PLoS ONE: Glaudesnis išraiška Rimta Ne kodavimo RNR HOTAIR yra susijęs su skrandžio vėžio plėtros

Abstract

ilgas ne kodavimo RNR HOTAIR buvo pranešta, kad prastas prognostinė biologinis į piktybinių navikų įvairovė. Tačiau mažai žinoma apie HOTAIR kartu su skrandžio vėžiu. Mes išnagrinėjo HOTAIR išraišką 68 skrandžio vėžiu mėginių, naudojant kiekybinius realaus laiko RT-PGR ir analizuojami jos ryšį su klinikiniais parametrais. Funkcinis vaidmuo HOTAIR buvo nagrinėjama generuojant žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas pasižymi didesniu ar nutylėtų HOTAIR išraiška. Tvirtinimo -independent augimas buvo įvertintas minkštu agaro tyrimu. Padidėjęs arba slopinamas HOTAIR išreikšti skrandžio vėžio ląstelės buvo švirkščiamas į uodegos venos ar pilvaplėvės ertmę imuninės pelių išnagrinėti šios molekulės ant metastazių ir pilvaplėvės sklaidos efektą. Iš HOTAIR išraiška buvo reikšmingai didesnis vėžio pažeidimų nei gretimose nevėžinės audinių žmogaus skrandžio vėžio. Į difuzinio tipo skrandžio vėžio, aukšto HOTAIR grupė (HOTAIR /GAPDH > 1) parodė žymiai venų invazija, dažnai metastazių limfmazgiuose ir mažesnį bendrą išgyvenamumas, palyginti su mažai HOTAIR grupės (HOTAIR /GAPDH < 1). Kolonija formavimas ant minkštos agaro buvo sustiprintas į HOTAIR priklausomu būdu. HOTAIR ekspresija MKN74 suformuota daugiau metastazių kepenyse, palyginti su kontrolinės, kai jie buvo švirkščiamas į uodegos venos pelių. Be to, sumažintas išraišką HOTAIR Kato III nutylėtų peritoninė sklaidą. Šie rezultatai rodo, kad HOTAIR vaidina svarbų vaidmenį skrandžio vėžio išsivystymo

nurodomoji dalis:. Endo H Shiroki T Nakagawa T Yokoyama, M, Tamai K Yamanami O et al. (2013) Glaudesnis išraiška Long nekoduojanti RNR HOTAIR yra susijęs su skrandžio vėžio vystymosi. PLoS ONE 8 (10): e77070. Doi: 10,1371 /journal.pone.0077070

redaktorius: Dajun Dan, Pekino universiteto Vėžys Ligoninių ir institutas, Kinija

Įstojo: Gegužės 10, 2013 m Priimtas rugsėjo 5, 2013 m Paskelbta 10 Spalio, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 endo ir kt. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė JSP KAKENHI dotacijos numbers24791480 ir 24.591.022 (http://www.jsps.go.jp/j-grantsinaid/index.html) ir dotacija-in-pagalbos iš Hiromi medicinos mokslinių tyrimų fondo ( "http: //www.smtb Jp /asmens /patikėjimas /valdymas /Viešieji /pavyzdys /PDF /natūralios 06a.pdf) ir "Daiwa Securities sveikatos fondas (http://www.daiwa-grp.jp/dsh/grant/outline.html). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

sergamumas ir mirtingumas skrandžio vėžiu smarkiai sumažėjo per pastaruosius 50 metų daugelyje pasaulio regionų, bet jis vis dar išlieka antra pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirčių visame pasaulyje [1]. Nepaisant neseniai pasiektos pažangos diagnostinių metodų, tokių kaip didinamasis endoskopija su siaura juosta vaizdavimo (NBI) [2], ypač į gydymą, įskaitant tikslinės terapijos [3,4], vis dar yra didelis kiekis skrandžio vėžiu sergančių pacientų blogos prognozės. Patogeninis mechanizmas prisideda prie agresyvaus biologinės funkciją šis vėžys dar reikia patikslinti.

genomo sekvenavimo projektai parodė, kad žmogaus genomo sudaro mažiau nei 2% baltymų kodavimo genų, ir daugiau nei 90% genomo yra transkribuojama kaip nekoduojanti RNR (ncRNA) [5-7]. Šie ncRNAs yra suskirstyti į dvi grupes, priklausomai nuo nukleotidų dydžio. Mikro RNR yra maždaug 18-25 nukleotidų ilgio, tuo tarpu ilgą nekoduojanti RNR susideda iš daugiau nei 200 nukleotidų. HOTAIR yra ilgas ne kodavimo RNR, kuri buvo nustatyta pagal užsakymą žemės įdirbimas masyvo su HOXC lokuso. HOTAIR buvo įrodyta, kad trimethylate Histon H3 lysin-27 HOXD lokuso su polycomb represinio kompleksas 2 (PRC2) ir slopina HOXD genų ekspresiją, įsikūręs kitame chromosomos [8]. HOTAIR skatina metastazių per sąveiką su PRC2 į slopinant kelis metastazės slopintuvas genų transkripciją į krūties vėžio [9]. Sustiprintos išraiška HOTAIR yra susijęs su invazijos, metastazių ir blogos prognozės į vėžio, pavyzdžiui, krūties, gaubtinės žarnos, kasos ir plaučių vėžio [9-12] įvairovė. Tačiau, mažai žinoma apie raiškos ir /arba HOTAIR funkcija skrandžio vėžio vystymosi. Atsižvelgiant į dabartinę tyrime mes tyrė HOTAIR dalyvavimą vykdant žmogaus skrandžio vėžio vystymosi ir ištyrė, ar jos išraiška būtų koreliuoja su agresyvaus elgesio skrandžio vėžio.

Medžiagos ir metodai

audiniai

68 skrandžio vėžiu audiniai buvo gauti iš pacientų, kuriems buvo atlikta operacija ne Miyagi Cancer Center (Natori, Japonija), tarp 2007 ir 2011 Visi mėginiai buvo nedelsiant įšaldomi netrukus po rezekcijos skystame azote ir saugomi -80 ° C arba nustatyta 10% buferiniame formalino ir įdėta į parafinas. Skrandžio vėžio buvo histopathologically klasifikuojami kaip žarnyno tipą (n = 36), difuzinis tipą (N = 32), atsižvelgiant į Pasaulio sveikatos organizacijos ir ankstesnėse ataskaitose [13] klasifikaciją. Nė vienam pacientui skiriama chemoterapija ir radioterapija prieš operaciją. Statistinei analizei, bendras išgyvenamumas buvo apibrėžtas mirties dėl bet kokios priežasties, ir buvo naudojami Kaplan-Meier išgyvenimo kreivės.

Mobilaus ryšio linijos

skrandžio vėžio ląstelių linijas MKN74 (žarnyno tipas) [14] ir KATO III (difuzinis tipas) [15] buvo gauti iš RIKEN Bioresource centro (Tsukuba, Japonija). Abu ląstelių linijos ir buvo išlaikytos RPMI-1640 (Gibco /Life Technologies Co, CA), kurių sudėtyje yra 10% inaktyvuotame FBS (EuroClone, Milano, Italija) su 100 vienetų /ml penicilino ir 100 mikrogramų /ml streptomicino (Gibco /Life Technologies Co , ĮA) ir kultivuojamos drėgnoje 5% CO _{2 inkubatoriaus 37 ° C temperatūroje.}

RNR paruošimas, atvirkštinę transkripciją ir kiekybinė realaus laiko PGR

viso RNR iš šaldytų mėginių ir ląstelių linijos buvo išgauti ISOGENE (Nippon genų, Tokijas, Japonija) pagal gamintojo protokolą. kDNR iš visų mėginių buvo sintetinamas iš 1,0 mikrogramų visų RNR pagal PrimeScript® 1. kryptis kDNR sintezės Kit (TAKARA bio, Siga, Japonija) pagal gamintojo protokolą. Iš HOTAIR išraiška buvo įvertintas LIGHTCYCLER Briliantas SYBR Žalioji KRL-PGR rinkinys (Roche Applied Science, IN) pagal gamintojo protokolą su konkrečiais pradmenų rinkinius pagal ankstesnį tyrimą [9]. Iš HOTAIR išraiškos kiekvieno mėginio lygis normalizavosi su atitinkamu GAPDH ekspresijos lygiu. Kiekvieno PGR reakcijos specifiškumą buvo patvirtinta tirpsta kreivė analizes.

HOTAIR išraiška retrovirusų vektorius

Žmogaus HOTAIR kDNR (addgene, Cambridge, MA) buvo papildyta PGR ir buvo įtrauktas į pBabe Puro vektorius (pBabe -HOTAIR). Rekombinantinis retrovirusas buvo gaminami su platina-A (Plat-A, jei prof Kitamura) Pakuotė ląstelių linijas, kaip aprašyta anksčiau [16]. Trumpai tariant, Plat-A ląstelės buvo pernešta su pBabe -HOTAIR ar pBabe-puro Vector (EV). Fugene-6 (Roche Applied Science) ir OPTI-MEM aš (Lanksčiai /Life Technologies Co) buvo pridėta pagal gamintojo protokolą. Keturiasdešimt aštuonias valandas po to, kai transfekciją, retroviruso, kurių sudėtyje yra supernatantas buvo surinkti ir pereina per 0,45 m filtrą. MKN74 ląstelės buvo infekuoti rekombinantinių retrovirusų ir tada pasirenkamas su puromicino.

RNR interferencija

Jei triuškinantis HOTAIR Kato III, mes panaudojome Knockout ™ RNAi sistemos (Klontex Laboratories, Inc. ", Mountain View, CA) pagal gamintojo protokolą. Trumpai, mes skirta keturių shRNR seką tikslinę HOTAIR, kaip parodyta 1 lentelėje Po atkaitinimo, susijusius su papildomu shRNR oligonukleotidų, mes perrišama atkaitintomis oligonukleotidus į pSIREN vektoriaus (shHOTAIR). Tada mes perkeltų Plat-A ląsteles shHOTAIR ar pSIREN Vector (EV) ir užsikrėtę KATO III su rekombinantinių retrovirusų ir atrinkti puromicino. Transdukuotų su sh-HOTAIR2 ir -3 vektoriaus ląstelės buvo pasirinktas tolesnei analizei. Kiekvienas vitrto
eksperimentas buvo atliktas tris kartus, tris kartus ir reprezentatyvūs duomenys rodomi.
shRNR
seka
shHOTAIR-1sensegatccgaacgggagtacagagagattttcaagagaaatctctctgtactcccgttcttttttganti-senseaattcaaaaaagaacgggagtacagagagatttctcttgaaaatctctctgtactcccgttcgshHOTAIR-2 sensegatccgccacatgaacgcccagagattttcaagagaaatctctgggcgttcatgtggttttttg kovos su senseaattcaaaaaaccacatgaacgcccagagatttctcttgaaaatctctgggcgttcatgtggcgshHOTAIR-3 sensegatccgtaacaagaccagagagctgttttcaagagaaacagctctctggtcttgttattttttganti-senseaattcaaaaaataacaagaccagagagctgtttctcttgaaaacagctctctggtcttgttacgshHOTAIR-4sensegatccaattcttaaattgggctggttcaagagaccagcccaatttaagaattttttttganti-senseaattcaaaaaaaattcttaaattgggctggtctcttgaaccagcccaatttaagaattgTable 1. sekos shRNR įterpia už shHOTAIR išreiškiamas vektoriumi.
CSV Parsisiųsti CSV

Mobilusis augimo tyrimas

1 × 10 ^{4 ląstelės buvo pasėjamos už gerai 96 duobučių lėkštelėse į normalų ląstelių augimą žiniasklaida. 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-diphenyltetrazolium bromidas, geltona tetrazolo (MTT) Analizės buvo atliekama naudojant ląstelių proliferaciją Kit I (GE Healthcare Gyvosios gamtos mokslai, NJ) pagal gamintojo protokolą. buvo Matavimai absorbciją prie 570 nm bangos ilgiui VERSAMAx (molekulinė įrenginiai, Kalifornija) įvertinti MTT-formazano gamybą po 24, 48 ir 72 valandų inkubacijos. Šis indeksas buvo įvertintas 48 ir 72 valandų normalizuojamas, kad po 24 valandų.}

Minkštas agaras kolonija formavimas tyrimas

Minkšti agaras tyrimai buvo pastatytas 6-duobučių lėkštelėse. Bazinė sluoksnis kiekvieną duobutę sudarė 1ml su galutiniais koncentracijų 1 x žiniasklaida (RPMI-1640 plius 10% inaktyvuota FBS) ir 0,6% mažos Lydymosi temperatūra agarozės. Plokštelės buvo atšaldyti kambario temperatūroje, kol kietas, kuriame a punktas 1 ml augimo agaro sluoksnis buvo pilamas, sudaryta iš nuo 1 x 10 ^{4 ląstelių suspenduotų 1 x žiniasklaidos ir 0,3% mažos Lydymosi temperatūra agarozės. Plokštelės buvo vėl atšaldyti kambario temperatūroje, kol augimo sluoksnis sustingo. Dar 1 ml 1 x laikmenų be agarozės buvo įtraukta ant augimo sluoksniu, ant dieną 0 ir vėl augimo 14 dieną. Ląstelės buvo leidžiama augti 37 ° C 4 savaites ir buvo skaičiuojami bendra kolonijos.}

Gyvūnai pervežimas

6 savaičių amžiaus Patelė NOD /Shi-SCID-IL2Rγ ^{null (nog ) pelėms buvo įsigytas iš Centrinės instituto eksperimentinių gyvūnų (CIEA, Kawasaki, Japonija) ir naudojamas šiame eksperimente. Jie buvo leista Aklimatizuojama per savaitę iki eksperimentų dalį. Jie buvo laikomi švarioje kambaryje gyvūnų priežiūros įrenginys, Miyagi vėžio tyrimų centro ir saugomi pagal standartinę temperatūros, drėgmės ir datuoti apšvietimo sąlygomis ir pelės Čiau /vandens iki soties.}

uodegos venos tyrimas dėl vėžio ląstelių metastazės

Jei įvertinti HOTAIR raiškos kraujo plintančių metastazių poveikį, mes švirkščiamas 1,0 x 10 ^{5 ląstelių HOTAIR- (n = 9) ar E. ekspresija (n = 9) MKN74 su 0,2 ml PBS į uodegos venos pelių. Pelių buvo paprastai stebėti dėl galimo ligos kartą per savaitę skiriama eksperimento ilgio, ir jie buvo paaukotos 8 savaites po injekcijos. Plaučiai, kepenys, inkstai, antinksčiai, blužnis ir iš pelių buvo pašalintų ir buvo tiriami mikroskopiškai apie metastazių buvimas.}

peritoninė metastazės

1,0 x 10 ^{6 ląstelės shHOTAIR- (n = 5), arba E. ekspresija (n = 5) KATO III buvo sušvirkšta 0,2 ml PBS į pilvaplėvės pelių įvertinti HOTAIR raiškos poveikį peritoninės metastazių. Pelių buvo paprastai stebėti dėl galimo ligos kartą per savaitę skiriama eksperimento ilgio, ir jie buvo paaukotos 8 savaites po injekcijos. Tirta mazgų ir ascitu buvimas pilvaplėvės ertmę.}

histologija ir imunohistocheminis

akcizais apmokestinamos audiniai buvo nustatytas 10% buferiniame formalino 24 valandas, tada nukopijuokite ir įdėta į parafino mikroskopu tyrimas. Bandiniai buvo supjaustyti 4 mkm storio sekcijų ir tamsintas hematoksilinu ir eozinu (H & E). Mes tyrė mikro-metastazių buvimas, kad nebuvo pripažintas makroskopinis. Pripažintos navikai buvo toliau tiriamas immunohistochemically naudojant pirminį antikūną žmonėms citokeratino (anti citokeratino žemas, DC10 /5D3, Nichirei Co, Tokijas, Japonija), įsitikinkite, kad jie buvo kilęs iš liejamo su žmogaus skrandžio vėžio ląstelių. Po to, kai deparaffinization, audinių dalys buvo inkubuotos metanolyje su 0,3% vandenilio peroksido distiliuotame vandenyje 20 minučių, kad blokuoti endogeninę peroksidazės aktyvumo. Antigenas paieška buvo atlikta pagal slėgio virimo 95 ° C temperatūroje 5 min 10 mM citrato buferio, pH 6,0, ir paliekama atvėsti iki kambario temperatūroje 30 minučių. Endogeninė biotin- arba avidino-privalomas vietos buvo užblokuotas eilės inkubacijos 30 minučių. Skyriai buvo inkubuojami per naktį 4 ° C su pirminiais antikūnais aukščiau aprašytą ir buvo reaguoja su antrojo antikūno. Avidino-biotin- peroksidazės kompleksas buvo naudojamas aptikti antras antikūnas. Dažymo buvo ryškinamos su diaminobenzidinu (DAB). Skyriai buvo counterstained hematoksilinu, išplauti ir dehidratuoto naudojant etanolį gradientą ksilenas.

Statistinė analizė

iš HOTAIR raiškos sąsają su paciento klinikos kintamųjų ir metastazių norma švirkščiamas pelėms buvo analizuojami chi-square testą. Statistinis reikšmingumas skirtumų tarp 2 grupių buvo nustatoma naudojant Vilkoksono testą ir P
vertę (

< 0,05) buvo laikomas statistiškai reikšmingas. Statistinis skirtumas tarp 3 grupes buvo įvertintas naudojant plieno Dwass testą arba Bonferroni analizę ir P
vertė (< 0,017) buvo laikomas statistiškai reikšmingas bendro išgyvenamumo tikimybė buvo analizuojami Kaplan-Meier metodų ir įvertino log-rank testus, ir P
vertė (< 0,05) buvo laikomas statistiškai reikšmingas. Visi statistinės analizės buvo atliekamos naudojant Ekuseru-Toukei 2012 (sociologinės apklausos tyrimų informacija Co, Ltd, Tokijas, Japonija). P
vertė (< 0,05) buvo laikomas statistiškai reikšmingas

Etika

Institucinis apžvalga valdyba Miyagi Cancer Center (MKC) patvirtino šį tyrimo protokolą,. ir raštu informuoti sutikimas buvo gautas iš kiekvieno paciento (leidimo numeris: MCC 22-30). Eksperimentai su gyvūnais protokolas buvo patvirtintas MKC gyvūnų priežiūrai ir naudojimui komiteto (leidimo numeris: MKC-AE-2011-12).

Rezultatai

Apie HOTAIR išraiška žmogaus skrandžio vėžio mėginių

HOTAIR ekspresijos lygis vėžinių ir gretimų noncancerous audinių iš skrandžio vėžiu sergantiems pacientams buvo išnagrinėti KRL-PGR ir normalizuotas pagal GAPDH ekspresijos lygį. Vidutinė išraiška lygis HOTAIR buvo 4.952 ± 6.462 ir 3.804 ± 6.721 (HOTAIR /GAPDH ± standartinis nuokrypis) ir karcinoma ir nevėžinės pažeidimų, atitinkamai. Sąvoka lygiai HOTAIR buvo žymiai didesnis karcinoma pakitimų palyginti su tais, ne vėžinių pakitimų ( P
= 0,019, 1A pav.)

asociacija tarp HOTAIR išraiškos ir klinikos veiksnių į žmogaus skrandžio vėžio

žmogaus skrandžio vėžio audiniuose buvo histopathologically suskirstyti į žarnyno (n = 36) ir pasklidųjų tipų (n = 32). Žmogaus skrandžio vėžio audiniuose buvo toliau klasifikuojami pagal HOTAIR ekspresijos lygis į Aukštos HOTAIR grupės (HOTAIR /GAPDH > 1.0) ir Low-HOTAIR grupė (HOTAIR /GAPDH < 1,0) (Skaičiai 1B ir C). Iš HOTAIR išraiškos su klinikos funkcijų žarnyno ir difuzinio tipo skrandžio vėžio asociacija apibendrinti 2 ir 3 lentelėse, atitinkamai. Žarnyno tipo skrandžio vėžio, nėra reikšminga koreliacija buvo nustatyta tarp HOTAIR išraiškos ir klinikos išvadas (2 lentelė). Be to, jokių reikšmingų santykis buvo vertinamas tarp HOTAIR išraiška ir bendras išgyvenamumas, nors Aukštos HOTAIR grupė linkę parodyti trumpesnį išgyvenamumą nei Mažai HOTAIR grupė (2A pav). Kita vertus, didelė priklausomybės tarp HOTAIR saviraiškos ir limfmazgių metastazių (p = 0,043), venų infiltracija ( P
= 0,0083) ir trumpą bendro išgyvenamumo ( P
= 0,018) į difuzinis tipo skrandžio vėžiu (3 lentelė ir 2b pav.) Tačiau nebuvo ryšys tarp scenos ir HOTAIR išraiška.
HOTAIR mažas
HOTAIR aukštos
P
vertė
Age73.07 ± 9.1870.87 ± 10.650.53Gender0.63Male1016female37T0.87T1, T2610T3, T4713N0.26N078N1, N2 , N3615Ly0.68ly069ly1, ly2, ly3714v0.19v089v1, v2 v3514Stage0.501,27153,4680.50Table 2. HOTAIR išraiškos su klinikos funkcijų žarnyno tipo skrandžio vėžio asociacija.
CSV Parsisiųsti CSV
HOTAIR mažo
HOTAIR aukštos
P
vertė
Age59.250 ± 10.7566.35 ± 10.160.07Gender0.71male812female48T0.87T1, T212T3, T41118N0.043*N086N1,N2,N3414ly0.40ly067ly1,ly2,ly3613v0.0083*v0119v1,v2,v3111Stage0.311,2783,4512Table 3. HOTAIR išraiškos su klinikos funkcijų difuzinio tipo skrandžio vėžio asociacija.
CSV Atsisiųsti CSV

kartos HOTAIR aukštyn ir žemyn reguliuojama ląsteles ir koreliacija su ląstelių gyvybingumas

Jei įvertinti funkcinis vaidmuo HOTAIR skrandžio vėžio išsivystymo, mes sukurtas stabiliai HOTAIR išreikšti MKN74 ląstelių (MKN-HOTAIR) ir stabiliai shHOTAIR ekspresuojančiam KATO III ląstelių (KATO-shHOTAIR). KRL-PGR analizė parodė, kad MKN-HOTAIR ląstelės išreiškė savo HOTAIR lygį apie 10 kartų, kad EV išreiškiančio (MKN-EV) arba tėvų MKN74 ląstelių ir kad šios molekulės išraiška buvo sumažintas nuo 30 iki 70% Kato-shHOTAIR ląstelių palyginti su EV transdukuoti (KATO-EV) arba tėvų KATO III (KATO-EV) ląstelių (3a pav.) Šio MTT rezultatai parodė, kad nei iki reguliavimą, nei žemyn reguliavimo HOTAIR įtakos skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją (S1 pav.)

Minkštas agaras kolonija formavimas tyrimas

Jei išsiaiškinti funkcijų HOTAIR į tvirtinimo nepriklausomas augimo skrandžio vėžio ląsteles, mes naudojamas minkštas agar tyrimą. MKN-HOTAIR ląstelės sudarė didesnę kolonijų skaičių nei MKN-EV ląstelių ( P
= 0,009, 4A pav.) Suderinamas su šia išvada, Kato-shHOTAIR ląstelės parodė reikšmingą mažiau kolonijų nei KATO-EV ląstelių (4b pav.) Be to, skrandžio vėžio ląstelės su panašiu HOTAIR ekspresijos lygio (MKN-HOTAIR ir shHOTAIR-3, 3B pav), suformuotą skaičius yra panašus kolonijų, nurodant, kad tvirtinimo įtaisas-nepriklausomas augimas skrandžio vėžio ląstelių buvo reguliuojamos HOTAIR priklausomu būdu.

HOTAIR išraiška ir skrandžio vėžio ląstelių metastazės ir pilvaplėvės sklaida

nuo HOTAIR stiprinamas tvirtinimo nepriklausoma, bet ne Anchorage-priklauso augimas skrandžio vėžio ląsteles, mes iškėlė hipotezę, kad HOTAIR gali prisidėti prie tolimos metastazės ir /ar peritoninė sklaida, o ne tiesioginis įsiveržimas į kaimynines organus. Siekiant spręsti šią problemą, mes dirbo uodegos venos tyrimą ir pilvaplėvės injekcijos ląstelių išnagrinėti, ar HOTAIR išraiška skatina kraujo -borne metastazių ir pilvaplėvės sklaidą, atitinkamai. Kaip ir tikėtasi, MKN-HOTAIR ląstelės dažnai eksponuojami metastazes kepenų ( P
= 0,01), lyginant su MKN-EV ląsteles. Be to, skaičiai ir dydžių metastazėms kepenų navikų buvo didelis didesnis su MKN-HOTAIR ląstelių nei MKN-EV ląstelių ( P
= 0,03 ir P
= 0,019, atitinkamai, skaičiai 5A ir B). Įdomu tai, kad vienu pelės sušvirkšta MKN-HOTAIR parodė metastazių į inkstų ir antinksčių be kepenų, o su MKN-EV ląstelių metastaziniai navikai susidaro tik kepenyse. Nuosekliai, pilvaplėvės sklaida buvo gerokai sumažintas (1/5 P
= 0,009), kai HOTAIR inaktyvuodavo Kato III ląstelių, o visi valdymo elementai susiformavo peritoninė sklaidą (5/5) (Skaičiai 6A ir B). Metastazėms navikai buvo histologiškai patvirtinta ir jie parodė intensyvus teigiamą dažymo už žmogaus citokeratino (skaičiais 5C ir 6c).

Diskusijos

Šiame tyrime mes tyrė HOTAIR išraišką skrandžio vėžio ir išnagrinėti jos koreliacijos su klinikos funkcijų, įskaitant pacientų prognozei. Mūsų rezultatai aiškiai parodė, sustiprintą išraišką HOTAIR vėžiu audinių, palyginti su nevėžinės audinių, skrandžio ir kad aukšto lygio išraiška šiai molekulei buvo susijęs su limfmazgių metastazių, venų invazijos ir prastos išlikimo difuzinio tipo skrandžio vėžio. Šie rezultatai sutampa su neseniai atliktą tyrimą, kuriame, kad iki-reguliavimas HOTAIR randama skrandžio vėžiu, palyginti su sveikų audinių ir koreliuoja su naviko stadijos ir limfmazgių metastazių [17]. Be to, HOTAIR ekspresija skrandžio vėžio ląsteles eksponuojami iš Anchorage-nepriklausoma ląstelių augimą stiprinimą in vitro parsisiųsti ir metastazių kepenyse vivo
o sumažintas išraiška HOTAIR skrandžio vėžio ląstelių lėmė sumažėjo tvirtinimo nepriklausomas augimą ir pilvaplėvės sklaidą, o tai rodo, kad HOTAIR vaidina svarbų vaidmenį skrandžio vėžio progresavimą.

Aukštojo išraiška HOTAIR buvo aptikta vėžinių ląstelių nei atitinkamu ne vėžinių ląstelių įvairių vėžio, įskaitant krūties, storosios žarnos, kepenų, kasos ir nosiaryklės vėžio [9-11,18-20]. Šiose vėžio, HOTAIR taip pat buvo įrodyta, kad būti susijęs su metastazių ir /arba blogos prognozės. Be to, aukšto lygio HOTAIR išraiškos koreliavo su trumpu ligos reiškinių išgyventas plaučių vėžio [12]. Todėl, mūsų dabartiniai duomenys sutampa su ankstesniais tyrimais, rodančiais, kad HOTAIR išraiška dalyvauja tvirčiau agresyvumo įvairių tipų karcinoma ląsteles. Kita vertus, mes negalėjome rasti neigiamą prognostinę poveikį HOTAIR žarnyno tipo skrandžio vėžiu, nors Aukštos HOTAIR grupė linkę parodyti trumpesnį bendrą išgyvenamumą lyginant su žemo HOTAIR grupei. Tai gali būti dėl mažo pacientų skaičiaus dabartinės studijų, nes priverstine išraiška HOTAIR į žarnyno skrandžio vėžio ląstelių linijos (MKN74) įgijo agresyvų fenotipą in vitro parsisiųsti ir vivo,
. Tolesni tyrimai su dideliais skaičiais mėginių Be eksperimentinis tyrimas, naudojant kitus žarnyno skrandžio vėžio ląstelių linijas reikėtų spręsti šią problemą.

dabartinės tyrimo metu asociacija buvo nustatyta tarp HOTAIR saviraiškos ir ląstelių augimo skrandžio vėžys. Krūties, storosios žarnos ir kepenų vėžiu, kad HOTAIR dalyvavimas ląstelių augimą neįrodyta [9,10,18], o HOTAIR skatinamas ir sumažinti ląstelių proliferaciją in kasos vėžiu [11] ir plaučių vėžio [12], atitinkamai. Be to, nėra reikšmingas skirtumas rastas oda naviko augimo nog pelių tarp HOTAIR ekspresija ir kontrolės ląstelės dabartiniame tyrime (duomenys nebuvo parodyta). Remiantis šiais duomenimis, ji yra tikėtina, kad tarp HOTAIR išraiškos ir ląstelių proliferacijos ryšys yra priklausoma nuo vėžio tipo. Priešingai, tvirtinimo įtaisas-nepriklausomas augimas skrandžio vėžio ląstelių buvo aiškiai sustiprintas į HOTAIR priklausomu būdu. Be to, HOTAIR išraiška sukelia daugiau metastazėmis kepenyse ir kituose organuose, ir iš HOTAIR defektas slopino peritoninė sklaidą skrandžio karcinoma ląsteles. Šie stebėjimai kartu su tuo, kad HOTAIR išraiška prisideda prie metastazių įvairiose karcinoma [9-12,18], rodo, kad HOTAIR daugiausia dalyvauja metastazavusiu procesą, o ne į pirminio naviko augimą.

Taigi, sustiprintas HOTAIR išraiška difuzinio tipo skrandžio vėžio buvo susijęs su venų invazija ir blogos prognozės nepriklausomai nuo T faktorius sergamumo ir privertė išraišką HOTAIR skrandžio vėžio ląstelių skatinama tvirtinimo nepriklausomas ląstelių augimą in vitro parsisiųsti ir metastazių kepenyse vivo
. Šie rezultatai rodo, kad HOTAIR yra tikėtina, kad būti įtraukti į skrandžio vėžio išsivystymo ir taip pat gali būti naudojami terapijoje taikiniu, skrandžio vėžio gydymui.

Pagalbinė informacija
S1 paveiksle.
ląstelių proliferacijos asociacijos HOTAIR išraiška. Iš MTT įvertintas po 72 valandų rezultatai buvo standartizuoti, kad po 24 valandų. Nėra santykis buvo rastas tarp HOTAIR saviraiškos ir skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0077070.s001
(TIF)

Padėka

Mes dėkojame profesorius Kitamura (Tokijo universitetas, Tokijas, Japonija) už Platina-A ląsteles.

• PLoS ONE: Gamtos istorijos piktybinis kaulų liga, skrandžio vėžiu: galutiniai rezultatai yra multicentrinius Kaulų Metastazė Survey
• PLoS ONE: aktyvavimas STAT3 Žmogiškųjų Skrandžio vėžio ląsteles per interleukino (IL) -6-Type citokinų Signalizacijos koreliuoja su klinikinė reikšmė