A hámsejtek mesenchymalis tranzíció (EMT) tartják, hogy korrelációban rosszindulatú rákos sejtek és felelős a rák terjedését és áttét. Korábban már beszámoltunk, hogy a távoli áttétek járt hypoxia gyomorrákban. Ezért megvizsgáltuk a hatását hipoxiás állapotban EMT gyomorrák-sejtek. Gyomorrák sejteket tenyésztettünk normoxia (21% O 2), vagy a hipoxia (1% O 2) 24 órán át. EMT értékeltük a százalékos orsó alakú sejtek teljes sejtekben. Hatása a transzformáló növekedési faktor β1 (TGFβ1), vagy tirozin-kináz-inhibitorok a EMT értékeltük. Az expressziós szintje TGFβ1 katalógusa és TGFβR katalógusa úgy értékeltük, hogy valós idejű RT-PCR-rel. A TGFβ1 termelés a rákos sejteket ELISA-val mértük. Hipoxia stimulált EMT a OCUM-2MD3 és OCUM-12 sejteket, de nem a OCUM-2M sejteket. Az expressziós szintje TGFβ1 Citation: Matsuoka J, Yashiro M, Doi Y, Fuyuhiro Y, Kato Y, Shinto O, et al. (2013) A hipoxia Stimulálja az EMT gyomorrák sejtek révén Autokrin TGF-jelzés. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10,1371 /journal.pone.0062310 katalógusa Szerkesztő: Claudio M. Costa-Neto, University of Sao Paulo, Brazília katalógusa Beérkezett: október 19, 2012; Elfogadva: március 19, 2013; Megjelent: május 17, 2013 katalógusa Copyright: © 2013 Matsuoka et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa Forrás: Ez a tanulmány részben támogatta a Nemzeti Rákkutató Központ Kutatási és Fejlesztési Alap (23-a-9), valamint a támogatások-in támogatás Tudományos Kutatási (KAKENHI, sz. 20591573, 22390262 és 23390329) a minisztérium Oktatási, Tudományos, Sport, kultúra és a technológia Japánban. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa Érdekütközés: A szerzők az alábbi érdekeit. KS, TS, és AM munkavállalói a Hakko Kirin Co. Ltd. Ki26894, amit ebben a tanulmányban használt, egy olyan termék Hakko Kirin Co. Ltd. Nincsenek további szabadalmak, a fejlesztés alatt álló, illetve forgalmazott termékek nyilatkozni . Ez nem változtat a szerzők betartása minden PLoS One politikák adatok megosztása és anyagok, részletes online útmutató a szerzők. Katalógusa Bevezető katalógusa A hámsejtek mesenchymalis tranzíció (EMT) jellemzi változások a sejt morfológiájában, amelynek során epiteliális sejtek szert mezenchymális tulajdonságait míg a vesztes a sejt-sejt kölcsönhatások és apicobasal polaritás [1], [2]. Epitheliális rák, EMT elismerten az egyik felelős mechanizmusok beindítására invazív és metasztatikus viselkedés [3] - [5]. Katalógusa A hipoxiás környezetben létezik bizonyos régióiban daganatos betegségek, amelyek megmutatják a gyors növekedés miatt az angiogenezis a karcinómák heterogén [6]. A hypoxia kell tekinteni társított agresszív tumor fenotípusát gastricus karcinómák [7], [8], beleértve az áttétes képessége rákos sejtek [6], [9]. Klinikai és kísérleti adatok azt is bizonyítják, hogy összefüggés van a hipoxiás környezet és rossz prognózist jelent [10], [11]. Ezért fontos, hogy a jövőbeli fejlődése rákkezelés, hogy tisztázza a mechanizmust az áttétek a hipoxia. Katalógusa Azt jelentette, hogy különböző vízben oldódó tényező, köztük a transzformáló növekedési faktor-β1 (TGFβ1) [12], [ ,,,0],13], az epidermális növekedési faktor (EGF) [14], az inzulin-szerű növekedési faktor-1 (IGF-1) [15], a fibroblaszt növekedési faktor (FGF) [16], a hepatocita növekedési faktor (HGF) [17] korreláltak EMT . TGFp jelek fontos szerepe van a különböző aspektusait a metasztatikus rák terjedését sejtek, például a migráció, invázió, és EMT [12], [13]. A TGFp ligandumok kötődni TGFp receptorhoz II típusú (TGFβRII), amely aztán képez komplexet sem TGFβR I. típusú vagy II. TGFβR I típusú (TGFβRI) továbbítja a jeleket a sejten belül keresztül második messenger Smad fehérjék [13], [18]. Downstream jelet továbbadja keresztül TGFβRI, amely foszforilezi receptor által szabályozott Smad fehérjék [19], [20]. Katalógusa Számos tanulmány számolt be, hogy a hipoxiás állapot okozhat, EMT rákos sejtek [21] - [24], de a molekuláris mechanizmus felelős EMT alatt hipoxiás állapot továbbra is tisztázatlan. Ezért megvizsgáltuk a hatását a hipoxia a morfológiai jellemzőit gyomorrák sejtek tisztázni felelős mechanizmusok hypoxia indukálta EMT. Katalógusa Anyagok és módszerek katalógusa Cell Culture és sejtvonalak katalógusa hét gyomorrák sejtvonalakat használtunk. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], KATO-III [28], és MKN-45 [29] származnak diffúz típusú gyomorrák. MKN-74 [29] és MKN-7 [29] származnak intesztinális típusú. OCUM-2M, OCUM-2MD3 és OCUM-12-t establised laboratóriumunk, mint korábban jeleztük [25] - [27]. Röviden, OCUM-12was származó aszcitesz kapcsolódó diffúz típusú gyomorrák, és OCUM-2MD3 sejtek egy lánya sejtvonal nagy potenciállal peritonealis metasztázis, hoztunk létre OCUM-2M sejtekbe orthotopikus tumor modell, a szülői sejtvonal ascites kapcsolódó diffúz típusú gyomorrák. A többi sejtvonalat nyert JCRB sejt bank (Osaka, Japán), vagy az American Type Culture Collection (Rockville, MD). A sejteket 37 ° C-on 21% O 2 (normoxia), vagy 1% O 2 (hypoxia). Hipoxiás körülmények tartottuk fenn a moduláris inkubátor kamra (Hirasawa, Tokió, Japán), 5% -os CO 2 és 1% O 2 kiegyensúlyozott N 2 gáz. A táptalaj Dulbecco-féle módosított Eagle-tápközeg (DMEM; Nikken Bio., Osaka, Japán) 10% magzati borjúszérummal (Nichirei Bio.), 100 NE /ml penicillin (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 ug /ml sztreptomicinnel (ICN Biomedicals) és 0,5 mM nátrium-piruvátot (Cambrex, Walkersville, MD). morfológiai változások Cancer sejteket normoxiás vagy hipoxiás körülmények között 24 órán át, és a sejt morfológiája volt megfigyelhető mikroszkopikusan. EMT-ben határozzák meg, amikor a sokszögű vagy orsó alakú találtak rákos sejtek fáziskontraszt-mikroszkóp alatt. A frekvencia a EMT értékeltük az arány a sokszög vagy orsó alakú sejtek valamennyi rákos sejtek; EMT sebesség = száma sokszög vagy orsó alakú sejtek /összes sejt × 100 (%). hatását vizsgáltuk a különböző oldható faktorok , beleértve az EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, NJ), IGF1 (Pepro Tec), a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF; R &D Systems, Minneapolis, MN), alap-FGF-t (Sigma, Saint Louis, MO), a vérlemezke -eredetű növekedési faktor BB homodimer (PDGF-BB; Pepro Tech), HGF (Pepro Tech), TGFβ1 (king Brewing, Kakogawa, Japán), a morfológia a rákos sejtek. A sejteket DMEM-ben tenyésztjük, amely az egyik fenti tényezők a kívánt koncentrációban, 37 ° C-on normoxia. Sejtmorfológia vizsgáltuk 24 óra elteltével. Kísérleteket végeztünk az egyes tényezők, két példányban. Mi használt semlegesítő antitestek, mint például az anti-HGF antitest (Genzyme Techne, MPLS, MN, USA), anti-TGFp ellenanyaggal (R &D rendszerek), anti-PDGF-BB (Genzyme), anti-FGF7 (R &; D systems), anti-VEGFR3 (R &D rendszerek). A sejteket DMEM-ben tenyésztjük, amely az egyik fenti antitestek 100 pg /ml 37 ° C-hypoxia. Sejtmorfológia vizsgáltuk 24 óra elteltével. Miután a sejtek elérték félig torkolat, sejteket adtunk TGFp vagy két inhibitort, és inkubáltuk hipoxiás állapot vagy normoxia 24 órán át. Ezután morfológiai megállapítások vizsgáltuk, összehasonlítva a kontroll. Öt kis szintetikus phospholylation inhibitorok, Ki26894 (TGFβRI inhibitor, 10 jim; Kirin Pharma, Mishima, Japán), SB431542 (TGFβRI inhibitor, 10
mRNS alatt hypoxia szignifikánsan magasabb volt, mint amit alatt normoxia minden három sejtvonal. Az expressziós szintje TGFβR katalógusa mRNS szignifikánsan nőtt, hypoxia OCUM-2MD3 sejtek, de nem OCUM-2M sejteket. TGFβR inhibitor SB431542 vagy Ki26894, jelentősen visszaszorult EMT a OCUM-2MD3 és OCUM-12. TGFβ1 termelés OCUM-2MD3 és OCUM-12 sejtek szignifikánsan emelkedett alatt hipoxia képest, hogy az normoxia. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a hipoxia serkenti az EMT gyomorrák sejtek keresztül autokrin TGF /TGFβR jelátvitel. Katalógusa
hatásait a különböző oldható faktor morfológiai változások
hatásai neutralizáló ellenanyagok morfológiai változások
hatása különféle phospholylation inhibitorok morfológiai változások