PLoS ONE: slopinantis poveikis Pseudolaric Acid B skrandžio vėžio ir naviko atsparumą daugeliui per COX-2 /PKC-alfa /P-gp būdas

Abstract

Tikslas

Jei ištirti slopinantį poveikį pseudolaric rūgšties B ant poodinio audiniuose, žmogaus skrandžio adenokarcinoma ir pagrindinės molekulinius mechanizmus, dalyvaujančių naviko atsparumą daugeliui vaistų.

metodai

Žmogaus skrandžio adenokarcinoma SGC7901 ląstelės ir vaistams atsparių SGC7901 /ADR ląstelės buvo švirkščiamas į nuogas pelių nustatyti poodinių svetimo modelį. Į pseudolaric rūgšties B su arba be adriamicinas gydymo poveikis buvo lyginamas nustatant naviko dydį ir svorį. Ciklooksigenazę-2, baltymų kinaseC-α ir P-glikoproteino ekspresijos lygis buvo nustatomas imunohistocheminiu ir Vakarų dėmė.

Rezultatai

Pseudolaric rūgštis B reikšmingai slopino sukeltas SGC7901 ląstelių naviko augimą ir SGC7901 /ADR ląstelės. Iš pseudolaric rūgšties B ir tradicinių chemoterapija narkotikų adriamiciną derinys eksponuojami stipresnis slopinamąjį poveikį skrandžio vėžio augimo in vivo, nei gydymo arba pseudolaric rūgšties B arba adriamiciną vien. Baltymo ekspresija lygiai ciklooksigenazės-2, baltymų kinaseC-α ir P-glikoproteino buvo nuslopintos atskirai arba kartu su adriamiciną į SGC7901 /AGS ląstelių audiniuose, pseudolaric rūgšties B.

Išvada

Pseudolaric rūgštis B turi didelę slopinamąjį poveikį ir papildomu slopinančio poveikio kartu su adriamiciną dėl skrandžio vėžio augimo in vivo, kuris panaikina atsparumą skrandžio navikas chemoterapijos vaistai vaistams iki downregulating COX-2 /PKC-α /P- GP /MDR1 signalizacijos kelią

nurodomoji dalis:. Saulė Klausimas Li Y (2014) slopinantis poveikis Pseudolaric Acid B skrandžio vėžio ir naviko atsparumą daugeliui per COX-2 /PKC-α /p-gp keliu. PLoS ONE 9 (9): e107830. Doi: 10,1371 /journal.pone.0107830

redaktorius: Soumitro Pal, Vaikų ligoninė Bostono "& Harvardo medicinos mokyklos, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Gegužės 15, 2014; Priimtas rugpjūčio 20, 2014 m Paskelbta: 24 rugsėjo, 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 Saulės, Li. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų prieinamumas:. autoriai patvirtina, kad visi duomenys, kuriais grindžiamos išvados visiškai prieinama be apribojimų. Visi atitinkami duomenys yra per popieriaus

Finansavimas:. Šis darbas buvo remiamas mokslo programos fondo Shenyang savivaldybės mokslo ir technologijų biuras (1091136-9-02). Finansuotojas neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

skrandžio vėžys yra viena labiausiai pasaulyje paplitusių vėžio [1], chemoterapija yra svarbi strategija prieš skrandžio vėžio [2]. Nes kelis chemoterapiniai vaistai skirtingų klasių yra naudojami gydyti skrandžio vėžio, kuris yra iš priešvėžinių vaistų jautrumas skrandžio vėžio palaipsniui sumažėja, ir gali atsirasti atsparumas daugeliui įvairių vaistus, turinčius skirtingų cheminių struktūrų ir skirtingais mechanizmais. Toks atsparumo tipas vadinamas naviko atsparumą daugeliui vaistų (MDR) ir žymiai sumažėja gydymo efektyvumą skrandžio vėžio. MDR tampa pagrindine problema sėkmingo vėžio gydymo [3]. Ji buvo atrasta, kad pagrindinė priežastis, dėl MDR vėžį yra P-glikoproteino (P-gp), iš žmogaus MDR1 geno produkto raiška. P-glikoproteino yra ATP-priklauso išsiurbimo siurblį, kad gali sumažinti vaisto susikaupimo į vėžio ląsteles. Siūloma, kad P-gp, gerai priimtas biologinis MDR, taip pat turėtų būti laikomas molekulinės taikinio vaistams atsparios vėžiui [4]. Neseniai atlikti tyrimai parodė, kad vėžinių ląstelių su MDR, ekspresijos lygis ciklooksigenazės-2 (COX-2) ir baltymų kinaseC (PKC-alfa) izoforma yra tiek aktyvinama, ir jų slopinimas gali pakeisti neoplazminė MDR [5] - [10].

Pseudolaric rūgštis B (PAB, 1 paveikslas), diterpene rūgštis išskiriama iš šaknų ir kamieno žievė medžio, Pseudolarix kaempferi
Gordonas (pušiniai), naudojamas tradicinė kinų medicina už jos plataus spektro biologinių funkcijų, pavyzdžiui, priešgrybeliniais poveikio ir kovos su vaisingumui. Be to, jos anti-angiogeninių poveikis taip pat buvo palaipsniui pripažintas į Pastaraisiais metais [11], [12]. Naujausi tyrimai parodė, kad PAB skatina augimo slopinimą, ląstelinio ciklo suėmimą ir apoptozę. Be to, PAB apsisuks atsparumą vėžinių ląstelių [13], [14] daugiskaitos. PAB slopina skrandžio neoplastiniu AGS ląstelių linijos augimą ir skatina savo apoptozę [15]. Mūsų ankstesni tyrimai parodė, kad PAB taip pat turi dramatišką slopinančio poveikio žmogaus skrandžio vėžys SGC7901 ląstelėse in vitro [16]. Tačiau in vitro tyrimai priešvėžinio poveikio PAB yra reti, ir nei in vivo veiksmingumas šiame romane žolelių junginys nuo auglių nei savo tikslios molekulinės mechanizmą prieš MDR buvo visiškai ištirtas.

dabarties tikslas tyrimas yra įvertinti anti-neoplastinių poveikį PAB in vivo, įskaitant MDR atstatymo, naudojant svetimo transplantanto modelį nuogas pelių ir ištirti, ar Pab užslėptas molekulinė mechanizmas yra susijęs su MDR slopinimo per Cox-2 /PKC-alfa /p-glikoproteino kelias.

medžiagos ir metodai

medžiagos

RPMI-1640 mitybinė terpė ir vaisiaus jaučio serumo (FBS) ląstelių kultūros buvo įsigytas iš Gibco BRL, Gaithersburg MD, JAV. Triušis kovos su COX-2 monokloninis antikūnas, pelės anti-PKC-alfa ir pelės anti-P-gp monokloniniai antikūnai buvo įsigytas iš Santa Cruz Corporation, CA, JAV. Antriniai antikūnai prieš triušio ir pelės antikūnai, streptavidino-peroksidazės (SP) rinkiniai ir 3,3'-diaminobenzidinu (DAB) buvo gauti iš Pekino Zhongshan biotechnologijos, Kinija. BCA baltymų analizes rinkiniai ir SDS-PAGE gelio paruošimas rinkiniai buvo gauti iš Beyotime Biotechnologijos institutas, Šanchajuje, Kinijoje. PAB buvo įsigytas iš Liaoningo instituto narkotikų kontrolės, Kinija kodas 201003 (grynumu: > 98%). Adriamiciną (AGS) buvo gauta iš Zhejiang HISUN Pharmaceutical Co Ltd, Kinija Nr 120906. Tween80 ir polietilenglikolis buvo įsigytas iš Sigma cheminis, St Louis, MO, JAV.

Mobilusis kultūra

Žmogaus skrandžio adenokarcinoma SGC7901 ląstelės buvo auginamos centrinėje laboratorijoje Shengjing ligoninės susijęs su Kinija medicinos universiteto [16], ir adriamiciną atsparus SGC7901 /ADR ląstelės buvo talentingas iš instituto virškinimo ligų Xijing ligoninės kontroliuojamų ketvirtosios karo medicinos universiteto [17]. Žmogaus skrandžio adenokarcinoma SGC7901 ląstelės ir adriamiciną atsparus SGC7901 /ADR ląstelės buvo auginamos RPMI-1640 terpėje, papildytoje su 10% FBS ir antibiotikų (100 V /ml penicilino ir streptomicino) su 5% CO _{2 drėgnoje inkubatoriuje ne 37 ° C. ADR (1 mikrogramai /ml) buvo pridėta prie SGC7901 /ADR ląstelių kultūros terpėje padėti išlaikyti savo MDR. Ląstelės logaritminis augimo fazėje buvo centrifuguojamas ir skiedžiamas RPMI-1640 terpėje parengti vieno ląstelių suspensijos su 2,5 × 10 ^{6 /ml koncentracijos sėjimo.}}

įsteigimas nuogas pelėmis ksenografiniuose modelį

in vivo, priešnavikinis poveikis PAB buvo nagrinėjama pelių ksenografiniuose modelį. Dėl modelio, 4-6 savaičių amžiaus vyrai ir moterys Imunodeficitinės Balb /c dalis (Nu /Nu) Pelės, sveria nuo 18 iki 22 g, buvo įsigytas iš Pekino HFK biologijos mokslų Co, Ltd (China) ir saugomi akredituotų objektų standartinėmis sąlygomis graužikų (SPF laipsnio) į laboratorinių gyvūnų mokslo departamentas. Penkiasdešimt pelėms buvo atrinkti ir atsitiktinai atrinkti į dvi grupes (25 kiekvienos grupės). Viso 25 pelių, kad bendras buvo po oda įšvirkščiama 2,5 × 10 ^{6 /ml SGC7901 ląstelės 0,2 ml RPMI-1640 terpėje į kairę axillae, ir prie kitų 25 pelių buvo suleistas su SGC7901 /ADR ląstelių į dešinę pažasties srityje pagal gemalo be sąlygomis.}

Eksperimentiniai grupės ir vaistai

per septynias dienas po ląstelių implantavimo, augliai tapo apčiuopiamas (maždaug 3 mm x 3 mm skersmens), o tada, švirkšti į dvi grupes su dviejų skirtingų tipų ląstelių buvo atsitiktinai suskirstyti į penkias pogrupiuose (5 pelėmis kiekvienai grupei): normalus fiziologinis (NS) kontrolinės grupės, TWEEN kontrolinės grupės, ADR GROUP, PAB grupės ir PAB + ADR grupės. Už PAB grupių, PAB (25 mg /kg kūno svorio /d 0,1 ml), ištirpinto vandeninio tirpalo 6% polietileno glikolio, 3% etanolio, ir 1% Tween80 buvo pilvaplėvės ertmę (i.p.) dozės per parą 20 dienų [13]. Identiškas tūris vandeninio tirpalo arba NS buvo įšvirkščiamas į TWEEN kontrolinės grupės arba NS kontrolinės grupės, atitinkamai. Dėl ADR grupės, ADR (1,25 mg /kg 0,1 ml) praskiesti NS buvo vartojamas i.p. per parą 20 dienų [18]. Naviko-guolis pelių buvo skiriami abu PAB (25 mg /kg kūno svorio /d) ir ADR (1,25 mg /kg /per parą) i.p. už tą patį laikotarpį PAB + ADR grupei. Po gydymo, pelės iš kiekvienos grupės buvo paaukota, o buvo sveriami ir rezekcijos imunohistochemiškai navikų mėginiuose dvišalių pažasties regionų ir Vakarų dėmė analizes. Šis tyrimas buvo atliktas griežtai laikantis vadove rekomendacijas dėl priežiūros ir naudojimo laboratorinių gyvūnų iš Nacionalinių sveikatos institutų. Protokolas buvo patvirtintas dėl pranešimo apie gyvūnų eksperimentai su Shengjing ligoninės susijęs su Kinija medicinos universiteto etikos komiteto (leidimo numeris: 2013PS144K). Pelės buvo paaukota pagal 10% chloralio hidrato anestezijos ir buvo dedamos visos pastangos, kad kuo mažiau kentėtų.

matavimas ir apskaičiavimas naviko tūrio ir svorio

buvo stebimas kūno masės kiekvieną dieną, ir dvi statmenos skersmenys (ilgis ir plotis milimetrais) navikų buvo matuojamas kas dvi dienas su žnyplių visą gydymo laikotarpį. Naviko apimtys buvo apskaičiuotas naudojant dvimatę matavimus ir apskaičiuojamas taip: naviko tūris (mm ^{3) = ilgis (mm) × plotis 2 (mm) /2. Santykinis naviko tūris (RTV) buvo apskaičiuota taip: RTV = (vidutinis naviko tūris gydymo metu) /(vidutinis naviko tūris gydymo pradžioje). Priešvėžiniai poveikis PAB ir /arba ADR buvo apskaičiuota su naviko augimo vidutinį slopinimo koeficientas (IR) pagal šią lygtį: IR (%) = [(1-vidutinis RTV narkotikų-gydytoje grupėje /vidutinio RTV iš NS kontrolinės grupės ) × 100] [19]. Santykinis kūno svorio pelėms buvo apskaičiuojamas naudojant W _{T /W 0 indeksas, kur w T buvo kūno svorio matavimo dieną, ir W 0 buvo kūno masė pirmą dieną nuo gydymo pradžios. Į kūno svorio 1 ir 20 dienomis, atstovaujančių pradžios ir pabaigos eksperimento pokytis atitinkamai buvo naudojamas siekiant įvertinti ir analizuoti narkotikų poveikis kūno masės [20].}}

imunohistocheminis dažymas išraiškos COG-2, PKC-alfa ir p-gp

naviko egzemplioriai buvo fiksuotas paraformaldehidu, tvarkomi nuolat įdėdami parafinu, tada supjaustyti į 4-mikrometrai skyriuose. Po hematoksilinu ir eozinas (He) dažymo, ląstelės skrandžio vėžio audiniuose, buvo stebima šviesos mikroskopu. Ekspresijos lygis Cox-2, PKC-α ir P-glikoproteino į auglio ląstelių buvo nustatoma naudojant SP metodą. Trumpai, po to, kai devaškuoti ir rehidrataciją, skaidres buvo inkubuojamos 0,3% H _{2O 2 tirpalo ir džiovinamas į citrinos rūgšties buferio mikrobangų 15 min gauti antigenus. Griežinėliai buvo blokuotos įprastą ožkų serume 30 min 37 ° C temperatūroje ir tyrinėjo su triušio monokloninis antikūnas, kad COX-2 ir pelių monokloninius antikūnus PKC-alfa ir P-gp, esant 4 ° C temperatūroje per naktį (visi antikūnai buvo praskiestų ne 1 :300). Biotinilinto anti-triušio IgG ir anti-žiurkė IgG buvo pridėta ir inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 30 min prieš buvo įtraukta fermentas konjuguoto HRP-streptavidino. Be to, 3, 3'-diaminobenzidinas (DAB) buvo naudojamas kaip chromogeną. Skaidrės buvo counterstained hematoksilinu, dehidratuoti alkoholio ir montuojamas ant neutralios balzamu. Kontrolės priemonės buvo parengtos naudojant tik antriniai antikūnai. Penki sritys kiekviename skyriuje iš kiekvienos pele kiekvienoje grupėje buvo atrinkti vaizdo kolekciją. Rezultatai buvo analizuojami ir lyginami statistiškai naudojant tinklų ir elementai Br 3.0 programinę įrangą, o vidutinė optinio tankio buvo gautas kiekybiškai raiškos lygius, COX-2, PKC-α ir P-glikoproteino.}

Vakarų dėmė COG -2, PKC-α ir p-gp nuogas pelėmis audiniuose,

100 mg šviežių šaldytų navikų audiniuose, iš ne mažiau kaip trijų pelių kiekvieno grupės iš viso buvo sveriami ir papildytas radijo imunoprecipitacijos tyrimas (Ripa) lizės buferio [sudėtyje yra 100 mikrogramų /ml fenilmetansulfonil (PMSF)]. Po sumaltas naudojantis žirklėmis, ekstraktai homogenizuoti ultragarsu. Po to, kai centrifugavimo 14000 rpm ir ties 4 ° C temperatūroje 30 min, plūduriuojančios paviršiuje Pavyzdžio buvo užšaldyti -80 ° C temperatūroje Imunoblotingo. Baltymų koncentracija ekstraktų buvo nustatomi, naudojant bicinchoninic rūgštis (BCA) baltymų reagentq rinkini. A 100 mikrogramų baltymo pelei, kad bendras pagal denatūravimo sąlygomis (100 ° C, 5 minutės) buvo atliekama elektroforezė naudojant natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforezės būdu (SDS-PAGE) dėl 8% atskyrimo gelio ir electrotransferred ant PVDF membranų naudojant šlapias perdavimo sistemą 100 V (Cox-2, PKC-α, β-aktino 100 min, ir P-glikoproteino 3 h). Po blokavimo su 5% Nonfat sauso pieno 1 × TBST (tri-buferinis tirpalas, kuriame yra 0,1% Tween20) 90 min, membranos buvo inkubuojamos su pirminio antikūno [triušio monokloninio antikūno į COX-2 (1:400) arba pelės monokloninius antikūnus PKC-alfa (1:200) ir P-gp (1:200), su beta-aktino kaip vidaus kontrolės baltymų pakrovimo] naktį 4 ° C temperatūroje. Antikūnas rišasi vizualizuojami naudojant peroksidazės-kartu antrinė ožkos anti-triušio antikūnas (1:2000) ir ožkos anti-pelės antikūnas (1:2000) 1,5 h kambario temperatūroje. Tada, membranos buvo vizualizuojami chemiliuminescencijos sustiprinimo (EST) reagentu. Rezultatai buvo analizuojami naudojant Vaizdo J programinę įrangą.

Statistinė analizė

Visi duomenys pateikiami kaip vidutinės vertės ± standartinio nuokrypio ir daugeliui lyginimų tarp bet kurių iš apdorotų grupių dviejų vertino vieno- būdas ANOVA, naudojant SNK ir LSD metodus SPSS 17.0 programa. Tarp kūno svorio kaitai ir naviko tūrio santykiai buvo analizuojami Pearson koreliacijos analize. P vertės yra mažesnės nei 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas.

Rezultatai

slopinantis poveikis PAB apie žmogaus skrandžio vėžio
augimo

navikų visų gydytų grupių suformuota lengvai po yra sudarytas iš viengubų-ląstelių suspensijos implantacijai, ir susidarymo greitis buvo 100%. Kai ksenoimplantai tapo akivaizdu, nebuvo jokių reikšmingų skirtumų vidutinę apimtį iš tarp skirtingų grupių (1 lentelė) audiniuose, ir naviko apimtys buvo stebimi įvairiais laiko momentais visose grupėse. Auglio augimo iš dviejų ląstelių linijų kreivės buvo grafika (pav 2A, 2B). Kaip parodyta 1 lentelėje, SGC7901 ląstelių gydytų grupių reikšmingai nesiskyrė buvo pastebėtas tarp PAB grupės ir ADR grupės vidutinis santykinis apimtys audiniuose, (p > 0,05) ir IR buvo 56,4% ir 59,0%, atitinkamai. ADR be PAB lėmė aukštojo priešvėžinėmis, nei vien tik PAB arba ADR (p < 0,05), kurio 88.1% IR. Slopinantis poveikis PAB grupėje buvo stipresnis palyginti su ADR grupė dėl SGC7901 /AGS ląstelių audiniuose, ir spindulių vertės buvo 64,1% ir 21,9%, atitinkamai (p < 0,05). Naviko augimo slopinimas buvo labiau akivaizdu, pelėms, gydomiems PAB kartu su ADR, su iš 85,8% IR. Naviko masės skirtingų grupių išvados dar labiau sustiprino mūsų rezultatus, susijusius su pelėmis audiniuose, apimties. 2C ir 2D skaičius rodo, santykinio kūno svorio pelėms pokyčius dešimties grupių. Kūno svoris buvo panašus tarp kontrolinių grupių bei PAB-pacientų grupėse. Tačiau, kūno svorį sumažėjo Derinio-pacientų grupėse ir GAS grupių, ir iš GAS grupių sumažėjimas buvo labiau akivaizdu, (p < 0,05). Be to, 3 paveiksle pateikiama tiesiogiai palyginti iš dydžių, auglys SGC7901 ląstelių ir SGC7901 /GAS ląstelių, priklausantiems skirtingoms grupėms. Tarp kūno svorio pokyčio ir naviko tūrio santykio nebuvo reikšmingas (p > 0,05). buvo pastebėta, išbandyti buvo gerai toleruojamas pelių dozės, ir nė vienas gyvūnas mirtingumas eksperimento metu.

imunohistocheminį dažymo už COX-2 raiškos, PKC-α ir P-gp

Visi navikai kiekvienos grupės, per imunohistocheminį dažymo, rodomas teigiamą išraiška COX-2, PKC-alfa ir P-gp baltymų. COX-2 ir PKC-α išraiška buvo apibrėžtas kaip teigiamas, jei nudažomi regionas navikų ląstelių buvo citoplazmoje, ir P-glikoproteino dažymo buvo laikomas teigiamu, jei dažymo buvo stebimas membranos ir citoplazmos. Baltymai buvo tamsintas geltonos arba rudos spalvos pagal optinio mikroskopo stebėjimo (4 paveikslas). Už SGC7901 /ADR ląstelių linija, šių baltymų kontrolinių grupių dažymo buvo stipresnis nei kitų grupių (p < 0,05). PAB gydymas sumažino ląstelėje dažymas COX-2, PKC-alfa ir P-gp, palyginti su ADR gydytų pacientų grupėje (p < 0,05). Po PAB ir gydymo ADR, ląstelėse dažymo šių baltymų buvo sparser ir silpnesni lyginant su kitų grupių. Dėl dviejų NS kontrolinių grupių audiniuose,, kad P-gp į SGC7901 ląstelių dažymo buvo gerokai mažesnis nei SGC7901 /ADR ląstelių (p < 0,05). Iš dažymo intensyvumo COX-2 analizė, PKC-α ir P-glikoproteino ekspresija atskleidė pačius rezultatus (2 lentelė).

poveikis PAB nuo COX-2, PKC-alfa, ir P-gp išraiška pelėms ksenoimplantai

Jei išsiaiškinti molekulinį mechanizmą dalyvauja atstatymas poveikio PAB dėl SGC7901 /ADR ksenoimplantai in vivo, iš COX-2, PKC-alfa, ir p-gp išraiška navikų iš skirtingų reagentų gydytų grupės buvo nustatomas pagal Western blot analizės. Kaip parodyta 5 paveiksle NS kontrolinės grupės, ekspresijos lygis COX-2, PKC-alfa, ir P-gp į SGC7901 ląstelių audiniuose, buvo mažesnis, palyginti nei su SGC7901 /ADR ląstelių navikų (p < 0,05) , Taikant SGC7901 navikų /ADR ląstelės, ekspresijos lygis trijų baltymų susidomėjimą NS kontrolinės grupės ir TWEEN kontrolinės grupės buvo žymiai didesnis, lyginant su kitų grupių (p < 0,05), ir nebuvo reikšmingo skirtumo tarp dvi grupės (p > 0,05). Sąvoka lygiai COX-2, PKC-alfa, ir P-gp į PAB-gydytų pacientų grupėje buvo žymiai mažesnis, palyginti su tais, ADR-gydytų pacientų grupėje (p < 0,05). Iš beta-aktino išraiška buvo naudojamas kaip vidaus kontrolės, ir ekspresijos lygis COX-2, PKC-alfa, ir P-gp buvo nuosekliai mažėjo tarp kontrolinių grupių, ADR grupė, PAB grupės ir pab + ADR grupėje (p < 0,05)

Diskusijos

PAB yra vienas iš pagrindinių biologiškai aktyvių komponentų šaknų žievės vaistinio augalo, Pseudolarix kaempferi parsisiųsti ir rodo didelę citotoksiškumo link kelių vėžio ląstelių. linijos. In vitro tyrimai taip pat parodė, kad jis apsisuks karcinoma MDR slopina P-gp raiška be akivaizdžių šalutinis poveikis [13], [15], [20], [21]. Jis taip pat buvo įrodyta, kad PAB turi priešvėžiniai poveikį pelių buvo gauta pranešimų apie svetimo transplantanto modeliai žmogaus gaubtinės žarnos vėžio ir kepenų ląstelių karcinoma [13], [20], ir šalutinių poveikių nenustatyta Pab gyvūnų. Mūsų Ankstesnis tyrimas parodė, kad PAB turi stipriai slopina poveikį SGC7901 ląstelių linijos in vitro ir indukuoja apoptozę skrandžio vėžio ląsteles per kaspazės keliu [16]. Mūsų metu in vivo tyrimas suteikia papildomų įrodymų, kad PAB lankosi apsaugo nuo skrandžio navikų pelių ksenografiniuose modelių naudojant SGC7901 ląsteles ir SGC7901 /AGS ląsteles. Mūsų preliminariniais eksperimentų parodė, kad PAB 25 mg /kg ne tik slopina skrandžio vėžio augimą, bet taip pat gerai toleruojamas pelių. Be to, mes įtraukti Tween kontrolinę grupę neįtraukti, vandeninio tirpalo, kuris buvo naudojamas, kad ištirptų PAB dėl auglių [13] įtaką. Jautrių ląstelių, priešvėžiniai poveikis PAB nepateikė jokių reikšmingų skirtumų, lyginant su ADR, tradicinės chemoterapijos narkotikų. Be to, PAB yra biologiškai aktyvus junginys, kad darė savo atbulinės eigos poveikį prieš SGC7901 /AGS ląstelių linija navikų nukreipiant signalizacijos kelią įsijungia P-glikoproteino ekspresija in vivo.

P-glikoproteino yra 170 kDa membrana baltymas, kuris veikia kaip vaistas ištekėjimo siurblio, todėl nuolat defektas sankaupą ląstelėje narkotikų [22]. Atsparumas daugeliui vaistų fenotipas yra pagrindinė priežastis, dėl naviko chemoterapijos nesėkmės ir yra daugiausia iš P-gp raiškos į vėžio dauguma, įskaitant skrandžio navikų [23] produktas. Be to, šio būdo slopinimas gali būti būdas pakeisti MDR skrandžio vėžio ląstelių [3], [24].

Cox-2, kuri yra indukuojamas fermentas, kuris katalizuoja arachidono rūgšties virtimą į prostanoidai ( PG) ir dalyvauja daugelyje fiziologinių ir patologinių įvykius, yra sukeliama įvairių uždegiminių ir mitogeninis dirgiklius [25]. Stiprus ryšys tarp MDR ir COX-2 raiškos buvo užregistruoti tarp daugelio įvairių tipų navikų. Šie ankstesni rezultatai rodo, kad COX-2 moduliuoja išraišką ir veiklą P-gp ir dalyvauja nuo MDR fenotipą [26] vystymuisi - [28]. Be to, sukaupta įrodymas parodė, kad COX-2 inhibitoriai gali pasirūpinti, kad vėžines ląsteles su Kovos su proliferacinių poveikio chemoterapiniais narkotikų, pakeitus ATF-prijungimo kasetės baltymų aktyvumą. COX-2 inhibitoriai net gali pakeisti MDR blokuoja cox-2-medijuojamos padidinti MDR1 išraiškos ir aktyvumo vėžio, tiek in vitro ir in vivo [6], [7], [29]. Taigi, mes iškėlė hipotezę, kad COX-2 gali reguliuoti P-gp navikų audiniuose išraiška ir kad slopina šį kelią yra labai svarbi atbulinės eigos vėžio atsparumą chemoterapiniais vaistais.

Mes nustatėme, kad už SGC7901 /ADR ląstelių navikai pasakymas lygiai COX-2 ir P-gp NS kontrolinės grupės buvo akivaizdžiai didesnės negu už SGC7901 ląstelių audiniuose,. Po to, kai PAB injekcijos, buvo pastebėta, akivaizdu, sumažėjimas šiems ekspresijos lygių. Tačiau NRV buvo mažiau veiksmingas už COX-2 ir P-glikoproteino ekspresija lygių SGC7901 /ADR ląstelių audiniuose, ir kai ji derinama su PAB, buvo stebimas mažesnis lygis baltymų slopinimo. Taigi, mes pasiūlėme, kad COX-2 raiškos iki PAB moduliacija gali sumažinti raišką ir veiklą P-gp, slopina augimą ir sukelti apoptozę, be to, veikdami drauge su ADR į vaistams atsparių navikų slopinimo ir netgi atstatymas MDR fenotipas skrandžio vėžio.

PKC yra serino /treonino kinazės dalyvauja signalo transdukcijos, reikalingą ląstelių proliferacijos ir diferenciacijos [30]. Iš PKC izoformų, The raiška ir padidėjęs aktyvumas PKC-alfa yra glaudžiai siejama su MDR fenotipo reguliavimo žmogaus skrandžio vėžio [31]. Čia pateikti rezultatai patvirtina mintį, kad PKC-α fosforilina P-gp, moduliuoja P-gp ištekėjimo funkcija, ir galiausiai veda prie atsparumo vaistams [32]. Iš PKC-alfa slopinimas su konkrečiu inhibitoriumi arba numušti PKC-alfa su siRNR Dėl to sumažėja MDR1 išraiška, išaugo toksiškumą priešvėžinių vaistų, ir atvirkščiai MDR [8] - [10]. Todėl mes spėlioti, kad PKC-α signalo perdavimas sistema gali vaidinti svarbų vaidmenį tolygiam MDR1 išraišką skrandžio vėžio.

Esant normalioms aplinkybėms, PKC neaktyvus ląstelėse, o jo aktyvavimo yra susijęs su naujų krypčių PGE aktyvacijos. COX-2 yra sujungtas su membrana-susijęs prostaglandinų E2 sintazės (MPGES-1), ir sintezės PGE medijuojamų šie baltymai didėja ir aktyvuoja pasroviui PKC-alfa tuo pačiu būdu, [33]. Buvo įrodyta, kad selektyvių COX-2 slopinimo, konkrečiais inhibitoriais arba siRNA turi gydomąjį poveikį slopina PKC-alfa ir P-gp išraiška, o taip pat, tuo pačiu metu, atbulinės eigos MDR [26], [34]. Tyrimas parodė, kad PGE2 tarpininkauja indukciją MDR1 išraiška per PKC keliu [35]. Mūsų eksperimentų rezultatai parodė, kad PAB gali slopinti PKC-α išraišką audiniuose, iš SGC7901 /ADR ląstelių linijos, kurių poveikis buvo stipresnis nei ADR. Be to, kai pab buvo derinamas su ADR, The PKC-α ekspresijos slopinimo veiksmingumas buvo dar stipresnis. Pokytis tendencija PKC-alfa išraiška dera su COX-2 ir P-gp įvairių reagentų gydytų grupių vaistams atsparių SGC7901 /ADR navikų. Įrodyta, kad PAB skatina augimo suėmimą ir apoptozę per slopina COX-2 kelią į vėžio ląsteles [20], [21]. Mes iškėlė hipotezę, kad PAB slopina COX-2 išraišką SGC7901 /ADR ląstelių audiniuose, ir kad tarp Cox-2 ir MPGES-1 jungtis sumažina PGE sintezę, kuri sumažina vartotojų PKC-alfa aktyvacijos. Kadangi P-gp fosforilinimas yra slopinamas, daugiau vaistų kauptis vėžinių ląstelių, ADR toksiškumas yra tvirtesnis ir MDR yra atstatomas. Šie rezultatai suteikia įžvalgą į naują strategiją, susijusioje su PAB naudoti slopinti MDR žmogaus skrandžio vėžio.

Vienas dėmesys mūsų eksperimento yra slopinantis poveikis pseudolaric rūgšties B ant poodinio audiniuose, žmogaus skrandžio adenokarcinoma ir palyginti iš antinavikinį poveikį, narkotikų tarp skirtingų gydymo grupėse. Be to, SGC7901 ląstelių ir SGC7901 /GAS ląstelių savybė yra skirtingi. Per mūsų dviem išankstinio eksperimento ir formalaus eksperimentą, mes visi rado navikas tūris SGC7901 /AGS ląstelių buvo ne didesnis nei SGC7901 ląsteles. Mes hipotezę navikas tūris gali būti susijęs su ląstelių skaičiaus, augimo metu, būdingą ląstelių ir kitų rūšių veiksnių. Todėl mes negalime palyginti naviko tūris tarp SGC7901 ląstelių audiniuose, ir SGC7901 /AGS ląstelių audiniuose,. Be to, mes spėlioti, kad pelių kūno svorio pokytis gali būti daugiausia susijęs su narkotikų toksiškumo, ir turėti ne didelę ryšį su naviko tūrio mūsų eksperimentas.

kita dėmesys mūsų eksperimento yra pagrindinis molekuliniai mechanizmai, dalyvaujantys atsparumas vaistams. Taigi mes turime tik skirta NJ valdymo grupė SGC7901 ląstelių audiniuose, kontrastas ir patvirtinti visų trijų rūšių baltymų SGC7901 /AGS ląstelių audiniuose, išraiškas iš tiesų yra gerokai didesnis, nei iš SGC7901 ląstelių audiniuose,. Be to, kadangi SGC7901 ląstelių atsakas į priešvėžiniai vaistai yra gana jautresni nei SGC7901 /AGS ląstelių abiejų pagrindinių ir klinikinių eksperimentų, kaip pagerinti atsparumo daugeliui vaistų ląstelių jautrumą priešvėžiniai vaistai yra mūsų mokslinių tyrimų dėmesys. Todėl mes negalime palyginti su COX-2, PKC-alfa ir P-gp už navikų iš SGC7901 ir įvairių gydymo šios grupės, išskyrus NS kontrolinės grupės Vakarų dėmė ir imunohistocheminį dažymo išraiškas.

Mūsų tyrimas nustatė, kad vaistažolių diterpenoido PAB ne tik reikšmingai slopino skrandžio vėžio SGC7901 ląstelėse in vivo, tačiau taip pat rodomas akivaizdžių slopinamąjį poveikį link navikų vaistams atsparių SGC7901 /ADR ląsteles. Be to, PAB derinys su ADR gali slopinti skrandžio vėžio augimą ir audiniuose, kuriuose vystymąsi nuogas pelių. Ji yra verta paminėti, kad kaip tradicinės kinų medicinos tipo, PAB poveikis ant kūno masės nuogas pelių buvo gana mažesnis negu ADR mūsų eksperimento, kuris yra akivaizdus privalumas, kad daro PAB labiau saugoma ir toleruotina vaisto, skirto vėžio gydymo. PAB gali būti ne tik nauja efektyvus vaistas už skrandžio vėžio ir atbulinės eigos savo MDR augimo slopinimo, tačiau ji taip pat gali būti naudojamas kaip puikus adjuvantu su tradiciniais chemoterapiniai ir chirurginio gydymo, taip pat tolesnis plėtros ir mokslinių tyrimų.

Šiame tyrime, mes nagrinėjami, pirmą kartą, slopinantis poveikis PAB prieš žmogaus skrandžio vėžio ir jo atstatymas poveikis MDR in vivo per svetimo transplantanto nuogas pelių modelį. Mes nustatėme, kad jo slopinimas MDR buvo tarpininkaujant per COX-2 /PKC-alfa /P-gp keliu, kuris numato svarbų teorinį pagrindą dėl molekulinius mechanizmus skrandžio vėžio gydymo. Tačiau, mes ne studijavo MDR mechanizmą atsižvelgiant į genų raiškos ir reglamento. Kaip molekulinius mechanizmus atbulinės eigos MDR yra nepaprastai sudėtingas ir įvairių tipų baltymų, genų ir veiksnių gali būti susiję, kilpa, kad mes pasiūlėme gali būti tik už atbulinės eigos MDR mechanizmo dalis. Nuodugnesnės ir betono reguliavimo mechanizmai turi būti išaiškinta, būsimoms studijoms.

Taigi, PAB turi didelę slopinamąjį poveikį skrandžio vėžio in vivo ir gali pakeisti skrandžio vėžio MDR chemoterapijos vaistų. Prieš MDR mechanizmas yra sąlygojamas bent iš dalies per Cox-2 /PKC-alfa /P-gp keliu. Mūsų tyrimas suteikia plačias perspektyvas ateities tyrimų PAB skrandžio vėžio gydymo.

Parama Informacija
Kontrolinis sąrašas S1.
ARRIVE Gairės Kontrolinis sąrašas
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0107830.s001
(DOC)

• PLoS ONE: Chemoterapija ar Tikslinės terapija, kaip antros eilės gydymas išplitusiu skrandžio vėžiu. Sisteminė apžvalga ir metaanalizė Paskelbta Studies
• PLoS ONE: Intratumor IL-17-Teigiamas putliųjų ląstelių yra pagrindinis šaltinis IL-17 Tai Ar Nuspėjamasis išlikimo skrandžio vėžio Patients