PLoS ONE: Poboljšana Izražavanje Long nekodirajuće RNA HOTAIR je povezana s razvojem želučane Cancer

Sažetak pregled

Dugo nekodirajuće RNA HOTAIR je izvijestila da biti siromašan prognostičkim biomarkera u različitim malignih tumora. Međutim, malo je poznato o organizaciji HOTAIR s rakom želuca. Ispitali smo ekspresiju HOTAIR u 68 uzoraka raka želuca pomoću kvantitativne real-time RT-PCR i analizirati svoju povezanost s kliničkim parametrima. Funkcionalna uloga HOTAIR ispitana je generiranje staničnih linija raka želučanog povećane ili potisnuti ekspresiju HOTAIR. Sidrište neovisnim rast procijenjen je mekom agaru testom. Povećanu ili potisnuta HOTAIR eksprimiraju želučane stanice raka su injiciran je u repnu venu ili peritonealnu šupljinu miševa imunodeficijentne ispitati učinak ove molekule na metastazama i peritonealni širenja. Izraz HOTAIR bila je značajno viša u lezijama raka nego u susjednim non-kancerogen tkiva u ljudskim želučanog karcinoma. U difuznom tipu karcinoma želuca, visoki-HOTAIR skupina (HOTAIR /GAPDH > 1) pokazala je znatno više venske invaziju, česte metastaze u limfne čvorove i nižu ukupnu stopu preživljavanja u odnosu na niske HOTAIR grupu (HOTAIR /GAPDH < 1). Formiranje kolonija na mekom agaru je poboljšana u HOTAIR ovisan način. HOTAIR eksprimirajuće MKN74 formira više metastaze jetre u usporedbi s kontrolnim, kada su ubrizgava u venu repa miševa. Osim toga, smanjuje ekspresiju HOTAIR u Kato III potisnuta peritonealnoj širenje. Ovi rezultati sugeriraju da HOTAIR igra ključnu ulogu u razvoju raka želuca pregled

Izvor. Endo H, Shiroki T, Nakagawa T, Yokoyama M Tamai K, Yamanami H, et al. (2013.) Pojačana ekspresija Long nekodirajuće RNA HOTAIR je povezana s razvojem raka želuca. PLoS ONE 8 (10): e77070. doi: 10,1371 /journal.pone.0077070 pregled

Urednik: Dajun Deng, Peking University Cancer Hospital i Institut Kina pregled

Primljeno: 10 lipnja 2013; Prihvaćeno: 5. rujan 2013; Objavljeno: 10. listopad 2013 pregled

Copyright: © 2013 Endo i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo bio podržan od JSPS KAKENHI grant numbers24791480 i 24.591.022 (http://www.jsps.go.jp/j-grantsinaid/index.html), a grant-in-potpore iz Hiromi Medical Research Foundation (http: //www.smtb .jp /osobna /izručenje /upravljanje /javne /primjer /pdf /prirodni-06a.pdf) i Daiwa Securities Health Foundation (http://www.daiwa-grp.jp/dsh/grant/outline.html). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

incidencija i smrtnost od raka želuca značajno smanjio u posljednjih 50 godina u većini područja u svijetu, ali i dalje ostaje drugi vodeći uzrok smrti od raka povezanih svijetu [1]. Unatoč nedavnim iskoracima u dijagnostičkim tehnikama, kao što je povećalo endoskopiju s uskom rasponu slike (NBI) [2], a na liječenje, uključujući ciljanu terapiju [3,4], još uvijek postoje veliki broj pacijenata oboljelih od raka želuca s lošom prognozom. Patogeni mehanizam doprinosi agresivnom biološke značajke u ovom raka, ostaje da se razjasni. pregled

sekvenciranja projekti genoma pokazala da je ljudski genom se sastoji od gena koji kodiraju za manje od 2% bjelančevina, a više od 90% genoma prepisuje kao nekodirajuće RNA (ncRNA) [5-7]. Ovi ncRNAs se podijeliti u dvije skupine, ovisno o veličini nukleotida. Mikro RNA približno 18-25 nukleotida u dužinu, dugo nekodirajuće RNA se sastoji od više od 200 nukleotida. HOTAIR je dugo nekodirajuće RNA koja je identificirana s prilagođenim tilling niz od HOXC lokusa. HOTAIR je pokazala da trimethylate Histon H3 lysin-27 HOXD lokusa s polycomb represivnim kompleksu 2 (PRC2) i inhibira ekspresiju HOXD gena, koji se nalazi na drugom kromosomu [8]. HOTAIR promovira metastaza kroz interakciju s PRC2 potisnuti transkripciju više metastaze supresorski geni kod raka dojke [9]. Pojačana ekspresija je povezana s HOTAIR invazivnosti metastazama i lošom prognozom u različitih tumora, kao što su dojke, debelog crijeva, pankreasa i karcinom pluća [9-12]. Međutim, malo se zna o izrazu i /ili funkciju HOTAIR u razvoju karcinoma želuca. U trenutnoj studiji, istražili smo uključenost HOTAIR u ljudskom razvoju raka želuca i ispituje da li je izraz bi u korelaciji s agresivnim ponašanjem raka želuca. Pregled

Materijali i metode pregled

Tkiva pregled

68 želučanih tkiva raka dobiveni su od bolesnika podvrgnutih operaciju Miyagi Cancer Center (Natori, Japan), između 2007. i 2011. Svi uzorci su odmah zamrznuti ubrzo nakon resekcije u tekućem dušiku i pohranjeni na -80 ° C ili vezan 10% puferiranom formalinu i uklopljene u parafin. Želučanog raka su patohistološki klasificirani kao crijevna tipa (n = 36), difuzni tip (n = 32) prema klasifikaciji Svjetske zdravstvene organizacije i prethodna izvješća [13]. Nema bolesnici primili kemoterapiju i zračenje prije operacije. Za statističku analizu, sveukupno preživljenje definirano je smrt od bilo kojeg uzroka, a korišteni su Kaplan-Meier krivulje preživljavanja. pregled

Stanične linije

želuca stanične linije raka MKN74 (crijevna tip) [14] i Kato III (difuzna tip) [15] su dobiveni iz Riken BioResource Center (Tsukuba, Japan). Obje stanične linije su održavane u RPMI-1640 (Gibco tehnologije /Life Co., CA) koji sadrži 10% FBS inaktiviranog (EuroClone, Milano, Italija) u 100 jedinica /ml penicilina i 100 ug /mL streptomicina (Gibco /Life technologies Co. , CA) i uzgajane u vlažnom 5% CO _{2 inkubator na 37 ° C. pregled}

priprema RNA, reverzna transkripcija i količine real-time PCR pregled

Ukupna RNA iz zamrznutih uzoraka i stanične linije ekstrahira ISOGENE (Nippon gen, Tokyo, Japan) u skladu s uputama proizvođača. cDNA iz svih uzoraka sintetizirani su od 1.0 ug ukupne RNA PrimeScript® 1. lanca cDNA Synthesis Kit (Takara bio, Siga, Japan) slijedeći protokol proizvođača. Izraz HOTAIR se kvantificira LightCycler Brilliant SYBR Green QRT-PCR kit (Roche Applied Science, IN) slijedeći protokol proizvođača s posebnim primera seta prema prethodnoj studiji [9]. Razina ekspresije HOTAIR u svakom uzorku se normalizira na odgovarajuću razinu GAPDH ekspresije. Specifičnost svake PCR reakcije je potvrđen topljenjem analize krivulje. Pregled

HOTAIR ekspresije retrovirusni vektor pregled

Human HOTAIR cDNA (addgene, Cambridge, MA) povećan je pomoću PCR i umetnut je u pBabe puro vektor (pBabe -HOTAIR). Rekombinantni retrovirus je nastala uz Platinum-A (Plat-A, pod uvjetom prof Kitamura) pakiranje staničnih linija kao što je ranije [16] što je opisano. Ukratko, Plat-A stanice su transfektirane s pBabe -HOTAIR ili pBabe-puro Vector (EV). Fugene-6 (Roche Applied Science) i Opti-MEM I (Gibco /Life Technologies Co) dodaju se slijedeći protokol proizvođača. Četrdeset osam sati nakon transfekcije, Supernatant koji sadrži retrovirus je sakupljen i propusti kroz 0,45 um filter. MKN74 stanice su zaražene s rekombinantnim retrovirusa, a zatim se bira s puromicinom. pregled

RNA interferencije pregled

Za obaranje HOTAIR u Kato III, koristili smo nokaut ™ RNAi Systems (Clontech Laboratories, Inc., Mountain View, CA) u skladu s uputama proizvođača. Ukratko, dizajnirali smo četiri shRNA sekvencu ciljane HOTAIR kao što je prikazano u tablici 1. Nakon žarenja komplementarnih oligonukleotida shRNA ligatiranoj smo kali oligonukleotide u pSIREN vektor (shHOTAIR). Zatim transfektirane smo stanice Plat-a s shHOTAIR ili pSIREN Vector (EV), a zaraženo Kato III s rekombinantni retrovirusi i odabrati s puromicinom. Stanice transducirane sa SH-HOTAIR2 i -3 vektora su odabran za daljnje istraživanje. Svaki u vitrto pregled eksperiment je izveden u tri primjerka, ponovio tri puta, a prikazani su i podaci. pregled shRNA pregled Slijed
shHOTAIR-1sensegatccgaacgggagtacagagagattttcaagagaaatctctctgtactcccgttcttttttganti-senseaattcaaaaaagaacgggagtacagagagatttctcttgaaaatctctctgtactcccgttcgshHOTAIR-2 sensegatccgccacatgaacgcccagagattttcaagagaaatctctgggcgttcatgtggttttttg anti-senseaattcaaaaaaccacatgaacgcccagagatttctcttgaaaatctctgggcgttcatgtggcgshHOTAIR-3 sensegatccgtaacaagaccagagagctgttttcaagagaaacagctctctggtcttgttattttttganti-senseaattcaaaaaataacaagaccagagagctgtttctcttgaaaacagctctctggtcttgttacgshHOTAIR-4sensegatccaattcttaaattgggctggttcaagagaccagcccaatttaagaattttttttganti-senseaattcaaaaaaaattcttaaattgggctggtctcttgaaccagcccaatttaagaattgTable 1. Sekvence shRNA umetci za shHOTAIR eksprimira vektor.
CSV Svi CSV

Rast stanica test pregled

1 x 10 ^{4 stanice su posađene u svaku jažicu na pločama s 96 jažica u normalan rast stanice mediji. 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolijevog bromida, žuta tetrazol (MTT) Test je izveden pomoću stanične proliferacije Kit I (GE Healthcare Life Sciences, NJ) prema uputama proizvođača. Mjerenjima apsorpcije na 570 nm VersaMax (Molecular Devices, CA) su izrađene za procjenu MTT-formazanski proizvodnju nakon sata inkubacije 24, 48 i 72. Indeks procijenjen je na 48 i 72 sati, koji su normalizirani na to 24 sata. Pregled}

Soft agar koloniziranje Test pregled

mekom agaru pokusi napravljeni su u ploče sa 6 jažica. Osnovni sloj u svaku jažicu koja se sastoji od 1 ml s konačne koncentracije od 1 x medija (RPMI-1640 plus 10% inaktiviranog FBS) i 0.6% niskog tališta agarozom. Pločice su ohlađeni na sobnoj temperaturi dok se ne stvrdne, pri čemu nastaje rast agar sloja 1 ml je izlivena, koja se sastoji od 1 x 10 ^{4 stanice su suspendirane u 1 x medija i 0,3% niskog tališta agarozom. Ploče su ponovno ohlađeni na sobnoj temperaturi sve dok se sloj rasta zgusnu. Daljnjih 1 ml 1 x medija bez agaroze doda se na vrh sloja rasta na dan 0 i ponovo na dan 14 rasta. Stanice su ostavljene da rastu na 37 ° C tijekom 4 tjedna i ukupna kolonije su izbrojani. Pregled}

Životinje

6 tjedana starih ženki NOD /Shi-SCID-IL2Rγ ^{null (NOG ) miševi su kupljeni od Središnjeg instituta za eksperimentalnih životinja (CIEA, Kawasaki, Japan) i koristi se u ovom eksperimentu. Bilo im je dopušteno da se aklimatiziraju tjedan prije pokusa. Oni su bili smješteni u čistoj prostoriji objekta za njegu životinja na Cancer Research Center Miyagi i drži pod standardnoj temperaturi, vlažnosti i vremenski svjetlosnim uvjetima i pod uvjetom miš chow /voda ad libitum. pregled}

repne vene esej stanica raka metastaza pregled

Kako procijeniti učinak HOTAIR izrazu prenose krvlju metastaza, ubrizgava se 1.0 x 10 ^{5 stanica od HOTAIR- (n = 9) ili EV-ekspresijom (n = 9) MKN74 s 0,2 ml PBS-a u repnu venu miševa. Miševi su promatrani u pravilu radi znakova bolesti tjedno za cijelog eksperimenta, te su žrtvovani 8 tjedana nakon injekcije. Pluća, jetre, bubrega, nadbubrežne žlijezde i slezene miševa su izdvojeni i ispitivane su makroskopski o prisutnosti metastaza. pregled}

Peritonealni metastaza pregled

1.0 x 10 ^{6 stanice shHOTAIR- (n = 5), ili EV-ekspresijom (n = 5), KATO III su injicirani s 0.2 ml PBS-a u peritoneum miševa za procjenu učinka HOTAIR izražavanja na peritonealnoj metastaza. Miševi su promatrani u pravilu radi znakova bolesti tjedno za cijelog eksperimenta, te su žrtvovani 8 tjedana nakon injekcije. ispitana je prisutnost čvorova i ascites u peritonealnu šupljinu. pregled}

Histologija i imunohistokemija pregled

Izvađeni Tkiva su fiksirane u 10% -tnom puferiranom formalinu tijekom 24 sata, zatim se izrezati i stavljeni u parafin za mikroskopski istraga. Uzorci su rezani u 4 um-debela sekcija i obojeni s hematoksilinom i eozinom (H &E). Ispitivali smo prisutnost mikro-metastaza koji nije prepoznat makroskopski. Priznate tumori su dodatno ispitani imuno pomoću primarnog protutijela za ljudski keratin (Anti keratin Nisko, DC10 /5D3, Nichirei Co-a, Tokyo, Japan) kako bi bili sigurni da su izvedeni iz ubrizgane ljudske stanice raka želuca. Nakon deparaffinization, sekcije tkiva su inkubirani u metanolu s 0,3% vodikovim peroksidom u destiliranoj vodi tijekom 20 minuta da se blokira Aktivnost endogene peroksidaze. Antigen dohvat je provedena pritiskom kuhanje na 95 ° C 5 minuta u 10 mM citratni pufer, pH 6.0, a zatim je ostavljena da se ohladi na sobnoj temperaturi 30 minuta. Endogeni biotin- ili avidin-vezujuća mjesta blokirana su uzastopnom inkubacije od 30 minuta. Sekcije su inkubirane preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelom je gore opisano i reagira s drugim protutijelom. Avidin-biotin- peroksidaza je korištena za detekciju drugog protutijela. Bojenje je vizualizirano pomoću diaminobenzidin (DAB). Sekcije su prebrojane s hematoksilinom, ispere i dehidrira uporabom gradijenta etanola u ksilen. Pregled

Statistička analiza pregled

Korelacija HOTAIR ekspresije sa klinikopatološkim pacijenta varijabli i Učestalost metastaze u injektirani miševa analizirane su hi-kvadrat testa. Statistička značajnost razlike između 2 skupine određena je korištenjem Wilcoxon testa i P
vrijednost (pregled

< 0,05) bio je smatran statistički značajna. Statistički značajna razlika između 3 skupina procijenjena Čelik Dwass testa ili Bonferronijev analizu i P pregled vrijednost (< 0,017) se smatra statistički značajna ukupna vjerojatnost preživljavanja je analiziran metodama Kaplan-Meier i ocjenjuje log-rank test, i P pregled vrijednost (< 0,05) bio je smatran statistički značajna. Sve statističke analize provedene su pomoću Ekuseru-Toukei 2012 (Social Survey Research Information Co, Ltd, Tokyo, Japan). P pregled vrijednost (< 0,05) bio je smatran statistički značajna pregled

Etika pregled

Institutional Review Board od Miyagi Cancer Center (MCC) odobrila ovaj Protokol ispitivanja,. i pismeni informirani pristanak dobiven je od svakog pacijenta (broj dozvole: MCC-22-30). Protokol pokusa na životinjama je odobren od strane njega i uporaba odbora MCC životinja (broj dozvole: MCC-AE-2011-12). Pregled

Rezultati pregled

HOTAIR izraz ljudskih uzoraka raka želuca

HOTAIR izražavanja razine kancerogenih i susjednih noncancerous tkiva od pacijenata s rakom želuca su pregledane QRT-PCR i normalizira prema razini GAPDH ekspresije. Srednja razina ekspresije HOTAIR je 4.952 ± 6.462 i 3.804 ± 6.721 (HOTAIR /GAPDH ± standardna devijacija) u karcinoma i ne-kancerogen lezije, respektivno. Razina ekspresije HOTAIR bile su značajno više u lezijama karcinoma u usporedbi s onima koji nisu kancerozne lezije ( P pregled = 0,019, Slika 1A). Pregled

pridruživanju između ekspresije HOTAIR i kliničkopatološkim faktora u ljudskim želučani karcinom

ljudska tkiva raka želuca su patohistološki svrstati u crijeva (n = 36) i difuznih oblika (n = 32). Ljudska tkiva raka želuca su klasificirani prema HOTAIR razine ekspresije u visoke HOTAIR grupu (HOTAIR /GAPDH > 1.0) i Low-HOTAIR skupina (HOTAIR /GAPDH < 1,0) (Slike 1B i C). Udruga HOTAIR izražavanja s kliničkopatološkim značajke u probavnom i difuznog tipa raka želuca sažeti u tablicama 2 i 3, respektivno. U probavnom vrste raka želuca, nema značajne korelacije između HOTAIR izražavanja i kliničkopatološkim nalaza (tablica 2). Osim toga, postoji značajna povezanost je viđen između HOTAIR izražavanja i ukupno preživljavanje, iako visoke HOTAIR grupa skloni pokazati kraće preživljavanje nego Niske HOTAIR grupe (slika 2a). S druge strane, značajan povezanost između HOTAIR izražavanja i limfnih čvorova metastaza (P = 0,043), venske infiltracije ( P pregled = 0,0083), te kratke ukupno preživljavanje ( P pregled = 0,018) u difuzni tip karcinoma želuca (Tablica 3 i Slika 2B). Međutim, nije bilo povezanost između faze i HOTAIR izražavanja.
HOTAIR niska pregled HOTAIR visoka pregled P pregled vrijednost pregled Age73.07 ± 9.1870.87 ± 10.650.53Gender0.63Male1016female37T0.87T1, T2610T3, T4713N0.26N078N1, N2 , N3615Ly0.68ly069ly1, ly2, ly3714v0.19v089v1, v2, v3514Stage0.501,27153,4680.50Table 2. udruga HOTAIR izražavanja s kliničkopatološkim značajke u crijevnom vrste raka želuca.
CSV Preuzmite CSV pregled HOTAIR niske
HOTAIR visoka pregled P pregled vrijednost pregled Age59.250 ± 10.7566.35 ± 10.160.07Gender0.71male812female48T0.87T1, T212T3, T41118N0.043*N086N1,N2,N3414ly0.40ly067ly1,ly2,ly3613v0.0083*v0119v1,v2,v3111Stage0.311,2783,4512Table 3. Udruga HOTAIR izražavanja s kliničkopatološkim značajke u difuznog tipa raka želuca.
CSV Preuzimanje CSV

generaciju HOTAIR nad- i dolje regulirano stanice i korelativnost stanica održivosti Netlogu

Kako bi se procijenila funkcionalna uloga HOTAIR u razvoju raka želuca, ostvarila mi stabilno HOTAIR izražavanje MKN74 stanice (MKN-HOTAIR) i stabilno shHOTAIR izražavaju Kato III stanica (Kato-shHOTAIR). QRT-PCR analiza pokazala je da MKN-HOTAIR stanice izrazili razinu HOTAIR oko 10 puta veća od EV izražava (MKN-EV) ili roditeljskih MKN74 stanica i da je izraz ove molekule smanjen je za 30 do 70% u KATO-shHOTAIR stanica u usporedbi s EV transduciranog (KATO-EV) ili roditeljskih KATO III (KATO-EV) stanica (Slika 3A). Rezultati MTT pokusom pokazali da ni naviše, niti dolje reguliranje HOTAIR pogođeni rak želuca proliferaciju stanica (Slika S1). Pregled

Soft agar formiranje kolonija Test pregled

Da se razjasni funkcije HOTAIR u sidrište neovisan rast želučanih stanica raka, koristi se mekani agar testa. MKN-HOTAIR stanica formira veći broj kolonija nego MKN-EV stanica ( P pregled = 0,009, slika 4A). Skladu sa ovim nalazom, KATO-shHOTAIR stanice pokazuju značajne manje kolonije nego KATO-EV stanica (slika 4b). Osim toga, želučani stanice raka s sličnoj razini HOTAIR ekspresije (MKN-HOTAIR i shHOTAIR-3, slika 3B) oblikovan sličan broj kolonija, što ukazuje da je reguliran sidrište neovisno rast želučanih stanica raka u HOTAIR ovisan način.

HOTAIR izraz i rak želuca stanica metastaza i peritonejsku širenje pregled

od HOTAIR pojačana sidrište neovisan, ali ne i sidrište ovisna rast želučanih stanica raka, pretpostavili smo da HOTAIR mogu doprinijeti udaljenim metastazama i /ili peritonejsku širenje, a ne izravna invazija na susjedne organe. Kako bi riješio taj problem smo zaposleni repne vene testa i peritonealnoj injekciju stanica ispitati da li HOTAIR izraz potiče krvni -borne metastaze i peritonealnoj širenje, respektivno. Kao što se očekivalo, MKN-HOTAIR stanice često su pokazivali metastaze jetre ( P pregled = 0,01) u odnosu na MKN-EV stanica. Osim toga, broj i veličina metastatskih tumora jetre bile su značajne veće s MKN-HOTAIR stanica nego s MKN-EV stanica ( P pregled = 0,03 i P
= 0,019, odnosno, na slikama 5A i B). Zanimljivo, jedan miš injektiran MKN-HOTAIR pokazao metastaza u bubrezima i nadbubrežne žlijezde uz jetri, dok s MKN-EV stanica metastatskih tumora nastaje tek u jetri. Dosljedno, peritonealni širenje značajno smanjen (1/5, P pregled = 0,009) kada HOTAIR inaktiviran u KATO III stanice dok su sva kontrolna stanica formira peritonealnoj širenje (5/5) (Slike 6A i B). Metastatskih tumora su histološki potvrđena i pokazali su intenzivnu pozitivno bojenje za ljudski keratin (slikama 5C i 6c). Pregled

Rasprava pregled

U ovoj studiji ispitivali smo ekspresiju HOTAIR kod raka želuca i ispitati njegovu korelaciju s kliničkopatološkim značajkama, uključujući prognozu pacijenata. Naši rezultati jasno otkriva pojačanu ekspresiju HOTAIR u tkivu karcinoma u usporedbi s ne-kancerogena tkiva u želucu, te da je visoka razina ekspresije tih molekula bio je povezan s metastazama na limfne čvorove, venskog invazije i slabe preživljavanja u difuznog tipa raka želuca. Ovi rezultati su u skladu s nedavnom istraživanju koje pokazuje da up-regulacija HOTAIR nalazi se u raka želuca u usporedbi s normalnim tkivima iu korelaciji je s tumora pozornice i limfnih čvorova metastaza [17]. Osim toga, HOTAIR-izražavanje želučane stanice raka izlagao unapređenje rasta stanica sidrište neovisan In vitro pregled i metastaze na jetri In vivo pregled, dok je smanjena ekspresija HOTAIR u želučanim stanicama raka rezultiralo smanjen učvršćenja neovisno rast i peritonealni širenja, što ukazuje da HOTAIR igra ključnu ulogu u progresiji želuca raka. pregled

najveća ekspresija HOTAIR nije detektiran u stanicama karcinoma u usporedbi s odgovarajućim ne-tumorskih stanica u različitim oblicima raka, uključujući rak dojke, debelog crijeva, jetre, gušterače i karcinoma nazofarinksa [9-11,18-20]. U ovim karcinomima, HOTAIR Također je pokazano da je povezan s metastazama i /ili lošu prognozu. Osim toga, visoka razina HOTAIR izražavanja bila povezana s preživljavanjem kratkim slobodnim od bolesti u raka pluća [12]. Dakle, naši su predmetni nalazi konzistentni s prethodnim istraživanjima koji ukazuju da je ekspresija HOTAIR je uključen u povećanje agresivnost raznih tipova stanica karcinoma. S druge strane, nismo mogli pronaći negativan prognostički utjecaj HOTAIR u probavnom vrste raka želuca, iako visoke HOTAIR grupa skloni pokazati kraći ukupno preživljenje u usporedbi s Low-HOTAIR grupi. To bi moglo biti zbog malog broja pacijenata u studiji, jer prisilnim izražavanja HOTAIR u crijevnom želučanog raka stanične linije (MKN74) dobio je agresivan fenotip In vitro pregled i in vivo
. Daljnja istraživanja s velikim brojem uzoraka pored eksperimentalnom istraživanju koje koriste druge crijevne želučanog raka stanične linije će biti potrebna za rješavanje ovog problema. Pregled

U trenutnoj studiji, ni povezanost između HOTAIR izražavanja i rasta stanica u rak želuca. U dojke, debelog crijeva i raka jetre, uključivanje HOTAIR u rastu stanica nije dokazana [9,10,18], dok HOTAIR promicati i smanjuje proliferaciju stanica kod karcinoma gušterače [11] i raka pluća [12], respektivno. Nadalje, postoji značajna razlika pronađena je u potkožnom rasta tumora kod miševa Nog između HOTAIR-izražavanja i kontrolne stanice u studiji (podaci nisu prikazani). Na temelju tih nalaza, vjerojatno je da je veza između HOTAIR ekspresije i proliferacije stanica ovisi o vrsti raka. Nasuprot tome, sidrište neovisan rast želučanih stanica raka očito poboljšana u HOTAIR ovisan način. Osim toga, HOTAIR izraz izazvao više metastaze na jetri i drugim organima, a defekt HOTAIR potisnut peritonealnoj širenje stanica karcinoma želuca. Ovi podaci, zajedno s činjenicom da HOTAIR izraz pridonosi metastaza u različitim karcinomima [9-12,18], ukazuju na to da HOTAIR je uglavnom uključeni u metastatskog procesa, a ne u rastu primarnog tumora. pregled

U zaključku, pojačana ekspresija HOTAIR u difuznom tipu karcinoma želuca bila povezana s učestalošću venske invazije i lošom prognozom, neovisno T faktor, i prisiljeni izraz HOTAIR u želučanim stanicama raka promovirao učvršćenja neovisan rast stanica In vitro pregled i metastaze na jetri in vivo pregled. Ovi rezultati pokazuju da HOTAIR je vjerojatno da će biti uključen u razvoj raka želuca i može također biti terapeutski cilj za liječenje raka želuca. pregled

popratne podatke
Slika S1.
organizaciji proliferaciji stanica s HOTAIR izražavanja. Rezultati MTT testom procjenjivan je na 72 sata su normalizirani da nakon 24 sata. Ne odnos postoji između HOTAIR izražavanja i proliferacije želučane stanice raka pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0077070.s001 pregled (TIF) pregled

Izvori pregled

Zahvaljujemo profesor Kitamura (Sveučilište u Tokiju, Tokyo, Japan) za pružanje Platinum-a stanice. pregled