PLoS One: Csökkent Core-Fucosylation Hozzájárul Rosszindulatú a gyomor Cancer

absztrakt katalógusa

A tárgy a tanulmány célja, hogy azonosítsa N¹glikán profilalkotás változások kapcsolódó gyomorrák gyakorolt ​​hatásának feltárását és mag-fucosylation biológiai viselkedések humán gyomor rákos sejteket. Összesen 244 tantárgyból gyomorrák, gyomorfekély és egészséges kontroll toboroztak. N-glikán profilozás a szérum és a teljes proteinek gyomor szövetekben analizáltuk DNS-szekvenáló-assisted fluorofor támogatott kapilláris elektroforézis. A rengeteg mag teljes fukoziiált maradékok és a kifejezés a részt vevő enzimek mag-fucosylation elemeztük lektin-blot, kvantitatív reverz transzkripciós polimeráz-láncreakció, Western blot, immunhisztokémiai festéssel és lektin-hisztokémiai festés. A rekombináns plazmidokat a GDP-fukóz transzporter és α-1,6-fukozil-transzferáz (FUT8) épültek és transzfektáltuk gyomor rákos sejtvonalak BGC-823, SGC-7901. CCK-8 és a sebgyógyulás assay használták, hogy értékelje a funkcionális hatását mag-fucosylation moduláció sejtek proliferációját és migrációját. Jellemző szérum N¹glikán profilok találtak gyomorrák. Összehasonlítva az egészséges kontroll, egy trianntenary szerkezet bőség, csúcs 9 (NA3Fb) volt, jelentősen nőtt a gyomorrák, miközben a teljes rengeteg mag fukoziiált maradékok (sumfuc) csökkent. Core fukoziiált szerkezetek, peak6 (NA2F) és peak7 (NA2FB) adtunk elhunyt gyomor tumor szövetekben, amikor összehasonlítottuk a szomszédos, nem-tumor szövetekben. Egyenletesen, Lens culinaris agglutinin (LCA) -kötő fehérjék jelentősen csökkent szérumában gyomorrák, és a fehérje szintje FUT8 szignifikánsan csökkent gyomor tumor szövetekben összehasonlítottuk a szomszédos, nem-tumor szövetekben. Túlszabályzását GDP-Tr és FUT8 gátolhatja proliferáció, de nem volt jelentős hatása migrációja BGC-823, SGC-7901 sejtek. Core-fucosylation van szabályozva a gyomorrák. Felülszabályozása mag-fucosylation lehetett proliferációjának gátlására az emberi gyomor rákos sejteket.

bevezető hivatkozás: Zhao Y-P, Xu X-Y, Fang M, Wang, H Te Q, Yi C-H, et al. (2014) Csökkent Core-Fucosylation Hozzájárul Rosszindulatú gyomorrákban. PLoS ONE 9 (4): e94536. doi: 10,1371 /journal.pone.0094536 katalógusa

Szerkesztő: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: augusztus 19, 2013; Elfogadva: március 17, 2014; Megjelent: április 14, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Zhao et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Finanszírozás: A tanulmány támogatott Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 81201697, 81101639 és 81271925 számú); Tudományos és Technológiai Bizottságának Shanghai Önkormányzat (No. 10ZR1439100 és No. 11JC1416400) .A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: a szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

a gyomorrák (GC) a negyedik leggyakoribb daganat a második leggyakoribb oka a rákos megbetegedésekkel kapcsolatos halál világszerte [1] - [3], különösen elterjedtek a sok ázsiai országban, különösen Kínában [4]. Fehérje glikoziláció az egyik leggyakoribb poszttranszlációs módosításoknak fehérjékhez [5]. Glikánok lehet csatolni fehérjék vagy amidkötéssel csoport (N-kapcsolt glikozilezési), vagy egy hidroxilcsoport (O-kapcsolt glikozilezési), amely előfordul a különböző bioszintetikus utak és potenciálisan független funkciói [6]. N-kapcsolt glikozilezési játszik alapvető szerepet a számos biológiai folyamatban, mint például sejt adhézió, sejtmigráció, és a jelátvitel [7]. Abnormális expressziója N-kapcsolt glikoproteinek figyelték meg különböző betegségek [8] - [10]. Upon mélyreható jellemzése N-kötött glikoproteinek és a betegség-asszociált glikozilezési változásokat, néhány módszereket fejlesztettek ki. Korábbi vizsgálatunkban, már azonosított néhány N¹glikán markerek heptatocellular karcinóma (HCC) és a vastagbél rák kapilláris elektroforézis alapú nevezett DNS-szekvenáló segített fluorophore segített kapilláris elektroforézis (DSA-FACE) [11]. Ezen túlmenően, azt is leírták, hogy α-1, 6-fukozil-transzferáz (FUT8) aktivitás és expresszió emelkedett számos emberi rákos megbetegedések, ami arra utal, szerepe ez az enzim a tumor kialakulásában és progressziójában, mint például a HCC [12], a kolorektális rák [ ,,,0],13], nem kissejtes tüdőrák [14] és a petefészek savós adenocarcinoma [15]. Megváltozott mag-fucosylation az egyik legfontosabb kóros glikozilezett módosítás azonosított rosszindulatú daganatok. FUT8 katalizálja a fukóz származó guanozin-difoszfát (GDP) -fucose hogy a legbelső GlcNAc a hibrid és komplex N-kapcsolt oligoszacharidok keresztül α-1,6-kötés, ami a mag fukoziiált glikoproteinek [16] - [17], és megváltoztatása biológiai funkciója kapott glikoproteinek [18]. Bár sok tanulmány arról számolt be a szövetség között megváltozott core-fucosylation és más agresszív tumorok, a tudásunk, befolyása core-on fucosylation gyomorrák továbbra is ismeretlen. Ebben a vizsgálatban elemeztük N¹glikán profilalkotás DSA-FACE mindkét szérum mintákban gyomorrák, gyomorfekély, egészséges kontrollok és a szöveti fehérjék tumorok és a szomszédos, nem daganat. Majd húzza ki a funkcionális kutatás időben a konkrét glikozilezéseket. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

A vizsgálati protokollt jóváhagyta a kínai Etikai Bizottság az Emberi Erőforrások a második katonai Orvostudományi Egyetem. Minden vizsgálatban résztvevők írásos beleegyezését adta. Katalógusa

Study lakosság katalógusa

A teljes, 105 gyomorrákos betegeknél (n = 80) és gyomorfekély (n = 25) vontak között 2007. december október 2010 Changzheng Kórház a második katonai Orvostudományi Egyetem (Shanghai, Kína). Minden esetben gyomorrák beiratkozott arra szövettanilag is megerősítették 2 patológusok és esetek gyomorfekély felvett megerősítette gastroszkóppal. Gyomorrákos betegeknél, akik preoperatív kemoterápia, és akik más betegségek, többek között fertőzések kizártuk a vizsgálatból. A szérum mintákat vettünk előtt sebészi reszekció. Egy kontroll csoport 139 életkorú, egészséges önkéntes vett részt a medence rák-mentes, akik meglátogatták a kórházban a rendszeres fizikális vizsgálat, és akik önként vállalták, hogy csatlakoznak a kutatás ugyanezen időszak alatt. Mi határozza meg egy egészséges ember, mint aki ítélték mentes betegségek (beleértve korábban nem rákos) az egészségügyi kivizsgálás. A következő klinikai jellemzőit alanyokat idején nyert teljes vérvétel. Egy összefoglaló a vonatkozó adatoknak a tantárgyak az 1. táblázat A progresszió minden gyomorrákos betegeknél sorolták szerint az Unió nemzetközi Rákellenes (UICC) TNM stádium kritériumok gyomorrák, 13 beteg (16,25%) stádiumú volt I, 24 beteg (30,00%) volt Stage II, 30 beteg (37,5%) volt a szakaszban a III, és 13 beteg (16,25%) volt a szakaszban a IV. Az átlagéletkor összes beteg 54,35 ± 6,69 köztük 60 férfi és 20 nő. A szérumot összegyűjtöttük, standard protokoll alkalmazásával a teljes vérből, kezelt centrifugálással 10,000 g-vel 20 percig, és -80 ° C-on.

N-glikán profilozás a szérum proteinek

szérum fehérje N-glikán elemzéseket végeztünk a korábban leírtak szerint [11]. Röviden, az N-glikánok jelen a fehérjék 2 ul szérumot is megjelent peptid N-glikozidáz-F (PNGáz-F) (New England Biolabs, Boston, Mass), majd jelzett 8-aminonaphtalene-1, 3, 6- triszulfonsav sav (APTS) (Invitrogen, Carlsbad, Calif) .Sialic-ecetsavat eltávolítjuk Arthrobacter ureafaciens által termelt szialidáz (Roche Bioscience, Paio Alto, CA), és a feldolgozott mintát elemeztük DSA-Face technológia segítségével kapilláris elektroforézis-alapú ABI3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA). A 9 legintenzívebb csúcsok találtak mind a minta (együtt, ezek a csúcsok elszámolni > 90% a teljes szérum-N-glikánok) alkalmazásával elemeztük GeneMapper szoftver (Applied Biosystems). Minden szerkezet N¹glikán írták le numerikusan normalizálása a magassága az összeg a magasból minden csúcs. Katalógusa

A szövetminták

Minden szövetet használtak szerint az Intézményi Review Board szabályzata a második katonai Orvostudományi Egyetem. Tissue vettünk from10 80 gyomorrákos betegeknél. Szöveti minták 2 szelet, egy tumorszövet és egy szomszédos, nem-tumoros szövetet. Párosított szövetminták (körülbelül 0,5 × 0,5 × 0,5 cm ^{3, duplikált minden egyes minta) kiválasztott amelyek vagy azonnal lefagyasztottuk -80 ° C-on az RNS és fehérje extrakció vagy rögzített 10% -os pufferolt formalinnal legfeljebb 24 órán át, majd feldolgozni egy paraffinba ágyazott blokk és szobahőmérsékleten tároljuk a hisztokémiai festés.}

N-glikán profilozás a szöveti fehérjék és szerkezeti analízis exoglycosidase emésztés

a fehérjéket extraháltunk körülbelül 25 mg fagyasztott szövetmintákban . A szövet mintákat szuszpendálunk és apróra törjük lízis pufferben proteáz inhibitorokat tartalmazó koktél (Roche Diagnostics, Meylan, Franciaország). A nem lizált részeket centrifugálással eltávolítjuk (12000 g, 10 perc, 4 ° C-on) kétszer. A koncentráció a szolubilizált fehérjéket alkalmazásával határoztuk meg BCA reagenskészlet (Pierce Biotechnology /Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL), és a fehérje mintákat -80 ° C-on a felhasználásig. Összesen 40 ug szöveti fehérjéket megállapítására használt N-glikán-profilok segítségével szabályos n-glikán profiling módszer ugyanaz, mint a végzett szérum fent leírtak szerint. Azonosításához mag-α-1, 6-fukoziiált N-glikán struktúrák, megfelelő számú APTS-jelzett N-glikánok emésztettük mind Arthrobacter ureafaciens által termelt szialidáz és a szarvasmarha vese α-1, 6-fukozidáz (Prozyme, San Leandro, CA , USA). DSA-FACE technológiát alkalmaztak, hogy elemezzék az emésztési termékeket és GeneMapper szoftvert használják, hogy elemezzék a magassága a csúcsok. Katalógusa

RNS extrakció és kvantitatív valós idejű PCR katalógusa

Az összes RNS-t nyert fagyasztott a szövetek és sejtek alkalmazásával össz-RNS extrakciós kit alkalmazásával a gyártó utasításai szerint (Axygen Biosciences, Hangzhou, Kína). A tisztaság és koncentrációja RNS határoztuk meg spektrofotométer (Eppendorf, Hamburg, Németország), majd -80 ° C-on a felhasználásig. A cDNS-t szintetizáltunk ReverTra Ace-α-RT-PCR kit (Toyobo Co., Osaka, Japán) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. Primereket terveztünk a Primer Express programot (Applied Biosystems; a szekvenciákat táblázat S1). Kvantitatív valós idejű PCR-t a SYBR® Zöld Real-time PCR Master Mix reagenskészlet (Toyobo Co., Osaka, Japán), és elemeztük az alkalmazott Biosystems 7300 Real-Time PCR System (ABI, Foster City, CA, USA) . Minden vizsgálatot végeztünk függetlenül három példányban. PCR ciklus állt denaturálás 95 ° C-on 5 percig, majd 40 ciklus: 95 ° C-on 15 másodpercig, és 59 ° C-on vagy 55 ° C-on 15 másodpercig, és kimutatására, 45 másodperc, 72 ° C-on. A relatív mennyisége FUT8 vagy guanozin-difoszfát (GDP) -fucose transzporter (GDP-Tr) transzkriptumok mindegyik mintában normalizáltuk a háztartási gén β-aktin és gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH) levonjuk a ciklust. A génexpressziót használatával határozták meg Delta-delta CT-módszerrel. Abszolút átirat expressziós értékek túl 40 ciklus tekintették detektálható szint. Melt görbéket ellenőrizni minden egyes reakció, hogy garantálják, hogy egy termék amplifikáltuk.

Western blot és lektin-blot

A fehérjéket extraháljuk fagyasztott szöveteket a fent leírt eljárással, és összesen 50 ng fehérjéket elektroforézissel elválasztottuk, 10% -os nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélen (SDS-PAGE). A géleket megfestettük Coomassie Blue-val G250 vagy a fehérjéket a gélben átvisszük egy nitrocellulóz membránra () kimutatására FUT8 vagy a százalékos mag fukoziiált fehérjéket. Szérum minták, összesen 85 esetben származó gyomorrák (n = 80), gyomorfekély (n = 25) és egészséges kontroll (n = 30) használunk a SDS-PAGE és lektin-blot. A membránokat blokkoltuk éjszakán át 4 ° C-on 5% -os zsírtalan tejjel fehérje vagy 5% szarvasmarha szérum albumint tartalmazó Tris-pufferelt sóoldatban [140 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl-t (TBS)], majd inkubáljuk 2 órán át szobahőmérsékleten 1:100 hígított anti-humán FUT8 antitest (15C6, anti-humán FUT8, Fujirebio Corp., Japán), vagy 5 ug /ml biotinilezett Lens culinaris agglutinin a (LCA) (Vector Laboratories, Burlingame, CA) tartalmazó TBS-ben 0,05% Tween-20 (TBST puffer), majd inkubáljuk egy 1:10,000 hígításával fluoreszcencia-jelzett szekunder antitestek (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE), vagy IRDye 800CW-sztreptavidin (LI-COR Biosciences) 1 órán át szobahőmérsékleten . A membránokat kidolgozni az Odyssey infravörös képalkotó rendszer. Anti-béta aktin (1:2000) használtunk belső referencia antitesttel Western-blottal. Tisztított albumint használtunk a negatív kontrollként lektin-blot és a teljes fehérje Coomassie-blue-t kiszámításához használt százalékos mag fukoziiált fehérje.

immunhisztokémiai (IHC) festést és lektin-hisztokémiai festés

A rögzített szövetminták paraffinba ágyazott vágtuk 4 mm-es beteg szeletekre immunhisztokémiai festéssel FUT8 és lektin-hisztokémiai festéssel LCA. Miután átesett deparaffinization, rehidratáló, az endogén peroxidáz blokkolása, és antigén-visszanyerés (10 mM Tris /1 mM EDTA, pH = 9,0, autokláv kezeltük), a mintákat inkubáltuk egy egér monoklonális antitest ellen humán FUT8 (1:100) vagy a biotinilált LCA (1 :500) egy éjszakán át 4 ° C-on, majd torma-peroxidázzal konjugált szekunder antitesttel vagy fluoreszceinnel jelzett streptavidin 37 ° C-on 30 percig. A sejtmagokat hematoxilinnel ellenfestettük vagy Draq5. Negatív kontroll állt azonosan kezelt szövettani metszetek egér IgG cserélni egér FUT8. Katalógusa

Sejtvonalak és tenyésztési katalógusa

Az emberi gyomor rákos sejtvonalak, BGC-823, SGC-7901, vásároltunk a Shanghai Institute of Cell Biology, a kínai Tudományos Akadémia és a tenyésztést 37 ° C-on, 5% CO _{2 RPMI 1640 tápközegben, és DMEM közegben (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA), illetve 10% FBS-sel, 1% glutaminnal és 1% antibiotikum-oldatot.}

Építőipari GDP-Tr és FUT8 rekombináns plazmidok és transzfekciója gyomorrák sejtek

a pEGFP-N1-GDP-Tr és a pEGFP-N1 -Fut8, hogy a plazmid vektor kódoló humán GDP-Tr vagy FUT8, keletkezett beiktatásával GDP-Tr vagy FUT8 cDNS-t egy pEGFP-N1 vektorba (Clontech Laboratories, Inc., Mountain View, CA, USA), amely egy CMV promotert és SV40 korai promoter, valamint a neomicin /kanamicin rezisztencia gén a Tn5. A vektor gerincét is tartalmaz egy SV40 replikációs origót emlőssejtekben. A többszörös klónozó hely (MCS) mellett van a közvetlen korai promoter a CMV. Az emberi GDP-Tr vagy FUT8 gént klónozták az mRNS extraháljuk TRIzol reagenssel (Invitrogen, Carlsbad, USA) a humán májszövet elvégzésével RT-PCR segítségével primereket (táblázat S2), amelyben a Xhol vagy Kpn I restrikciós helyei voltak benne, emésztéssel Xhol vagy Kpnl és ligáljuk a pEGFP-N1. A pEGFP-N1-GDP-Tr vagy pEGFP-N1-FUT8-t transzfektáltunk Escherichia coli DH5a amplifikációhoz és DNS szekvenálással arra használták, hogy biztosítsák a hűség. Plazmid DNS-t állítottunk elő a Qiagen DNS Mini Kit (Qiagen, Hilden, Németország), mint egy a gyártó utasításainak megfelelően. A plazmidokat transzfektáljuk a humán gyomor rákos sejtvonalban, a BGC-823, SGC-7901 80% összefolyás és 5 × 10 ^{5 sejt lyukanként egy hat lyukú lemezre lipofektamin ™ 2000 (Invitrogen, Carisbad, USA ) a gyártó utasításai szerint. A transzfektált sejteket, amelyek expresszált célgén igazoltuk kvantitatív RT-PCR-rel.}

Cell proliferációs vizsgálati

sejtproliferációs vizsgálatokban végeztük sejtszámláló Kit-8 (CCK-8 Dojin, Japán) szerint a gyártó utasításai szerint. Cell monitoroztuk a növekedést minden 24 órában 5 napon át, és minden egyes időpontban végeztük két példányban. Az abszorbanciát mértük minden egyes jól hullámhosszon 450 nm-es.

Sebgyógyulái assay

a sebgyógyulási vizsgálatban a humán gyomor rákos sejtvonalban, a BGC-823, SGC-7901 ( 1 × 10 ^{5 sejt /35 × 11 mm-es edények) oltottunk, és 24 órán keresztül inkubáltuk 37 ° C hőmérsékleten, majd transzfektáljuk rekombináns plazmidokat. Elérése után összefolyás, a sejtes réteg minden lemezt karcos egy műanyag pipetta hegyével. A migráció a cellák szélén a semmiből elemeztük 0, 24 és 48 óra elteltével a kép elfogták és elemezzük Leica fluoreszcens mikroszkóppal és kiegyenlített képelemző szoftver (Comet assay IV képelemző rendszer, PI, UK).}

szokásos tumor kávéfőző Detection

a klinikai és biokémiai adatokat a betegek 1. táblázat foglalja össze rutin biokémiai tesztek mértük standard eljárások alkalmazásával, és kiegyenlített reagensek (Hitachi 7600 Analyzer (Hitachi, Tokió, Japán) . tumormarker szint, beleértve a szénhidrát antigén 19-9 (CA19-9), rákkeltés-embrionális antigén (CEA), Cytokeratin 19 (CK19), CA125 és CA724, meghatároztuk a Roche E170 moduláris kiegyenlített reagensek. katalógusa

Statisztikai elemzés katalógusa

Minden mennyiségi változókat átlag ± standard deviáció, kivéve, ha másként. mennyiségi változókat összevetettük Student t-próbát, a variancia-analízis (ANOVA), vagy paraméteres teszteket. Pearson együtthatók korreláció (Spearman együtthatóit korrelációt számoltunk ordinális kategorikus változók) és a kapcsolódó valószínűségekkel ( p katalógusa) arra, hogy értékelje közötti korreláció paramétereit. Minden bejelentett p katalógusa értékek 2 farkú, és p katalógusa értékek < 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. A statisztikai elemzéseket az SPSS 16.0 for Windows statisztikai programcsomag (SPSS Inc.). Katalógusa

Eredmények katalógusa

Különböző szérum N¹glikán profilalkotás minták gyomorrák, gyomorfekély és egészséges kontrollok katalógusa

a DSA-FACE, megvizsgáltuk a N¹glikán profilok deszialilezve származó szérumok gyomorrákos betegeknél (n = 80), gyomorfekély (n = 25), és a hasonló korú egészséges egyének (n = 139). Meghatároztuk és statisztikailag képest csúcsok között 3 különböző csoportok között. Legalább 9 N¹glikán struktúrák (csúcs) azonosítottak összes mintát (1A). A szerkezeti elemzés ezen N-glikánok megjelent korábban Callewaert [11]. Az átlagos relatív abundanciája ezek N-glikán struktúrák írták le a 2. táblázatban A rengeteg struktúrák csúcsok 2, 3, 5, 6, 7, 8 és 9-feltárta statisztikailag szignifikáns különbség az gyomorrák, gyomorfekély, és egészséges kontroll csoportok, jelezve, hogy a különböző N-glikán mintákat megjelent különböző kórélettani körülmények között. Összehasonlítva az egészséges kontroll csoportban peak5 (bigalacto kétantennás glikán, NA2) és peak9 (elágazó α-1,3 fukoziiált háromantennás glikán, NA3Fb) emelkedett volt (P < 0,001) (1B); mivel mag- fukoziiált csúcsok, mint a peak2 (agalacto core-α-1,6 fukoziiált felező kétantennás glikán, NGA2FB), peak3 (egyszeri agalacto core-α-1,6 fukoziiált kétantennás glikán, NG1A2F), peak6 (bigalacto mag -α-1,6 fukoziiált kétantennás glikán, NA2F) és peak7 (bigalacto mag-α-1,6 fukoziiált felező kétantennás glikán, NA2FB) csökkent a gyomorrák csoport (P < 0,001). Hasonlóképpen, a rengeteg mag fukoziiált szerkezet glikánok elemzi sumfuc (jelzi a teljes mag fukoziiált szerkezetek, beleértve a csúcs 1, 2, 3, 4, 6, és 7) szignifikánsan csökkent a gyomorrák (P < 0,001) (1C ). A gyomorrák csoport tovább osztályozható 4 alcsoportra szerint TNM Staging az UICC gyomorrák. A szerkezet és a bőség sumfuc nem változott szignifikánsan a 4 különböző alcsoportok számára; azonban sumfuc csökkent fokozatosan progresszió szakaszában gyomorrák (3. táblázat). katalógusa

Korreláció N-glikánok és rutin tumormarkerek

Eddig CEA még széles körben használják a szűrés és monitorozása gyomorrák. Elemeztük közötti összefüggések egyéni N¹glikán marker CA19-9, CEA, CK19, CA 125 és CA724. A Pearson-féle korrelációs elemzés azt mutatta, hogy a CEA pozitívan befolyásolja az peak1 (r = 0,19; P < 0,01), és peak9 (r = 0,28; P < 0,01), míg negatívan peak6 (r = -0,18; p < 0,01) és peak8 (r = -0,23; p < 0,01) (4. táblázat). katalógusa

összehasonlítása sumfuc között gyomorrák és egyéb emésztőrendszeri rákok katalógusa

Korábban már tanulmányozták a N¹glikán profilalkotás hepatocelluláris carcinoma (HCC) [19] és a kolorektális rák (CRC) [20]. A rengeteg sumfuc kiderült statisztikailag szignifikáns különbség az gyomorrák (41,32 ± 6,39), HCC (50,99 ± 8,39), CRC (45,33 ± 5,96) és az egészséges kontroll (47,67 ± 5,08) csoportban (P < 0,001, 5. táblázat), jelezve, hogy a különböző szintű core-fucosylation megjelent rák különböző eredetű szövetekben. Között a 4 csoport, a szint a mag-fucosylation HCC volt a legmagasabb, míg a fucosylation szinten a gyomorrák volt a legalacsonyabb, és még alacsonyabb volt, mint az egészséges kontroll. Katalógusa

N¹glikán profilalkotás minták gyomor tumor és a nem tumoros szövetekben

N-glikán profilok vizsgáltuk deszialilezett fehérje gyomor tumor és a nem tumoros szövetekben. A három legnagyobb mennyiségben bigalacto kétantennás glikánok mutatott szérum, peak5 (NA2), peak6 (NA2F) és preak7 (NA2FB) azonosítottak is szöveti fehérjék (2A ábra). Peak6 és Peak7 esetében igazolták a mag fukoziiált szerkezetek dervied származó peak5 után kezelt mag-α-1, 6-fukozidáz emésztés (2A ábra). A magasban a három csúcs segítségével elemeztük GeneMapper szoftver. Az arány a peak6 hogy peak5 alacsonyabb volt a tumor szövetekben, mint a szomszédos, nem tumoros szövetben (0,83 ± 0,18 vs. 1,05 ± 0,42, a 2B ábra), valamint az aránya peak7 hogy peak5 (0,13 ± 0,06 vs. 0,16 ± 0,04, 2C ábra). Azonban nem volt statisztikailag szignifikáns különbség (P 0,05) között a tumor és a nem tumoros szövetekben.

Csökkent mag teljes fucosylation azonosítottuk mind szérumok és a szöveteket a gyomorrák

Mivel LCA specifikusan felismerik a glikoproteinek a α-1,6 fukoziiált-kapcsolt N-acetil-D-glükózamin-aszparagin (GlcNAc-Asp) a trimannosyl mag, megvizsgáltuk a mag teljes fukoziiált fehérjék szérumokat és szövetek gyomorrák használatával LCA hogy érvényesítse a megállapítás DSA-FACE. A szérum, a szint a LCA-kötő mag fukózmaradékok alacsonyabb volt, a gyomorrák, mint az gyomorfekély és az egészséges kontrollok (3A ábra). Mag teljes fukóz bőség is trendszerű kisebb lesz a gyomor tumorok, összehasonlítva a párosított szomszédos szövetekben (3B). Annak meghatározására, hogy a módosítás a teljes mag fucosylation gyomor tumorszövetben releváns eltérése a glikozilációs bioszintézisében, kvantitatív RT-PCR-t alkalmaztunk, hogy elemezze a rengeteg emlős FUT8 és a GDP-Tr gyomor tumorok és szomszédos szövetekben. Az eredmények azt mutatták, hogy nincs szignifikáns különbség a FUT8 és a GDP-Tr mRNS expresszió volt megfigyelhető között daganatok és szomszédos szövetekben (3C, ábra és 3D). A relatív abundanciája FUT8 fehérje segítségével mutatjuk be Western-blot (nyers adatok ábrán volt látható, S1). A FUT8 szomszédos szövetekben jelentősen magasabb volt, mint a tumor szövetekben (P < 0,05) (ábra 3E). Immunhisztokémia kiderült, hogy a FUT8 erősen pozitívan kifejezve a luminális határain nem-tumor gyomor sejtek (4b ábra), azonban gyengén pozitívan kifejezve tumorsejtek (4a ábra). Az expressziós LCA-kötő mag fukoziiált glikoproteinek magasabb volt a nem-tumoros gyomor sejtek, mint a tumorsejtek (4C, 4D). Tehát, a szint a teljes mag fucosylation azonosították csökkent mindkét szérumot és a szöveteket a gyomorrák. Katalógusa

Effect FUT8 és a GDP-Tr proliferációját és migrációját az emberi gyomor rákos sejtvonalak

A humán gyomor rákos sejtvonalban, a BGC-823, SGC-7901 használtunk in vitro vizsgálat. Mivel BGC-823 kifejezve alacsonyabb GDP-Tr míg SGC-7901 kifejezve alacsonyabb FUT8 a mi kísérleti kutatás, pEGFP-N1-GDP-Tr transzfektáltunk BGC-823 a túltermelő GDP-Tr és pEGFP-N1 FUT8 transzfektáljuk SGC-7901 a túltermelő FUT8. A rekombináns kifejezéseket sikeresen mutatja riporter gén GFP (S2 kép). Hogy vizsgálja meg a lehetséges részvétele a GDP-Tr és FUT8 tumor proliferációját és migrációját, BGC-823, SGC-7901 sejteket vizsgáltuk transzfekció után a CCK-8 és a sebgyógyulási migrációs assay volt. Az eredmények azt mutatták, hogy fokozza a GDP-Tr csökkent BGC-823 proliferációs 2-5 nappal a transzfekció után és fokozza a FUT8 csökkent SGC-7901 proliferáció 2 nappal a transzfekció után (ábra 5A és 5B). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a magas expressziója a GDP-Tr és FUT8 tudta elnyomni a proliferációját emberi gyomor rákos sejteket. Sebgyógyító vizsgálatban kimutatták, hogy a GDP-Tr és FUT8 nincs jelentős hatással a migrációval BGC-823, SGC-7901 48 órával a kezelés után (5C és 5D). Katalógusa

Vita katalógusa

Glikozilezési az egyik leggyakoribb poszt-transzlációs módosítások megjelent körülbelül 70% az összes ismert fehérjéket. Megváltozása glikozilezési szerepet játszanak számos különböző biológiai jelenségek, mint a tumorsejt-metasztázis, a sejten belüli kommunikáció és a gyulladást [21] - [23]. Egyre több és több vizsgálatok azt mutatják, hogy a változtatások a glikozilezés és a szintek a glikozil-transzferázok tevékenységek származó malignus transzformáció szempontjából releváns humán rosszindulatú [24] - [25]. DSA-FACE egy egyszerű és hatékony technológiák mérésére N¹glikán a szérum. Mi korábban használt ezt a technológiát, hogy segítse a diagnózis a HCC és a CRC [19] - [20]. A jelenlegi vizsgálat során, ezt használtuk elemezni jellemző N-kapcsolt profilalkotás minta gyomorrák. Az eredmények azt mutatták, hogy nem voltak jelentősen eltérő N-glikán profilozás minták között gyomorrák, gyomorfekély és egészséges kontrollokban. Ezek közül a különböző profilalkotás mintákat, peak9 és sumfuc azt találták, hogy ellentétesen változott minta gyomorrák képest, a kontroll. Amint azt a korábbi kutatások, peak9 járt a fejlesztés a fajták a rosszindulatú daganatok, azt megerősítette, újra, hogy a háromantennás N-glikán szerkezet bősége jelentősen nőtt a gyomorrák és ez a változás már kiderült, hogy korrelál a CEA, ami egy leggyakrabban használt CRC marker és egy igen heterogén glikoprotein, amely tartalmazza a 60% szénhidrát. [26] Egyes N¹glikán szerkezet bőség elemzés, azt tapasztaltuk, hogy sumfuc szignifikánsan csökkent a gyomorrák a kontrollcsoporthoz viszonyítva. További érvényesítse ezt a megállapítást, végeztünk lektin blot egyaránt sera és a szövetekben. Segítségével HCC szérum pozitív kontrollként, mi megfigyelt csökkent fucosylation az N-glikánok a teljes fehérjéket szérumából gyomorrák. Hasonló tendencia volt, kiderült a gyomor daganatos szövetekben. Ezek az eredmények összhangban vannak a korábbi jelentések CRC [20]. Az eredmények azonban ellentétes a korábbi jelentéseket rák más eredetű szövetekben. A emelkedése fukoziiált oligoszacharidok kóros körülmények számoltak mások és a mi csoport [19]. A fukoziiált AFP (AFP-L3) óta használják, mint a HCC marker a klinikai gyakorlatban [25]. A contradictories mag-fucosylation szinten megjelentek a különböző rákos megbetegedések oka lehet a különböző szerepeket játszott különböző szövetekben, például máj a fő szerv, amely felelős előállítására glikoproteinek mellett immunglobulin-termelő B-limfociták [27] - [28].

Fucosylation katalizálják fucosyltransferases, guanozin-5'-difoszfát (GDP) -fucose szintetikus enzimek, és GDP-fukóz transzporter (s). GDP-fukóz egy gyakori donor szubsztrát minden fucosyltransferases. Miután a GDP-fukóz szintetizálták a citoszolban, úgy szállítják, hogy a Golgi-apparátus keresztül a GDP-Tr szolgál szubsztrátként fucosyltransferases [17], [29]. Ezért GDP-Tr kulcsfontosságú tényező a GDP-fukóz szintetizált útvonal. FUT8 az egyetlen fukoziltranszferáz bevont mag-fucosylation [29]. Azt észleltük, csökkent FUT8 fehérje expresszió a tumor szövetben, amely támogatta megállapításainkat sera. Azonban FUT8 mRNS expressziója nem volt szignifikáns különbség a gyomor tumorok és szomszédos szövetekben. Glikozilezés erősen fényvisszaverő változások a környezetben egy cella. Epigenetikus módosításokat a genom stabilan továbbítják leánysejtekbe anélkül, hogy követelmény a genetikai szekvencia változtatások. [30] tisztázni, hogy a csökkent mag fucosylation játszik fontos szerepet karcinogenezis gyomorrák, kiterjesztettük a vizsgálatot a gyomor sejtvonalakban in vitro. Azt találtuk, hogy a fel-szabályozott GDP-Tr és FUT8 expressziós humán gyomorrák sejtek vezethet alacsony proliferációs. De nem talált semmilyen hatása a centrum-fucosylation sejtvándorlásra. Ezek az eredmények segíthetnek megmagyarázni a potenciális mechanizmus miért csökkent mag-fucosylation megjelent gyomorrák, és ez a lefelé szabályozott core-fucosylation korrelált néhány rosszindulatú biológiai viselkedését gyomor rákos sejteket.

Az elmúlt években, több megállapítások felfedi, hogy a változtatások a glikozilezés fontos szerepet játszanak progressziójában betegségek mellett májrák és autoimmun betegségek. A jelentős változásokat hozott a glikozilációját kiválasztódik glikoproteinek csökkentését tartalmazza az alapvető fucosylation, fokozott elágazást és fokozott sziaiiiezés, és a módosításokat a epigenetikus gép egy mély hatást gyakorol a glikán struktúrák által létrehozott sejtek petefészek daganatos progresszió [30]. A szinteket a mag fukoziiált kétantennás glikánok és α-2,3-kötésű sziálsav szignifikánsan megnövekedett a prosztatarák. [31] volt a növekedés 40% -os mag fucosylation a fő szialilezett kétantennás glikánok a hasnyálmirigyrák szérum, ami jelzi egy részhalmaza tumorasszociált glükoformok [32].

Nemrégiben, a funkció a mag-fucosylation jelentették, hogy társítható a funkciója EGFR [33]. A kötődés az EGF a receptorához igényel mag fucosylation az N-glikánok az EGFR-t.

• PLOS Genetics: csírasejt-mutáció MAP3K6 társul familiáris gyomorkarcinóma
• PLoS One: Discovery tumormarkerek gyomorrák által proteomikai