Persistente colonización por H. pylori en la edad temprana de adquisición ratones relacionados con una mayor gástrico sialilado Lewis x, IL-10, pero inferior γ-interferón expressions

persistente H. pylori
colonización en edad adquisición temprana de los ratones relacionados con una mayor gástrico sialilado Lewis x , IL-10, pero menor interferón-gamma expresiones
Resumen Antecedentes

H. pylori
es menos frecuente en la infancia. Este estudio valida si las tasas de colonización por H. pylori
dependen de diferentes edades de adquisición, y se correlaciona con los diferentes antígenos de Lewis gástricas o expresiones de citoquinas después de H. pylori adquisición
.
Métodos
se aplicó una joven (7 días de edad) C57BL /6 ratones de grupo (n = 50) y adulto (6 semanas de edad) C57BL /6 ratones de grupo (n = 50). En cada grupo, 30 ratones fueron desafiados con H. pylori
y 20 ratones sirvieron como control ingenuo. El éxito de la colonización por H. pylori
se evaluó sobre la 2 ª semana y el 8 ª semana, respectivamente. La intensidad de la Lewis x, sialilada Lewis x (sialil-Le x), y citoquinas expresiones, incluyendo TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-10, e IL-1β, eran inmunoquımicamente manchada y graduada.
: resultados de la En la 2 ª semana después de H. pylori
desafío, las tasas de colonización de H. pylori
fueron similares entre el grupo de ratones jóvenes y el grupo de ratones adultos (89 % frente a 100%, P Hotel > 0,05). Sin embargo, en la 8 ª semana, la tasa de colonización
pylori H. fue significativamente menor en el grupo de ratones jóvenes que en el grupo de ratones adultos (53% vs. 95%, p = 0,003
). En la 8 ª semana, el joven ratones con una persistencia de H. pylori
colonización tuvieron mayor sialil-Le x, superior inferior IFN-γ IL-10, y que los de los ratones que perdió la colonización durante el ª a la 8 ª semana (P Hotel < 0,05) 2.
Conclusión
la persistencia de la colonización por H. pylori
podría ser un factor determinante en edad de adquisición proceso. Después de H. pylori
exposición a una edad temprana adquisición, la respuesta del huésped con una sialil-Le x superior e IL-10, pero una menor IFN-γ se correlaciona con la consiguiente persistencia de H. pylori
la colonización.
Introducción
Helicobacter pylori
infección puede causar gastritis crónica y la úlcera péptica, incluso en niños y adultos [1, 2]. En los estudios epidemiológicos, la seropositividad de H. pylori
se ha demostrado que ser menor en niños que en adultos [3, 4]. Un estudio de cohorte de seguimiento mostró que la mayor incidencia de seroconversión se produce en la primera infancia y disminuye gradualmente con la edad [3]. Varios estudios han sugerido que una adquisición temprana de la infección por H. pylori
en la infancia, posiblemente, puede conducir a una pérdida posterior de la colonización [3-6]. Sin embargo, las regulaciones exactas dentro de los niños, ya sea para determinar la pérdida o la persistencia de la colonización por H. pylori
después de la adquisición temprana restos no muy conocido.
Una adhesina de unión de grupo sanguíneo (Baba) de H. pylori de
se une selectivamente al antígeno fucosilado Lewis (Le b) de las células gástricas mediación de una colonización bacteriana pesada [7-9]. La otra unión de ácido siálico-adhesina (Saba) de H. pylori
se une al antígeno Lewis x sialilado gástrica (sialil-Le x) asistir alternativamente, la persistencia de la colonización después de la inflamación crónica [10], y sobre todo se convierte en importante cuando el Le b antígenos del huésped está ausente o débil [11]. Nuestro estudio reciente descrito que H. pylori
niños infectados tenían un aumento significativo de sialil-Le x, pero no Le b expresión [12]. Por tanto, es interesante comprobar si la persistencia de la adquisición temprana de H. pylori
en la infancia podría estar relacionada con las respuestas del huésped variables de inflamación gástrica o de sialilación epitelial de adaptar el Saba de H. pylori
.
Con adultos C57BL /6 ratones mayores de seis semanas de edad, la clínica H. pylori
cepas pueden colonizar con éxito la mayoría de los ratones durante más de seis meses [13, 14]. La crónica la infección por H. pylori
conduce a diversas inflamaciones gástricas tipo Th1 predominante con variables respuestas de citoquinas de tipo pro-inflamatorias y Th1-dominantes entre los diferentes huéspedes [15-18]. En consecuencia, el presente estudio tuvo en un principio para comprobar si la persistencia de la colonización por H. pylori
podría ser un proceso determinante en edad de adquisición. Además, este estudio intentó responder si la variable sialil-Le x y las expresiones de citoquinas inflamatorias después de H. pylori desafío
podrían determinar la colonización persistente de la infección H. pylori
, especialmente en los ratones que recibieron la desafío de la adquisición temprana.
Materiales y métodos
grupos de ratones y H. pylori
aislados para el experimento desafío
Este estudio utilizó 100 ratones C57BL /6 (50 de siete días de edad, los ratones jóvenes y 50 de seis adulto -Semana de edad, ratones macho), incluyendo 60 en el grupo experimental desafiado con un tipo 1, Saba-positivo H. pylori
aislado clínico (HP 625) y 40 en los controles no tratados previamente. Las multiplicaciones de la H. pylori
aislamientos fueron aplicados con el mismo método que nuestro anterior estudio modelo de ratones para alcanzar una densidad de 0,8 × 10 8 CFU /ml. [19]. Para el grupo experimental, una suspensión de bacterias de 0,1 ml para los ratones jóvenes y 0,5 ml para los ratones adultos se inocularon por vía oral durante tres días consecutivos, respectivamente. Diez cada uno de los jóvenes y adultos ratones del grupo de control fueron sacrificados al 2 ª y la 8 ª semana. En los ratones experimentales, diez de cada uno de los ratones jóvenes y adultos en el nd semanas 2 y 20 cada uno de los ratones jóvenes y adultos en la 8 TH semanas después de la inoculación se sacrificaron por inyección intra-peritoneal de pentobarbital ( 150-200 mg /kg). Los estómagos aislados se practicará una incisión a lo largo de las curvaturas mayor y menor en dos mitades. Una mitad se formalina y embebidos para la histología y los exámenes de antígeno Lewis. La otra mitad se colocó inmediatamente en tampón, se congelaron en hielo seco y se almacenó a -80 ° C para el examen de citoquinas. H. pylori
la infección se probó mediante una prueba de la urea rápida y el análisis histológico.
Histología gástrica de ratones
Dos investigadores incluyendo uno patólogo, sin darse cuenta de los datos demográficos y resultados de colonización, analizó la histología gástrica. La aplicación del método de nuestro modelo de ratones anterior [19], los parámetros histológicos, incluyendo H. pylori densidad gratis (rango 0-4), la puntuación inflamatoria aguda (AIS, rango 0-3), la puntuación de la inflamación crónica (CIS, gama 0-3), el cambio atrófica (AT, rango 0-1), y la metaplasia intestinal (MI, rango 0-3) fueron evaluados topográficamente sobre el antro, cuerpo y cardias, respectivamente. El sistema de clasificación de H. pylori
densidad utilizada fue la siguiente: 0, no hay bacterias detectadas; 1, un nivel leve de la colonización y las bacterias no detectados en todas las criptas gástricas; 2, un nivel leve de la colonización con bacterias detectadas en la mayoría de las criptas presentes; 3, moderado a la colonización pesada en todas las criptas; y 4, la colonización grave con todas las criptas densamente poblada por bacterias. Los resultados presentados son el valor medio de la colonización para cada grupo. El H. pylori densidad total
(THPD) se definió como la suma de las densidades obtenidas del antro, corpus y cardias, y por lo tanto fuera de 0 a 12. La aguda total (TAIS) y crónica (TCIS) las puntuaciones inflamatorias eran también una suma de la puntuación de los tres lugares (rango 0-9).
infección bacteriana de H. pylori
se definió como la presencia de cualquier bacteria en las secciones gástricas, mientras que los ratones se consideraron no haber podido inocularse cuando no se observaron bacterias en la histología y negativo para la prueba CLO.
la tinción inmunohistoquímica y de puntuación para la expresión de Lewis gástrica
inmunotinción de muestras gástricas para antígenos de Lewis se ha realizado mediante la técnica de avidina-biotina-peroxidasa con un vector Ms.OM Kit de inmunodetección. El anticuerpo monoclonal primario (anti-Le x, Signet Laboratories, Inc., Dedham, MA) fue seleccionado para detectar la Le gástrica x antígenos [11, 12]. Además de Le x tinción de antígeno, el anticuerpo monoclonal contra sialil-Le x (IgM de ratón MAB2096, Chemicon International, Inc., Temecula, CA) se utilizó [12]. sitios de unión no específicos se saturaron con 2 a 2,5% de albúmina de suero bovino. Para cada sitio gástrica, la intensidad de Le x (rango 0-5) y sialil-Le x (rango 0-4) se puntuó de acuerdo a la topografía de la tinción (Figura 1). la intensidad del antígeno Lewis gástrica total de Le xy sialil-Le x era la suma del antro, cuerpo y cardias (rango 0-15 en Le x, y 0-12 en sialil-Le x). Figura 1 La inmunohistoquímica (IHC) tinción y clasificación de Lewis x (Le x), y sialil-Lewis x (x) sialyl- Le antígenos se muestran para las biopsias gástricas de ratones (200 ×). La tinción inmunohistoquímica mostró negativo para dos antígenos de Lewis y se denomina puntuación de 0. Para Lex, la puntuación de 1 (A): escasa tinción (< 5% en las células parietales de las glándulas profundas; puntuación 2 (B): glándulas profundas 5 -50% de tinción y débil; puntuación 3 (C): glándulas >profundas; 50% de tinción y fuerte; anotar 4 (D): capa entera de profundas glándulas con tinción del epitelio superficial, ninguna expresión de moco; puntuación de 5 (e): todo . capa con la expresión de moco Para sialyl- Lex, la puntuación de 1 (F): sólo el moco superficial positiva; puntuación 2 (G): El moco y epitelio superior; puntuación de 3 (H): epitelio superior y glándulas profundas (células principales y lt; 50% .); anotar 4 (I): el epitelio superior y glándulas profundas (células principales ≥ 50%): perfil tinción inmunohistoquímica y de puntuación para la expresión de citoquinas
Las secciones congeladas (4 m) se secaron a temperatura ambiente durante 2 h, y se fijaron con 3,7% de formaldehído durante 1 min. Después de lavar con PBS dos veces, las muestras se fijaron con acetona fría y después se lavaron con PBS. La Ig de ratón Reactivo bloqueante (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EE.UU.) se utilizó para bloquear los sitios de unión no específicos. Los anticuerpos monoclonales de rata anti-ratón (TNF-a, IL-6, IL-10, IL-1ß, y IFN-gamma) y el anticuerpo policlonal anti-ratón de conejo (IL-1β) se usaron como el anticuerpo primario. El HRP conjugado de polímero de amplio espectro (Zymed Laboratories Inc. South San Francisco, CA, EE.UU.) se utilizó como 2 nd anticuerpo. El kit AEC se utilizó para ilustrar la mancha. La intensidad de cada citoquina se puntuó de acuerdo a la distribución de células de tinción positiva en el epitelio (intervalo 0-3), y en los componentes de la lámina propia, incluyendo la matriz, las células polimorfonucleares, linfocitos, y los fibrocitos (Tabla 1) .Tabla 1 Puntuación de las expresiones de citoquinas en el epitelio y la lámina propia gástrica.

Puntuación
0

1
2
3
epitelio
negativo
Menos del 33%
33% -67%
más del 67%
lámina propia
Matrix
Ausencia
presencia de linfocitos

Ausencia
Presencia
fibrocitos
Ausencia
presencia de neutrófilos

Ausencia
Presencia Francia el puntuación cuantitativa de cada uno de citoquinas en el epitelio fue el siguiente: 1 puntuación: tinción positiva en el citoplasma de las células epiteliales sólo en la parte superior 1/3 parte del epitelio; Resultado 2: en la parte superior y media del epitelio (1 /3-2 /3); puntuación 3: en toda la capa del epitelio (> 2/3). La tinción positiva de cada uno de citoquinas en la lámina propia (linfocitos, fibrocitos, y neutrófilos) quiere decir que hubo más de cinco células positivas en un campo de alta potencia de vista en el examen microscópico. El análisis estadístico
χ de Pearson 2 se utilizó la prueba para probar la diferencia de las tasas de colonización entre los ratones experimentales y de control. Los parámetros histológicos, antígenos de Lewis, y las expresiones de citoquinas se compararon con la prueba exacta de Fisher para diferentes subgrupos. Se utilizó el test de Friedman para probar la diferencia de H. pylori densidad
entre el antro, cuerpo y cardias del estómago de cada ratón. Todas las pruebas se evaluaron dos colas y un valor de p <
; 0,05 se consideró como significativo.
: Resultados de la Las tasas de éxito H. pylori
colonización en ratones con diferentes edades de adquisición
en los 2 ª semana después de H. pylori
desafío, H. pylori
colonización tuvo éxito en 89% (8/9) del grupo de ratones jóvenes y 100% (10/10) del grupo de ratones adultos. Por el contrario, en la 8 ª semana después de H. pylori desafío
, la tasa de colonización fue significativamente menor en los ratones jóvenes que en los ratones adultos (53% vs. 95%, P = 0,003
). Para los ratones con colonización exitosa ya sea en la 2 nd o la 8 ª semana, las densidades de H. pylori
se distribuyeron uniformemente en el antro, corpus, y cardias tanto en ratones jóvenes y adultos ( P Hotel > 0,05)
específicas por edad gástricos Lewis antígenos y citoquinas expresiones en los ratones no tratados previamente Hoteles en los ratones ingenuo de los dos grupos de jóvenes y adultos, las expresiones de Le xy sialyl-. Le x eran débiles en el antro gástrico. Sin embargo, un aumento gradual de la intensidad total de Le xy sialil-Le x expresiones se dan a conocer en los incrementos de edad (Figura 2 A & 2B). Dicho aumento alcanzó una meseta desde la edad cronológica de cerca de 5 semanas de edad. Al ª semana 2 y el 8 ª semana después de H. pylori desafío
, el Le x expresiones no fueron diferentes entre los ratones colonizados y el control en ambos grupos de jóvenes y adultos. Figura 2 La intensidad de Lewis gástrica antígenos en ratones ingenuos a diferentes edades de la vida (A) x Lewis, (B) sialil-Lewis x. México La intensidad de la expresión de citoquinas gástrica varió entre las diferentes edades de los ratones y ubicación. Para las citoquinas proinflamatorias, no hubo tinciones positivas de TNF-α e IL-6 en el epitelio superficial en cualquiera de los ratones no tratados previamente. Las tinciones positivas de TNF-α y la IL-6 sobre los linfocitos, fibrocitos, y neutrófilos más de la lámina propia fueron significativamente mayores en los ratones de edad ≥ 5 semanas de edad que los < 5 semanas (P
< 0,01; figura 3A &Amp; 3B). La tinción positiva de IL-1β se encuentra principalmente en el epitelio y expresó temprana en ratones de edad y lt; 5 semanas. La tasa de tinción positiva de IL-1β en los neutrófilos fue mayor en los ratones de ≥ 5 semanas que los mayores de < 5 semanas (P
< 0,05; Figura 3C). Figura 3 expresiones de citoquinas gástricos en el epitelio y la lámina propia entre los ratones no tratados previamente edad ≥ 5 semanas y < 5 semanas. (A) Tumor factor de necrosis alfa (TNF-α), (B) la interleucina 6 (IL-6), (C) la interleucina 1 beta (IL-1β), (D) de interferón gamma (IFN-γ), y (E ) interleucina 10 (IL-10).
en la vida temprana de los ratones, la tinción de IFN-γ positivo fue en la mayoría se encuentran en el epitelio y de la matriz, como la intensidad de la tinción positiva IFN-γ disminuyó después de ≥ edad 5 semanas (P
< 0,01, Figura 3D). Sin embargo, una tasa significativamente mayor de tinción positiva de IFN-γ en los linfocitos y fibrocitos se dio a conocer en los ratones de edad ≥ 5 semanas que los mayores de < 5 semanas (P
< 0,01).
En contraste con la tinción de IFN-γ pesado sobre el epitelio en la vida temprana de los ratones, la IL-10 era por lo general negativa en el epitelio. La tinción positiva de IL-10 fue mayor en los linfocitos y los fibrocitos en los ratones con edades ≥ 5 semanas que en los mayores de < 5 semanas (P Hotel < 0,05; Figura 3E). Histología
ratones y la expresión del antígeno Lewis después de la infección por H. pylori

En la página 2 ª semana después de H. pylori
desafío, el H. pylori
-colonized ratones jóvenes parecían tener una tasa ligeramente superior de alta TCIS (puntuación ≥ 4) que los ratones de control (88% vs. 50%, p = 0,15
), pero tales una significación marginal no se da a conocer en los ratones adultos (30% vs. 30%, p = 1,00
). Por otra parte, en el grupo de ratones jóvenes, los ratones con la colonización persistente de la 8 ª semana tuvo una tasa evidentemente superior de altos TCIS que los ratones que perdieron la colonización (40% vs. 11%, P = 0,30
) . En la página 2 ª semana después de H. pylori desafío
, el porcentaje de ratones jóvenes colonizados que tienen una alta intensidad de sialil-Le x expresión (puntuación ≥ 7) había disminuido en comparación a la de los ratones de control (25% vs. 60%, P = 0,19
). Sin embargo, dicha caída no fue evidente en la 8 ª semana (100% vs 90%, P Hotel > 0,05) y con ratones adultos en el vs. 2 ª semana (90% 100 %, P Hotel > 0,05) y el 8 ª semana (58% vs. 60%, P Hotel >. 0.05) después de H. pylori
retos
expresión de citoquinas gástrico después de infección por H. pylori
en la página 2 ª semana después de H. pylori desafío
, el joven ratones con éxito la colonización tuvo una intensidad significativamente mayor de IL-6 en fibrocitos (75% frente a 0 %, P
= 0,002) y la matriz (75% vs. 20%, P = 0,05
), pero inferior IFN-γ (0% vs. 100%, P
< 0,001) en el matriz que los controles no tratados previamente (Tabla 2). También en los ratones adultos, los ratones con la colonización exitosa se dieron a conocer a tener una tasa más baja de la expresión de IFN-γ en fibrocitos que los ratones de control (30% vs. 90%, p = 0,02
) .Tabla 2 La citoquina gástrica expresiones en la segunda semana de ratones jóvenes y adultos con persistente H. pylori
colonización y control ingenuo ratones.


ratones jóvenes
ratones adultos

Parámetro (%) guía empresas Colonizado gratis (n = 8)
control de
gratis (n = 10)
P
valor
Colonizado gratis (n = 10) guía empresas de control gratis ( n = 10)
P
Valor
IL-6 *
Matrix
75
20
0.05
70
30
NS
de linfocitos
50
10
NS
60
70
NS
fibrocitos
75
0
0,002
80
50
NS
neutrófilos
37,5
20
NS
20
70
0,07
TNF-α *
Matrix
87,5
70
NS
80
90
NS
de linfocitos
62,5
40
NS
90
90
NS
fibrocitos
87,5
40
0,07
100
90
NS
neutrófilos
12,5
10
NS
30
40
NS hotels, IL-1β
epitelio ≥ 2
100
70
NS
100
90
NS
Matrix
a25
0
NS
100
80
NS
de linfocitos
25
20
NS
30
0
NS
fibrocitos
a25
60
NS
100 100

NS
IFN-γ
epitelio ≥ 2
0
30
NS
10
0
NS
Matrix
0
100 Hotel < 0.001
40
20
NS
Linfocitos
0 0

NS
10
30
NS
fibrocitos
12.5
10
NS
30
90
0,02
Neutrophil
0
0
NS
10
20
NS
IL-10*
Matrix
a25
60
NS
100
80
NS
Linfocitos
25
20
NS
60
60
NS
fibrocitos
a37.5
50
NS
100
80
NS
neutrófilos
12,5
0
NS
10
20
NS
CIS: puntuación inflamatoria crónica; AIS: Puntuación inflamatoria aguda. *: Medios colonizados ratones infectados con H. pylori
con la colonización exitosa (prueba de la urea y la histología positiva) en el sacrificio. R: P
valor < 0,01; b: P
valor ≤ 0,05 entre los jóvenes y adultos ratones colonizados. NS: no significativo. * Indica en este parámetro, el epitelio es bastante débil para dicha citocina en la tinción inmunohistoquímica.
Por 8 ª semana después de H. pylori desafío
, las tasas de alta TNF-α (100% vs. 20%, P = 0,02
) en la matriz y de alta IL-1β (100% vs. 20%, P = 0,02
) en fibrocitos fueron mayores en los jóvenes ratones con la colonización persistente que en los ratones de control ( Tabla 3). Para los ratones adultos con colonización exitosa, las tasas de alta IFN-γ (30% vs. 100%, P = 0,003
), IL-10 (20% vs. 100%, P = 0,001
) y IL-6 (50% vs. 100%, P = 0,03
) en fibrocitos también fueron significativamente más bajos que los de los ratones no tratados previamente de control. Sin embargo, fue más común en los ratones adultos colonizados que los ratones de control a tener un mayor IFN-γ (80% vs. 40%), IL-10 (80% vs. 40%), e IL-6 (80% frente a 30%) en el matrix.Table 3 las expresiones de citoquinas en la 8ª semana de ratones jóvenes y adultos con persistente y perdió H. pylori
colonización y control ingenuo ratones.


ratones jóvenes
ratones adultos

variables (% ) guía empresas colonización persistente gratis (n = 5)
perdido la colonización gratis (n = 4) guía empresas de control gratis (n = 10)

P
† valor
persistente colonización gratis (n = 10) guía empresas de control gratis (n = 10)
P
valor
IL-6 *
Matrix
100
80
50
NS
80
30
NS
de linfocitos
25
60
50
NS
70
70
NS
fibrocitos
100
80
70
NS 50

100
0,03
neutrófilos
0
20
50
NS
20
70
NS
TNF-α *
matriz
100 100

20
NS
100
60
NS
linfocitos
100
80
60
NS
90
90
NS
fibrocitos
100 100

70
NS
100
80
NS
neutrófilos
25
20
60
NS
10
40
NS sobre Il-1β
epitelio ≥ 2
100
80
70
NS 100

80
NS
Matrix
75
40
30
NS
100
80
NS
linfocitos
50
60
0
NS
50
60
NS
fibrocitos
100
60
20
NS
100 100

NS
neutrófilos
0 0

20
NS
0
10
NS
IFN-γ
El epitelio ≥ 2
0
80
20
0,048
30
0
NS
Matrix
75
100
40
NS
80
40
NS
linfocitos
75
60
40
NS
30
50
NS
fibrocyte
75
100
50
NS
30
100
0,003
Neutrophil
0
0
40
NS
20
0
NS
IL-10*
Matrix
100
20
70
0.048
80
40
NS
Linfocitos
100
20
70
0,048
40
50
NS
fibrocitos
100
60
70
NS
20
100
NS
neutrófilos
50
0
10
NS
0
10
NS
†: el significado se comparó entre los ratones jóvenes con la colonización persistente y perdido. * Indicado en este parámetro, el epitelio es bastante débil para dicha citocina en la tinción inmunohistoquímica.
Superior sialil-Lex coexiste con niveles de IL-10, pero inferior INF-γ para H. pylori
colonización
Por 2 nd semanas, los ratones joven colonizado tenía ninguna diferencia significativa en la intensidad de la sialil-Le x expresión de los ratones de control (P
> 0,05). Sin embargo, en la 8 ª semana después de H. pylori desafío
, el joven ratones con persistencia de la colonización tuvo una mayor tasa de manifiesto sialil-Le x expresión (puntuación ≥ 7) que los de los ratones que la colonización perdido (100% vs 56%, P = 0,03
). Además de mostrar una mayor tasa de sialil-Le x expresión (puntuación ≥ 7), todos de la persistente H. pylori
-colonized ratones jóvenes coexistieron de manera significativa con una menor IFN-γ y niveles de IL-10 que expresiones aquellos ratones que habían perdido la colonización persistente de la 8 TH semanas (Tabla 4, 100% vs. 0%, P = 0,008
) .Tabla 4 a bajo gástrico IFN-γ (puntuación ≤ 1) expresión en la epitelio coexistiendo con alta sialil-Lex (puntuación ≥ 7) e IL-10 (tanto en la matriz y linfocitos) se correlacionó con la colonización bacteriana persistente en la edad adquisición temprana de los ratones.
expresión de citoquinas (%) guía empresas colonización de ratones jóvenes
OR (IC del 95%)
P
valor *

persistente (n = 4) guía empresas Lost (n = 5)


baja de IFN-γ
100
20
0,2 (0,1-1,2)
0,048
alta IL-10
100
0 -
0,008
baja de IFN-γ y de alta sialil -Lex
100
0 -
0,008
baja de IFN-γ y de alta IL-10
100
0 -
0,008
O : odd ratio; IC: intervalo de confianza; *: Prueba exacta de Fisher
Tabla 5 muestra la puntuación de IFN-γ en el epitelio y la IL-10 en la matriz y linfocitos entre los ratones con la colonización persistente y perdido en el 8 ª semana después de H. pylori
desafío. Ninguno de los ratones jóvenes con la colonización bacteriana persistente tenido la expresión de IFN-γ en el epitelio, pero tenía obvio IL-10 expresión de la matriz y los linfocitos, en comparación con los ratones sin colonization.Table 5 La puntuación de IFN-γ en el epitelio y IL -10 en la matriz y linfocitos en la 8ª semana después de H. pylori
desafío en los jóvenes ratones con y sin persistencia de la colonización.



Puntuación de la IL-10
ratones Nº
Colonización
Puntuación de IFN-γ en el epitelio
en la matriz de
lymphocyte

1
Yes
0
1
1
2
Yes
0
1
1
3
Yes
0
1
1
4
Yes
0
1
1
5
No
1
0
0
6
No
2
1
0
7
No
2
0
0
8
No
2
0
0
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Discusión
adquisición de H. pylori
se produce principalmente en la infancia y la eliminación espontánea de la infección ocurre generalmente en niños pequeños [3-6, 20]. En este estudio, los ratones adultos C57BL /6 tenían un favorable H. pylori
tasa de colonización de las cepas que van a más de 80%, que es compatible con los informes anteriores [13, 14]. Esta alta tasa de colonización en ratones adultos también es compatible para apoyar el hecho de que la adquisición tardía de H. pylori
en pacientes humanos adultos generalmente resulta en la colonización crónica [20]. Por otra parte, en comparación con el 2 nd semanas de ratones jóvenes después de H. pylori adquisición
, la tasa de colonización en el 8 TH semanas fue del 53%, lo que apoya que la eliminación espontánea de H. pylori
realmente ocurre durante la edad de adquisición temprana de los ratones. Así el presente estudio debe ser muy original para introducir un modelo de ratón diseñado para validar que debería haber una pérdida de H. pylori
colonización después de una adquisición anterior de H. pylori
, que imita estrechamente los hallazgos clínicos en los jóvenes los niños.
Nuestro estudio anterior ha demostrado que la intensidad de los gástrica Le x se relaciona positivamente con el incremento de la edad en los seres humanos [12]. Sin embargo, para los que no tienen la infección por H. pylori
, la expresión de sialil-Le x el epitelio gástrico es débil o inexistente en los niños y adultos con dispepsia [12]. Compatible con los seres humanos, la intensidad de los gástrica sialil-Le x de los ratones también se correlaciona positivamente con el incremento de la edad (Figura 2B). Tal hallazgo en ratones también es compatible con un estudio en ratas, el cual da a conocer un incremento relacionado con la edad de la glicosilación en los tejidos del hígado [21]. El aumento gástrica sialil-Le x expresión después de la infección por H. pylori
se ha informado en los seres humanos y los monos Rhesus [9-12]. Sin embargo, en nuestro estudio los ratones, una intensidad disminuida de gástrico sialil-Le xwas da a conocer en el H. pylori
infectados ratones jóvenes, pero no en ratones adultos en el nd semana 2, en comparación con los ratones de control. Más sorprendentemente, en la 8 ª semana después de H. pylori
adquisición, tal disminución de sialil-Le x desapareció en tanto los ratones jóvenes y adultos colonizados, que tenía una mucosa gástrica totalmente sialilada. Este hallazgo sugiere que H. pylori
desafío debe participar perturbar la curva de maduración relacionada con la edad de la sialilación en los ratones jóvenes. Por otra parte, se sugiere indirectamente que los cambios de antígeno sialil-Lewis en ratones jóvenes deben estar altamente correlacionadas con la persistencia o la pérdida de la colonización por H. pylori
.
En este modelo animal, a principios de H. pylori
adquisición determinó una mayor CIS que en los controles sobre el 2 ª semana (87,5% frente a 50%; p = 0,15
), pero no en el 8 ª semana (40% vs. 30%, P
= 0,36) después de H. pylori
desafío. Suponiendo que densa inflamación provoca síntomas clínicos más graves, este cambio histología podría ser correlacionada con nuestros hallazgos previos de que la infección por H. pylori
podría causar dolor epigástrico a corto plazo en los niños, aunque por lo general resuelta en el seguimiento [22]. Con respecto tanto en la observación clínica y los datos del modelo de ratones in vivo, H. pylori
adquisición en los niños generalmente se presenta como una secuela autolimitada en la inflamación.
Después de la infección por H. pylori
, las diferentes respuestas del huésped de la gástrico citocinas, posiblemente, podrían estar relacionados con diferentes resultados clínicos [14, 18, 23, 24]. En este estudio, se encontró que los ratones no tratados previamente para tener regular de IL-1β y expresiones de IFN-γ (Figura 3C & 3D) en el epitelio gástrico, que es coherente con un informe anterior en los seres humanos [15]. Nuestro estudio ratones mostraron una expresión de citoquinas específico de la edad sobre el epitelio gástrico (IFN-γ) y lámina propia (IL-6, TNF-α, IFN-γ, y IL-10). Debido a la respuesta específica de la edad de las citoquinas, nuestro estudio apoya que debe haber diferentes respuestas inmunitarias ingenuas entre niños y adultos.
Basándose en el estudio inmunohistoquímico, este estudio confirmó que las expresiones de citoquinas pro-inflamatorias en la lámina gástrica propria podría cambiar tanto en la 2 ª y la 8 ª semana después de H. pylori
desafío [25, 26]. Tanto en ratones y en seres humanos, las respuestas de citoquinas gástricos de H. pylori
la infección se ha demostrado que ser Th1-dominante, porque el nivel de IFN-γ se incrementa en H. pylori
sujetos infectados por comparación con los controles [15, 18, 23, 27]. Un nivel alto de INF-γ se ha atribuido como sello de H. pylori
-related gastritis, especialmente durante la inflamación crónica y potencialmente atribuido como un papel protector contra H. pylori
colonización [16-18, 28]. Como se muestra en la Tabla 3, que se da a conocer que los ratones jóvenes con una pérdida de la colonización tenía una expresión de IFN-γ más alto en el epitelio de los ratones con la colonización persistente (P
= 0,048). Este hallazgo es compatible con un estudio en seres humanos en los niños que mostró que los niños con H. pylori
infección tuvieron una menor concentración de IFN-γ que en los controles no infectados [29]. Estos datos en ratones sugiere que puede haber una correlación significativa a la pérdida de la colonización una vez que hay una alta expresión de IFN-γ. Por lo tanto, debe ser en cuestión para examinar la respuesta del huésped diferente de IFN-γ que pueden estar relacionados con tener diferentes resultados de infección pylori
H. en los niños.
IL-10 es una citocina Th2, y puede ser activado por regulación de compensación después de un cambio de Th1 por el H. pylori
desafío para proteger la mucosa gástrica [13, 15, 23, 27]. Por lo tanto, no es tan sorprendente para ilustrar un aumento significativo de la expresión de IL-10 en los jóvenes ratones con la colonización persistente (Tabla 3). Como se muestra en la Tabla 4, el joven ratones con baja IFN-γ en el epitelio de tener una persistencia de H. pylori
colonización tenía una coexistencia 100% con una alta expresión de IL-10 en la matriz y linfocitos.

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