PLoS ONE: Uloge DPY30 u proliferaciji i motilitet želuca stanica raka

Sažetak pregled

Razne vrste histona metilacije su povezani s progresijom raka. Ovisno o metilacije mjestu u histona proteina, njezini učinci na transkripciju su različite. DPY30 je čest član SET1 /MLL histona H3K4 mctiltransfcrazu kompleksa. Međutim, njegov izraz i uloga kod raka želuca su slabo poznata. Da bi se utvrdilo da li DPY30 ima patofiziološke uloge u raka želuca, njegov izraz i uloge su ispitani. Imunohistokem i real time PCR pokazala up-regulaciji DPY30 izražavanja u nekim želučanih staničnim linijama karcinoma i pacijenata tkiva. Njegova obaranje po siRNA smanjio proliferaciju, migraciju i invaziju želučanih stanica raka, a njegova prekomjerna ekspresija pokazali suprotne učinke. Ovi rezultati pokazuju da DPY30 ima kritičnu ulogu u širenju, migracije i invazije želučanih stanica raka, te sugeriraju DPY30 može biti terapijski cilj u raka želuca pregled

Izvor:. Lee YJ, Han ME, Baek SJ, Kim SY, oh tako (2015) Uloge DPY30 u proliferaciji i pokretljivosti želučane stanica raka. PLoS ONE 10 (7): e0131863. doi: 10,1371 /journal.pone.0131863 pregled

Urednik: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Sjedinjene Američke Države pregled

Primljeno: 3. ožujka 2015. godine; Prihvaćeno: 8. lipnja 2015; Objavljeno: 6. srpnja 2015 pregled

Copyright: © 2015 Lee et al. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Podaci Dostupnost: sve relevantne podatke su u radu pregled

Financiranje:. Ovaj rad je podržan od strane bio & Medicinski program Technology Development (É2M3A9C6050213, OSO) i Basic Science Research Foundation (É2R1A1A3010521, HME) iz National Research Foundation (NRF) financira korejske vlade (MONT), a bespovratna sredstva iz Nacionalnog R &D program za Kontrola Rak, Ministarstvo zdravstva, socijalne skrbi i obitelji, Republika Koreja (\0050, OSO). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Kovalentne modifikacije histona repa, kao što je, acetilaciju, fosforilaciju, ubikvitinacija i metilacija, moduliraju kromatina strukturu i igraju ključne uloge u reguliranju napredovanja staničnog ciklusa, genske transkripcije, popravka DNA, embrionalni razvoj i staničnu diferencijaciju [1, 2]. A povećana Acetiliranje obično povezuje s transkripcije aktivacije, metiliranje histona korelira s aktivacijom transkripcije i represije. Na primjer, metilacija histona H3 na lizinu 9, 20, ili 27 ostataka (H3K9, H3K20 ili H3K27) je uključen u transkripcijskoj utišavanja gena, ali s druge strane, metilacija na H3K4, H3K36 ili H3K79 povezana s otvorenim kromatina i transkripcijski aktivan gena. [3] pregled

sisavaca, mono-, di- i tri-metiliranjem H3K4 (H3K4me1, H3K4me2 i H3K4me3) obavlja šest različitih SET1 obitelji /MLL kompleksa (SET1A, SET1B , MLL1, MLL2, MLL3 i MLL4) [4, 5]. Ove H3K4 methyltransferases (H3K4MT) sadrže različite katalitičke podjedinice, te o aktivnostima svih šest obiteljskih kompleksa kontroliraju zajedničkih ključnih komponenti multi-podjedinica, koje uključuju WDR5, RBBP5, ASH2L i DPY30, a također se spominju kao WRADs. [6-9]. Gubitak bilo koje podjedinice WRAD složenih rezultata u smanjenom H3K4 metilacije. WDR5 i RBBP5 su ključni za sve tri vrste metilacije H3K4 (H3K4me1, H3K4me2 i H3K4me3), dok ASH2L i DPY30 uglavnom su potrebni za H3K4me3 [6, 8, 10, 11]. Pregled

DPY30 je član od svih ljudskih MLL kompleksa SET1 /, a potreban je za punu SET1 /MLL metiltarnsferaznoj aktivnosti [10, 12]. DPY30 je bio upleten u diferencijacije potencijala embrionalnih matičnih stanica (ESCs) duž neurona povezanosti [10] te je neophodan za pravilan diferencijacije i proliferacije hematopoetskih ishodišnih stanica [12]. Nadalje, osiromašeni DPY30 uzrokuje stanica za unos starenja, kao što su stanje i da regulira P16 (lokusu CDKN2A) i P15 (CDKN2B), koji su izravno uključeni u starenje [13]. Pregled

Rak želuca je jedan od vodećih uzroci raka povezanih smrti u svijetu [14]. Iako nedavni dijagnostički i terapijski napredak pružiti odličnu preživljavanje bolesnika s ranim karcinomom želuca, bolesti obično dijagnosticira u kasnoj fazi kada je prognoza je loša [15]. Želučani karcinogeneze podrazumijeva progresivne nakupine različitih genetskih i epigenetičkim promjena, koje vode da se dobije-of-funkcije koje onkogena i gubitak-of-funkcije pomoću gena za suzbijanje tumora. Nadalje, budući da transkripciju gena jako ovisi o kromatina strukturi, promijenjenih ili abnormalnih histona metiliranje je obično povezan s progresijom tumora i prognozi kod raka [16], a premda se status histona metilacije je dobro opisana u mnogim tipovima karcinoma, ovaj aspekt ostaje nejasno u rakom želuca [16, 17]. pregled

u ovom istraživanju, kako bi se utvrdilo da li DPY30 ima patofiziološke uloge u raka želuca, njegov izraz i uloge su ispitani. pregled

Materijali i metode

kultura stanica i siRNA transfekcija pregled

rak želuca-izvedeni stanične linije, SNU1, SNU16, SNU216, SNU620, SNU638 i NCI-N87 kupljeni su od korejskog stanične linije banke (Seoul). Želučana stanična linija epitelnih stanica, HFE145 su obdareni od profesora Hasana Ashktorab (Howard University). Su stanične linije raka želučanih su kultivirane na 37 ° C u vlažnoj 5% CO _{2/95% atmosferi zraka u RPMI1640 uz dodatak 25 mM HEPES, 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS) (GE Healthcare Life Science, Južna Logan , UT, USA) i 100 ug /ml penicilin /streptomicin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). DMEM (GE Healthcare Life Science) medij, uz dodatak 10% FBS i 100 ug /ml penicilina /streptomicina korištena je za HFE145 kulture. Stanice su transficirane s malom ometa RNA (siRNA) ili kodirani (SCR) siRNA korištenjem DhamaFECT reagens 1 ili 3 (Thermo Scientific, Lafayette, CO, USA) u skladu s uputama proizvođača. siRNA sekvence su kako slijedi: DPY30 siRNA dupleks (ORF) (Bioneer, Daejeon, Koreja), 5'-CAC UCU GAG UAC GGU CUC A (dTdT) -3 ', 5'-CUC UGA GUA CGG CAC UCU A (dTdT) -3 ', 5'CUC ACU UAU UCU AGG UAC U (dTdT) -3'; DPY30 siRNA duplex (3'-UTR) (Bioneer); 5'-CCG GAC AAC AGA ACC UAU UUU UGG A (dTdT) -3 ', 5'-GAG OKS GCU UUA AUU GCC kolovoz AUC A (dTdT) -3'; WDR5 siRNA duplex (Bioneer), 5'-GUC Cửu GUG AAG CUC GUC U (dTdT) -3 ', 5'-GUC GUG AUC UCA ACA GCU U (dTdT) -3', 5'-CAG AUU CUA ACC UUC UUG U (dTdT) -3 '; RBBP5 siRNA duplex (Bioneer), 5'GUG UGA AAA GGG CUC AGU A (dTdT) -3 ', 5'-CAG AUU CUC AGG AUC UUG U (dTdT) -3', 5'GUG GUU GAG AUU AGU AGA U (dTdT) -3 '; ASH2L siRNA duplex (Bioneer), 5'-gua UGA ACG GGU UUU GUU A (dTdT) -3 ', 5'CUG AGA ACA CCU GAA AUC A (dTdT) -3', 5'-GUC UAC Cửu UCA UGA CCA A (dTdT) -3 '; kodirani (SCR) siRNA (Thermo Scientific), 5'GAU CCG CAA AAG AGC GAA A (dTdT) -3 '. pregled}

DPY30 pojačanom ekspresijom pregled

DPY30 cDNA je kloniran u pLenti6.3 -V5 /DEST vektor (lentivirusni odredište vektor) pomoću in vivo
rekombinacije temeljene Gateway kloniranja sustav (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Donorska vektor (pDONR221) zadržanih cDNA sekvencu DPY30 je kupljen od Konačan ORF klonova (Invitrogen) i rekombinirati s ccdB suprotnom birati
gena pLenti6.3-V5 /DEST pomoću LR clonase enzima smjesu (Invitrogen). Prazan vektor pLenti6.3 /V5-DEST je korišten kao tobožnje kontrolom. Rekombinantni lentivirusi su proizvedene u 293FT stanica i koristi se za infekciju SNU216 i SNU638 stanica, u skladu s uputama proizvođača (ViraPower lentivirusne Expression System; Invitrogen). DPY30-ekspresijom stabilne stanice su uspostavljeni selekcijom s blasticidin (7,5 ug /ml) (Invitrogen). Pregled

Za spašavanje testovima, možemo mijenjati, slijede protokol 'RNAi smetnje pomoću Precision Lenti ORF kolekciju' (http://dharmacon.gelifesciences.com/uploadedFiles/Resources/precision-lentiorfs-rnai-rescue-appnote.pdf). Ukratko, stanice su zaražene s rekombinantnim lentivirusa (pLenti6.3-V5 /DEST ili DPY30-over konstrukte). 24 sata nakon prijenosa, a medij koji sadrži virus se ukloni i zamijeni sa kompletnom mediju za kultiviranje. Sljedećeg dana, blasticidin je dodan u koncentraciji od 7,5 ug /ml. Stanice su održavane u izboru za šest dana, zamjenom medija ili pasažiranje svaka 2-3 dana je potrebno. Odabrane populacije kontrolnim stanicama ili stanicama koje eksprimiraju DPY30 su korišteni za transfekcijske eksperimente upotrebljavaju DPY30 siRNA ciljanjem otvorenu čitajuću (ORF) ili 3'-netranslatiranu regiju (UTR). Pregled

realnom vremenu PCR pregled

uzorci tkiva dobiveni su od 23 nepovezanih korejski primarnih pacijenata s rakom želuca koji je podvrgnut kirurškom resekcija na Pusan ​​National University Hospital i Pusan ​​National University Yangsan bolnice i pod uvjetom pismeni informirani pristanak. Istraživanje je odobreno od strane Pusan ​​National University Hospital-Institutional Review Board (PNUH-IRB) i Pusan ​​National University Yangsan bolnica-Institutional Review Board (PNUYH-IRB). Ukupna RNA iz tkiva i stanice su ekstrahirane pomoću Trizol reagensa (Invitrogen) ili RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA), u skladu s uputama proizvođača. Kvantitativno realnom vremenu lančane reakcije polimeraze (PCR u realnom vremenu), je bio korišten za provjeru razine DPY30 mRNA. cDNA su sintetizirani s MMLV reverzne transkriptaze (Promega, Madison, WI, USA), dNTP i oligo-dT početnice. Nizovi primera korištene su kao što slijedi: DPY30, 5'AAC GCA GGT TGC AGA AAA TCC T -3 'i 5'-TCT GAT GGT CCA CAC AGG GAG 3'; WDR5, 5'-TGT TAC TGG TGG GAA GTG GA-3 i 5'CTG TTG GGT GAC AAG CTG TT -3 '; RBBP5, 5'AGT OKS CAC ATC MAČKA CCA GT -3 'i 5'-TCA CAG TCG CCT GAA AGA AC 3'; ASH2L, 5'-TAC AAG AGC TGC ACG GTT TC -3 'i 5'-CCA GCC MAČKA GTC ACT MAČKA AG -3'; GAPDH, 5'TGG GCC AGG AAA TCA MAČKA CC -3 'i 5'-CTC AGC CCG AGT GGA AAT GG -3'. Real-time PCR je provedena korištenjem LightCycler ™ 96 Real-time PCR sustav (Roche, Nutley, NJ) i FastStart Osnovni DNK Green Master (Roche), u skladu s uputama proizvođača. GAPDH korištena je kao interna kontrola. Pregled

Imunohistokemija pregled

Imunohistokemijsko bojanje sa zečjim anti-humanim DPY30 poliklonskog antitijela (Sigma-Aldrich) je izvedena na tkiva niz karcinoma želuca (n = 59) kupljeni od super BIO čips (Seoul) ili na 4-ĩm sekcije parafin uklopljenih primjeraka. Ukratko, poslije deparaffinization i rehidracije, stakalca su tretirane s 0,3% vodikovim peroksidom na 30 min da inhibiraju Aktivnost endogene peroksidaze i blokirane s 10% normalnog seruma tovara (NDS) i 1% BSA u 1 × slanom otopinom puferovanom fosfatom (PBS). Rezovi su inkubirani preko noći na 4 ° C u puferu za blokiranje sadrži zečji anti-humani DPY30 primarna antitijela (1:80, Sigma-Aldrich). Sekundarna protutijela (HRP-konjugirani), vezanje se provodi pri razrjeđenju od 1: 200 u puferu za blokiranje za 2 h pri sobnoj temperaturi. Detekcija je izvršena s HRP (Vector Laboratories), i objektna stakalca su prebrojane, tretirajući ih 1 min hematoksilinom bojenje puferu (Sigma-Aldrich). Pregled

Stanična proliferacija Test pregled

Jedan dan nakon transfekcije stanice s siRNA, medij je zamijenjen s 1% FBS mediju, a četiri dana kasnije dodan je 10 ul Ez-Cytox (ITSBIO, Seoul) i inkubira se 0,5 do 2 sata. Kako bi se provjerila učinak DPY30 prekomjernom ekspresijom na proliferaciju stanica, stanice su nasađene u 10% FBS mediju, a nakon tri dana kulture, doda se 10 ul Ez-Cytox (ITSBIO) i inkubira se 0,5 do 2 sata. Stanične Životna sposobnost određena je mjerenjem apsorbancije pri 450 nm pomoću VICTOR3 više čitatelja (Perkin Elmer, MA, USA). Pregled

Boyden komora Test pregled

Modificirani Boyden Transwell® komora (Neuro Probe, Gaithersburg, MD, USA) je korišten. Dno komora se napuni s 50 ul RPMI koji sadrži 10% FBS-a. Ispitati učinke DPY30 poznatim dolje, SNU1 i SNU16 (nepričvršćenih stanica) su transficirane sa siRNA ORF-ciljanje. Jedan dan nakon transfekcije, stanice su isprane, suspendirane u gustoći od 5 × 10 ^{5 stanica /ml u 50 ul RPMI uz dodatak 0,5% FBS, i posađene u gornju komoru. Za uklanjanje učinaka proliferacije, doda mitomicin C (0,01 ug /ml, Sigma-Aldrich). Stanice su zatim inkubirane 24 sata na 37 ° C s 5% CO2. Broj migrirale stanica je ocijenjena prebrojavanjem stanica kod donje jamice. Da bi se ispitala učinke DPY30 prekomjernom ekspresijom, stabilne stanice (Prihvaćene stanice; SNU216 i SNU638) su korišteni. Stanice (lažno i DPY30-više) su tripsinizirane, te nasađene u gustoći od 1 x 10 5 stanica /ml. Za uklanjanje učinaka proliferacije, mitomicin C je dodan. Stanice su ostavljene da migriraju tijekom četiri sata, membrane su fiksirane i obojene korištenjem Diff-Quik otopina (Sysmex, Kobe, Japan) i ispere s destiliranom vodom. Broj stanica u 10 nasumično izabranim poljima izbrojene su pomoću svjetlosnog mikroskopa. Eksperimenti su provedeni u tri primjerka. Pregled}

Matrigel invazija Test pregled

invazivne sposobnosti stanica raka utvrđena je pomoću 8-um porozne Biocoat Matrigel komornih umetke (BD bioznanosti, San Jose, CA, USA). Jedan dan nakon transfekcije s SCR ili DPY30 siRNA, stanice su tripsinizirane i suspendiraju na gustoću od 5 × 10 ^{4 stanica /ml u 500 ul RPMI uz dodatak 0,5% FBS i mitomicina C (0,01 ug /ml, Sigma -Aldrich). Stanice su zatim dodana u komori umeće i smješteni u udubine napunjene s 0,7 ml mediju s 10% FBS kako kemoatraktant. Nakon inkubacije od 24 ili 48 sati, a ne invaziju stanica na vrhu membrane su uklonjene struganjem i invazivnih stanica na dno membrane su fiksirane i obojene s Diff-Quik otopine (Sysmex). Broj stanica u 10 nasumično izabranim poljima izbrojene su pomoću svjetlosnog mikroskopa. Eksperimenti su izvedeni u triplikatu te najmanje 5 polja su izbrojani po eksperimentu. Pregled}

Statistička analiza pregled

Rezultati su izraženi kao prosjek ± standardna devijacija (SDS) tri neovisna pokusa. U značajnosti razlika je određena primjenom Student t pregled -test za nesparene opažanja. P
Vrijednosti < 0,05 smatrane su statistički značajne. Pregled

Rezultati

Izražavanje DPY30 u želučanim tkiva raka pregled

Kako istražiti izražaj DPY30 u ljudskom raka želuca, proveli smo imunohistokemije koristeći niz raka tkiva u želucu ili arhivske parafin uklopljenih dijelove tkiva. U normalnim želučanog tkiva, DPY30 izraz lica bio je teško detektirati (Slika 1a), ali u tkivu raka DPY30 protein široko je pojačana ekspresija (Sl 1b-1D). Naime, DPY30 je izraženo u invaziju želučane stanice raka (Slika 1B-1d). Nadalje, utvrdili smo razine mRNA DPY30 u jednom besmrtnom normalne želuca epitelnih stanica linije (HFE145) i šest želučanih staničnim linijama karcinoma porijekla (SNU1, SNU16, SNU216, SNU620, SNU638 i NCI-N87) pomoću real-time PCR. MRNK razina DPY30 bio je znatno viši (fold promjenu > 5) u SNU1 i SNU16 nego u HFE145 stanica, dok se razine ekspresije od DPY30 u SNU216, SNU620 i SNU638 bila slična onima u HFE145 stanice i bila je niža (kauč promjenu >10) u NCI-N87 (Slika 1E). Također smo provjerili razine mRNA DPY30 u želučanim tkiva raka. DPY30 je visoko izražen u 15 slučajeva (15/23, 65%) u usporedbi s normalnim tkivima (Slika 1F). Ovi rezultati pokazuju da DPY30 jako je izražen u nekih ljudskih želučanim raka. Pregled

Uloge DPY30 na proliferaciju stanica želuca raka pregled

Da bi se odredila moguća uloga DPY30 u želučanim stanicama raka, mi prvi pokucao dolje DPY30 pomoću ORF-ciljanje DPY30 siRNA i prati njegovu obaranje učinkovitost u realnom vremenu PCR (slika 2A). ORF ciljanje DPY30 siRNA (100 nM) smanjenje mRNA DPY30 u HFE145, SNU1, SNU16, SNU216 i SNU638 stanica u usporedbi s kodiranim siRNA (SCR) do 78%, 89%, 79%, 76% i 88%, pojedinačno. Pet dana nakon što je transfekcijom stanica sa SCR ili siRNA ORF-ciljanje, proveli smo proliferacije. Obaranje DPY30 inhibiran proliferacija od HFE145, SNU1 i SNU16 u usporedbi sa SCR za 31%, 69% i 71% respektivno, dok obaranje nije utjecao na proliferaciji od SNU216 i SNU638 (slika 2b), u kojem je izraz razina DPY30 bila je niska (Slika 1E). Dalje, proizveli smo DPY30-s povećanom ekspresijom stanične linije (DPY30-više) pomoću HFE145, SNU216 i SNU638 stanice, a zatim u usporedbi razine DPY30 mRNA u lažno stanica (kontrola) i DPY30-više stanica. Real-time PCR rezultati pokazali su da je razina ekspresije DPY30 bio 4,2, 3,5 i 3,2 puta veći u DPY30-ekspresijom HFE145, SNU216 i SNU638 stanica nego lažno stanica, odnosno (Sl 2a). DPY30 prekomjerna ekspresija pojačan proliferacija od HFE145, SNU216 i SNU638 stanica u odnosu na lažno stanica za 1,9, 2,2 i 1,6 puta, odnosno (Slika 2b). Pregled

Kako bi se potvrdila specifičnost DPY30 siRNA, proveli smo pokuse spašavanja. Za pokuse spašavanja, koristili smo DPY30 siRNA ciljanja 3'-UTR umjesto ORF jer siRNA ORF-ciljanje može degradirati egzogeni DPY30 ORF DNA smo uveli. Za ekspresiju DPY30, prenesen smo SNU1 i SNU16 s virusnim česticama, pLenti6.3-V5 /DEST (kontrola) ili DPY30-ORF-više konstrukti. DPY30-s povećanom ekspresijom SNU1 ili SNU16 stanice pokazuju višu ekspresiju DPY30 2,1 ili 2,5 puta veći nego lažno stanica, odnosno (slika 2c). SiRNA ORF ciljanje dovelo do podreguliranja razina DPY30 ekspresije za više od 75% u Mock kao DPY30-ekspresijom stanica. siRNA 3'-UTR ciljanje podregulirani ekspresiju DPY30 za više od 85% u lažno stanica, dok se u stanicama DPY30-ekspresijom, smanjena ekspresija DPY30 na razinu sličnu onoj u SCR siRNA-transficirane stanice ( slika 2C). Ovaj rezultat pokazuje da je egzogeni DPY30-ORF DNA je otporan na 3'-UTR ciljanju siRNA i izražena je na sličnoj razini onom endogenog DPY30 mRNA. ORF-ciljanje siRNA inhibira proliferaciju stanica, bez obzira na egzogenog DPY30 izraza (Slika 2D). Proliferacija je također inhibirana siRNA 3'UTR-ciljanja lažno stanicama, no djelomice inhibirane u DPY30-ekspresijom stanica. U DPY30-ekspresijom stanica, siRNA ORF-ciljanje smanjuje proliferaciju SNU1 i SNU16 u usporedbi sa SCR siRNA za 74% i 66%, respektivno, no siRNA 3'-UTR-ciljanje smanjena je za 20% i 8%, odnosno , Ovaj rezultat pokazuje da egzogeni DPY30 spašava inhibiciju proliferacije inducirane siRNA 3'-UTR-ciljanje, a fenotipa uzrokovanih DPY30 specifične siRNA nisu od cilja efekte. Pregled

Zbog DPY30 je sastavni dio štićenika ispitali smo izraze i uloge drugih komponenti odjelima. Real-time PCR pokazala je da razina mRNA WDR5 i RBBP5 u SNU1, SNU16, SNU216 i SNU638 su bili slični onima HFE145. Međutim, razina mRNA od ASH2L bila je značajno veća (fold promjenu > 3) u SNU1 i SNU16 nego u HFE145 stanicama (Slika 3a) što DPY30 na slici 1E. Kako bi istražili da li su WRAD komponente povezane s proliferacijom stanica želuca raka, knockdowned smo svaki WRAD komponentu pomoću svoje specifične siRNA i prati obaranje učinkovitosti u realnom vremenu PCR (slika 3B). Svaki siRNA (100 nM) smanjena razina mRNA u SNU1 i SNU16 stanica u usporedbi sa SCR za 65% -75%. Obaranje WDR5 i RBBP5 inhibiraju proliferaciju SNU1 i SNU16 stanica u usporedbi sa SCR po 30-48% (slika 3C). Međutim, ASH2L inhibiraju proliferaciju SNU1 i SNU16, u kojima je razina ekspresije ASH2L bila visoka, u usporedbi sa SCR za 85% i 75%, respektivno. Pregled

Uloge DPY30 u migraciji i invaziji želuca stanice raka pregled

sljedeći ispituje da li DPY30 regulira migracija želučanih stanica raka. Obaranje DPY30 smanjio FBS-inducirane migracije SNU1 i SNU16 stanice prema SCR je za 35% i 45%, respektivno (Slika 4). Za razliku od toga, DPY30 prekomjerna ekspresija povećana FBS-inducirane migracije svih SNU216 i SNU638 stanica u odnosu na lažno stanica za 2,5 i 2,2 puta, odnosno (Slika 4). Ovi rezultati nas je vodio da ispita ulogu DPY30 u invaziji želučanih stanica raka. U invaziju u Matrigel testu, DPY30 siRNA inhibirana FBS-inducirane provalama SNU1 i SNU16 stanice prema SCR siRNA je za 65% i 84%, respektivno (slika 5A i 5C). Nadalje, DPY30 prekomjerna ekspresija povećana FBS-inducirane provalama SNU216 i SNU638 stanica u odnosu na lažno stanice su za 3,2 i 2,9 puta, odnosno (slika 5B i 5C). Ovi rezultati pokazuju da DPY30 potiče migraciju i invaziju želučanih stanica raka. Pregled

Rasprava pregled

Uloge DPY30 iz biologije raka su slabo poznata, iako njegove uloge u diferencijaciji ESCs i hematopoetskih ishodišnih stanica imala prijavljen [10, 12]. U ovom istraživanju, pokazali smo nove uloge DPY30 kod raka želuca. DPY30 je amplificiran (podaci nisu prikazani), a vrlo je izražena (slika 1), u nekim želučanom tkivu raka. Štoviše, obaranje ili prekomjerna ekspresija regulira proliferaciju, migraciju i invaziju stanica želuca raka. Promjene u ekspresiji, kromosomske translokacije i somatske mutacije gena koji kodiraju podjedinice SET1 /MLL kompleksa zabilježeni su u mnogim raka. Ovi rezultati podupiru ključne uloge pripadnika SET1 /MLL kompleks u progresiji karcinoma. Pregled

Up-regulaciju DPY30 izražavanja zabilježena je samo u SNU1 i SNU16 želučanih stanica raka među šest želučanih stanica karcinoma smo istražili. No njegov se regulacija zabilježeno je u više od polovice želučanog tkiva raka koje smo propitivali (slika 1). Teško je objasniti taj nesklad. Međutim, očito je da je broj želučanih tkiva raka koje smo ispitali nije dovoljno. Dakle, opsežna studija izraz koristi mnogo više broj tkiva potrebno je procijeniti kliničku vrijednost u budućnosti. Pregled

Uloge SET1 /MLL H3K4 mctiltransfcrazu kompleks u biologiji tumora je složen. Regulatorni podjedinice SET1 /MLL kompleksa, uključujući WRAD, sadržavati i moćan onkoproteine ​​i tumorske uklanjanje smetnji. Na primjer, MEN1 gen kodira menin, sastavni podjedinicu MLL1 i MLL2, te je mutiran u bolesnika s multiple endokrine neoplazije tipa 1 (MEN1) [18, 19]. Nadalje, menin regulira P18 (CDKN2C) i p27 (CDKN1B) zapošljavanjem MLL1 kompleks [20]. Nasuprot tome, WDR5, komponenta WRAD kompleksa objavljeno je da djeluju kao onkoproteina kod raka prostate, u kojem je prekomjerno i presudno za proliferaciju androgena inducirane tumorskih stanica [21]. ASH2L, što je još jedan dio WRAD kompleksa i može komunicirati s onkoprotcin myc [22], od presudne je važnosti za mic /Ha-RAS-ovisnog transformacije rat embrija. Štoviše, on je prekomjerno eksprimiran u mnogim vrstama tumora i kritične za proliferaciju tumorskih stanica [23]. U ovom istraživanju, pokazali smo uloge DPY30 kao onkoproteina u rak želuca. Pregled

Što su molekularni mehanizmi u podlozi uloge DPY30 kod raka želuca? Iako mi nije otkrio, nekoliko hipoteza može se predložiti na temelju prethodnih studija. Jedna od mogućih hipoteza je da DPY30 pojačana ekspresija dovodi do overexpressions onkogena putem povećane aktivnosti H3K4MT. Iscrpljivanje DPY30 ili ASH2L dovodi do smanjenja H3K4me3, dok WDR5 i RBBP5 su ključni za sve tri vrste H3K4 (H3K4me1, H3K4me2 i H3K4me3) [6, 8, 10, 11]. Osim toga, prekomjerna ekspresija DPY30 sama može povećati aktivnost H3K4MT [10]. Budući H3K4me2 /3 je aktivan oznaka za transkripciju [3, 24], povećana H3K4MT može izravno pojačanog mnogih gena, kao što su, onkogeni, ili alternativno neizravno podregulira tumora uklanjanje smetnji. Jedan prethodnog izvješća podržava ovu hipotezu je da ASH2L, kritična komponenta SET1 /MLL kompleksa, pokazalo se da igraju kao onkoproteina [25, 26]. Drugi prethodnog izvješća je da DPY30 direktno aktivira izraze ID proteina putem H3K4 metilacije [13, 27]. ID proteini inhibirani aktivnosti ETS1 i ETS2 koji može izazvati jedan od supresorski gen tumora, p16. U ovom istraživanju, pokazali smo da komponente WRAD (WDR5, RBBP5 i ASH2L) može inhibirati proliferaciju stanica želuca raka (slika 3), što ukazuje da DPY30 čin kroz povećane aktivnosti H3K4MT. Dodatne studije su potrebne da bi se otkrilo mehanizama koji stoje iza uloge DPY30 u želučanom stanica raka. Pregled

• PLoS ONE: Analiza deregulirano mikroRNA i njihovih ciljnih gena u želučanom Cancer
• PLoS ONE: MED30 regulira proliferaciju i pokretljivosti želučanog raka Cells