Plos ONE: Okrepljeno Izražanje Long nekodiranih RNA HotAir je povezana z razvojem želodca Cancer

Povzetek

Dolgo non-kodiranje RNA HotAir so poročali, da je slaba prognostični biomarkerjev v različnih maligni tumorji. Kljub temu je malo znanega o pridružitvi HotAir z rakom želodca. Proučili smo izraz HotAir v 68 želodčnih vzorcih raka s kvantitativnimi in v realnem času RT-PCR in analizirajo njeno skladnost s kliničnimi parametri. Funkcija HotAir je pregledal ustvarjajo človeške želodčne linij raka celic z večjo ali zatreti izražanje HotAir. Pritrdilna -independent rast je bila ocenjena z mehko agar testom. Povečana ali zatreti HotAir izražanje želodčne rakavih celic smo injicirali v repno veno ali trebušne votline imunsko pomanjkljivostjo miši, naj preuči vpliv te molekule na metastaz in peritonealno razširjanje. Izraz HotAir bil rakavih lezij bistveno višja kot v sosednjih ne-rakavih tkiv v želodcu raka pri ljudeh. V difuznega tipa raka želodca, je skupina High-HotAir (HotAir /GAPDH > 1), je pokazala bistveno več venskega invazijo, pogosto bezgavkah in nižjo splošno stopnjo preživetja v primerjavi z nizko-HotAir skupino (HotAir /GAPDH < 1). Nastanek kolonije na mehki agar je okrepila v HotAir odvisni način. HotAir-izražanje MKN74 tvori več jetrne metastaze v primerjavi s kontrolo, ko so injicirali v repno veno miši. Poleg tega se zmanjša izražanje HotAir v KATO III zatreti peritonealno razširjanje. Ti rezultati kažejo, da ima HotAir ključno vlogo pri razvoju raka želodca

Navedba. Endo H, Shiroki T, Nakagawa T, Yokoyama M, Tamai K, Yamanami H, et al. (2013) Okrepljeno Izražanje Long nekodiranih RNA HotAir je povezana z razvojem želodca raka. PLoS ONE 8 (10): e77070. doi: 10,1371 /journal.pone.0077070

Urednik: Dajun Deng, Peking University Cancer Hospital in Institute, Kitajska

Prejeto: 10. junij 2013; Sprejeto: 5. september 2013; Objavljeno: 10. oktober 2013

Copyright: © 2013 Endo et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je bila podprta z JSP KAKENHI numbers24791480 dodelitvi sredstev in 24591022 (http://www.jsps.go.jp/j-grantsinaid/index.html), in donacije-v-pomoči Hiromi Medical Research Foundation (http: //www.smtb Jp /osebno /pooblastitev /management /javno /primer /pdf /zemeljski 06a.pdf) in Daiwa Securities Health Foundation (http://www.daiwa-grp.jp/dsh/grant/outline.html). Blagajnami imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

incidenca in umrljivost zaradi raka želodca so se močno zmanjšala v zadnjih 50 letih v večini držav sveta, vendar je še vedno drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka na svetu [1]. Kljub nedavni napredek v diagnostičnih tehnik, kot so povečevalno endoskopijo z ozek pas slikanje (NBI) [2] in zdravljenja, vključno s ciljno terapijo [3,4], je še vedno veliko število bolnikov želodca raka s slabo prognozo. Patogeni mehanizem prispeva k agresivnemu biološke funkcije v tem raku je treba še pojasniti.

Projekti zaporedja genoma je pokazala, da je človeški genom sestavljen iz manj kot 2% beljakovin, ki kodirajo geni, in več kot 90% genoma je prepisal kot nekodiran RNA (ncRNA) [5-7]. Te ncRNAs so razdeljeni v dve skupini, odvisno od velikosti nukleotidov. Mikro RNA približno 18-25 nukleotidov, pri čemer dolga nekodirajoči RNA sestoji iz več kot 200 nukleotidov. HotAir je dolgo nekodiran RNA, ki je bila opredeljena s custom obdelovalna paleto za HOXC lokusu. HotAir se je izkazalo, da trimethylate Histon H3 lizin-27 HOXD locus z polycomb represivne kompleksu 2 (PRC2) in zavirajo HOXD izražanje genov, ki se nahaja na drugem kromosomu [8]. HotAir spodbuja metastaze v interakciji z PRC2 zatreti transkripcijo več metastaze zaviralnih genov pri raku dojke [9]. Okrepljeno izraz HotAir je povezan z invazivnosti, metastaze in slabo prognozo na različnih rakavih obolenj, kot so dojke, debelega črevesa, trebušne slinavke in raka na pljučih [9-12]. Vendar pa je malo znanega o izražanja in /ali funkcije HotAir pri razvoju želodčni karcinom. V trenutni študiji smo raziskovali sodelovanje HotAir želodčnega razvoju človeškega raka in preučila, ali bi njen izraz v korelaciji z agresivnim vedenjem raka želodca.

Materiali in metode

Robčki

68 želodčni rak tkiva so bili pridobljeni pri bolnikih, ki so bili operirani na Miyagi Cancer Center (Natori, Japonska), med letoma 2007 in 2011. Vsi vzorci so bili takoj zamrznejo kmalu po resekciji v tekočem dušiku in shranili pri -80 ° C ali določen v 10% buffered formalin in vgrajeni v parafinskega voska. Želodčnega raka so histopathologically razvrščene kot črevesne tipa (n = 36), razpršenega tipa (n = 32) po klasifikaciji Svetovne zdravstvene organizacije in prejšnjih poročilih [13]. Ni bolniki s kemoterapijo in obsevanje pred operacijo. Za statistično analizo je bilo celokupno preživetje je opredeljeno v smrt zaradi kateregakoli vzroka, in so bili uporabljeni Kaplan-Meier krivulji preživetja.

Celične linije

želodca rakave celične linije MKN74 The (črevesne vrsta) [14] in Kato III (difuzni tip) [15] so bili pridobljeni iz RIKEN Bioresource Center (Tsukuba, Japonska). Oba celične linije so se ohranili v RPMI-1640 (Gibco /Life Technologies Co., CA), ki vsebuje 10% inaktivirana FBS (EuroClone, Milano, Italija) s 100 enot /ml penicilina in 100 pg /ml streptomicin (Gibco /tehnologije življenju Co. CA) in kultiviramo v navlaženi 5% CO _{2 inkubator pri 37 ° C.}

priprave RNA obratno transkripcijo in kvantitativni PCR v realnem času

Celotna RNA iz zamrznjenih vzorcev in celične linije je bila vzeta s ISOGENE (NIPPON GENE, Tokio, Japonska) v skladu s protokolom proizvajalca. cDNA iz vseh vzorcih smo sintetizirali z 1,0 ug celotne RNA ga PrimeScript® 1. sklop cDNA zbirnem Kit (Takara Bio, Siga, Japonska) po protokolu proizvajalca. Izraz HotAir je količinsko s LightCycler Brilliant SYBR Green QRT-PCR kit (Roche Applied Science, IN) po protokolu proizvajalca s posebnimi ali osnovne sklope glede na prejšnje študije [9]. Raven HotAir izražanja v vsakem vzorcu je normalizirana na ustrezni ravni GAPDH izražanja. Specifičnost vsake reakcije PCR smo potrdili s topljenjem analize krivulje.

HotAir izraz retrovirusni vektor

cDNA Human HotAir (addgene, Cambridge, MA) smo pomnožili s PCR in je vstavljen v pBabe Puro vektor (pBabe -HOTAIR). Rekombinantni retrovirus je bil proizveden z Platinum-A (Plat-A, ki ga je prof Kitamura poslanih) embalaže celičnih linij, kot prej [16] opisano. Na kratko, celice Plat-A transfekciji s pBabe -HOTAIR ali pBabe-puro Vector (EV). Fugene-6 (Roche Applied Science) in Opti-MEM I (Gibco /Life Technologies Co.) dodamo po protokolu proizvajalca. Oseminštirideset ur po transfekciji supernatant, ki vsebuje retrovirus zberemo in spustili skozi filter 0,45 um. MKN74 celice so bili okuženi z rekombinantnih retrovirusov in nato izbrane puromicina.

interference RNA

Za rasklapanje HotAir v KATO III, smo uporabili knockout ™ RNAi Systems (Clontech Laboratories, Inc., Mountain View, CA), v skladu s protokolom proizvajalca. Na kratko smo oblikovali štiri shRNA zaporedje ciljno HotAir, kot je prikazano v tabeli 1. Po žarjenje dopolnilnih shRNA oligonukleotidov smo ligiramo na razbeljenem oligonukleotidov v pSIREN vektor (shHOTAIR). Nato smo transfektirali celice Plat-A z shHOTAIR ali pSIREN Vector (EV) in okuženih KATO III z rekombinantnih retrovirusov in izbrane puromicina. Celice transducirani s sh-HOTAIR2 in -3 vektorja sta bila izbrana za nadaljnji študij. Vsak v vitrto
poskusu je bila izvedena v treh izvodih, ponovi trikrat in reprezentativni podatki so prikazani.
shRNA
Sequence
shHOTAIR-1sensegatccgaacgggagtacagagagattttcaagagaaatctctctgtactcccgttcttttttganti-senseaattcaaaaaagaacgggagtacagagagatttctcttgaaaatctctctgtactcccgttcgshHOTAIR-2 sensegatccgccacatgaacgcccagagattttcaagagaaatctctgggcgttcatgtggttttttg anti-senseaattcaaaaaaccacatgaacgcccagagatttctcttgaaaatctctgggcgttcatgtggcgshHOTAIR-3 sensegatccgtaacaagaccagagagctgttttcaagagaaacagctctctggtcttgttattttttganti-senseaattcaaaaaataacaagaccagagagctgtttctcttgaaaacagctctctggtcttgttacgshHOTAIR-4sensegatccaattcttaaattgggctggttcaagagaccagcccaatttaagaattttttttganti-senseaattcaaaaaaaattcttaaattgggctggtctcttgaaccagcccaatttaagaattgTable 1. Zaporedja shRNA vložki za shHOTAIR izraža vektor.
CSV prenos CSV

rast celic vsebnosti

1 x 10 ^{4 Celice smo zasejali na jamico v 96 vdolbinicami v normalno celično rast mediji. 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolijevega bromida, rumena tetrazol (MTT) test smo izvedli z uporabo kompleta Cell proliferacije I (GE Healthcare Life Sciences, NJ) po protokolu proizvajalca. Meritve absorbance pri 570 nm, ki ga VersaMax (Molecular Devices, CA) so bile za oceno MTT-formazana proizvodnjo po 24, 48 in 72 urah inkubacije. Indeks je bil ocenjen na 48 in 72 ur normalizirale, da je ta v 24 urah.}

Mehki agar oblikovanje kolonija test

Mehki agar testi so bili izdelani v 6 vdolbinami. Osnovno plast vsako jamico sestavljalo po 1 ml z končnih koncentracijah 1 x medijev (RPMI-1640 plus 10% inaktiviran FBS) in 0,6% nizko talilno točko agaroze. Plošče smo ohlajeno pri sobni temperaturi, dokler se trdne snovi, pri kateri točka a 1 ml agar rast sloj zlijemo, sestavljen iz 1 x 10 ^{4 celic, suspendiranih v 1 x medijih in 0,3% nizko talilno točko agaroze. Plošče smo ponovno ohladiti pri sobni temperaturi, dokler sloj rast strdila. Dodatnih 1 ml 1 x medija brez agaroze dodamo na vrhu plasti rasti na dan 0 in spet na dan 14. rasti. Celice smo pustili rasti pri 37 ° C za 4 tedne in so bili prešteti skupne kolonije.}

Živali

6 tednov stari ženski NOD /Shi-Scid-IL2Rγ ^{null (NOG ) miši smo nabavili pri centralni inštitut za eksperimentalnimi živalmi (CIEA, Kawasaki, Japonska) in se uporabljajo v tem poskusu. Jim je bilo dovoljeno aklimatizirajo za en teden, preden eksperimentov. Bili so nastanjeni v čistem prostoru objekta za oskrbo živali na Miyagi Cancer Research Center in se hranijo pri standardni temperaturi, vlažnosti in časovno svetlobnih pogojih in ki miška oglasov chow /voda libitum.}

rep veno vsebnosti rakave celice metastaz

Da bi ocenili vpliv HotAir izražanja na metastaze ki se prenašajo s krvjo, smo injicirali 1,0 x 10 ^{5 celic za HOTAIR- (n = 9) ali EV-izražanje (n = 9) MKN74 z 0,2 ml PBS v repno veno miši. Miši so na splošno opazili znake bolezni na teden za dolžino poskusa, zato so žrtvovali 8 tednov po injiciranju. V pljuča, jetra, ledvice, nadledvične žleze in vranica miši so izrezali in bili preiskani z mikroskopom o prisotnosti metastaz.}

Peritonealna metastaze

1,0 x 10 ^{6 celice shHOTAIR- (n = 5) ali EV-izražanje (n = 5) Kato III smo injicirali 0,2 ml PBS v peritonej miši oceniti učinek HotAir izražanja na peritonealno metastaz. Miši so na splošno opazili znake bolezni na teden za dolžino poskusa, zato so žrtvovali 8 tednov po injiciranju. Prisotnost vozličev in ascites v peritonealni votlini raziskovali.}

Histologija in Imunohistokemija

izrezanega tkiva so bile določene v 10% zastalega formalina za 24 ur, nato razrežite in vgrajeni v parafin za mikroskopsko preiskava. Vzorce smo razrezali v 4-mikrometrov debelih odsekov in obarvali s hematoksilinom in eozinom (H &E). Ugotavljali smo prisotnost mikro metastaze, ki ni bila priznana z mikroskopom. Priznani tumorji so dodatno raziskati imunohistokemicno uporabo primarnega protitelesa za prehrano Cytokeratin (Anti Cytokeratin Low, DC10 /5D3, Nichirei Co, Tokio, Japonska) zagotoviti, da so pridobljeni iz vbrizganega človeške želodčne celice raka. Po deparaffinization so bili odseki tkiva inkubiramo v metanolu z 0,3% vodikovega peroksida v destilirani vodi 20 minut, da blokira endogenega peroksidaze aktivnost. Antigen Preiskovalna smo izvedli s pritiskom kuhanje pri 95 ° C za 5 minut v 10 mM citrat pufru, pH 6,0, nato pa pustili, da se ohladi na sobni temperaturi 30 minut. Endogeni biotin- ali avidin vezavnega mesta smo blokirali z zaporednim inkubacijo 30 minut. Odseki inkubiramo preko noči pri 4 ° C, s primarnim protitelesom opisan zgoraj in jih reagiramo z drugim protitelesom. Avidin-biotin- peroksidaze kompleks je bil uporabljen za odkrivanje drugega protitelesa. Obarvanje smo vizualizirali s diaminobenzidine (DAB). Oddelki so jih nasprotno s hematoksilinom, oprati in posušiti z uporabo gradienta etanola ksilena.

Statistična analiza

korelacija HotAir izražanja s bolnikovih clinicopathological spremenljivk in stopnja metastaz v vbrizga miši smo analizirali s testom hi-kvadrat. Statistična pomembnost razlik med 2 skupinama je bila določena z Wilcoxonovim testom in P
vrednost (

< 0,05) je bila obravnava kot statistično značilne. Statistično značilne razlike med 3 skupine je bila ocenjena s pomočjo Steel Dwass testa ali analize Bonferroni in P
vrednost (< 0,017) veljalo za statistično značilno Skupni verjetnosti za preživetje je bila analizirana z metodami Kaplan-Meier in ocenila log-ranga test, in P
vrednost (< 0,05) je bila obravnava kot statistično značilne. Vse statistične analize smo izvedli s pomočjo Ekuseru-Toukei 2012 (Social Survey Research Informacije Co, Ltd, Tokio, Japonska). P
vrednost (< 0,05) veljalo za statistično značilne

Etika

Pregled odbor Institucionalna v Miyagi Cancer Center (MCC) odobril ta protokol študije. in pisno privolitev je bila pridobljena iz vsakega bolnika (številka dovoljenja: MCC-22-30). Protokol o poskusih na živalih je odobril odbor za MCC živali Nega in medicini (številka dovoljenja: MCC-AE-2011-12).

Rezultati

HotAir izraz človekovih želodca vzorcev raka

ravni HotAir izraz rakavih in sosednjih noncancerous tkiv bolnikov želodca z rakom so bile pregledane s QRT-PCR in normalizirana glede na stopnjo GAPDH izražanja. Povprečna vrednost izraz HotAir bilo 4.952 ± 6.462 in 3,804 ± 6.721 (HotAir /GAPDH ± standardni odklon) v karcinoma in ne-rakavih poškodb oz. Ravni izraz za HotAir so bile bistveno višje v karcinomom lezij v primerjavi s tistimi, ki niso rakavih lezije ( P
= 0,019, slika 1A).

zveza med izražanje HotAir in clinicopathological dejavnikov v želodčni rak človekovih

človekovih želodčni rak tkiva so histopathologically razvrščeni v črevesju (n = 36) in razpršenih vrste (n = 32). Človekovih želodca raka tkiva so nadalje razvrščene glede na stopnjo HotAir izražanja v skupino High-HotAir (HotAir /GAPDH > 1,0) in Low-HotAir skupina (HotAir /GAPDH < 1,0) (sliki 1B in C). Združenje HotAir izražanja z clinicopathological funkcije v črevesnem in difuznega tipa raka želodca so povzeti v tabelah 2 in 3, v tem zaporedju. V črevesni vrsto raka želodca, je bilo ugotovljeno, ni pomembno povezavo med HotAir izražanja in clinicopathological ugotovitev (tabela 2). Poleg tega ni bilo pomembno razmerje videl med HotAir izražanja in celokupno preživetje, čeprav je skupina na visoki HotAir večinoma kažejo krajše preživetje kot tisti z nizkimi HotAir skupine (slika 2A). Po drugi strani pa je bila pomembna povezava našel med HotAir izražanja in bezgavk metastaz (P = 0,043), vensko infiltracijo ( P
= 0,0083) in kratke skupnega preživetja ( P
= 0,018) pri raku na difuzna tipa želodca (tabela 3 in slika 2B). Vendar pa ni bilo nobene povezave med odrom in HotAir izražanja.
HotAir nizko
HotAir visoko
P
vrednost
Age73.07 ± 9.1870.87 ± 10.650.53Gender0.63Male1016female37T0.87T1, T2610T3, T4713N0.26N078N1, N2 , N3615Ly0.68ly069ly1, ly2, ly3714v0.19v089v1, v2, v3514Stage0.501,27153,4680.50Table 2. združenje HotAir izražanja z clinicopathological funkcij v črevesnem vrsto raka želodca.
CSV prenos CSV
HotAir nizko
HotAir visoko
P
vrednost
Age59.250 ± 10.7566.35 ± 10.160.07Gender0.71male812female48T0.87T1, T212T3, T41118N0.043*N086N1,N2,N3414ly0.40ly067ly1,ly2,ly3613v0.0083*v0119v1,v2,v3111Stage0.311,2783,4512Table 3. združenje HotAir izražanja z clinicopathological funkcij v difuznega tipa raka želodca.
CSV prenos CSV

generacije HotAir navzgor in navzdol regulirano celic in soodvisnost z viabilnosti celic

Če želite oceniti Funkcija HotAir v razvoj raka želodca, smo ustvarili trajno HotAir izražanje MKN74 celice (MKN-HotAir) in stalni shHOTAIR izražajo celice KATO III (KATO-shHOTAIR). QRT-PCR analiza je pokazala, da MKN-HotAir celice so izrazili stopnjo HotAir približno 10 krat večja od EV izraža (MKN-EV) ali starševskih MKN74 celic in da je izraz te molekule v KATO-shHOTAIR celicah zmanjša za 30 do 70% v primerjavi z EV transducirani (KATO-EV) ali KATO III (KATO-EV) celic starševskih (slika 3A). Rezultati MTT testom dokazali, da niti regulacijo navzgor niti navzdol ureditev HotAir vplivala raka proliferacije celic želodca (slika S1).

Mehka oblikovanje agar kolonija test

Za pojasnitev funkcij HotAir v pritrditve neodvisen rast želodca rakavih celic, smo uporabili mehko agar testa. MKN-HotAir celice oblikujejo večje število kolonij kot MKN-EV celic ( P
= 0,009, slika 4A). V skladu s to ugotovitvijo, KATO-shHOTAIR celice pokazala pomembno manj kolonije kot KATO-EV celic (slika 4b). Poleg tega želodčne rakave celice s podobno stopnjo HotAir ekspresije (MKN-HotAir in shHOTAIR-3, slika 3B) tvorjen podobno število kolonij, kar kaže, da so pritrdišča neodvisen rast želodčnih rakavih celic urejena v HotAir-odvisen način.

HotAir izražanja in želodčni rak celic metastaze in peritonealno
razširjanje

Ker HotAir okrepiti sidrišče neodvisen, ne pa rast sidrišče odvisna od želodca rakavih celic, smo predpostavili, da bi HotAir prispevajo k oddaljenih metastaz in /ali peritonealno razširjanje in ne neposredno invazije na sosednje organe. Za rešitev tega vprašanja smo uporabili test za rep žil in peritonealno injekcijo celic, da preveri, ali HotAir izraz pospešuje krvni -borne metastaze in peritonealno širjenje oz. Kot je bilo pričakovati, MKN-HotAir celice pogosto razstavljal jetrne metastaze ( P
= 0,01) v primerjavi s MKN-EV celic. Poleg tega so bile številke in velikosti iz metastatskih tumorjih jeter, pomembno večji pri MKN-HotAir celic kot pri MKN-EV celic ( P
= 0,03 in P
= 0.019, v tem zaporedju, Številke 5A in B). Zanimivo je, da ena miš vbrizgali MKN-HotAir pokazala metastaze na ledvicah in nadledvične žleze poleg jeter, medtem ko z MKN-EV celic tvori metastatskih tumorjev, samo v jetrih. Dosledno je peritonealna razširjanje bistveno zmanjšalo (05/01, P
= 0,009), ko je bila HotAir inaktiviran v celicah KATO III medtem ko so vse kontrolne celice oblikovane peritonealno razširjanje (5/5) (sliki 6A in B). V metastatskih tumorjev, so histološko potrjena in se je pokazalo, intenzivno pozitivno barvanje za človeško Cytokeratin (sliki 5C in 6C).

Pogovor

V tej študiji smo raziskovali izražanje HotAir pri raku želodca in pregleda korelacija z clinicopathological funkcije, vključno s prognozo bolnikov. Naši rezultati jasno pokazala povečano ekspresijo HotAir pri rakavih tkiv v primerjavi z ne-rakavih tkiv želodca in ta izraz visoka stopnja te molekule bil povezan z bezgavkah metastaze, vensko invazije in slabe preživetje pri difuzni vrsto raka želodca. Te ugotovitve so skladne z nedavno raziskavo, ki kaže, da se ugotovi, da up-ureditev HotAir pri raku želodca v primerjavi z običajnimi tkiva in je povezana z odrsko tumor in bezgavk metastaz v [17]. Poleg tega HotAir-izražanje želodčne rakastih celic razstavljeni povečanje rasti pritrditve neodvisen celic in vitro
in metastaze na jetrih in vivo
medtem zmanjšana ekspresija HotAir v želodčnih rakavih celic za posledico zmanjšala rast sidrišča neodvisen in peritonealno širjenje, kar pomeni, da ima HotAir ključno vlogo v želodcu napredovanju raka.

Višje izraz HotAir bila odkrita v rakavih celicah kot v ustreznih non-tumorskih celic v različnih vrst raka, vključno raka dojke, debelega črevesa, jeter, trebušne slinavke in nazofaringealnega raka [9-11,18-20]. V teh rakov je HotAir tudi pokazala, da so povezani z metastaz in /ali slabo prognozo. Poleg tega je bila visoka stopnja HotAir izražanja povezana s preživetjem kratkem proste bolezni pljučnega raka [12]. Zato je naš sedanji ugotovitve so skladne s predhodnimi študijami kaže, da je izražanje HotAir vključenih v okrepljeno agresivnosti različnih tipov celic karcinoma. Po drugi strani pa ni bilo mogoče najti negativno napovedno učinek HotAir v črevesnem vrsto raka želodca, čeprav je skupina na visoki HotAir večinoma kažejo krajše celokupno preživetje v primerjavi z nizko-HotAir skupine. To je lahko posledica majhnega števila bolnikov v trenutne študije, saj prisilno izražanja HotAir v črevesne želodčni rak celične linije (MKN74) pridobil agresivni fenotip in vitro
in in vivo
. Nadaljnje preiskave z velikim številom vzorcev poleg eksperimentalne študije, ki uporabljajo druge črevesne želodčni rak celične linije bi bilo potrebno za rešitev tega problema.

V sedanji študiji, ne Povezave med HotAir izražanja in rast celic v rak želodca. V dojke, debelega črevesa in raka na jetrih, vključevanje HotAir rasti celic ni bilo dokazano, [9,10,18], medtem ko HotAir spodbujati in zmanjšano proliferacijo celic pri raku trebušne slinavke [11] in pljučnega raka [12], v tem zaporedju. Poleg tega ni bilo pomembne razlike najdemo v podkožnem rasti tumorja pri miših nog med HotAir-izražanje in kontrolnih celicah v tekočem študiji (podatki niso prikazani). Na osnovi teh ugotovitev je verjetno, da je povezava med HotAir izražanja in proliferacijo celic odvisen od vrste raka. V nasprotju s tem je pritrdišče neodvisni rast želodčnih rakavih celic jasno izboljšana v HotAir odvisni način. Poleg tega HotAir izraz povzročil več metastaze na jetrih in drugih organih, in gre za napako HotAir zatreti peritonealno razširjanje želodčnih celic karcinoma. Te ugotovitve, skupaj z dejstvom, da HotAir izraz prispeva k metastaze v različnih karcinomov [9-12,18], kažejo, da je HotAir ukvarja predvsem z metastatskim postopku in ne v rasti primarnega tumorja.

Na koncu, okrepljeno HotAir izraz v difuznega tipa raka želodca je bila povezana s pojavnostjo venske invazije in slabo prognozo neodvisno dejavnik T, in prisilno izražanje HotAir v želodčnih rakavih celicah spodbuja rast sidrišča neodvisen celic in vitro
in metastaze na jetrih in vivo
. Ti rezultati kažejo, da je HotAir verjetno vključena v razvoj raka želodca in lahko tudi terapevtski cilj pri zdravljenju raka želodca.

Podpora Informacije
Slika S1.
združenje celične proliferacije z HotAir izražanja. Rezultati MTT testu preračunanega po 72 urah smo normalizirali na ta v 24 urah. Nobene zveze je bilo med HotAir izražanja in širjenja želodca rakave celice
doi:. 10,1371 /journal.pone.0077070.s001
(IOD)

Priznanja

Zahvaljujemo profesor Kitamura (Univerza v Tokio, Tokio, Japonska) za zagotavljanje celice Platinum-A.

• Plos ONE: Naravna zgodovina malignega boleznijo kosti želodčnega raka: Končni rezultati raziskave Večsrediščna kostnih metastaz
• Plos ONE: Aktivacija stat3 v Human želodca raka celic preko interlevkina (IL) -6-Type citokin signalnih korelira z kliničnih posledic