PLoS ONE: Smanjen core-fukozilacije Doprinosi zloćudni tumor u rak želuca

Sažetak pregled

Cilj istraživanja bio je ustanoviti N-glikanske promjene profiliranje povezane s rakom želuca i istražiti utjecaj core-fukozilacije o biološkim ponašanja ljudskih stanica raka želuca. su regrutirani ukupno 244 predmeta, uključujući rak želuca, čira na želucu i zdrave kontrole. N-glikana profiliranja iz seruma i ukupnih proteina u želučanom tkivu analizirano DNK sekvencijalne asistirane fluorofornoj uz pomoć kapilarne elektroforeze. Obilje ukupnih ostataka jezgre-fukozilirani i izraz enzima uključenih u core-fukozilacije su analizirani lektina blot, kvantitativnom lančanom reakcijom reverzne transkripcije-polimeraze, Western blot, imunohistokemijska bojanja i lektina-histokemijskim bojanjem. Rekombinantni plazmidi BDP-fukoze transportera i alfa-1,6-fukozil-transferaza (FUT8) koji su napravljeni i transficirana u želučanom staničnim linijama karcinoma BGC-823 i SGC-7901. CCK-8 i zacjeljivanje rana analiza korišteni su za procjenu funkcionalnog utjecaja jezgre fukozilacije modulacije na proliferaciju i migraciju stanica. Karakterističan seruma N-glikana profili pronađeni su kod raka želuca. U usporedbi sa zdravom kontrolom, a trianntenary izobilju strukture, vrh 9. (NA3Fb), značajno je povećan kod raka želuca, dok je ukupna brojnost temeljnih-fukozilirani ostataka (sumfuc) je smanjen. Temeljni-fukozilirani strukture, peak6 (NA2F) i peak7 (NA2FB) je umrlo u želučanim tumorskih tkiva u usporedbi s onim u susjednim ne-tumorskih tkiva. Dosljedno, objektiv culinaris aglutininom (LCA) -vezujući proteini su značajno smanjeni u serumu raka želuca, a razina proteina FUT8 je značajno smanjen u želučanim tumorskih tkiva u usporedbi s onim u susjednim ne-tumorskih tkiva. Pojačanu regulaciju BDP-Tr i FUT8 mogu inhibirati proliferaciju, ali nije imao značajan utjecaj na migraciju BGC-823 i SGC-7901 stanica. Temeljni-fukozilacije dolje je regulirano raka želuca. Doreguliranje core fukozilacije može inhibirati proliferaciju ljudskih stanica raka želuca pregled

Izvor. Zhao Y-P, Xu X-Y, Fang M, Wang H, ti Q, Yi C-H, et al. (2014) Smanjen core-fukozilacije Doprinosi maligniteta u rak želuca. PLoS ONE 9 (4): e94536. doi: 10,1371 /journal.pone.0094536 pregled

Urednik: Salvatore V. Pizzo Sveučilišta Duke Medical Center, Sjedinjene Američke Države pregled

Primljeno: 19. kolovoz 2013; Prihvaćeno: 17. ožujka 2014. Objavljeno: 14. travanj 2014 pregled

Copyright: © 2014 Zhao i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Studija je podržan od strane Nacionalne zaklade prirodoslovni Kine (br 81201697, 81101639 i 81271925 br); Znanost i tehnologija povjerenstvo Općine Šangaj (br 10ZR1439100 i br 11JC1416400) .The donatori imali nikakvu ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

suprotstavljenih interesa.: autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

karcinom želuca (GC) je četvrti najčešći oblik raka i drugi najčešći uzrok raka povezane smrti u svijetu [1]. - [3], osobito prisutni u mnogim azijskim zemljama, posebno Kina [4]. Protein glikozilacija je jedan od najčešćih posttranslacijskih modifikacije na proteinima [5]. Glikana mogu biti vezani na proteine ​​ili preko amidne skupine (N-vezana glikozilacijska) ili hidroksilna grupa (O-povezana glikozilacija), koje se pojavljuju različitim biosinteskim putovima i potencijalno nezavisne funkcije [6]. N-povezana glikozilacija ima temeljnu ulogu u mnogim biološkim procesima, kao što su stanične adhezije, migraciju stanica, te prijenosa signala [7]. Nenormalna ekspresija N-vezani glikoproteini je primijećeno u različitim bolestima [8] - [10]. Nakon dubinskog karakterizaciju N-vezanih glikoproteina i bolesti povezane glikozilacije promjena, nekoliko metodologija su razvijeni. U našem prethodnom istraživanju, identificirali smo neke N-glikanske markere u heptatocellular karcinoma (HCC) i raka debelog crijeva pomoću kapilarne elektroforeze temelji se zove DNA sekvencer potpomognuto fluorofor potpomognuto kapilarna elektroforeza (DSA-lice) [11]. Osim toga, objavljeno je da je α-1, 6-fukozil-transferaza (FUT8) aktivnosti i ekspresija kojeg je povećana kod nekoliko ljudskih tumora, što ukazuje na ulogu tog enzima u razvoju tumora i progresiji, kao što je HCC [12], rak debelog crijeva [ ,,,0],13], karcinoma ne-malih stanica pluća [14] i jajnika serozni adenokarcinom [15]. Promijenjena jezgra-fukozilacije je jedan od najvažnijih nenormalan glikoziliranog modifikacije identificiran u zloćudnih bolesti. FUT8 katalizira prijenos fukoze iz gvanozin difosfat (GDP), -fucose do unutarnjeg GlcNAc hibridnih i složenost N-vezanih oligosaharida preko a-1,6-veze, što je rezultiralo u jezgri-fukozilirani glikoproteine ​​[16] - [17] i mijenjaju biološku funkciju proizlaze glikoproteina [18]. Iako su mnoge studije izvijestili povezanost izmijenjenom core-fukozilacije i drugih agresivnih tumora, da naše znanje, utjecaj core-fukozilacije na rak želuca ostaje nepoznat. U ovoj studiji analizirali smo N-glikana profiliranje s DSA-lice u oba uzorka seruma od raka želuca, čira na želucu, zdravih i proteina tkiva iz tumora i susjednih ne-tumora. Zatim produžiti funkcionalna istraživanja o uočenim specifične glikozilacije. Pregled

Materijali i metode pregled

Etika Izjava pregled

Protokol istraživanja je odobren od strane kineske etičkog povjerenstva ljudskih potencijala na drugom Medicinski fakultet Sveučilišta Vojni. Svi sudionici studije pod uvjetom pismeni informirani pristanak. Pregled

stanovništvo Studija pregled

U ukupno 105 bolesnika s karcinomom želuca (n = 80) i čir na želucu (n = 25) su bili upisani u razdoblju od prosinca 2007. do listopada 2010 u Changzheng bolnici Vojnomedicinsku Sveučilišta Drugog (Shanghai, Kina). Svi slučajevi s rakom želuca upisani su patohistološki potvrđuju 2 patologa i slučajeva s čira na želucu pribavljeni su potvrđene gastroskop. Pacijenti s rakom želuca koji su primili preoperativna kemoterapija, i koji je imao druge bolesti, uključujući infekcije su isključeni iz studije. Uzorci seruma su dobiveni prije kirurških resekcija. Za kontrolnu skupinu, 139 odgovarajuće starosti, zdravi dobrovoljci su bili upisani iz bazena raka bez pojedinaca koji posjećuju istu bolnicu za redovito fizički pregled i koje su se dobrovoljno pridružiti istraživanja u istom razdoblju. Definirali smo zdravog pojedinca kao netko tko se smatralo bez bolesti (uključujući bez povijesti raka) na zdravstvenom pregledu. Sljedeće kliničke značajke ispitanika dobiveni su za vrijeme cijelog uzorak krvi. Sažetak podataka iz tih predmeta je u tablici 1. napredovanje svih bolesnika s karcinomom želuca je klasificiran prema Uniji za međunarodnu kontrolu raka (UICC) kriterijima TNM za rak želuca, 13 bolesnika (16,25%) je imao fazu i, 24 bolesnika (30,00%) je imao faza II, 30 bolesnika (37,5%) je imao fazu III, a 13 bolesnika (16,25%) je imao faza IV. Prosječna dob svih bolesnika bila je 54,35 ± 6,69, uključujući 60 muškaraca i 20 žena. Serum se prikupi pomoću standardnog protokola iz pune krvi, tretira centrifugiranjem na 10.000 g tijekom 20 minuta, i pohranjeni na -80 ° C. Pregled

N-glikana profiliranje iz proteina seruma pregled

serum protein N-glikanu analiza izvedena kako je prethodno opisano [11]. Ukratko, N-glikana prisutni na proteine ​​u 2 ul seruma su pušteni s peptidnom N-glikozidazom-F (PNGaseF) (New England Biolabs, Boston, MA), a zatim označene sa 8-aminonaphtalene-1, 3, 6- trisulphonic kiselina (APTS) (Invitrogen, Carlsbad, CA) .Sialic kiselina je uklonjena sa Arthrobacter ureafaciens sijalidaze (Roche Bioscience, Palo Alto, CA) i obrađeni uzorci su analizirani DSA lice tehnologijom pomoću kapilarna elektroforeza temeljen ABI3500 genetski Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA). U 9 ​​Najintenzivnije vrhovi koji su otkriveni u svim uzorcima (zajedno, ovi vrhovi činili > 90% ukupnih serumskih N-glikana) analizirani su pomoću GeneMapper softvera (Applied Biosystems). Svaka struktura N-glikana opisan numerički normalizaciju svoj vrhunac na zbroj visina svih vrhova. Pregled

Uzorci tkiva

Svi tkiva su korišteni u skladu s propisima o Institutional Review Board of Druga vojna Medical University. Uzorci tkiva dobiveni æe od 10. od 80 pacijenata s rakom želuca. Uzorci tkiva uključena 2 kriške, a tumorskog tkiva i susjedne ne-tumorsko tkivo. Spareni uzorci tkiva (otprilike 0,5 x 0,5 x 0,5 cm ^{3 duplikati svaki uzorak) odabrane su ili odmah zamrznuti na -80 ° C, RNA i proteina ekstrakcijom ili fiksirani u 10% puferiranom formalinu do 24 sata i zatim obrađeni u parafinskom bloku ugrađen i pohranjeni na sobnoj temperaturi histokemijskim bojanjem. pregled}

N-glikana profiliranje iz proteina tkiva i strukturna analiza koristeći exoglycosidase probavu pregled

proteini su ekstrahirani iz približno 25 mg zamrznutih uzorcima tkiva , Uzorci tkiva su suspendirane i pestled u puferu za lizu koji sadrži inhibitore proteaze koktel (Roche Diagnostics, Meylan, Francuska). Nelizirane dijelovi su uklonjeni centrifugiranjem (12000 g tijekom 10 minuta na 4 ° C) dva puta. Koncentracija otopljenih proteina određena je korištenjem BCA kit (Pierce Biotechnology /Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL), a uzorci proteina je pohranjen pri -80 ° C do upotrebe. Ukupno 40 J..lg proteina tkiva kako bi se odredio N-glikana profile pomoću redovite N-glikana metoda profiliranje isto kao da je izvedena u serumu opisan gore. Prepoznati osnovne-a-1, 6-fukozilirano N-glikanu strukture, odgovarajući broj APTS-obilježeni N-glikana digestirani su s obje Arthrobacter ureafaciens sijalidaze i goveđeg bubrega α-1, 6-fukozidaza (Prozyme, San Leandro, CA , USA). DSA-FACE tehnologija korištena je za analizu probavne proizvode i GeneMapper software je korišten za analizu visine vrhova. Pregled

ekstrakcija RNA i kvantitativne real-time PCR

Ukupno RNA su iz smrznute tkiva i stanica, koristeći ukupno kit ekstrakcija RNA prema uputama proizvođača (Axygen bioznanosti, Hangzhou, Kina). Čistoća i koncentracija RNA određena je spektrofotometrom (Eppendorf, Hamburg, Njemačka), a zatim pohranjene na -80 ° C do upotrebe. CDNA je sintetizirana upotrebom ReverTra Ace-α-RT-PCR (Toyobo Co., Osaka, Japan) u skladu s uputama proizvođača. Primeri su oblikovani korištenjem programa Primer Express (Applied Biosystems, sekvencije su prikazane u Tablici S1). Kvantitativna realnom vremenu PCR je provedena korištenjem SYBR® Green Real-time PCR Master Mix kit (Toyobo, Osaka, Japan), a bila je analizirana na Biosystcms 7300 real-time PCR sustava (ABI, Foster City, CA, USA) , Sva ispitivanja su provedena u triplikatu samostalno. PCR se sastojao od biciklizam denaturacije na 95 ° C tijekom 5 minuta, nakon čega slijedi 40 ciklusa na 95 ° C tijekom 15 sekundi, a na 59 ° C ili 55 ° C kroz 15 sekundi, a detekcija 45 sekundi na 72 ° C. Relativna količina FUT8 ili gvanozin difosfat (GDP) -fucose transporter (GDP-Tr) transkripata u svakom uzorku je normalizirana na domaći gen P-aktin i gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH) oduzimanjem ciklus. Razine ekspresije gena je određena pomoću Delta-Delta Ct metode. Apsolutne vrijednosti prijepis izraz iznad 40 ciklusa smatra se ispod mjerljive razine. Tope krivulje su provjereni za svaku reakciju da bi se zajamčilo jedan proizvod je pojačan. Pregled

Western blot i lektin blot pregled

Proteini su ekstrahirani iz smrznutog tkiva s prethodno opisanim postupkom, a ukupno 50 ug proteini su razdvojeni elektroforezom u 10% natrij dodecil sulfat-poliakrilamid gelu (SDS-PAGE). Gelovi su obojani sa Coomassie blue G250 ili proteina u gelu se prenesu na nitroceluloznu membranu () za detekciju FUT8 ili postotak osnovne-fukozilirani proteina. Za uzorcima seruma, ukupno 85 slučajeva od raka želuca (n = 80), želuca (n = 25) i zdrave kontrole (n = 30) korišteni su za SDS-PAGE i lektina-blot. Membrane su blokirane preko noći na 4 ° C sa 5% nemasnim mlijekom proteina ili 5% albumina goveđeg seruma u Tris-puferiranoj slanoj otopini [140 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (TBS)] i zatim inkubirane tijekom 2 sata na sobnoj temperaturi s 1:100 razrijeđena anti-humano antitijelo FUT8 (15C6, anti-humani FUT8, Fujirebio Corp., Japan) ili 5 ug /ml biotiniliranog leće culinaris aglutininom A (LCA) (Vector Laboratories, Burlingame, CA) u TBS koji sadrži 0,05% Tween-20 (PBST pufer) i zatim inkubirane s 1:10,000 razrjeđenje fluorescencije obilježenim sekundarnih antitijela (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE), ili IRDye 800CW-streptavidinom (Li-COR Biosciences) kroz 1 sat na sobnoj temperaturi , Membrane su razvijene uz Odyssey IR Imaging System. Anti-beta aktin (1:2000) se koristi za unutarnju referentnog antitijela za western-hibridizaciju. Pročisti albumin je korišten kao negativna kontrola za lektina analizom i ukupnog proteina obojani sa Coomassie blue je korišten za izračunavanje postotka jezgre-fukozilirani proteina. Pregled

Imunohistokemijska (IHH) bojenje i lektin-histokemijsko obojenje pregled

fiksni uzorci tkiva uklopljene u parafin izrezati na 4 mm bolesne kriške za imunohistokemijski bojanjem FUT8 i lektina-histokemijskim bojanjem za LCA. Nakon podvrgavanja deparaffinization, rehidraciju, endogene peroksidaze blokiranje, i vraćanje antigen (10 mM Tris /1 mM EDTA, pH 9.0, autoklava pomiješa), primjerci su inkubirani sa mišjim monoklonskim protutijelom protiv ljudskog FUT8 (1:100) ili biotiniliranim LCA (1 :500) preko noći na 4 ° C, a zatim s hren peroksidaza-konjugiranog sekundarnog antitijela ili Fluorescein obilježenog streptavidina na 37 ° C tijekom 30 min. Jezgre su prebrojane s hematoksilinom ili Draq5. Negativna kontrola se sastoji od identično tretiranih histoloških sekcija s IgG-a zamijeniti miša FUT8. Pregled

Stanične linije i kulture pregled

ljudske stanične linije raka želuca, BGC-823 i SGC-7901, su kupili iz Šangaja Instituta za staničnu biologiju, kineske akademije znanosti i kultivirane na 37 ° C pod 5% CO _{2 u 1640 srednjim i DMEM mediju (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA), odnosno, sa 10% FBS, 1% glutamina i 1% otopina antibiotik. pregled}

Izgradnja BDP-Tr i FUT8 rekombinantnih plazmida i transfekciju želučanih stanica raka pregled

pEGFP-N1-BDP-Tr i pEGFP-N1 -Fut8, plazmid vektor koji kodira ljudsko BDP-Tr ili FUT8, generiran umetanjem BDP-Tr ili FUT8 cDNA u pEGFP-N1 vektor (Clontech Laboratories, Inc., Mountain View, CA, USA), koji sadrži CMV promotor i SV40 rani promotor, kao i gen neomicin /kanamicin otpornost Tn5. Vektor Okosnicu sadrži SV40 ishodište replikacije u stanicama sisavaca. Višestruko kloniranje (MCS) nalazi se pored neposrednog ranog promotora CMV. Ljudski GDP-Tr ili FUT8 gena je kloniran iz mRNA ekstrahira sa TRIZOL reagensom (Invitrogen, Carlsbad, USA) od ljudskog tkiva jetre izvođenjem RT-PCR uporabom klica (Tablica S2) u kojoj Xho I ili KpnI restrikcijskim mjestima su uključeni, probavlja sa Xho ili Kpnl i vezanjem u pEGFP-N1. PEGFP-N1-GDP-Tr ili pEGFP-N1-FUT8 transficirana u Escherichia coli DH5a za pojačavanje i DNA sekvenciranje da bi se osiguralo vjernost. Plazmid DNA je pripravljen uporabom Qiagen DNA mini kit (Qiagen, Hilden, Njemačka) prema naputku proizvođača. Plazmidi su transfecirani u ljudskim staničnim linijama karcinoma želuca, BGC-823 i SGC-7901 na 80% -tne konfluencije i 5 × 10 ^{5 stanica po jažici u šest jažica korištenjem Lipofektamin ™ 2000 (Invitrogen, Carlsbad, USA ) u skladu s uputama proizvođača. Transficirane stanice koje su izražavale ciljanog gena je potvrđena pomoću kvantitativne RT-PCR. Pregled}

Stanična proliferacija Test pregled

stanici proliferacije analize su provedene s brojanja Kit-8 (CCK-8 Dojin, Japan) u skladu s uputama proizvođača. Rast stanica je praćen svakih 24 sati, tijekom 5 dana, a za svaku vremensku točku je provedeno u duplikatu. Apsorbancija je izmjerena za svaku komoru na valnoj dužini od 450 nm. Pregled

zacjeljivanja rana Test pregled

zacjeljivanja ispitivanju, ljudske stanične linije raka želuca, BGC-823 i SGC-7901 ( 1 × 10 ^{5 stanica /35 × 11 mm posudama) nasađene i inkubiraju 24 sata pri 37 ° C i zatim transfektirane s rekombinantnih plazmida. Nakon postizanja konfluentnosti, stanični sloj u svakoj ploči je ogreban uporabom plastičnih pipete. Migracija stanica na rubu nule analizirana je na 0, 24 i 48 sati, slike su zarobljeni i analizirani pomoću Leica fluorescentnim mikroskopom i uskladiti analiza slike softver (Comet Assay IV sliku analiza sustava, PI, UK).}

Rutinska tumora kavu Otkrivanje pregled

Klinički i biokemijski podaci iz bolesnika prikazani su u tablici 1. Rutinski biokemijske pretrage su standardnim metodama i podudarne reagense (Hitachi 7600 Analyzer (Hitachi, Tokyo, Japan) . razine tumorskih biljega, uključujući ugljikohidratni antigen 19-9 (CA19-9), karcinoma-embrionalne antigen (CEA), keratin 19 (CK19), ca125 i CA724, određeni su na Roche P170 modularan s podudarnim reagensa. pregled

Statistička analiza pregled

Svi kvantitativne varijable izražene su kao srednje vrijednosti ± standardna devijacija, osim ako nije drugačije navedeno. kvantitativne varijable u odnosu Student t-testova, analiza varijance (ANOVA), ili neparametrijskim testova. Pearson koeficijenti korelacije (Spearman koeficijenti korelacije su izračunate za rednim kategoričke varijable) i njihove povezane vjerojatnosti ( p pregled) korišteni su za procjenu korelacije između parametara. Sve prijavljene p
vrijednosti su bile 2 repom, i p
vrijednosti 0,05 smatrane su statistički značajne. Statističke analize su provedene s SPSS 16,0 for Windows statistički softver (SPSS Inc.). Pregled

Rezultati

Različiti serumski N-glikana profiliranje uzoraka u rak želuca, čira na želucu i zdravih kontrola pregled

Upotreba DSA-lice, ispitali smo N-glikanske profile u nesialiliranog seruma bolesnika s karcinomom želuca (n = 80), želuca (n = 25), i dobi zdravih osoba (n = 139). kvantificirane smo i statistički usporedio ove vrhove među 3 različite skupine. Najmanje 9 N-glikanu strukture (pikovi) identificirane su u svim uzorcima (Slika 1A). Strukturalna analiza tih N-glikana je ranije objavio Callewaert [11]. Prosječna relativna gustoća tih N-glikana struktura je opisano u tablici 2. obilju struktura u vrhove 2, 3, 5, 6, 7, 8 i 9 su pokazale statistički značajne razlike među raka želuca, čir na želucu i zdravu kontrolu skupine, koje ukazuju da različiti N-glikana obrasce pojavila u različitim patofiziološkim uvjetima. U odnosu na zdrave kontrolne skupine, peak5 (bigalacto biantennary glikana, Na2) i peak9 (odvojak a-1,3-fukozilirano triantennary glikana, NA3Fb) su povišene (P 0,001) (slika 1B); dok core- fukoziliranih vrhova, kao što su peak2 (agalacto core-a-1,6-fukozilirani raspolavlja biantennary glikana, NGA2FB), peak3 (single agalacto osnovne-α-1,6-fukozilirani biantennary glikana, NG1A2F) peak6 (bigalacto jezgre -α-1,6-fukozilirano biantennary glikana, NA2F) i peak7 (bigalacto core-a-1,6-fukozilirani bisekcijske biantennary glikana, NA2FB) se smanjio u želučanoj skupine raka (p 0.001). Isto tako, obilje temeljnih-fukozilirani strukture glikana nazivom sumfuc (označava ukupne osnovne-fukozilirani strukture, uključujući peak-a 1, 2, 3, 4, 6 i 7) značajno je smanjen u rak želuca (P 0,001) (slika 1C ). Želučana skupina Rak je dalje razvrstavaju u 4 podskupine prema TNM od UICC za rak želuca. Struktura obilje i sumfuc nije se značajno promijenio između 4 različite podskupine; Međutim, sumfuc se postupno smanjivala napredovanja faze raka želuca (tablica 3). pregled

Korelacija između N-glikana i rutinske tumorskih biljega

Do danas, HUP je još uvijek široko koristi za probiranje i praćenje karcinoma želuca. Analizirali smo korelacije između pojedinih N-glikana marker s CA19-9, CEA, CK19, ca125 i CA724. Analiza Pearson korelacija pokazala da CEA pozitivno je povezano s peak1 (r = 0,19; P < 0.01) i peak9 (r = 0,28; P < 0.01), a negativno s peak6 (r = -0.18 P 0,01) i peak8 (r = -0,23; p < 0,01). (Tablica 4) pregled

Usporedba sumfuc između karcinoma želuca i drugih vrsta raka probavnog sustava pregled

Ranije smo proučavali su N-glikana profiliranje hepatocelularnog karcinoma (HCC) [19] i kolorektalni rak (CRC) [20]. Obilje sumfuc pokazala statistički značajne razlike među karcinoma želuca (41.32 ± 6,39), HCC (50.99 ± 8,39), CRC (45.33 ± 5,96) i zdravu kontrolu (47.67 ± 5.08) skupine (P < 0,001, Tablica 5), ​​što ukazuje na da različite razine core-fukozilacije pojavila u karcinomima s različitih podrijetla tkiva. Među 4 skupine, razina core-fukozilacije u HCC je bila najviša, dok je razina fukozilacije kod raka želuca je najniža, a bio je čak i niža nego u zdravoj kontroli.

N-Glikanske profiliranje uzoraka u gastričkog tumora i ne-tumorskih tkiva

N-glikanu profili su ispitani nesialiliranog proteina iz želuca tumora i ne-tumorskih tkiva. Tri najrasprostranjeniji bigalacto biantennary glikana pokazala u serumu, peak5 (N2), peak6 (NA2F) i preak7 (NA2FB) također su pronađene u proteinima tkiva (slika 2A). Peak6 i Peak7 potvrđeni da jezgra-fukozilirani strukture dervied iz peak5 nakon liječenih s jezgrom-a-1, 6-fukozidaza probavom (Slika 2A). Visine tih triju vrhova su analizirani pomoću GeneMapper softvera. Omjer peak6 za peak5 bio niži u tumorskim tkivima nego u susjednim ne-tumorskih tkiva (0,83 ± 0,18 vs 1,05 ± 0,42, slika 2B), kao i omjerom peak7 prema peak5 (0,13 ± 0,06 vs 0,16 ± 0,04, slika 2C). Međutim, nije bilo statistički značajne razlike (P > 0,05). Između tumora i ne-tumorskih tkiva pregled

Smanjena razina ukupnog jezgre fukozilacije utvrđene u serumu i tkiva od raka želuca pregled

Od LCA mogu specifično prepoznati glikoproteini s α-1,6-fukozilirani-povezanog N-acetil-D-glukozamin-asparagin (GlcNAc-Asp) u trimannosyl jezgri, istražuju se ukupno srž fukozilirani proteina iz seruma i tkiva u raka želuca upotrebom LCA za provjeru na utvrđenje u DSA lice. U serumu, razina osnovne fukozni ostatak LCA veže na bilo niže u karcinomu želuca nego što se u želuca i zdravih kontrola (Slika 3A). Ukupna obilje jezgra fukoza i trended biti niža u gastričnih tumora u usporedbi s onom u uparenim susjedna tkiva (slika 3b). Da bi se utvrdilo da li je promjena ukupnog jezgre fukozilacije u želučanom tumorskog tkiva koje se odnosi na promjene u glikozilacije biosinteze puta, kvantitativna RT-PCR je korištena za analizu obilje FUT8 sisavaca i BDP-Tr u želučanim tumora i susjedna tkiva. Rezultati su pokazali da postoji značajna razlika u FUT8 i izražavanja BDP-Tr mRNA zabilježene su između tumora i susjednih tkiva (Slika 3C i 3D). Relativna brojnost FUT8 proteina prikazati upotrebom western blot (sirovi podaci su prikazani na slici S1). FUT8 u susjedna tkiva bio je znatno veći nego u tumorskim tkivima (p 0,05) (Slika 3e). Immunohistokemija je pokazala da je FUT8 snažno izražena na pozitivno luminalnih granicama želuca stanicama ne-tumorske (slika 4b), no slabo pozitivno izraženi u tumorskim stanicama (Slika 4A). Ekspresija jezgre-fukozilirani glikoproteine ​​LCA-vezanje bila je veća u želučanim stanicama ne-tumor nego što je to kod tumorskih stanica (Slika 4C, 4D). Dakle, razina ukupnog jezgre fukozilacije identificiran je smanjena u serumu i tkivima od raka želuca. Pregled

Utjecaj FUT8 i BDP-Tr na proliferaciju i migraciju u ljudskim staničnim linijama karcinoma želuca

ljudskih staničnih linija raka želuca, BGC-823 i SGC-7901 su korištene in vitro studiji. Od BGC-823 je izrazio nižu razinu BDP-Tr dok SGC-7901 izrazio nižu razinu FUT8 u našem pilot-istraživanja, pEGFP-N1-BDP-Tr bilo je ubačeno u BGC-823 za ekspresijom BDP-Tr i pEGFP-N1 FUT8 je transfektiran u SGC-7901 za ekspresijom FUT8. Rekombinantni izrazi su uspješno realizirana je prikazano reporter gen GFP izraz (Slika S2). Procijenjen je mogući angažman BDP-Tr i FUT8 u proliferaciji tumora i migracije, BGC-823 i SGC-7901 stanice su istraživali nakon transfekcije pomoću CCK-8 i rana ljekovitim testa migracije respektivno. Rezultati su pokazali da uzlazni BDP-Tr smanjen BGC-823 proliferaciju na 2-5 dana nakon transfekcije i pojačanja djelovanja FUT8 smanjen SGC-7901 proliferaciju 2 dana nakon transfekcije (slika 5A i 5B). Ovi rezultati ukazuju da je visok ekspresija BDP-Tr i FUT8 mogao potisnuti proliferaciju ljudskih stanica raka želuca. Zacjeljivanje rana Analiza je pokazala da BDP-Tr i FUT8 nemaju značajan utjecaj na migracije u BGC-823 i SGC-7901 na 48 h nakon tretmana (Slika 5C i 5D). Pregled

Rasprava pregled

glikozilacije jedna je od najčešćih post-translacijske modifikacije pojavili u oko 70% svih poznatih proteina. Promjene glikozilacije igraju ulogu u različitim oblicima bioloških pojava, kao što su stanica metastaza tumora, unutarstanični komunikacije i upale [21] - [23]. Sve više i više studije pokazuju da su promjene glikozilacije i razine glikoziltransferaze aktivnosti izvedenih iz maligne transformacije su relevantni za ljudska malignih bolesti [24] - [25]. DSA-FACE je jednostavna i učinkovita tehnologija za mjerenje N-glikana promjene u serumu. Mi smo ranije koristili ovu tehnologiju kako bi se pomoglo u dijagnostici HCC i CRC [19] - [20]. U trenutnoj studiji, koristili smo analizirati karakteristične N-vezani za profiliranje uzorak u raka želuca. Rezultati su pokazali da su bitno različite N-glikana profiliranje uzorci između raka želuca, čir na želucu i zdravih kontrola. Među tim različitim profiliranje uzoraka, pronađeni su peak9 i sumfuc treba mijenjati u suprotnom uzorak u rak želuca, u usporedbi s onima u kontrolnoj skupini. Kao što je prikazano od strane prethodnog istraživanja, peak9 bio povezan s razvojem sorti malignih bolesti, jednom potvrdio nam da je triantennary N-glikana obilje struktura značajno povećana u karcinomu želuca i ta promjena je otkrio da se u korelaciji s HUP, što je najčešće koristi CRC marker te je vrlo heterogena glikoprotein koji sadrži 60% ugljikohidrata [26]. U pojedinačnoj N-analize glikana obilje struktura, primijetili smo da sumfuc je značajno smanjen kod raka želuca u usporedbi s kontrolnom skupinom. Za dodatno potvrditi ovaj nalaz, proveli smo lektin brlju u serumu i tkivima. Korištenjem HCC seruma kao pozitivna kontrola, zapazili smo smanjena fukozilacije od N-glikana u ukupnih proteina u serumu od raka želuca. Sličan trend je otkriveno u želučanim tumorskih tkiva. Ovi rezultati su u skladu s našim prethodnim izvješćima o pravima djeteta [20]. Međutim, rezultati su u suprotnosti s ranijim izvještajima o karcinomima kod drugih podrijetla tkiva. Povećanje fukoziliranih oligosaharidi pod patološkim uvjetima je opisano od strane drugih i naše skupine [19]. Fukozilirani AFP (AFP-L3) je korišten kao HCC markera u kliničkoj praksi [25]. U proturječnosti razina jezgre fukozilacije pojavio se u različite oblike raka može biti zbog različitih igraju različitim tkivima ulogama, npr Jetra je glavni organ za proizvodnju glikoproteina, osim imunoglobulina proizvode B-limfociti [27] - [28]. pregled

fukozilacije katalizira fucosyltransferases, gvanozin 5'-difosfat (GDP) -fucose sintetski enzimi i GDP-fukoze transporter (s). BDP-fukoze je čest donator podloga za sve fucosyltransferases. Nakon GDP-fukoze sintetizira u citosolu, on se transportira na Golgi aparata preko BDP-Tr služiti kao supstrat za fucosyltransferases [17], [29]. Dakle, BDP-Tr je ključni faktor za BDP-fukoze sintetizirati puta. FUT8 je jedini fukozil-transferaza uključen u core-fukozilacije [29]. Otkrili smo smanjili FUT8 ekspresije proteina u tkivu tumora, a uz potporu naše nalaze u serumu. Međutim, FUT8 mRNA nije bilo značajne razlike u želučanim tumora i susjedna tkiva. Glikozilacije reflektira na promjene u okolišu u stanici. Epigenetski modifikacije genoma stabilno prenose se stanice kćeri, bez potrebe za genetske alteracije za sekvencu. [30] pojasniti da li je smanjenje jezgra fukozilacije igra važnu ulogu u procesu karcinogeneze raka želuca, proširena smo studije na želučani stanične linije in vitro. Ustanovili smo da se regulira prema gore BDP-Tr i FUT8 ekspresija u stanicama raka želuca može dovesti do niskog proliferacije. No, nismo uspjeli pronaći nikakav utjecaj core-fukozilacije na migraciju stanica. Ovi rezultati pomažu u objašnjenju potencijalni mehanizam zašto je smanjen temeljni-fukozilacije pojavio rak želuca i ovog dolje regulirano core-fukozilacije u korelaciji s nekim malignim biološkom ponašanju želučanih stanica raka. Pregled

U posljednjih nekoliko godina, postoji nekoliko rezultati otkrivaju da su promjene glikozilacije igraju važnu ulogu u progresiji bolesti osim raka jetre i autoimune bolesti. Značajne promjene u glikozilacije izlučenih glikoproteina uključivao smanjenje temeljne fukozilacije, povećanje grananja i povećana sialilaciju, a izmjene u epigenetičke strojeva imati dubok utjecaj na glikana struktura nastalih stanica za vrijeme jajnika progresiju raka [30]. Razine temeljnih-fukozilirani biantennary glikana i α-2,3-povezanih sialičnih kiselina bila značajno povećana u raka prostate. [31] Bilo je povećanje od 40% u jezgri fukozilacije u glavnim sializiranih biantennary glikana u serumu raka gušterače, što će biti indikativni za podskup tumorom glycoforms [32]. pregled

Nedavno funkcija core fukozilacije je da je to povezano s funkcijom EGFR [33]. Vezanje EGF-a na njegov receptor zahtijeva osnovnu fukozilacije od N-glikana u EGFR.

• PloS Genetics: zametne linije Mutacije u MAP3K6 su povezane s obiteljskim želučani Cancer
• PLoS ONE: Otkriće tumorskih markera za rak želuca by Proteomics