PLoS One: A gátló hatását Pseudolaric Acid B gyomorkarcinóma és multidrog rezisztencia keresztül Cox-2 /PKC-α /P-gp Pathway

absztrakt katalógusa

Cél katalógusa

Annak vizsgálatára, a gátló hatása pseudolaric sav B szubkután xenograftjai emberi gyomor adenokarcinóma és a molekuláris háttere vonni annak több szerrel szembeni rezisztencia. Katalógusa

módszerek

emberi gyomor adenokarcinóma SGC7901 sejtek és a gyógyszer-rezisztens SGC7901 /ADR sejteket injektáltunk csupasz egerekbe, hogy létrehoz egy szubkután xenograft modellben. A hatások a pseudolaric sav B vagy anélkül adriamicinnel kezelés hasonlítottuk össze, hogy meghatározzuk a tumor mérete és súlya. Ciklooxigenáz-2, fehérje kinaseC-α és a P-glikoprotein expressziós szinteket határoztuk meg immunhisztokémiával és Western-blottal.

Eredmények

Pseudolaric sav B szignifikánsan csökkentette a tumor által indukált SGC7901 sejtek és SGC7901 /ADR sejtekben. A kombináció a pseudolaric sav B és a hagyományos kemoterápiás gyógyszer adriamicin kiállított jóval hatékonyabb gátló hatást a növekedés a gyomorrák in vivo, mint a kezelést bármelyik pseudolaric sav a B vagy adriamicinnel egyedül. Protein expressziós szintje a ciklooxigenáz-2, fehérje kinaseC-α és a P-glikoprotein gátolta által pseudolaric sav B önmagában vagy adriamicinnel kombinálva a SGC7901 /ADR sejt xenograftok.

Következtetés

Pseudolaric sav B egy jelentős gátló hatást és egy adalék gátló hatást adriamicinnel kombinálva a növekedésre a gyomorrák in vivo, ami megfordítja a multidrog rezisztencia gyomortartalom neoplazma a kemoterápiás szerek által mTOR gátlása miatt csökken a Cox-2 /PKC-α /P- gp /mdr1 jelátviteli útvonal. katalógusa

Citation: Sun Q, Li Y (2014) gátló hatását Pseudolaric Acid B gyomorkarcinóma és multidrog keresztül Cox-2 /PKC-α /P-gp útvonal. PLoS ONE 9 (9): e107830. doi: 10,1371 /journal.pone.0107830 katalógusa

Szerkesztő: Soumitro Pal, Bostoni Gyermekkórház & Harvard Medical School, Amerikai Egyesült Államok

Beérkezett: 2014. május 15-; Elfogadva: augusztus 20, 2014; Megjelent: szeptember 24, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 V, Li. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok elérhetősége: A szerzők megerősítik, hogy az összes adatot a megállapításokat alátámasztó teljes mértékben hozzáférhető, korlátozás nélkül. Minden lényeges adat a papírra. Katalógusa

Forrás: Ezt a munkát támogatott Science Program Alapítvány Shenyang Városi Tudományos és Technológiai Hivatal (1091136-9-02). A fenntartó nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák egyik a világ leggyakoribb rákos [1], és a kemoterápia fontos stratégia ellen gyomorrák [2]. Mivel több kemoterápiás gyógyszerek különböző osztályainak kezelésére használják gyomorrák, az érzékenységet a rákellenes gyógyszerek gyomorrák fokozatosan csökken, és az ellenállás a sok különböző gyógyszerek eltérő kémiai szerkezetű és különböző hatásmechanizmusú is előfordulhat. Ez a fajta rezisztencia nevezik multidrog rezisztencia (MDR), és jelentősen csökkenti a terápia hatékonyságát a gyomor rák. MDR egyre nagyobb problémát jelent a sikeres rákkezelés [3]. Azt találtuk, hogy a fő oka az MDR a rák a túlzott expressziója a P-glikoprotein (P-gp), a termék a humán MDR1 gén. A P-gp egy ATP-függő kiáramlási pumpa, amely képes csökkenteni a kábítószer-felhalmozódás a rákos sejtekben. Azt javasoljuk, hogy a P-gp, jól elfogadott biomarker az MDR, is figyelembe kell venni, mint a molekuláris célpont multirezisztens rákot [4]. A legújabb vizsgálatok kimutatták, hogy a rákos sejtek MDR, az expressziós szintek a ciklo-oxigenáz-2 (COX-2) és egy izoform proteint kinaseC (PKC-α) egyaránt fokozódik, és ezek gátlása visszafordíthatja neoplasztikus MDR [5] - [10]. katalógusa

Pseudolaric sav B (PAB, 1. ábra), a diterpene sav izolált gyökér és a törzs kérgét a fa aranyfenyő kaempferi katalógusa Gordon (Pinaceae) használják hagyományos kínai orvoslás széles spektrumú biológiai funkciók, mint például az anti-gombás hatásokat és anti-termékenység hatásokat. Ezen túlmenően, az anti-angiogén hatásai is fokozatosan felismerte az utóbbi években [11], [12]. A legújabb vizsgálatok kimutatták, hogy a PAB indukálja a növekedés gátlás, sejtciklus és az apoptózis. Sőt, PAB megfordítja a multidrog rezisztencia rákos sejtek [13], [14]. PAB elnyomja a növekedés a gyomor neoplasztikus AGS sejtvonal és indukálja annak apoptózist [15]. Korábbi kutatások kimutatták, hogy a PAB is van egy drámai gátló hatása az emberi gyomorrák SGC7901 sejtek in vitro [16]. Azonban az in vitro vizsgálatok a rákellenes hatását PAB ritkák, és sem az in vivo hatásossága ezen újszerű növényi vegyület tumorok ellen, sem a pontos molekuláris mechanizmus ellen MDR már teljesen vizsgálni.

A cél a jelen tanulmány célja, hogy értékelje az anti-neoplasztikus hatás PAB in vivo, beleértve a fordított MDR, egy xenograft modell meztelen egerekben és vizsgálja meg, hogy PAB mögöttes molekuláris mechanizmusa kapcsolatban van a gátlása MDR keresztül COX-2 /PKC-α /P-gp útvonalon.

anyagok és módszerek

anyagok

RPMI-1640 tápközegben, és magzati borjúszérumot (FBS) sejttenyésztő vásároltunk a Gibco BRL, Gaithersburg , MD, USA. Nyúl anti-Cox-2 monoklonális antitest, egér anti-PKC-α és egér anti-P-gp monoklonális antitesteket szereztünk be a Santa Cruz Corporation, CA, USA. Másodlagos antitestek ellen a nyúl és egér antitestek, sztreptavidin-peroxidáz (SP) készletek, és 3,3'-diaminobenzidin (DAB) kaptuk a pekingi Zhongshan Biotechnology, Kína. BCA protein assay kit és SDS-PAGE gél készítmény kiteket nyert Beyotime Intézet Biotechnológiai, Shanghai, Kína. PAB-ben vásárolt a Liaoning Intézet kábítószer-ellenőrzési, Kína No. 201003 (a tisztaság: 98%). Adriamicin (ADR) kapunk Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd., Kína No. 120906. Tween80 és polietilén-glikol a Sigma Chemical, St. Louis, MO, Amerikai Egyesült Államok.

Sejtkultúra katalógusa

az emberi gyomor adenokarcinóma SGC7901 sejteket a központi laboratóriumában Shengjing kórház csatlakozott a kínai Orvostudományi Egyetem [16], és adriamicin-rezisztens SGC7901 /ADR sejteket tehetséges származó Intézet Digestive Diseases in Xijing kórház csatlakozott a negyedik Katonai Orvostudományi Egyetem [17]. Emberi gyomor adenokarcinóma SGC7901 sejtek és adriamicin-rezisztens SGC7901 /ADR sejteket RPMI-1640 tápközegben, amelyet 10% FBS-sel és antibiotikumokkal (100 E /ml penicillin és streptomicin), 5% -os CO _{2, nedvesített inkubátorban 37 ° C-on. ADR (1 ng /ml) adtunk a SGC7901 /ADR sejttenyésztési tápközeg, hogy segítsen fenntartani a MDR. A sejteket a logaritmikus növekedési fázisban centrifugáljuk és hígítjuk RPMI-1640 közegben, hogy készítsen egysejtű szuszpenziókat a koncentráció 2,5 × 10 ^{6 /ml vetés.}}

létrehozása csupasz egerek xenograft modell

Az in vivo tumorellenes hatását PAB vizsgáltuk egy rágcsáló xenograft modellben. A modell, 4-6-hetes hím és nőstény immunhiányos BALB /c (nu /nu) egereket, súlya 18-22 g, vásároltunk a Beijing HFK Bioscience Co., Ltd. (Kína) és a tartott akkreditált létesítmények standard körülmények rágcsálóknak (SPF minőségű) Tanszék Laboratory Animal Science. Ötven egereket kiválasztva, és véletlenszerűen két csoportra (25 per csoport). Összesen 25 egereket szubkután injektáltuk 2,5 × 10 ^{6 /ml SGC7901 sejt, 0,2 ml RPMI-1640 közegben a bal hónaljba, a másik 25 egereket injektáltunk SGC7901 /ADR sejtek a jobb hónalji régió alatt csíramentes körülmények között.}

Kísérleti csoportok és a gyógyszeres kezelés

után hét nappal a sejt implantáció, a daganatok lett tapintható (körülbelül 3 mm × 3 mm átmérőjű), majd a két csoport injektált két különböző típusú sejtek véletlenszerűen öt alcsoportban (5 egér per csoport): normál sóoldat (NS) kontroll csoport, TWEEN kontroll csoport, ADR-csoport, PAB-csoport, és PAB + ADR-csoport. A PAB csoportok, Pab (25 mg /kg /nap 0,1 ml-ben) feloldunk vizes oldatát 6% polietilén-glikol, 3% etanolt és 1% Tween80 intraperitoneálisan (i.p.) 20 napon át [13]. Egy azonos térfogatú vizes oldat vagy NS-t injektáltunk a TWEEN kontroll csoportban vagy az NS kontroll csoport, ill. Az ADR-csoport, ADR (1,25 mg /kg 0,1 ml) hígítjuk, az NS-ben adtuk i.p. naponta 20 napon [18]. A daganatot hordozó egereknek mind Pab (25 mg /kg /nap) és az ADR (1,25 mg /kg /nap) i.p. ugyanebben az időszakban a PAB + ADR-csoport. Kezelés után az egereket minden csoportból leöljük, és a tumor minták kétoldalú hónaljtájékokon lemértük, és kimetszettük immunhisztokémiai és Western-blot-analízissel. Ezt a vizsgálatot végeztek szigorúan összhangban az ajánlásokat a útmutató a Care és a laboratóriumi állatok felhasználását a National Institutes of Health. A protokoll hagyta jóvá a Bizottság Etikai Állatkísérletek az Shengjing kórház csatlakozott a Kínai Orvostudományi Egyetem (engedély száma: 2013PS144K). Az egereket megöltük alatt 10% klorálhidrátok érzéstelenítés, és minden erőfeszítést tettek arra, hogy minimálisra csökkentsék a szenvedést. Katalógusa

mérése és számítása tumor térfogata és tömege katalógusa

A testtömeget minden nap megfigyeljük, és két merőleges átmérő (hosszúság és szélesség mm-ben) a tumorok mértük minden két napig féknyereg az egész kezelési periódus alatt. A tumor térfogat becsültük meg kétdimenziós mérések és a következőképpen kell kiszámítani: a tumor térfogata (mm ^{3) = hossz (mm) × szélesség 2 (mm) /2. A relatív tumortérfogat (RTV) a következőképpen számítottuk: RTV = (átlagos tumortérfogat a terápia alatt) /(átlagos tumortérfogat elején terápia). A tumorellenes hatásai PAB és /vagy ADR becsültük az átlagos gátlási arány (IR) a tumor növekedésének a következő egyenlet segítségével: IR (%) = [(1-átlag RTV a hatóanyaggal kezelt csoport /átlag RTV NS kontrollcsoport ) × 100] [19]. A relatív testtömeg egerek alkalmazásával számítottuk W _{T /W 0 index, ahol W t volt, testtömegétől napján mérés, és W 0 volt a testtömeg a kezelés első napján. A testtömeg változása napon az 1. és 20, ami a kezdete és a kísérlet végén, illetve arra használták, hogy értékelje és elemezze a drogok hatásainak a testsúly [20].}}

immunhisztokémiai festését kifejezés a COX-2, a PKC-α és a P-gp

daganatmintákat paraformaldehiddel fixáltuk, feldolgozott rutinszerűen beágyazásával paraffinba, majd vágva 4-um szakaszok. Miután hematoxilin-eozin (HE) festés, a sejteket a gyomorrák xenograftok figyeltek fénymikroszkóp alatt. Az expressziós szinteket a COX-2, a PKC-α és a P-gp-ben betakarított tumorsejteket alkalmazásával határoztuk meg az SP módszerrel. Röviden, miután viaszmentesített és rehidratált, metszeteket 0,3% -os H _{2 O 2-oldattal mossuk és egy mikrohullámú citromsav pufferben 15 percig letölteni antigéneket. A szeleteket blokkoljuk normál kecske szérummal 30 percig 37 ° C-on és próbaként nyúl monoklonális antitest a Cox-2 és az egér monoklonális antitestek, hogy a PKC-α és a P-gp 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán át (összes antitesteket hígítottuk 1 :300). Biotinilált anti-nyúl IgG-vel és anti-patkány IgG-t adtunk hozzá, és inkubáltuk 37 ° C-on 30 percig, mielőtt az enzim konjugált HRP-streptavidin adunk hozzá. Ezen túlmenően, 3, 3'-diamino-benzidin (DAB) alkalmaztunk a kromogén. A metszeteket hematoxilinnel ellenfestettük dehidratált alkohol, és szerelt semleges balzsam. A kontrollokat elő, szekunder ellenanyagok használatával csak. Öt mező az egyes szekciók minden egér minden csoportban választottak ki képgyűjteményt. Az eredményeket analizáltuk és összehasonlítottuk statisztikailag NIS használatával-Elements Br 3.0 szoftver, és az átlagos optikai sűrűséget kapunk számszerűsíteni az expressziós szintek a COX-2, a PKC-α és a P-gp.}

Western-blotot, Cox -2, PKC-α és a P-gp nude egerekben xenograftok

összesen 100 mg friss-fagyasztott tumor szövetekben legalább három egereket az egyes csoportok lemértük, és kiegészített rádió immunprecipitációs vizsgálattal (RIPA) lízispufferben [amely 100 ng /ml fenil-metánszulfonil-fluorid (PMSF)]. Miután por alakú ollóval kivonatokat homogenizáljuk ultrahangos. Centrifugálás után 14000 rpm, 4 ° C-on 30 percen keresztül, egy felülúszó mintát -80 ° C-on Western-blottal. A fehérje koncentrációját kivonatok alkalmazásával határoztuk meg bicinchoninsav- (BCA) fehérje assay kit. Összesen 100 ng fehérjét tartalmaz az egér denaturáló körülmények (100 ° C, 5 perc) elektroforézisnek nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gél elektroforézissel (SDS-PAGE), 8% -os elválasztó gél és elektrotranszferrel PVDF membránokra egy nedves transzfer rendszer 100 V (COX-2, a PKC-α, β-aktin 100 percig, és a P-gp 3 H). Blokkolás után 5% -os zsírmentes tejpor 1 × TBST (Tris-pufferolt sóoldat, amely 0,1% Tween-20), 90 percig, A membránokat ezután inkubáljuk a primer ellenanyaggal [nyúl monoklonális antitest a Cox-2 (1:400) vagy egér monoklonális antitestek PKC-α (1:200) és P-gp (1:200), a β-aktin belső kontrollként fehérje Loading] egy éjszakán át 4 ° C hőmérsékleten. Az antitest kötődést vizualizáltuk peroxidáz-kapcsolt szekunder kecske anti-nyúl antitesttel (1:2000) és kecske anti-egér antitesttel (1:2000) 1,5 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a membránokat tettük láthatóvá fokozott kemilumineszcencia (ECL) reagenssel. Az eredményeket analizáltuk Image J szoftver.

Statisztikai analízis

Minden adat van bemutatva, mint az átlag ± standard eltérés, és a többszörös összehasonlításokat bármely két, a kezelt csoportok értékeltük egy- ANOVA segítségével SNK és LSD módszerek SPSS 17.0 szoftver. A kapcsolat a testtömeg változása és a tumor térfogatát elemeztük Pearson korrelációs elemzés. p értékek 0,05-nél kisebb tekinthető szignifikánsnak. katalógusa

Eredmények katalógusa

gátló hatásának PAB növekedésére humán gyomorrák katalógusa

A tumorok valamennyi kezelt csoportban kialakult könnyen után a beültetés egysejtű szuszpenziókat, és a kialakulása aránya 100% volt. Amikor a xenograftok nyilvánvalóvá vált, nem volt szignifikáns különbség az átlagos térfogata a xenograftok között a különböző csoportok (1. táblázat), és a tumor térfogatát követtük nyomon különböző időpontokban minden csoportban. A görbék a tumor növekedés a két sejtvonalat graphed (ábra 2A, 2B). Amint az 1. táblázatban látható, a SGC7901 sejt-kezelt csoportokban, nem figyeltünk meg szignifikáns különbséget a PAB-csoport és az ADR csoport az átlagos relatív mennyisége a átültetést hordoznak (p 0,05), és az IR 56,4% volt, és 59,0%, illetőleg. A túl ADR hogy PAB eredményezett nagyobb tumorellenes hatását, mint a PAB önmagában vagy ADR képest (p < 0,05), amelynek IR 88,1%. A gátló hatás a PAB csoport erősebb volt képest, hogy az ADR-csoport a xenograftjai SGC7901 /ADR sejtek, és az IR értékek 64,1%, illetve 21,9% -kal (p < 0,05). A tumor növekedés gátlás volt nyilvánvaló a kezelt egerekben PAB kombinált ADR, egy IR 85,8%. Az eredmények a tumor tömegének a különböző csoportokban tovább támogatja az eredmények tekintetében a hangerőt az egerek vizsgálatára. Ábra 2C és 2D a változtatások mutatja, a relatív testtömeg az egerek a tíz csoportban. A testsúly hasonló volt a kontroll csoportok és a PAB-kezelt csoportban. Ugyanakkor a testtömeg csökkent a kombinációs kezelt csoportok és ADR csoportok, és a csökkenés az ADR csoportok nyilvánvalóbb volt, (p < 0,05). Ezen kívül, a 3. ábra egy közvetlen összehasonlítása a tumor mérete SGC7901 sejtek és SGC7901 /ADR sejtek a különböző csoportok. A kapcsolat a testtömeg változás és a tumor térfogata nem volt szignifikáns (p 0,05). A dózisok vizsgálandó jól tolerálták az egerek, és egyetlen állat letalitás volt megfigyelhető a kísérlet során.

immunhisztokémiai festését expresszióját a COX-2, a PKC-α és a P-gp

Minden tumorok minden csoportban, via immunhisztokémiai festéssel, megjelenített pozitív expresszióját a COX-2, a PKC-α és a P-gp-fehérjéket. Cox-2 és a PKC-α expressziót úgy definiáljuk, mint pozitív, ha a foltos régió a tumorsejtek volt a citoplazmában, és a P-gp festődést tekintettük pozitívnak, ha volt festődés a membrán és a citoplazmában. A fehérjéket megfestettük sárga vagy barna, optikai mikroszkóppal megfigyelés (4. ábra). A SGC7901 /ADR sejtvonal, a festés ezen fehérjék a kontroll csoportokban erősebb volt, mint a többi csoportban (p < 0,05). PAB kezelés csökkentette az intracelluláris festés a COX-2, a PKC-α és a P-gp összehasonlítva az ADR-kezelt csoportban (p < 0,05). Miután PAB és az ADR kezelés, az intracelluláris festéssel ezen fehérjék volt gyérebb, és gyengébb képest, hogy a többi csoportban. A xenograftok a két NS kontroll csoport, a festés A P-gp a SGC7901 sejtekben lényegesen alacsonyabb volt, mint a SGC7901 /ADR sejtek (p < 0,05). Az elemzés a festés intenzitása a COX-2, a PKC-α és a P-gp expressziója feltárta ugyanazt az eredményt (2. táblázat).

hatása PAB on Cox-2, a PKC-α, és a P-gp expressziójához egerekben xenograftok

megvilágítását molekuláris mechanizmus részt vesz a megfordítása hatásait PAB a SGC7901 /ADR xenograftok in vivo, a kifejezés a COX-2-PKC-α, és a P-gp származó tumorokban eltérő reagens-kezelt csoportok határoztuk meg Western-blot-analízis. Amint az 5. ábrán látható, az NS kontroll csoport, az expressziós szintek a COX-2, a PKC-α, és a P-gp a SGC7901 sejt xenograftjait alacsonyabbak, mint az SGC7901 /ADR-sejt tumorok (p < 0,05) . A daganatok a SGC7901 /ADR sejtekben az expressziós szintek a három fehérje az érdeklődés az NS kontroll csoport és a TWEEN kontrollcsoport szignifikánsan magasabbak voltak, mint a többi csoportban (p < 0,05), és nem volt szignifikáns különbség a két csoportban (p 0,05). Az expressziós szinteket a COX-2, a PKC-α, és a P-gp a PAB-kezelt csoport szignifikánsan alacsonyabb volt, szemben azokkal az ADR-kezelt csoportban (p < 0,05). A kifejezés a β-aktin használtunk belső kontrollként, és az expressziós szinteket, a COX-2, a PKC-α, és a P-gp csökkentek szekvenciálisan között a kontroll csoportban, ADR-csoport, PAB-csoport és PAB + ADR csoportban (p <0,05). katalógusa

Vita katalógusa

PAB egyik legfontosabb biológiailag aktív összetevője a gyökér kérge gyógynövény aranyfenyő kaempferi katalógusa és kijelzők jelentős citotoxicitást felé több rákos sejt vonalak. In vitro vizsgálatok azt is kimutatták, hogy megfordítja a MDR carcinoma gátlása révén overexpressziója P-gp nélkül nyilvánvaló mellékhatások [13], [15], [20], [21]. Azt is kimutatták, hogy a PAB van egy tumorellenes hatást egerekben xenograft modell a humán vastagbélrák és hepatocelluláris karcinóma [13], [20], és nincs ismert mellékhatása PAB állatokon számoltak be. A mi korábbi tanulmány kimutatta, hogy PAB egy potens gátló hatást a SGC7901 sejtvonal in vitro és apoptózist indukál a gyomorrák sejtek keresztül a kaszpáz útvonal [16]. Jelen in vivo vizsgálat további bizonyíték arra, hogy a PAB ellen védő gyomor tumorok egér xenograftmodellekben segítségével SGC7901 sejtek és SGC7901 /ADR sejtekben. Előzetes kísérletek kimutatták, hogy a PAB 25 mg /kg nem csak gátolja a gyomor rák, de az is jól tolerálták egerekben. Sőt, magában foglalta a TWEEN kontrollcsoport, hogy kizárja a befolyása a vizes oldatot, hogy használták, hogy feloldódjon PAB tumorokra [13]. Az érzékeny sejtek, a rákellenes hatását PAB nem eredményezett szignifikáns különbséget összehasonlítva ADR, a hagyományos kemoterápiás gyógyszer. Ezen túlmenően, PAB egy biológiailag aktív vegyület, amely gyakorolt ​​hátramenti hatása ellen SGC7901 /ADR sejtvonal tumorok célzott jelátviteli által aktivált P-gp túlzott expressziója in vivo.

P-gp 170-kDa membránon fehérje úgy működik, mint egy gyógyszer efflux pumpa, ami folyamatos hiba az intracelluláris felhalmozódása kábítószerek [22]. A multidrog rezisztencia fenotípus a fő oka a tumor kemoterápia kudarc és elsősorban a termék a overexpressziója P-gp a legtöbb rákos megbetegedések, beleértve a gyomor daganatok [23]. Sőt, a gátlása ezen reakcióút lehet egy módja, hogy megfordítsa a MDR gyomorrák-sejtek [3], [24].

COX-2 indukálható enzim, amely katalizálja az arachidonsav prosztanoidok ( PG) és részt vesz több fiziológiás és patológiás események által kiváltott különféle gyulladásos és mitogén ingerek [25]. Egy erős összefüggést a MDR és a túlzott mértékű expressziója a COX-2-t számoltak be számos különböző típusú daganatok. Ezek a korábbi eredmények azt sugallják, hogy a COX-2 modulálja az expresszióját és aktivitását a P-gp és részt vesz a fejlesztés a MDR-fenotípus [26] - [28]. Ezen túlmenően, a felhalmozott bizonyíték bebizonyította, hogy a COX-2-gátlók képesek érzékennyé rákos sejteket az anti-proliferatív hatásának kemoterápiás szerek megváltoztatásával aktivitását az ATP-kötő kazetta fehérje. Cox-2-inhibitorok is fordított MDR blokkolásával COX-2-közvetített növekedését MDR1 expressziója és aktivitása a rák, mind in vitro és in vivo [6], [7], [29]. Ezért feltételezzük, hogy a COX-2-t expresszióját szabályozzák a P-gp tumor szövetekben, és hogy gátló ez az útvonal nagy jelentőségű, hogy megfordult a rezisztencia a rák kemoterápiás szerek.

Azt találtuk, hogy a SGC7901 /ADR sejtes daganatok esetében az expressziós szintek a COX-2 és P-gp az NS kontroll csoport nyilvánvalóan magasabb, mint azok, amelyek a xenograftjai SGC7901 sejteket. Az injekció beadása után a PAB, nyilvánvaló csökkenése ezek expressziós szintet figyeltünk meg. Azonban, ADR kevésbé volt hatékony elnyomása a COX-2 és P-gp expressziós szintjének a SGC7901 /ADR sejt xenograftok, és ha együtt PAB, alacsonyabb szintű fehérjék volt megfigyelhető. Így azt javasolta, hogy a modulációs a COX-2 expresszió által PAB csökkentheti a expressziója és aktivitása A P-gp, gátolják a növekedést és apoptózist indukál, továbbá a meghatalmazotti együttműködve ADR a elnyomása a gyógyszer-rezisztens tumorok, és még a megfordítása az MDR-fenotípus gyomorrák.

PKC egy szerin /treonin-kináz részt vesz a jelátviteli szükséges sejtproliferáció és differenciálódás [30]. A PKC izoformák expressziója és aktivitásának növekedése PKC-α a legszorosabban kapcsolódó szabályozása az MDR fenotípus humán gyomorrák [31]. Az itt közölt eredmények támogatják azt az elképzelést, hogy a PKC-α foszforilálja a P-gp, modulálja a P-gp efflux funkció, és végül vezet a gyógyszer-rezisztencia [32]. A gátlás a PKC-α egy specifikus inhibitor vagy bontani a PKC-α siRNS-sel vezet csökkentett MDR1 expressziója, fokozott toxicitást a rákellenes gyógyszerek, és fordított MDR [8] - [10]. Ezért azt feltételezzük, hogy egy PKC-α jelátviteli rendszer szerepet játszhat modulálásában MDR1 expressziója gyomorrákban.

Normális körülmények között, a PKC inaktív a sejtekben, és annak aktiválása összefügg upstream PGE aktiválást. A COX-2 kapcsolunk a membránhoz kapcsolódó prosztaglandin E2 szintáz (MPGES-1), és szintézise PGE által közvetített ezen fehérjék növekszik, és aktiválja a downstream PKC-α útvonal [33]. Bebizonyosodott, hogy a szelektív COX-2-gátlás specifikus inhibitorok vagy siRNS van terápiás hatása expresszióját gátló PKC-α és a P-gp, ugyanakkor, ugyanabban az időben, irányváltó MDR [26], [34]. Egy tanulmány kimutatta, hogy a PGE2 közvetíti indukció MDR1 expressziója útján PKC útvonal [35]. A kísérleteink eredményei igazolták, hogy a PAB képes gátolni a PKC-α expressziója xenograftok a SGC7901 /ADR sejtvonal, amelynek hatása erősebb volt, mint az ADR. Ezen túlmenően, amikor a PAB kombináltuk ADR, a PKC-α-expresszió-gátlási hatásosságot még erősebb. A változás tendenciája a PKC-α expresszió összhangban áll, hogy a COX-2 és P-gp különféle reagenssel kezelt csoportban a gyógyszer-rezisztens SGC7901 /ADR daganatok. Bebizonyosodott, hogy a PAB indukálja a növekedés és apoptózis útján gátolják a Cox-2 útvonal rákos sejtekben [20], [21]. Feltételezzük, hogy a PAB gátolja a kifejezés a COX-2-SGC7901 /ADR sejt xenograftok, és hogy a csatlakozó között, Cox-2 és MPGES-1 csökkenti a szintézis a PGE, ami csökkenti az aktiválás downstream PKC-α. Minthogy a foszforiláció A P-gp gátolt, több gyógyszer felhalmozódnak a rákos sejtek, a toxicitása ADR fokozott és MDR megfordul. Ezek az eredmények betekintést nyújt egy új stratégia használatával járó PAB, hogy gátolják az MDR humán gasztrikus rák.

Egy hangsúly a mi kísérlet a gátló hatása pseudolaric sav B szubkután xenograftok az emberi gyomor adenokarcinóma és az összehasonlítást az anti-tumor hatását gyógyszerek a különböző kezelési csoportokban. Sőt, a jellemző SGC7901 sejtek és SGC7901 /ADR sejtek különböző. A mi két előre kísérlet és egy hivatalos kísérlet, mindannyian talált a tumor térfogata SGC7901 /ADR sejtekben, nem volt nagyobb, mint a SGC7901 sejteket. Feltételezésünk a tumor térfogata esetleg összefüggésbe hozhatók a sejtszám, a növekedés ideje, jellemző a sejtek és más típusú tényezők. Ezért nem hasonlítottam össze a tumor térfogata közötti SGC7901 sejt xenograftokkal és SGC7901 /ADR sejt vizsgálatára. Ezen túlmenően, azt feltételezzük, hogy a testsúly változás az egerek lehet főként a toxicitása gyógyszerek, és nem szignifikáns kapcsolatot a tumor térfogatának a mi kísérletben.

A másik hangsúly a mi kísérlet a mögöttes szerepet játszó molekuláris mechanizmusok a több szerrel szembeni rezisztencia. Így már csak a tervezett NS kontroll csoport SGC7901 sejt xenograftokkal a kontrasztot és hagyja jóvá a kifejezéseket a háromféle fehérje SGC7901 /ADR sejt xenograftokkal valóban lényegesen magasabb, mint amelyet a SGC7901 sejt vizsgálatára. Emellett, mivel a válasz SGC7901 sejtek rákellenes gyógyszerek helyett sokkal érzékenyebb, mint SGC7901 /ADR sejtekben egyaránt alap- és klinikai kísérletek, hogyan lehetne javítani az érzékenységet a több szerrel szembeni rezisztencia sejtek rákellenes gyógyszerek a kutatás középpontjában. Ezért, még nem képest a kifejezéseket a COX-2, a PKC-α és a P-gp számára a tumor SGC7901 és a különböző kezelések ennek a csoportnak kivéve NS kontrollcsoport Western blot és immunhisztokémiai festéssel.

a tanulmány felfedezte, hogy a növényi diterpenoid PAB nemcsak jelentősen elnyomott gyomorrák SGC7901 sejtek in vivo, hanem megjelenik nyilvánvaló gátló hatásait felé tumorok a gyógyszer-rezisztens SGC7901 /ADR sejtekben. Ezen túlmenően, a kombináció a PAB ADR lehetett gátolja a növekedést a gyomorrák és a fejlesztés a xenograftok csupasz egerekben. Érdemes megemlíteni, hogy a típus a hagyományos kínai orvoslás, a hatás a PAB testtömegétől nude egerek meglehetősen kisebb, mint a ADR kísérletünkben, ami egy nyilvánvaló előnye, hogy teszi PAB egy biztonságos és tolerálható gyógyszer a rákterápiában. PAB lehet, hogy nem csak egy új, hatásos gyógyszer a gátlását a növekedés a gyomorrák és visszafordítása annak MDR, de ez is lehet használni, mint egy kiváló adjuváns hagyományos kemoterápiás és sebészeti terápiát követően további fejlesztés és kutatás.

a jelen vizsgálatban megvizsgáltuk, az első alkalommal, a gátló hatása PAB elleni humán gyomorrák és annak fordított hatása MDR in vivo keresztül xenograft nude egerekben modell. Megállapítottuk, hogy annak gátlása az MDR-t közvetített COX-2 /PKC-α /P-gp-útvonal, amely döntő fontosságú elméleti alapot a molekuláris mechanizmusok gyomorrák terápiát. Azonban még nem vizsgálták a MDR mechanizmus tekintetében génexpresszió és szabályozása. Mivel a molekuláris mechanizmusai irányváltó MDR vannak rendkívül bonyolult és több típusú proteinek, gének és tényezőket is be lehet vonni, a hurok, hogy általunk javasolt lehet, hogy csak egy része a mechanizmus irányváltó MDR. További részletes és konkrét szabályozás mechanizmusokat kell tisztázott jövőkutatás. Katalógusa

Végeredményben PAB jelentős gátló hatással gyomorrák in vivo és fordított az MDR gyomorrák, hogy a kemoterápiás szerek. A mechanizmus ellen MDR közvetíti legalább részben keresztül COX-2 /PKC-α /P-gp útvonalon. A tanulmány széles kilátások jövőbeni vizsgálatok PAB gyomorrákban terápiában. Katalógusa

alátámasztó információk katalógusa ellenőrzőlista S1.
ARRIVE iránymutatás ellenőrzőlista. katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0107830.s001 katalógusa (DOC) hotelben

• PLoS One: Kemoterápia vagy célzott kezelés második vonalbeli kezelésére előrehaladott gyomorrákban. A rendszeres áttekintése és meta-analízis Megjelent Studies
• PLoS One: tumorba IL-17-pozitív hízósejtek a fő forrása az IL-17 Ez előrevetíti Survival gyomorrákban Patients