne raka SGC7901 celic in vitro [16]. Vendar pa je in vitro študije o učinkih proti raku za PAB so redki, in niti in vivo učinkovitost te nove zeliščne spojine proti tumorjev niti z natančnimi molekularni mehanizem proti MDR je bila v celoti raziskana.

Cilj sedanjosti študija je oceniti anti-neoplastični učinek PAB vivo, vključno odprave MDR uporabo modela ksenotransplantata pri golih miših in raziskati, ali CTB je osnovni molekularni mehanizem, povezana z zaviranjem MDR preko Cox-2 /PKC-a /P-gp pot.

materiali in metode

materiali

RPMI-1640 gojišče in fetalni goveji serum (FBS) za celične kulture so bile kupljene od Gibco BRL, Gaithersburg , MD, ZDA. Rabbit anti-Cox-2 monoklonskih protiteles, miška anti-PKC-a in miško anti-P-gp monoklonska protitelesa so bile kupljene od Santa Cruz Corporation, CA, ZDA. Sekundarna protitelesa proti zajec in miške protitelesa, streptavidina-peroksidaze (SP) kompleti in 3,3'-diaminobenzidine (DAB) so bili pridobljeni iz Pekinga Zhongshan biotehnologijo, Kitajska. BCA protein Test kompleti in SDS-PAGE kompleti za pripravo gela smo pridobili iz Beyotime Inštituta za biotehnologijo, Šanghaj, Kitajska. PAB je bila kupljena iz Liaoning Inštituta za nadzor nad drogami, Kitajska št 201003 (čistost: > 98%). Adriamicin (ADR) je bilo pridobljeno iz Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co, Ltd, Kitajska št 120906. Tween80 in polietilen glikol bili kupljeni pri Sigma Chemical, St. Louis, MO, ZDA.

celične kulture

človekove želodčni adenokarcinom SGC7901 celice smo gojili v centralnem laboratoriju Shengjing bolnišnice povezana s Kitajsko Medical University [16], in adriamicinsko odporna SGC7901 /ARS celice nadarjen iz inštituta za bolezni prebavil v Xijing bolnišnici so odvisne od četrtega vojaške Medical University [17]. Človeške želodčne adenokarcinom SGC7901 celice in SGC7901 /ARS celice adriamicinsko odpornim smo kultivirali v RPMI-1640 medij dopolnjen z 10% FBS in antibiotiki (100 U /ml penicilina in streptomicin), s 5% CO _{2 v navlaženem inkubatorju pri 37 ° C ° C. ADR (1 mg /ml) dodamo k SGC7901 /ADR mediju celične kulture pomaga vzdrževati njihovo MDR. Celice v logaritmični fazi rasti smo centrifugirali in razredčimo z RPMI-1640 medij za pripravo suspenzije z enim celic s koncentracijo 2,5 x 10 ^{6 /ml za sejanje.}}

Oblikovanje modela golih miših ksenograftov

vivo protitumorski učinek PAB so raziskali v mišje modelu ksenotransplantskih. Za model 4-6 tednov star moški in ženski imunsko pomanjkljivostjo BALB /c (nu /nu) miši, ki tehtajo 18 do 22 gramov, ki so bile kupljene iz Pekinga HFK biološke znanosti Co, Ltd (Kitajska) in se hranijo v akreditiranih objektih pri standardnih pogojih za glodavce (SPF razreda) v oddelku za znanosti o laboratorijskih živalih. Petdeset miši so bili izbrani in naključno razporedili v dve skupini (25 na skupino). Skupno 25 miši subkutano injicirali 2,5 x 10 ^{6 /ml SGC7901 celic v 0,2 ml RPMI-1640 medij v levo axillae ter ostalih 25 miši smo injicirali SGC7901 /celicami ARS v pravem aksilarno regiji pod pogoji brez klic.}

Eksperimentalni skupine in
zdravila

Sedem dni po celic implantaciji, tumorji postali otipljivi (približno 3 mm x 3 mm v premeru), in nato injiciramo dve skupini z bili dve različni vrsti celic naključno razdelili v pet podskupin (5 miši na skupino): solne raztopine (NS) nadzor skupine, nadzor skupine TWEEN, skupina ADR, skupine PAB in PAB + skupine ADR. Za PAB skupine, CTB (25 mg /kg /d pri 0,1 ml) raztopimo v vodni raztopini 6% polietilen glikola, 3% etanola in 1% Tween80 smo dali intraperitonealno (i.p.) na dan za 20 dni [13]. Enak volumen vodne raztopine ali NS smo injicirali v skupini za nadzor TWEEN skupino ali kontrolno NS oz. Za skupino ARS, ADR (1,25 mg /kg v 0,1 ml) smo dali razredčene v NS i.p. vsak dan za 20 dni [18]. miši s tumorjem pri čemer smo dajali oboje PAB (25 mg /kg /d) in ADR (1,25 mg /kg /dan) i.p. za isto obdobje v skupini PAB + ADR. Po obdelavi smo žrtvovali miši iz vsake skupine in tumorske vzorci dvostranskih aksilarna regij smo stehtali in resekcija za imunohistokemijske in analize western blot. Ta študija je bila izvedena dosledno v skladu s priporočili v navodilih za nego in uporabo laboratorijskih živali iz National Institutes of Health. Protokol je odobril Odbor za etiko o poskusih na živalih v Shengjing bolnišnice povezana s Kitajsko Medical University (številka dovoljenja: 2013PS144K). Miši so se žrtvovali pod 10% Kloralhidrat anesteziji, in si je prizadevala za zmanjšanje trpljenja.

Merjenje in izračun obsega tumorja in teže

Telesna teža je spremljala vsak dan, in dve pravokotno premerov (dolžina in širina v mm) tumorjev so bile izmerjene na dva dni z čeljusti v celotnem obdobju zdravljenja. Obseg tumor so bili ocenjeni z uporabo dvodimenzionalne meritve in izračuna, kot sledi: volumen tumorja (mm ^{3) = dolžina (mm) x širina 2 (mm) /2. Sorazmerni obseg tumorja (RTV) je bila izračunana kot sledi: RTV = (povprečni volumen tumorja med zdravljenjem) /(povprečni volumen tumorja na začetku zdravljenja). Učinki antitumorskih iz PAB in /ali ADR smo ocenili s stopnjo srednja inhibicije (IR) rast tumorja z naslednjo enačbo: IR (%) = [(1-srednja RTV skupine obdelamo z drogami /pomeni RTV NS kontrolni skupini ) × 100] [19]. Relativna telesne teže miši smo izračunali s pomočjo W _{t /W 0 indeks, kjer t je W telesne teže na dan merjenja, in W 0 bil telesne teže pri prvi dan zdravljenja. Sprememba telesne teže na dan 1 in 20, ki predstavljajo začetek in konec poskusa, oziroma, je bila uporabljena za oceno in analizo učinkov zdravil na telesno težo [20].}}

Imunohistokemijsko za izražanje COX-2, so PKC-a in P-gp

Tumorski vzorci določen s paraformaldehidom, rutinsko obdelani z vključitvijo v parafin, nato pa rezine v 4-Lun sekcije. Po hematoksilinom in eozin (HE) barvanjem, smo pod svetlobnim mikroskopom opazili celice želodca ksenograftih rakom. Je ekspresijski nivoji Cox-2, so bile PKC-α in P-gp gojiščih tumorskih celicah z uporabo metode SP. Na kratko, potem ko razvoskanega in rehidrirani smo drsi inkubirali v 0,3% H _{2 raztopino 2O in sušimo v mikrovalovni pečici pri citronske kisline pufru za 15 minut za pridobivanje antigenov. Rezine smo blokirali z normalnim kozjim serumom 30 minut pri 37 ° C in preizkusimo z protitelesa kunec monoklonsko da Cox-2 in mišjimi monoklonskimi protitelesi, da PKC-a in P-gp pri 4 ° C preko noči (vsi protitelesa razredčimo na 1 :300). Biotinilirano anti-kunčjega IgG in anti-podgana IgG dodamo in inkubiranih pri 37 ° C 30 minut, preden dodamo encim, konjugiran HRP-streptavidina. Poleg tega, 3, je bil 3'-diaminobenzidine (DAB) uporabimo kot kromogena. Ploščice smo jih nasprotno s hematoksilinom, dehidrirali v alkoholu, in namesti na nevtralnem balzamom. Kontrole so bile pripravljene z uporabo le sekundarnih protiteles. Pet polj vsakega odseku od vsakega miško v vsaki skupini so bili izbrani za zbiranje slik. Rezultate smo analizirali in primerjali statistično uporabo NIS-Elements Br 3.0 programsko opremo, in povprečno optična gostota je bila pridobljena kvantificirati ravni izraz Cox-2, PKC-α in P-gp.}

Western blot za Cox -2, PKC-α in P-gp v golih miših presadkov

skupno 100 mg sveže zamrznjene tumorskih tkiv iz najmanj treh miši vsake skupine so stehtali in dopolnijo z radio imuno testa (RIPA) liza buffer [ki vsebuje 100 mg /ml fen fluorid (PMSF)]. Po prahu s škarjami smo ekstrakte homogeniziramo z ultrazvokom. Po centrifugiranju pri 14000 obratih na minuto pri 4 ° C za 30 minut, je bil supernatant vzorec zamrznemo pri -80 ° C Western blotting-om. Koncentracija proteinov ekstraktov smo določili z uporabo bicinchoninic kislina (BCA) protein analiznega kompleta. Skupaj 100 ig proteina na miš pod denaturirnih pogojih (100 ° C 5 min) smo elektroforezo z uporabo natrijevega dodecil sulfat, poliakrilamid gel elektroforeza (SDS-PAGE) na 8% ločevanja gelu in elektrotransferiramo na PVDF membrano z uporabo sistema za mokro prenosa pri 100 v (Cox-2, PKC-α, β-aktin 100 minut, in P-gp 3 ure). Po blokiranjem s 5% nemastno mleko v prahu v 1 x TBST (Tris-pufrom, ki vsebuje 0,1% Tween20) za 90 minut, smo membrane nato inkubirali s primarno protiteles [kunčjega monoklonskih protiteles proti Cox-2 (1:400) ali miške monoklonska protitelesa proti PKC-a (1:200) in P-gp (1:200), pri čemer P-aktina, kot notranje kontrole proteina natovarjanje] preko noči pri 4 ° C. Protitelo vezavo smo vizualizirali s pomočjo sekundarnega kozje anti-kunčje protitelo-peroksidaze skupaj (1:2000) in koza protitelo anti-miške (1:2000) 1,5 h pri sobni temperaturi. Nato smo membrane vizualiziramo z izboljšano kemiluminiscentnim (ECL) reagent. Rezultate smo analizirali z Image J programske opreme.

Statistična analiza

Vsi podatki so predstavljeni kot povprečne vrednosti ± standardni odklon, in multiple primerjave med katerima koli dvema tretiranih skupinah so bile ovrednotene z eno- ANOVA, z uporabo SNK in metode LSD s SPSS 17.0 programsko opremo. Razmerje med spremembo telesne teže in volumna tumorja smo analizirali Pearson korelacijsko analizo. p vrednosti manj kot 0,05 naj bi bile statistično značilne.

Rezultati

zaviralni učinek PAB na rast človeške želodčne raka

tumorjev pri vseh tretiranih skupinah oblikovali takoj po implantacija suspenzij enoceličnih in hitrost tvorbe bil 100%. Ko so ksenotransplantati postalo očitno, ni bilo bistvenih razlik v povprečnem obsega presadkov med različnimi skupinami (tabela 1), in obseg tumor so spremljali v različnih časovnih točkah v vseh skupinah. So krivulje rasti tumorjev dveh celičnih linij smo grafu (slika 2A, 2B). Kot je prikazano v tabeli 1, za skupine SGC7901 celic zdravijo, niso opazili pomembne razlike med skupino PAB in skupine ARS v povprečnih relativnih prostornin presadkov (p > 0,05) in IR je bila 56,4% in 59,0%, oz. Dodajanje ADR za PAB posledico višjo protitumorsko aktivnost, kot je samega PAB ali ADR samega (p 0.05) z IR 88,1%. Zaviralni učinek skupine PAB bila močnejša v primerjavi s tisto skupino ARS na presadkov iz SGC7901 /ARS celic in IR bile vrednosti 64,1% in 21,9%, oziroma (p 0.05). zaviranje rasti tumorja je bila bolj očitna pri miših, zdravljenih s PAB v kombinaciji z ADR, z IR 85,8%. Ugotovitve mase tumorja v različnih skupinah nadalje podpirajo naše rezultate glede obsega miših presadkov. Slika 2C in 2D prikazuje spreminjanje relativne telesne teže miši v desetih skupin. Telesna teža je bila podobna med kontrolne skupine in skupine, PAB zdraviti. Vendar pa je telesna teža znižala v skupinah kombinirani obdelamo in skupin ARS in zmanjšanje skupin ARS bil bolj očiten (p 0.05). Poleg tega, Slika 3 omogoča neposredno primerjavo velikosti tumorja SGC7901 celic in celic SGC7901 /ARS v različnih skupinah. Razmerje med spremembo telesne teže in volumna tumorja niso bile pomembne (p > 0,05). Med poskusom opazili testirani so jih miši dobro prenašali odmerke, in nobena žival smrtnost.

Imunohistokemijsko za izražanje Cox-2, PKC-α in P-gp

Vse tumorjev v vsaki skupini, prek imunohistokemično barvanjem, prikazane pozitivne ekspresijo Cox-2, PKC-a in P-gp proteinov. Cox-2 in PKC-α izraz je definirana kot pozitiven, če je obarvajo regija tumorskih celic v citoplazmi in P-gp obarvanje je pozitiven, če je obarvanje opazili v membrano in citoplazmo. Proteine ​​smo barvali rumene ali rjave barve pod optičnim opazovanjem mikroskopa (slika 4). Za SGC7901 /ADR celične linije, je bilo obarvanje teh proteinov v kontrolnih skupinah višja kot v drugih skupinah (p < 0,05). Zdravljenje CTB zmanjša znotrajcelično obarvanja Cox-2, PKC-alfa in P-gp primerjavi z ADR zdravljeni skupini (p 0.05). Po PAB in zdravljenje ARS, je intracelularni barvanje teh proteinov redkeje in šibkejši v primerjavi z drugimi skupinami. Za presadkov dveh kontrolnih skupin NS je bilo obarvanje P-gp v SGC7901 celicah bistveno nižji kot pri SGC7901 /celic ADR (p < 0,05). Analiza intenzivnosti obarvanja Cox-2, PKC-α in P-gp izraz pokazala enake rezultate (tabela 2).

Vpliv PAB na Cox-2, PKC-a in P-gp izraz na miših presadkov

za pojasnitev molekularni mehanizem, ki sodeluje v učinkih odprave PAB na SGC7901 /ARS presadkov pri vivo, izraz Cox-2, PKC-a in p-gp v tumorjih iz različnih skupine-reagent obdelamo smo določili z Western blot analizo. Kot je prikazano na sliki 5, pri kontrolni skupini NS, so ekspresijski nivoji Cox-2, PKC-a in P-gp v presadkov na SGC7901 celičnih nižji od tistih v SGC7901 /celičnih tumorje ARS (p 0.05) . Za tumorjev SGC7901 /ARS celice, stopnje izraženosti treh proteinov interesa v kontrolni skupini in kontrolni TWEEN skupini NS so bili bistveno višji v primerjavi z drugimi skupinami (p < 0,05), in ni bilo bistvene razlike med dve skupini (p > 0,05). Stopnje izraženosti COX-2, PKC-a in P-gp v PAB-zdravljeni skupini, so bile bistveno nižje v primerjavi s tistimi iz ADR-zdravljeni skupini (p < 0,05). Izraz p-aktin uporabimo kot notranjo kontrolo in ekspresijski nivoji Cox-2, PKC-a in P-gp bile zaporedno zmanjšala med kontrolnimi skupinami, skupina ADR, skupina CTB in PAB + ADR skupini (p lt 0,05)

Pogovor

PAB je eden od glavnih biološko aktivnih sestavin korenski lubja zdravilne rastline Pseudolarix kaempferi
in prikazuje velik citotoksičnost proti več rakave celice. linije. In vitro študije so pokazale, da se obrne MDR za rakom, tako da zavira čezmerno P-gp brez očitnih stranskih učinkov [13] [15] [20] [21]. Dokazano je bilo tudi, da je PAB protitumorskega učinka pri miših so poročali ksenotransplantskih modeli človeškega raka na debelem črevesu in karcinomom jetrnih celic [13], [20], in brez znanih stranskih učinkov PAB na živalih. Naši prejšnji študija je pokazala, da ima PAB močan zaviralni učinek na liniji SGC7901 celic in vitro in inducira apoptozo želodčnih rakavih celic prek kaspaze poti [16]. Naše sedanje študije in vivo vsebuje dodatne dokaze, da je PAB varstvo pred želodčnih tumorjev pri mišjih modelih ksenotransplantskih uporabo SGC7901 celice in celice SGC7901 /ARS. Naši predhodni poskusi so pokazali, da PAB pri 25 mg /kg, ne le zavira rast raka želodca, ampak je tudi miši dobro prenašajo. Poleg tega smo vključili kontrolno TWEEN skupino izključiti vpliv vodne raztopine, ki je bil uporabljen za raztapljanje PAB na tumorjih [13]. Pri občutljivih celicah, se proti raku učinki PAB proizvedeni v primerjavi z ADR, tradicionalno kemoterapijo zdravila nobenih pomembnih razlik. Poleg tega CTB je biološko aktivna spojina, ki deluje njegov vzvratno učinek proti SGC7901 /ARS celični liniji tumorjev z osredotočanjem na pot signalno aktivira P-gp prekomerno vivo.

P-gp je 170-kDa membranskega protein, ki deluje kot iztočno drog črpalke, kar v neprekinjenem napako v znotrajcelično kopičenje zdravil [22]. fenotip upor multidrug je glavni vzrok za neuspeh tumor kemoterapije in je predvsem zmnožek prekomerno P-gp v večini raka, vključno želodčnih novotvorbe [23]. Poleg tega bi zaviranje tej poti je tako, da se obrne MDR želodčnih rakavih celic [3], [24].

Cox-2, inducibilni encim, ki katalizira pretvorbo arahidonske kisline na prostanoidov ( PG) in sodeluje v različnih fizioloških in patoloških dogodkov, ki je povzročena z različnimi vnetnih in mitogeni dražljajev [25]. Močno povezavo med MDR in čezmerni COX-2 so poročali v mnogih različnih vrst tumorjev. Ti prejšnji rezultati kažejo, da Cox-2 modulira izražanje in aktivnost P-gp in je vključen v razvoj fenotipa MDR [26] - [28]. Poleg tega se je pokazalo nabralo dokazi, da so zaviralci COX-2 lahko senzibilizirati rakave celice na antiproliferativne učinke citostatikov, s spremembo dejavnosti ATP-vezave kasete beljakovine. inhibitorji Cox-2, lahko celo obrniti MDR z blokiranjem cox-2-posredovano povečanje MDR1 izražanja in aktivnost pri raku, in vitro ter in vivo [6] [7], [29]. Zato smo hipotezo, da lahko Cox-2 uravnavajo izražanje P-gp v tumorskih tkivih in da inhibira ta pot zelo pomembna za vzvratno odpornost raka na citostatikov.

Ugotovili smo, da za SGC7901 /ADR tumorji, so izražanjem Cox-2 in P-gp v kontrolni skupini NS so očitno višje od tistih za presadkov v SGC7901 celic. Po injiciranju PAB, so opazili očitno zmanjšanje teh stopnjah izražanja. Vendar pa je bil ADR manj učinkovita za zatiranje ravni Cox-2 in P-gp izraz SGC7901 /ARS celičnih presadkov, in v kombinaciji s PAB, so opazili nižjo raven beljakovin. Zato smo predlagali, da se modulacijo Cox-2 izražanja, ki ga PAB lahko zmanjša izražanje in aktivnost P-gp, zavira rast in inducira apoptozo, poleg tega, da v sodelovanju, ki deluje z ADR pri zatiranju tumorjev zdravila odpornih in celo preobrat MDR fenotip raka želodca.

PKC je serin /treonin kinaze vključena v transdukcijo signala je potreben za celično proliferacijo in diferenciacijo [30]. Od PKC izooblik, so prevelike in povečana aktivnost PKC-a najtesneje povezana z regulacijo MDR fenotip pri raku človeške želodčne [31]. Tukaj predstavljeni rezultati podpirajo idejo, da PKC-α fosforilira P-gp, uravnava delovanje izlivnimi P-gp, in v končni fazi vodi do odpornosti na zdravilo [32]. Zaviranje PKC-a z specifični zaviralec ali podreti PKC-a z siRNA vodi do zmanjšane izražanja MDR1, povečana toksičnost zdravil proti raku in obrnil MDR [8] - [10]. Zato domnevajo, da bi lahko PKC-α signalov sistema igrajo vlogo v zvezni MDR1 izraz raka želodca.

V normalnih okoliščinah, PKC ni aktiven v celicah, in njegova aktivacija je povezana s predhodnim aktivacijo PGE. Cox-2 je povezan z membrano povezano prostaglandin E2 sintaze (MPGES-1), in sinteze PGE posredovane s temi proteini povečuje in aktivira PKC-alfa pot prodajnega [33]. Dokazano je, da je selektivna inhibicija COX-2 s specifičnimi inhibitorji ali siRNA terapevtski učinek na inhibiranje ekspresije PKC-a in P-gp, hkrati ob istem času, vzvratno MDR [26], [34]. Študija je pokazala, da PGE2 posreduje indukcijo MDR1 izražanja prek PKC poti [35]. Rezultati naših eksperimentov je pokazala, da PAB lahko inhibira PKC-α izraz presadkov po SGC7901 /ADR celične linije, katerih učinek je bil večji od tistega ARS. Poleg tega, ko je CTB kombinaciji z ADR bila učinkovitost inhibicije ekspresijo PKC-α še močnejša. Razlike težnja PKC-alfa izražanja je skladen z Cox-2 in P-gp v različnih skupinah, obdelanih z reagenti za SGC7901 /tumorjev ARS zdravila odpornih. Dokazano je, da CTB povzroči zaustavitev rasti in apoptozo s inhibira pot Cox-2, pri rakavih celic [20], [21]. Smo hipotezo, da PAB inhibira ekspresijo COX-2 v SGC7901 /ADR celičnih presadkov in da je sklopitev med Cox-2 in MPGES-1 zmanjšuje sintezo PGE, ki zmanjšuje aktivacijo nadaljnjega PKC-a. Kot je inhibirana fosforilacijo P-gp, več zdravil kopičijo v rakavih celicah, toksičnost ADR je izboljšana in MDR se odpravi. Ti rezultati nudijo vpogled v novo strategijo, ki vključuje uporabo PAB, da zavira MDR želodca raka pri ljudeh.

Ena središče našega eksperimenta je zaviralni učinek pseudolaric kisline B na podkožne presadkov človeškega adenokarcinomom želodca in primerjavo anti-tumorskih učinkov zdravil med različnimi skupinami zdravljenja. Poleg tega je značilnost SGC7901 celic in celic SGC7901 /ADR so različni. Skozi naše dveh pre-eksperiment in formalni eksperiment, smo vsi ugotovili, obseg tumor SGC7901 /ARS celic ni bila večja od SGC7901 celic. Mi hipotezo volumen tumorja se lahko povezan z števila celic, čas rasti, značilne celic in druge vrste dejavnikov. Zato smo ne glede na obseg tumorja med SGC7901 celičnih presadkov in SGC7901 /ADR celic presadkov. Poleg tega smo špekulirajo, da bi bila sprememba telesne mase pri miših povezana predvsem toksičnosti zdravil in nimajo pomembnega odnosa do volumen tumorja v našem poskusu.

Drugi poudarek našega eksperimenta je osnovni molekularne mehanizme, ki sodelujejo pri odpornosti proti več. Tako smo le zasnovan NS kontrolna skupina celic presadkov SGC7901 kontrast in potrdite izraze treh vrst beljakovin iz celičnih presadkov SGC7901 /ARS so dejansko precej višja od tiste iz mobilnih ksenograftih SGC7901. Poleg tega, ker je odziv SGC7901 celic proti raku drog precej bolj občutljiva kot SGC7901 /ARS celic v obeh osnovnih in kliničnih poskusov, kako izboljšati občutljivost odpornosti proti več celic proti raku drog, je naša raziskava poudarek. Zato nismo primerjali izraze Cox-2, PKC-a in P-gp za tumorje iz SGC7901 in različnih obdelav iz te skupine, razen za NS kontrolno skupino, ki ga Western Blot in imunohistokemičnim barvanjem.

Naša raziskava je odkrila, da je zeliščni diterpenoid PAB ne le znatno zatreti želodčni rak SGC7901 celice in vivo, ampak tudi prikaže očitne zaviralno smeri tumorjev SGC7901 /ADR celic zdravila odpornih. Poleg tega bi lahko kombinacija PAB z ADR zavirajo rast raka želodca in razvoj presadkov v golih miših. Treba je omeniti, da je bil kot vrsta tradicionalne kitajske medicine učinek PAB od telesne teže golih miših precej nižja od ARS v našem poskusu, kar je očitna prednost, ki omogoča PAB bolj varno in sprejemljivo drog za zdravljenje raka. PAB morda ne bo le nova učinkovita zdravila za zaviranje rasti raka želodca in ki spreminja MDR, vendar se lahko uporablja tudi kot odličen adjuvans s tradicionalnimi kemoterapevtiki in operativnega zdravljenja po nadaljnji razvoj in raziskave.

v tej študiji, smo pregledali, prvič, zaviralni učinek PAB proti raku človeške želodčne in njegov preobrat učinek na MDR vivo preko ksenograftov golih modelu miši. Ugotovili smo, da je bila njena zaviranje MDR posredovana preko Cox-2 /PKC-alfa /P-gp pot, ki zagotavlja pomembno teoretično osnovo glede molekularne mehanizme zdravljenja raka želodca o. Vendar nismo raziskovali mehanizem MDR v zvezi z genske ekspresije in regulacije. Kot so molekularne mehanizme za vzvratno MDR izjemno zapletena in več vrst proteini, genov in dejavnikov lahko vključeni, lahko zanke, ki smo predlagali le del mehanizma za vzvratno MDR. Bolj poglobljeno in betonske regulacijski mehanizmi je treba pojasniti v prihodnjih študijah.

Na koncu PAB ima pomemben zaviralni učinek na raka želodca in vivo in lahko obrne MDR raka želodca, da kemoterapije drog. Mehanizem proti MDR je posredovana vsaj delno skozi Cox-2 /PKC-alfa /P-gp poti s. Naša raziskava ponuja veliko možnosti za nadaljnje preiskave PAB v zdravljenju raka želodca.

Podpora Informacije
Kontrolni S1.
ARRIVE smernice Kontrolni
doi:. 10,1371 /journal.pone.0107830.s001
(DOC)

• Plos ONE: kemoterapijo ali Ciljno Therapy kot drugi liniji zdravljenja napredovalega želodca raka. Sistematični pregled in Meta-analiza Objavljeno Studies
• Plos ONE: intraperitonealna IL-17-Pozitivna mastocitov so glavni vir za IL-17, ki lahko napoveduje preživetje želodčnega raka Patients