Vedvarende H. pylori kolonisering i tidlig erhvervelse alder af mus i forbindelse med højere gastrisk sialylerede Lewis X, IL-10, men lavere interferon-γ udtryk

Vedvarende H. pylori
kolonisering i tidlig erhvervelse alder af mus i forbindelse med højere gastrisk sialylerede Lewis X, IL-10, men lavere interferon-γ udtryk
Abstract
Baggrund
H. pylori
infektion er mindre udbredt i barndommen. Denne undersøgelse valideret, om satserne for H. pylori
kolonisering afhænger af forskellige erhvervelse aldre, og korrelerer med de forskellige mave- Lewis antigener eller cytokin udtryk efter H. pylori
købet.
Metoder
Vi anvendte en ung (7 dage gamle) C57BL /6-mus (n = 50) og voksne (6 uger gamle) C57BL /6-mus (n = 50). I hver gruppe blev 30 mus udfordret med H. pylori
og 20 mus tjente som naive kontrol. Succesen med H. pylori
kolonisering blev vurderet på 2 nd uge og 8 th uge, hhv. Intensiteten af ​​Lewis x, sialylerede Lewis x (sialyl-Le x), og cytokin-udtryk, herunder TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-10 og IL-1β, blev immunokemisk farves og gradueret.
Resultater
på 2 nd uge efter H. pylori
udfordring, koloniseringen satserne for H. pylori
var ens mellem den unge mus gruppen og voksne mus gruppe (89 % vs. 100%, P
> 0,05). Men på den 8 th uge, H. pylori
kolonisering var signifikant lavere i den unge mus gruppen end i voksne mus gruppen (53% vs. 95%, P
= 0,003). På 8 th uge, den unge mus med en persistens af H. pylori
kolonisering havde højere sialyl-Le x, højere IL-10, og lavere IFN-γ end de mus, der mistede kolonisering under 2 nd til 8 th uge (P
< 0,05).
Konklusion
vedvarende H. pylori
kolonisering kunne være et opkøb alder determinant behandle. Efter H. pylori
eksponering i en tidlig erhvervelse alder, værten respons med en højere sialyl-Le x og IL-10, men en lavere IFN-γ korrelerer med den deraf følgende persistens af H. pylori
kolonisering.
Introduktion
Helicobacter pylori
infektion kan forårsage kronisk gastritis og endda mavesår hos både børn og voksne [1, 2]. I epidemiologiske studier var seropositivitet af H. pylori
har vist sig at være mindre hos børn end hos voksne [3, 4]. En opfølgende kohorte undersøgelse viste, at den højeste serokonverteringsincidens opstår i den tidlige barndom og gradvist falder med alderen [3]. Adskillige undersøgelser har antydet, at en tidlig erhvervelse af H. pylori
infektion i barndommen muligvis kan føre til et efterfølgende tab af kolonisering [3-6]. Men for at de nøjagtige regler inden børnene bestemme enten tab eller vedvarende H. pylori
kolonisering efter tidlig erhvervelse forbliver ikke kendte.
En blodtype bindende adhesin (Baba) af H. pylori
selektivt binder til fucosylerede Lewis antigen (Le b) af gastrisk celler medierer en tung bakteriel kolonisering [7-9]. Den anden sialinsyre-bindende adhæsin (Saba) af H. pylori
binder til gastrisk sialylerede Lewis X-antigen (sialyl-Le x) alternativt bistå vedvarende kolonisering efter kronisk inflammation [10], og især bliver vigtigt når Le b-antigen af ​​værten er fraværende eller svag [11]. Vores seneste undersøgelse afslørede, at H. pylori
inficerede børn havde en betydelig forøgelse af sialyl-Le x, men ikke Le b udtryk [12]. Det er derfor interessant at undersøge, om den vedvarende tidlig erhvervelse af H. pylori
i barndommen kunne relateres til de variable værten svarene fra gastrisk betændelse eller epitelial sialylering at tilpasse Saba af H. pylori
.
med voksne C57BL /6 mus ældre end seks uger gamle, den kliniske H. pylori
stammer kan med held kolonisere de fleste af musene i mere end seks måneder [13, 14]. Den kroniske H. pylori
infektion fører til forskellige Th1 typen fremherskende gastriske betændelser med variabel pro-inflammatoriske og Th1-dominerende typen cytokin respons blandt forskellige værter [15-18]. Derfor til den aktuelle undersøgelse med henblik på først, om den fortsatte eksistens af H. pylori
kolonisering kunne være et opkøb alder afgørende proces. Derudover denne undersøgelse forsøgte at besvare, om den variable sialyl-Le X og den inflammatoriske cytokin udtryk efter H. pylori
udfordring kunne bestemme den vedvarende kolonisering af H. pylori
infektion, især hos mus der modtager udfordring af tidlig erhvervelse.
Materialer og metoder
mus grupper og H. pylori
isolater udfordring eksperiment
Denne undersøgelse brugt 100 C57BL /6 mus (50 syv dage gamle unge mus og 50 seks -Uge gamle voksne hanmus), herunder 60 i forsøgsgruppen udfordret med en type 1, SABA-positive H. pylori
klinisk isolat (HP 625) og 40 i naive kontroller. Multiplikationer af H. pylori
isolater blev anvendt med den samme fremgangsmåde som vores tidligere musemodel undersøgelse for at opnå en densitet på 0,8 × 10 8 CFU /ml. [19]. I den eksperimentelle gruppe blev en bakterie suspension 0,1 ml for unge mus og 0,5 ml til de voksne mus oralt inokuleret i tre på hinanden følgende dage. Ti hver af de unge og voksne mus i kontrolgruppen blev aflivet ved 2 nd og 8 th uge. I de eksperimentelle mus, ti hver af de unge og voksne mus på 2 nd uge og 20 hver af de unge og voksne mus på 8 th uge efter inokulering blev aflivet ved intraperitoneal injektion af pentobarbital ( 150-200 mg /kg). De isolerede maver blev indridset langs de større og mindre krumninger i to halvdele. Den ene halvdel blev formalin-embedded til histologi og Lewis antigen undersøgelser. Den anden halvdel blev straks placeret i puffer, nedfrosset på tøris og opbevaret ved -80 ° C i cytokin undersøgelse. H. pylori
infektion blev bevist ved en hurtig urea test og histologisk undersøgelse.
Gastrisk histologi af mus
To efterforskere herunder en patolog, uvidende om de demografiske data og kolonisering resultater, analyserede den gastriske histologi. Ved anvendelse af den vores tidligere musemodel [19], de histologiske parametre, herunder H. pylori
densitet (interval 0-4), akut inflammatorisk score (AIS, interval 0-3), kronisk inflammation score (CIS, range 0-3), atrofisk ændring (aT, interval 0-1), og intestinal metaplasi (IM, interval 0-3) blev evalueret topografisk over antrum, corpus og Cardia, hhv. Det klassificeringssystem af H. pylori
densitet anvendt var som følger: 0, ingen bakterier opdaget; 1, en mild grad af kolonisering og bakterier ikke påvises i hver gastrisk krypt; 2, en mild grad af kolonisering med bakterier påvist i de fleste krypter tilstedeværende; 3, moderat til svær kolonisering i alle krypter; og 4, alvorlig kolonisering med alle krypter tæt pakket med bakterier. Resultaterne præsenteret er middelværdien for kolonisering for hver gruppe. Den samlede H. pylori
densitet (THPD) blev defineret som summen af ​​densiteterne opnået fra antrum, corpus og mavemunden, og således lå fra 0 til 12. Det samlede akutte (TAIS) og kronisk (TCis) inflammatoriske scorer var også en sum af bedømmelse fra tre steder (interval 0-9).
Bakteriel infektion af H. pylori
blev defineret som tilstedeværelse af eventuelle bakterier i gastriske snit, mens mus blev anset for ikke at have inokuleres når ingen bakterier blev set i histologi og negativ for CLO-test.
Immunohistokemisk farvning og scoring for gastrisk Lewis ekspression
immunfarvning af gastriske prøver til Lewis-antigener udførtes under anvendelse af avidin-biotin-peroxidase-teknik med en vektor Ms.OM Immundetektering Kit. Det primære monoklonale antistof (anti-Le x, Signet Laboratories, Inc., Dedham, MA) blev udvalgt til at detektere den gastriske Le x antigener [11, 12]. Udover Le x antigenfarvning det monoklonale antistof mod sialyl-Le x (muse-IgM MAB2096, Chemicon International, Inc., Temecula, CA) blev anvendt [12]. Uspecifikke bindingssteder blev mættet med 2-2,5% bovint serumalbumin. For hver gastrisk site, blev intensiteten af ​​Le x (0-5) og sialyl-Le x (interval 0-4) scoret efter topografien af ​​farvning (figur 1). Total gastrisk Lewis antigen intensitet for Le x og sialyl-Le x var summen af ​​antrum, corpus og mavemunden (interval 0-15 i Le x og 0-12 i sialyl-Le x). Figur 1 immunhistokemiske (IHC) farvning og planering af Lewis x (Le x), og sialyl-Lewis x (sialyl- Le x) antigener er vist for mavens biopsier af mus (200 ×). Den IHC farvning viste negativ for to Lewis-antigener og blev omtalt som score 0. For Lex, score 1 (A): ringe farvning (< 5% i parietalceller fra de dybe kirtler; score 2 (B): dybe kirtler 5 -50% farvning og svag; score 3 (C): dybe kirtler > 50% farvning og stærk; score 4 (D): hele lag af dybe kirtler med overfladisk epitel farvning, ingen slim udtryk; score 5 (E): hele . lag med slim udtryk For sialyl- Lex, score 1 (F): kun overflade slim positiv; score 2 (G): slim og øvre epitel, score 3 (H): øvre epitel og dybe kirtler (chef celler < 50% .); score 4 (i): øvre epitel og dybe kirtler (chief cells ≥ 50%)
Immunohistokemisk farvning og scoring for cytokiner ekspression
De frosne snit (4 um) blev tørret ved stuetemperatur i 2 timer, og fikseret med 3,7% formaldehyd i 1 minut. efter vask med PBS to gange, blev prøverne fikseret med kold acetone og derefter vasket med PBS. Mus Ig Blocking Reagent (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) blev anvendt til at blokere ikke-specifikke bindingssteder. De monoklonale rotte-anti-muse-antistoffer (TNF-a, IL-6, IL-10, IL-1p, og IFN-y) og kanin-anti-muse-polyklonale antistof (IL-1β) blev anvendt som det primære antistof. HRP polymerkonjugat bredt spektrum (Zymed Laboratories Inc. South San Francisco, CA, USA) blev anvendt som 2 nd antistof. AEC-kit blev anvendt til at illustrere pletten. Intensiteten af ​​hvert cytokin blev scoret ifølge fordelingen af ​​positive farvning af celler på epitel (interval 0-3), og på lamina propria komponenter, herunder matrixen, polymorfonukleære celler, lymfocytter, og fibrocytter (tabel 1) .table 1 Scoring af cytokin udtryk på mavens epitel og lamina propria.

Score

0
en
2
3
epitel
Negativ
Mindre end 33%
33% -67%
Mere end 67%
Lamina propria
Matrix
Fravær
Presence
lymfocyt
Fravær
Presence
Fibrocyte
Fravær
Presence
Neutrofil
Fravær
Presence
kvantitativ scoring af hvert cytokin på epitelet var som følger: score 1: positiv farvning i cytoplasmaet af epitelceller kun på den øverste 1/3 del af epithelet; score 2: på den øvre og midterste del af epitelet (1 /3-2 /3); score 3: på hele lag af epitelet (> 2/3). Den positive farvning af hvert cytokin på lamina propria (lymfocytter, fibrocytter og neutrofiler) betyder, at der var mere end fem positive celler i en høj effekt synsfelt i mikroskopisk undersøgelse.
Statistisk analyse
Pearsons χ 2 test blev anvendt til at teste forskellen kolonisering kurser mellem eksperimentelle og kontrolmus. De histologiske parametre, Lewis antigener og cytokin udtryk blev sammenlignet med Fishers eksakte test for forskellige undergrupper. Den Friedman test blev anvendt til at teste forskellen af ​​H. pylori
densitet mellem antrum, corpus og mavemunden af ​​maven i hver mus. Alle tests blev vurderet tosidede og en p
værdi < 0.05 blev taget som signifikant.
Resultater
Den procentvise vellykkede H. pylori
kolonisering hos mus med forskellige erhvervelse aldre
På 2 nd uge efter H. pylori
udfordring, H. pylori
kolonisering lykkedes i 89% (8/9) af den unge mus gruppen og 100% (10/10) af voksne mus gruppe. I modsætning hertil på 8 th uge efter H. pylori
udfordring, koloniseringen var signifikant lavere i de unge mus end i voksne mus (53% vs. 95%, P
= 0,003 ). For de mus med vellykket kolonisering enten på 2 nd eller 8 th uge, tætheder af H. pylori
blev jævnt fordelt på antrum, corpus, og mavemunden i både unge og voksne mus ( P
> 0,05)
Alder-specifikke gastriske Lewis antigen og cytokiner udtryk i de naive mus
i naive mus af både unge og voksne grupper, de udtryk for Le x og sialyl-. Le X var svage på det gastriske antrum. Men en gradvis stigning i det samlede intensitet af Le x og sialyl-Le x udtryk blev afsløret i alder trin (figur 2A & 2B). En sådan forøgelse nåede et plateau fra den kronologiske alder af tæt 5 uger gamle. Ved 2 nd uge og 8 th uge efter H. pylori
udfordring, Le x udtryk ikke var forskellig mellem de koloniserede og kontrol mus i både unge og voksne grupper. Figur 2 Intensiteten af ​​gastrisk Lewis-antigener i naive mus ved forskellige aldre af livet (A) Lewis X, (B) sialyl-Lewis X.
Intensiteten af ​​gastrisk cytokinekspression varierede mellem de forskellige aldre af mus og placering. For de proinflammatoriske cytokiner, var der ingen positive farvninger af TNF-α og IL-6 på overfladisk epitel i nogen af ​​de naive mus. De positive farvninger af TNF-α og IL-6 på de lymfocytter, fibrocytter og neutrofiler over lamina propria var signifikant højere hos mus i alderen ≥ 5 uger end aldersgruppen < 5 uger (P
< 0,01; 3A & 3B). Den positive farvning af IL-1β blev hovedsagelig fundet på epitel og udtrykkes tidligt i mus i alderen < 5 uger. Hastigheden af ​​positiv farvning af IL-1β på neutrofiler var højere i mus i alderen ≥ 5 uger end aldersgruppen < 5 uger (P
< 0,05; figur 3C). Figur 3 Gastric cytokin udtryk på epitel og lamina propria mellem naive mus i alderen ≥ 5 uger og < 5 uger. (A) Tumor nekrotisk faktor alfa (TNF-α), (B) interleukin 6 (IL-6), (C) interleukin 1 beta (IL-1β), (D) interferon gamma (IFN-γ), og (E ) interleukin 10 (IL-10).
i tidlige liv af musene, den positive IFN-γ-farvning var i de fleste findes på epitel og matrixen, som intensiteten af ​​positive IFN-γ-farvning faldt efter alder ≥ 5 uger (P
< 0,01, figur 3D). Imidlertid blev en signifikant højere positiv IFN-γ farvning på lymfocytter og fibrocytter oplyses i musene i alderen ≥ 5 uger end aldersgruppen < 5 uger (P
< 0,01).
I modsætning til den tunge IFN-γ farvning på epitelet i den tidlige liv af mus, IL-10 var normalt negativt på epitelet. Den positive farvning af IL-10 var højere på lymfocytter og fibrocytter i musene i alderen ≥ 5 uger end i aldersgruppen < 5 uger (P
< 0,05, figur 3E).
Mus histologi og Lewis antigen udtryk efter H. pylori
infektion
På den 2 nd uge efter H. pylori
udfordring, at H. pylori
-colonized unge mus syntes at have en marginalt højere høj TCis (score ≥ 4) end kontrol mus (88% vs. 50%, P
= 0,15), men en sådan en marginal betydning var ikke videregives i voksne mus (30% vs. 30%, P
= 1,00). Desuden er der i den unge mus gruppe, mus med vedvarende kolonisering på 8 th uge havde en åbenbart højere høje TCis end de mus, der mistede kolonisering (40% vs. 11%, P
= 0,30) . På 2 nd uge efter H. pylori
udfordring, procentdelen af ​​koloniserede unge mus med en høj intensitet af sialyl-Le x ekspression (score ≥ 7) var faldet sammenlignet med den i kontrolmusene (25% vs. 60%, p
= 0,19). En sådan dråbe var ikke indlysende på 8 th uge (100% vs. 90%, p
&0,05) og med voksne mus på 2 nd uge (90% vs. 100 %, P
> 0,05) og 8 th uge (58% vs. 60%, p
>. 0,05) efter H. pylori
udfordringer
Gastrisk cytokiner ekspression efter H. pylori
infektion
på 2 nd uge efter H. pylori
udfordring, den unge mus med vellykket kolonisering havde en signifikant højere intensitet af IL-6 på fibrocytter (75% vs. 0 %, P
= 0,002) og matrix (75% vs. 20%, p
= 0,05), men lavere IFN-γ (0% vs. 100%, P
< 0,001) på matrix end de naive kontroller (tabel 2). Også i voksne mus, blev musene med vellykket kolonisering oplyses at have en lavere sats af IFN-γ udtryk på fibrocytter end kontrol mus (30% vs. 90%, P
= 0,02) .table 2 gastrisk cytokin udtryk på 2. uge af unge og voksne mus med vedvarende H. pylori
kolonisering og naive kontrol mus.


Unge mus
Voksne mus
Parameter (%)
koloniseret
(n = 8)

Kontrol
(n = 10)
P Drømmeholdet værdi
koloniseret
(n = 10)
Kontrol
( n = 10)
P
Value
IL-6 *
Matrix
75
20
0.05
70
30
NS
Lymfocyt
50
10
NS
60
70
NS
Fibrocyte
75
0
0,002
80
50
NS
Neutrocyt
37,5
20
NS
20
70
0,07
TNF-α *
Matrix
87,5
70
NS
80
90
NS
Lymfocyt
62,5
40
NS
90
90
NS
Fibrocyte
87,5
40
0,07
100
90
NS
Neutrocyt
12,5
10
NS
30
40
NS
IL-1β
epitel ≥ 2
100
70
NS
100
90
NS
Matrix
A25
0
NS
100
80
NS
Lymfocyt
25
20
NS
30
0
NS
Fibrocyte
A25
60
NS
100
100
NS
IFN-γ
epitel ≥ 2
0
30
NS
10
0
NS
Matrix
0
100
< 0,001
40
20
NS
lymfocyt
0
0
NS
10
30
NS
Fibrocyte
12,5
10
NS
30
90
0.02
Neutrophil
0
0
NS
10
20
NS
IL-10*
Matrix
a25
60
NS
100
80
NS
Lymfocyt
25
20
NS
60
60
NS
Fibrocyte
a37.5
50
NS
100
80
NS
Neutrocyt
12,5
0
NS
10
20
NS
CIS: kronisk inflammatorisk score; AIS: akut inflammatorisk score. *: Koloniserede midler mus inficeret med H. pylori
med vellykket kolonisering (positiv urea test og histologi) på offer. a: P Drømmeholdet værdi < 0,01; b: P Drømmeholdet værdi ≤ 0,05 mellem de unge og voksne koloniserede mus. NS: ingen betydning. * Angivet på denne parameter, epitel er ret svag til sådan cytokin på immunhistokemi farvning.
På 8 th uge efter H. pylori
udfordring, satserne for høj TNF-α (100% vs. 20%, P
= 0,02) på matrixen og høj IL-1β (100% vs. 20%, p
= 0,02) på fibrocytter var højere i den unge mus med vedvarende kolonisering end i kontrolmusene ( tabel 3). For de voksne mus med vellykket kolonisering, satserne for høj IFN-γ (30% vs. 100%, P
= 0,003), IL-10 (20% vs. 100%, P
= 0,001) og IL-6 (50% vs. 100%, P
= 0,03) på fibrocytter var også signifikant lavere end kontrol- naive mus. Ikke desto mindre var mere almindelig i de koloniserede voksne mus end kontrolmusene at have en højere IFN-γ (80% vs. 40%), IL-10 (80% vs. 40%), og IL-6 (80% vs. 30%) på matrix.Table 3 cytokin udtryk på 8. uge af unge og voksne mus med vedvarende og mistede H. pylori
kolonisering og naive kontrol mus.


Unge mus
voksne mus
variable (% )
Persistent kolonisering
(n = 5)
Mistet kolonisering
(n = 4)
Kontrol
(n = 10)

P
† værdi
Persistent kolonisering
(n = 10)
Kontrol
(n = 10)
P
værdi
IL-6 *
Matrix
100
80
50
NS
80
30
NS
lymfocyt
25
60
50
NS
70
70
NS
Fibrocyte
100
80
70
NS
50
100
0.03
Neutrocyt
0
20
50
NS
20
70
NS
TNF-α *
Matrix
100
100
20
NS
100
60
NS
lymfocyt
100
80
60
NS
90
90
NS
Fibrocyte
100
100
70
NS
100
80
NS
neutrofile
25
20
60
NS
10
40
NS
IL-1β
epitel ≥ 2
100
80
70
NS
100
80
NS
Matrix
75
40
30
NS
100
80
NS
lymfocyt
50
60
0
NS
50
60
NS
Fibrocyte
100
60
20
NS
100
100
NS
Neutrofil
0
0
20
NS
0
10
NS
IFN-γ
epitel ≥ 2
0
80
20
0,048
30
0
NS
Matrix
75
100
40
NS
80
40
NS
lymfocyt
75
60
40
NS
30
50
NS
Fibrocyte
75
100
50
NS
30
100
0.003
Neutrophil
0
0
40
NS
20
0
NS
IL-10*
Matrix
100
20
70
0.048
80
40
NS
Lymfocyt
100
20
70
0,048
40
50
NS
Fibrocyte
100
60
70
NS
20
100
NS
Neutrofil
50
0
10
NS
0
10
NS
†: betydningen var sammenlignet mellem unge mus med vedvarende og tabt kolonisering. * Angivet på denne parameter, epitel er ret svag til sådan cytokin på immunhistokemi farvning.
Højere sialyl-Lex sameksisterer med højere IL-10, men lavere INF-γ for H. pylori
kolonisering
På 2 nd uge, den koloniserede unge mus havde ingen signifikant forskel i intensiteten af ​​sialyl-Le x ekspression end kontrolmusene (P
&0,05). Men på den 8 th uge efter H. pylori
udfordring, den unge mus med vedvarende kolonisering havde en højere rate af indlysende sialyl-Le x udtryk (score ≥ 7) end de mus, mistet kolonisering (100% vs. 56%, P
= 0,03). Ud over at vise en højere sialyl-Le x udtryk (score ≥ 7), alle af vedvarende H. pylori
-colonized unge mus markant sameksisterede med lavere IFN-γ og højere IL-10 udtryk end de mus, der havde mistet vedvarende kolonisering på 8 th uge (tabel 4, 100% vs. 0%, P
= 0,008) .table 4 En lav gastrisk IFN-γ (score ≤ 1) udtryk på epitel sameksisterende med høj sialyl-Lex (score ≥ 7) og IL-10 (på både matrix og lymfocytter) blev korreleret til vedvarende bakteriel kolonisering i den tidlige erhvervelse alder af mus.
Cytokinekspression (%)
Kolonisering af unge mus
ELLER (95% CI)
P Drømmeholdet værdi *

Persistent (n = 4)
Lost (n = 5)


Low IFN-γ
100
20
0,2 (0,1-1,2)
0,048
High IL-10
100
0 -
0,008
lav IFN-γ og høj sialyl -Lex
100
0 -
0,008
Low IFN-γ og høj IL-10
100
0 -
0,008
OR : odds ratio; CI: konfidensinterval; *: Fishers eksakte test
Tabel 5 viser scoring af IFN-γ på epitel og IL-10 på matrixen og lymfocytter mellem mus med vedvarende og tabt kolonisering på 8 th uge efter H. pylori
udfordring. Ingen af ​​de unge mus med vedvarende bakteriel kolonisering havde IFN-γ-ekspression på epitelet men havde indlysende IL-10 ekspression på matrixen og lymfocytter i sammenligning med musene uden colonization.Table 5 Scoren af ​​IFN-γ på epitel og IL -10 på matrixen og lymfocytter på 8. uge efter H. pylori
udfordring i den unge mus med og uden vedvarende kolonisering.



score af IL-10
Mus nr
Colonization
score af IFN-γ på epitel

på matrix
på lymphocyte

1
Yes
0
1
1
2
Yes
0
1
1
3
Yes
0
1
1
4
Yes
0
1
1
5
No
1
0
0
6
No
2
1
0
7
No
2
0
0
8
No
2
0
0
9
No
2
0
1
Diskussion
Erhvervelse af H. pylori
hovedsageligt opstår i barndommen og spontan eliminering af infektion forekommer normalt hos små børn [3-6, 20]. I denne undersøgelse, at C57BL /6 voksne mus havde en gunstig H. pylori
kolonisering på isolater spænder til mere end 80%, som er kompatibel med tidligere rapporter [13, 14]. Denne høje kolonisering sats i voksne mus er også kompatibel til at støtte det faktum, at sene overtagelse af H. pylori
i voksne humane patienter, der normalt resulterer i kronisk kolonisering [20]. Som sammenlignet med 2 nd uge af unge mus efter H. pylori
erhvervelse, koloniseringen sats i 8 th uge var 53%, hvilket understøtter, at spontan eliminering af H. pylori
virkelig sker i den tidlige erhvervelse alder af mus. Så den nuværende undersøgelse skal være meget original at indføre en musemodel designet til at validere, at der bør være et tab af H. pylori
kolonisering efter en tidligere erhvervelse af H. pylori
, der nøje efterligner de kliniske fund i unge børn.
Vores tidligere undersøgelse har vist, at intensiteten af ​​gastrisk Le x positivt er relateret til forøgelse af alder hos mennesker [12]. Men for dem, uden at H. pylori
infektion, udtryk for sialyl-Le x på gastrisk epitel er svag eller mangler i dyspeptiske børn og voksne [12]. Kompatibel med mennesker, intensiteten af ​​gastrisk sialyl-Le x af mus er også positivt korreleret til forøgelsen af ​​alder (figur 2B). En sådan konstatering i mus er også kompatibel med en rotte undersøgelse, der offentliggøres en aldersrelateret tilvækst af glykosylering i levervæv [21]. Forøgelse gastrisk sialyl-Le x ekspression efter H. pylori
infektion er blevet rapporteret i mennesker og rhesusaber [9-12]. Men i vores mus undersøgelse, en nedsat styrke af gastrisk sialyl-Le xwas beskrevet i H. pylori
inficerede unge mus, men ikke i voksne mus på 2 nd uge, sammenlignet med kontrolmusene. Mere påfaldende, på 8 th uge efter H. pylori
erhvervelse, et sådant fald af sialyl-Le x forsvandt i begge de koloniserede unge og voksne mus, som havde et fuldt sialylerede maveslimhinden. Dette fund tyder på, at H. pylori
udfordring bør inddrages for at forstyrre aldersrelaterede modning kurve af sialylering i de unge mus. Desuden er det indirekte antyder, at ændringerne af sialyl-Lewis-antigen i unge mus bør være meget korreleret til vedholdenhed eller tab af H. pylori
kolonisering.
I denne dyremodel, tidlig H. pylori
erhvervelse forårsagede en højere CIS end i kontrol af 2 nd uge (87,5% vs. 50%, P
= 0,15), men ikke på 8 th uge (40% vs. 30%, P
= 0,36) efter H. pylori
udfordring. Antages det, at tætte inflammation forårsager mere alvorlige kliniske symptomer, kan dette histologi ændring korreleres til vores tidligere fund, at H. pylori
infektion kan forårsage kortsigtet epigastriske smerter hos børn, selv om der normalt løses ved opfølgning [22]. Vedrørende både klinisk observation og in vivo mus modeldata, H. pylori
erhvervelse hos børn normalt præsenterer som en selvbegrænsende efterfølger i inflammation.
Efter H. pylori
infektion, de forskellige vært svarene fra mavens cytokiner kan muligvis være relateret til forskellige kliniske resultater [14, 18, 23, 24]. I denne undersøgelse blev de naive mus sig at have regelmæssig IL-1β og IFN-γ udtryk (figur 3C & 3D) på det gastriske epitel, hvilket er i overensstemmelse med en tidligere rapport i mennesker [15]. Vores mus undersøgelse udviste en aldersspecifikke cytokin-ekspression på det gastriske epitel (IFN-γ) og lamina propria (IL-6, TNF-α, IFN-γ og IL-10). På grund af den aldersspecifikke respons af de cytokiner, vores undersøgelse understøtter, at der bør være forskellige naive immunreaktioner mellem børn og voksne.
Baseret på den immunhistokemiske undersøgelse, denne undersøgelse bekræftede, at de pro-inflammatoriske cytokin udtryk på den gastriske lamina propria kunne ændre på både 2 nd og 8 th uge efter H. pylori
udfordring [25, 26]. Både i mus og i mennesker, har mavens cytokinresponser af H. pylori
infektion blevet påvist at være Th1-dominant, fordi niveauet af IFN-γ forøges i H. pylori
-inficerede individer sammenlignet med kontroller [15, 18, 23, 27]. En høj INF-γ-niveau er blevet tilskrevet som kendetegnende for H. pylori
-relaterede gastritis, især i kronisk inflammation og potentielt tilskrives som en beskyttende rolle mod H. pylori
kolonisering [16-18, 28]. Som vist i tabel 3, vi beskrevet, at unge mus med et tab af kolonisering havde en højere IFN-γ-ekspression på epitelet end mus med vedvarende kolonisering (P
= 0,048). Dette fund er i overensstemmelse med en human undersøgelse af børn, der viste, at børn med H. pylori
infektion havde en lavere koncentration af IFN-γ end hos ikke-inficerede kontroller [29]. Disse data i mus tyder på, at der kan være en signifikant korrelation til kolonisering tab, når der er en høj ekspression af IFN-γ. Det bør derfor være bekymret at kortlægge anden vært reaktion af IFN-γ, der kan relateres til at have forskellige H. pylori
infektion resultater hos børn.
IL-10 er en Th2 cytokin, og kan udløses af kompenserende regulering efter en Th1 skift af H. pylori
udfordring at beskytte maveslimhinden [13, 15, 23, 27]. Derfor er det ikke så slående at illustrere en signifikant stigning af IL-10-ekspression i den unge mus med vedvarende kolonisering (tabel 3). Som vist i tabel 4, at den unge mus med lav IFN-γ på epitelet har en persistens af H. pylori
kolonisering havde en 100% sameksistens med en høj IL-10 ekspression på matrixen og lymfocytter.

• Gastritis cystica profunda tilbagefald efter kirurgisk resektion: 2-års follow-up
• Lauren klassificering kombineret med HER2-status er en bedre prognostisk faktor i kinesisk mavekræft patients