PLoS ONE: hypoxie Stimuleert de EMT van maagkanker cellen door Autocrine TGF Signaling

Samenvatting

Epitheliale mesenchymale transitie (EMT) wordt geacht te zijn gecorreleerd met maligniteit van kankercellen en verantwoordelijk voor kanker en metastase. We hebben eerder gemeld dat verre metastase werd geassocieerd met hypoxie bij maagkanker. We onderzochten daarom het effect van hypoxie voorwaarde EMT van maagkanker cellen. Maagkanker cellen werden gekweekt in normoxia (21% O _{2) of hypoxia (1% O 2) gedurende 24 uur. EMT werd beoordeeld als het percentage spoelvormige cellen in totaal cellen. Effect van transformerende groeifactor β1 (TGFB1) of tyrosine kinase inhibitoren op het EMT geëvalueerd. De expressie van TGFB1 Kopen en TGFβR
werd geëvalueerd door real-time RT-PCR. TGFB1 de productie van kankercellen werd gemeten met ELISA. Hypoxie gestimuleerde EMT van OCUM-2MD3 en OCUM-12-cellen, maar niet dat van OCUM-2M cellen. Het expressieniveau van TGFB1
mRNA onder hypoxie was significant hoger dan die onder normoxie in alle drie cellijnen. De expressie van TGFβR
mRNA was significant verhoogd door hypoxie in OCUM-2MD3 cellen, maar niet in OCUM-2M cellen. TGFβR inhibitor, SB431542 of Ki26894, aanzienlijk onderdrukt EMT van OCUM-2MD3 en OCUM-12. TGFB1 productie van OCUM-2MD3 en OCUM-12-cellen was significant verhoogd onder hypoxie vergeleken met die onder normoxia. Deze bevindingen zou kunnen suggereren dat hypoxie stimuleert de EMT van maagkanker cellen via autocriene TGF /TGFβR signalering}

Visum:. Matsuoka J, Yashiro M, Doi Y, Fuyuhiro Y, Y Kato, Shinto O, et al. (2013) hypoxie Stimuleert de EMT van maagkanker cellen door Autocrine TGFp Signaling. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10.1371 /journal.pone.0062310

Editor: Claudio M. Costa-Neto, Universiteit van São Paulo, Brazilië

Ontvangen: 19 oktober 2012; Aanvaard: 19 maart 2013; Gepubliceerd: 17 mei 2013

Copyright: © 2013 Matsuoka et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Deze studie werd mede ondersteund door het National Cancer Center Research en Development Fund (23-A-9), en door subsidies in Steun voor Wetenschappelijk Onderzoek (KAKENHI, nr. 20591573, 22390262 en 23390329) van het ministerie van Onderwijs, Wetenschap, Sport, Cultuur en Technologie van Japan. De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen. De auteurs hebben de volgende belangen. KS, TS en AM werknemers van Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. Ki26894, die werd gebruikt in deze studie, is een product van Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. Verder zijn er geen octrooien, producten in ontwikkeling of producten op de markt te verklaren . Dit betekent niet naleving van de auteurs te veranderen om alle PLoS ONE beleid op het delen van gegevens en materialen, zoals online beschreven in de handleiding voor auteurs.

Introductie

Epitheliale mesenchymale transitie (EMT) wordt gekenmerkt door veranderingen in celmorfologie gedurende welke epitheelcellen verkrijgen mesenchymale eigenschappen verliezen tijdens cel-cel interacties en apicobasal polariteit [1], [2]. In epitheliale kankers, EMT wordt erkend als een van de mechanismen die belast is met het invasieve en metastatische gedrag [3] - [5]

een zuurstofarme omgeving bestaat in bepaalde gebieden van vaste kankers die snelle groei vertonen omdat angiogenese. in carcinomen is heterogeen [6]. Hypoxie wordt geacht te zijn geassocieerd met agressieve tumor fenotypen van maagcarcinomen [7], [8], met inbegrip van metastatische vermogen van kankercellen [6], [9]. Klinische en experimentele gegevens ook het bewijs van een verband tussen de zuurstofarme omgeving en een slechte prognose [10], [11]. Daarom is het belangrijk voor de toekomstige ontwikkeling van kankerbehandelingen het mechanisme van metastase geïnduceerd door hypoxie verduidelijkt.

Er is beschreven dat verscheidene oplosbare factoren, waaronder transformerende groeifactor-β1 (TGFB1) [12], [ ,,,0],13], epidermale groeifactor (EGF) [14], insuline-achtige groeifactor-1 (IGF-1) [15], fibroblast groeifactor (FGF) [16], hepatocyt groeifactor (HGF) [17] werden gecorreleerd met EMT . TGFp signalen een belangrijke rol bij verschillende aspecten van de metastatische verspreiding van kankercellen, zoals migratie, invasie en EMT [12], [13]. Het TGFP liganden binden aan TGFp receptor type II (TGFβRII), die vervolgens een complex vormt met ofwel TGFβR type I of II. TGFβR type I (TGFβRI) zendt signalen binnen de cel via tweede-messenger Smad eiwitten [13], [18]. Downstream signalen worden uitgedragen via de TGFβRI, die-receptor gereguleerde Smad eiwitten fosforyleert [19], [20]

Verschillende studies hebben gemeld dat een hypoxische toestand EMT van kankercellen [21] zou kunnen veroorzaken -. [24] maar de moleculaire mechanisme dat verantwoordelijk is voor de EMT onder een hypoxische toestand blijft onduidelijk. We onderzochten daarom het effect van hypoxie op de morfologische kenmerken van maagkanker cellen naar de mechanismen die verantwoordelijk zijn voor de hypoxie-geïnduceerde EMT verduidelijken.

Materialen en methoden

Cell Cultuur en cellijnen

Zeven maagkanker cellijnen werden gebruikt. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], KATO-III [28], en MKN-45 [29] waren afkomstig van diffuse type maagcarcinoom. MKN-74 [29] en MKN-7 [29] werden afgeleid van intestinale-type. OCUM-2M, OCUM-2MD3 en OCUM-12 werden establised in ons laboratorium, zoals eerder beschreven [25] - [27]. In het kort, OCUM-12was afgeleid van ascites geassocieerd met diffuse-type maagcarcinoom en OCUM-2MD3 cellen, een dochter cellijn met een hoog potentieel van peritoneale metastase, werden vastgesteld op basis van OCUM-2M cellen met behulp van orthotope tumor model, een ouderlijke cellijn ascites geassocieerd met diffuse type maagcarcinoom. De andere cellijnen werden verkregen van de JCRB celbank (Osaka, Japan) en de American Type Culture Collection (Rockville, MD). Cellen werden gekweekt bij 37 ° C in 21% O _{2 (normoxia) of 1% O 2 (hypoxie). Hypoxische condities werden gehandhaafd met behulp van een modulaire incubator kamer (Hirasawa, Tokyo, Japan) met 5% CO 2 en 1% O 2 in balans met N 2 gas. Het kweekmedium bestond uit Dulbecco's gemodificeerd Eagle medium (DMEM;. Nikken Bio, Osaka, Japan) met 10% foetaal runderserum (. Nichirei Bio), 100 IU /ml penicilline (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 ug /ml streptomycine (ICN Biomedicals) en 0,5 mM natriumpyruvaat (Cambrex, Walkersville, MD).}

morfologische veranderingen

Kankercellen werden onder normoxische of hypoxische omstandigheden gekweekt gedurende 24 uur, en celmorfologie werd microscopisch waargenomen. EMT werd bepaald wanneer de polygonale of spil vorm kankercellen werd gevonden door fasecontrastmicroscoop. De frequentie van EMT werd beoordeeld door de snelheid van veelhoekige of spoelvormige cellen in alle kankercellen; EMT rate = het aantal veelhoekige vorm of spindel cellen /totaal aantal cellen x 100 (%).

Effecten van verschillende factoren op oplosbare morfologische veranderingen

We onderzochten de effecten van verschillende oplosbare factoren , waaronder EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, NJ), IGF-1 (Pepro Tec), vasculaire endotheliale cel groeifactor (VEGF; R & D-systemen, Minneapolis, MN), basis-FGF (Sigma, St. Louis, MO), bloedplaatjes afgeleide groeifactor BB homodimeer (PDGF-BB; Pepro Tech), HGF (Pepro Tech), TGFB1 (King Brewing, Kakogawa, Japan), op de morfologie van kankercellen. Cellen werden gekweekt in DMEM met één van deze factoren op de gewenste concentratie 37 ° C in normoxia. Celmorfologie werd onderzocht na 24 uur. Experimenten werden uitgevoerd voor elke factor in duplo.

Effecten van neutraliserende antilichamen op morfologische veranderingen

We gebruikten neutraliserende antilichamen, zoals anti-HGF antilichaam (Genzyme techne, MPLS, MN, USA), anti-TGFB-antilichaam (R &D Systems), anti-PDGF-BB (Genzyme), anti-FGF7 (R &D Systems), anti-VEGFR3 (R &D Systems). Cellen werden gekweekt in DMEM dat één van bovenstaande antilichamen bij 100 ug /ml bij 37 ° C in hypoxie. Celmorfologie werd onderzocht na 24 uur.

Effect van verschillende phospholylation remmers op morfologische veranderingen

Na de cellen bereikt semi-samenvloeiing, cellen werden toegevoegd aan TGF of elke remmer en geïncubeerd onder hypoxische toestand of normoxia gedurende 24 uur. Vervolgens werden morfologische bevindingen in vergelijking met de controlegroep onderzocht. Vijf kleine synthetische phospholylation remmers, Ki26894 (TGFβRI remmer, 10 micrometer; Kirin Pharma, Mishima, Japan), SB431542 (TGFβRI remmer, 10 micrometer; Sigma, Saint Louis, MO), Sunitinib (SU11248, 20 nm; een tyrosine kinase inhibitor tegen VEGFR, PDGFR, c-KIT, FGFR2 en FLT3, LKT Laboratories, St. Pail, MN), PD173074 (FGF /VEGF-receptor tyrosine kinase inhibitor, 5 nm; Santa Cruz, CA), Lapatinib (GW572016, 10 nm; a tyrosine kinase inhibitor tegen EGFR en ErbB2, Toronto Research Chemicals) en PHA665752 (c-mET inhibitor, 2 uM,. Pfizer, San Diego, CA, USA) werden gebruikt

Kwantitatieve real-time reverse transcriptase-polymerase kettingreactie (RT-PCR)

Kwantitatieve RT-PCR werd uitgevoerd om TGFB1
, TGFβRI, TGFβRII, Kopen en Vimentin
mRNA expressies te onderzoeken. Kankercellen werden geïncubeerd onder normoxische omstandigheden onder hypoxische condities gedurende 24 uur. Na incubatie werd het totale cellulaire RNA geëxtraheerd met behulp van Trizol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA) volgens de instructies van de fabrikant. Na verwijdering van genomisch DNA van DNase, werd cDNA bereid uit 2 pg RNA met Maloney muis leukemievirus reverse transcriptase (Invitrogen) met behulp van willekeurige primers (Invitrogen). Om veelvoudveranderingen in elk gen te bepalen werd real-time RT-PCR uitgevoerd op het ABI Prism 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA), in de handel verkrijgbare assays voor genexpressie TGFB1
(Hs00998130,), TGFβRI
(Hs00610319), TGFβRII
(Hs00559661), vimentine
(Hs00958116), Twist
(Hs01675818), Zeb1
(Hs 00.232.783), Snail1
(Hs00195591), VEGFA
(Hs00900055). PCR werd uitgevoerd bij 95 ° C gedurende 15 s en 60 ° C gedurende 60 s voor 40 cycli. Glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH) als een interne standaard om mRNA te normaliseren voor verschillen in de concentratie van het monster en laden. Voudige veranderingen in de expressie van elk doelwit-mRNA ten opzichte van GAPDH werd berekend gebaseerd op de drempelcyclus (Ct) als 2 ^{-Δ (ACt), waarbij ACt = Ct Ct doel- GAPDH en Δ (ACt) = ACt _{hypoxie-ACt normoxia. Kwantitatieve PCR reacties werden uitgevoerd in drievoud.}}

Western blotanalyse

Voor het onderzoeken van het effect van hypoxia op Smad2 fosforylering kankercellen werden geïncubeerd onder normoxische of hypoxische condities gedurende 24 uur, respectievelijk. De cellen werden gelyseerd in een lysisbuffer en aliquots met 50 ug totaal eiwit werden onderworpen aan natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese; de eiwitbanden werden overgebracht naar een polyvinylideendifluoridemembraan (Millipore, Billerica, MA). Het membraan werd geïncubeerd in TBS-T (10 mM TBS en 0,05% Tween 20) aangevuld met 5% magere melk of 5% runderserum albumine (Sigma) bij kamertemperatuur gedurende 1 uur. Vervolgens werd het membraan in een TBS-T oplossing die het primaire antilichaam p-Smad2 (Ser ^{465/467; 1: 1000, Cell Signaling Technology) of Smad2 /3 (1: 1000, Cell Signaling Technology), vimentine (1: 1000, Cell Signaling Technology), anti-βactin (1: 1000, Sigma) en gedurende een nacht reageren bij 4 ° C. Vervolgens werd elk antilichaam driemaal gewassen met TBS-T gedurende 10 min, en een met peroxidase gemerkt secundair antilichaam (GE Healthcare, Buckinghamsire, UK) reactief is met het primaire antilichaam toegevoegd. De banden werden gedetecteerd waarbij een versterkt chemoluminescentie systeem (Wako, Osaka, Japan).}

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

De TGFB1 productie van kankercellen werd gemeten door een kwantitatieve sandwich enzym immunoassay waarbij gebruik wordt Quantikine human TGFB1 ELISA kit volgens de instructies fabrikant (R &D Systems). Kankercellen werden geïncubeerd onder hypoxie of normoxie gedurende 24 uur, daarna werd het medium vervangen met 3 ml serumvrij DMEM. Cellen werden geïncubeerd onder hypoxie of normoxia, extra 24 uur. Voorwaardelijke medium (CM) verzameld uit elke schaal en gecentrifugeerd bij 1000 g
gedurende 5 min. TGFB1 niveau serumvrij CM werd gemeten met ELISA kit. ELISA gedetecteerd zowel de actieve als latente TGF.

Statistische analyse

Vergelijkingen tussen datasets werden gemaakt met Student's t
-test of de one-way Kruskal-Wallis ANOVA door rangen, gevolgd door meerdere vergelijkende test Dunn's. Verschillen werden beschouwd als statistisch significant te zijn wanneer de P-waarde was. ≪ 0.05

Resultaten

Effecten van hypoxie op de kankercel morfologie

Een hypoxische toestand aanzienlijk toename van het aantal veelhoekige of spoelvormige cellen ondergaan EMT onder OCUM-2MD3 of OCUM-12-cellen, maar niet bij OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74 of KATO III cellen (Fig. 1A en Fig. S1). De cel morfologie van OCUM-2MD3 en OCUM-12 begon te veranderen na 4 uur in de hypoxische cultuur. Na 12 uur van de cultuur, werd een verhoogde graad van EMT gezien in beide cellijnen. De EMT tarief van OCUM-2MD3 en OCUM-12-cellen was het hoogst na 24 uur hypoxie cultuur (Fig. 1B). Aangezien de morfologische veranderingen waren duidelijk op 24 uur cultuur onder hypoxie werden de moleculaire mechanismen van EMT geanalyseerd 24 uur cultuur onder hypoxische omstandigheden onder toepassing OCUM-2MD3, OCUM-12 en OCUM-2M cellen.

effecten van diverse groeifactoren op kanker celmorfologie

Oplosbare factoren gebruikt bij een concentratie van 10 of 100 ng /ml. OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen werden spoelvormig na toevoeging van TGFB1 of HGF, maar niet na de toevoeging van EGF, FGF2, FGF7, IGF1, VEGF of PDGF-BB na 24 uur onder normoxia (tabel 1). Daarentegen OCUM 2M-cellen vertoonden geen morfologische veranderingen na toevoeging van elke factoren (fig. 2).

Effecten van neutraliserende antilichamen tegen kanker celmorfologie onder hypoxie

EMT geïnduceerd door hypoxie werd deels geremd door anti-TGF-β1 antilichaam bij 100 ug /ml, maar niet door anti-HGF antilichaam (Tabel 2).

Effect van hypoxie op TGFB1
, TGFβRI
en TGFβRII
mRNA expressie van maagkanker cellen

De expressie niveau van de TGF
was significant (p < 0,001) steeg onder een hypoxische toestand in heel OCUM -2MD3, OCUM-12 en OCUM 2M-cellen, vergeleken met het niveau dat onder normoxia (Fig. 3A). De expressie niveaus van TGFβRI Kopen en TGFβRII
waren significant toegenomen onder een hypoxische toestand in OCUM-2MD3 cellen. In tegenstelling, de niveaus van TGFβR1 Kopen en TGFβR2
expressie significant verlaagd onder hypoxische toestand OCUM 2M-cellen (Fig. 3B).

Effect van hypoxie op TGFB1 productie vrijgegeven aan maag- kankercellen

TGFB1 productie van OCUM-2MD3 en OCUM-12-cellen significant was (p < 0,001) toegenomen tijdens hypoxie opzichte normoxia, maar niet dat van OCUM-2M cellen (Fig 3C. ).

Effecten van hypoxie op Smad2 fosforylering van maagkanker cellijnen

In OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen, Smad2 fosforylering werd verhoogd onder een hypoxische toestand, vergeleken met die in het kader van een normoxische staat. Daarentegen werd Smad2 fosforylering niet verhoogd onder hypoxische toestand OCUM 2M-cellen (Fig. 4).

Effecten van fosforylatie kinaseremmers op EMT en vimentine expressie in hypoxie

Een van de TGFβR fosforylering remmers, Ki26894 en SB431542, remde de morfologische veranderingen van OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen onder hypoxische toestand, maar drie andere remmers, Lapatinib, sunitinib, en PHA665752, niet (Figuur 5A, 5B). Anderzijds geen van de remmers enig effect op de morfologie van OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen onder normoxia was (gegevens niet getoond). Het expressieniveau van vimentine
, dat werd gebruikt als marker EMT, was significant verhoogd door hypoxie, en werd verminderd door een van de TGFβR remmers Ki26894 en SB431542 (figuur 5C). Vimentine eiwitgehalte was eveneens verhoogd onder hypoxie, en werd verminderd door een van de TGFβR remmers Ki26894 en SB431542 (figuur 5D).

Effecten van hypoxische toestand op de factoren die samenhangen met EMT.

Hypoxic conditie aanzienlijk toegenomen VEGF-A
mRNA-niveau in OCUM-2M, OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen. De expressie van Twist golfreizen of Zeb1
was significant verhoogd door hypoxie in OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen, maar werd afgenomen in OCUM-2M cellen. De verhoogde expressie van Twist golfreizen of Zeb1
werd afgenomen door een van de TGFβR remmers Ki26894 en SB431542 in OCUM-12 cellen. Hypoxische toestand niet beïnvloed op de expressie van Snail1
(Figuur 6).

Discussie

Onlangs hebben diverse studies gemeld dat een hypoxische micro omliggende solide tumorcellen zou kunnen bijdragen aan de progressie van kanker [30] - [34]. De moleculaire mechanismen die verantwoordelijk zijn voor de progressie van kanker in hypoxie onduidelijk. Vermeld is dat hypoxie is een van de triggers voor EMT [35]. In de huidige studie, een hypoxische toestand geïnduceerde EMT in de diffuse-type maagkanker cellijnen OCUM-2MD3 en OCUM-12, maar niet in de darm-type cellen. Diffuse type maagkanker wordt gekenmerkt door een hoger dan maligniteit intestinale type maagkanker [36]. De EMT potentieel van kankercellen onder hypoxie kan een van de redenen voor de hoge maligne potentieel van diffuse type maagkanker.

Veel studies hebben gemeld dat verschillende moleculen kunnen beïnvloeden EMT van kankercellen, waaronder TGF [23 ], [37], EGF [38], en PDGF [39]. In de huidige studie, TGF gestimuleerd EMT van OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen, maar EGF en PDGF niet. Bovendien werd EMT inductie onder hypoxische toestand aanzienlijk af met anti-TGFB-neutraliserend antilichaam of TGFβR fosforylering remmers zowel OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen. Samengenomen geven deze resultaten aan dat het productieniveau van TGFp in kankercellen significant is toegenomen tijdens hypoxie, en de expressieniveaus van TGFβR en Smad2 fosforylatie verhoogd door hypoxie. Vimentine is een kenmerkend onderdeel van mesenchymale cellen en wordt normaliter niet tot expressie gebracht in epitheelcellen. Omdat de expressie van vimentine
in epitheelcellen speelt een essentiële rol in EMT door de interactie met actine en andere intermediaire filamenten [40], vimentine werd gebruikt als EMT merker in deze studie. De expressie van vimentine
werd significant verhoogd door hypoxie, en werd verminderd met de TGFβR fosforylering remmers Ki26894 en SB431542. Deze bevindingen suggereerden dat EMT onder hypoxische toestand geassocieerd met TGFp autocriene /TGFβR signalering in diffuse type maagkanker. Verschillende studies meldde de correlaties tussen EMT en TGFP signalering in hypoxie. [2], [21], [23], [32], [37] In maagkanker, is gemeld dat EMT gecorreleerd met kanker van kankercellen en verantwoordelijk voor kanker en metastase. Maar de mechanismen verantwoordelijk voor EMT maagkanker cellen blijven onduidelijk. Dit artikel verduidelijkt dat EMT van maagkanker cellen werd geïnduceerd via TGF signalering onder hypoxie. TGFβR remmers zouden dus zijn veelbelovende middelen voor de behandeling van maagkanker metastase.

De hypoxia gestimuleerde EMT van OCUM 2MD3-cellen, maar niet dat van OCUM-2M cellen. EMT is betrokken bij het bevorderen van kanker en metastase. Terwijl OCUM-2MD3 is een "dochter" cellijn van OCUM-2M [25], [34], OCUM-2MD3 cellen hebben een hogere kans op uitzaaiingen naar het buikvlies in naakt muizen dan OCUM-2M cellen [25], [34] . Kankercellen vrij migreren in de buikholte worden blootgesteld aan hypoxie door het ontbreken van een proximaal voeding vat [41]. Het expressieniveau van TGFB1
mRNA onder hypoxie was significant hoger dan die onder normoxie in alle drie de cellijnen. In tegenstelling tot de expressie van TGFβRI Kopen en TGFβRII
mRNA was significant verhoogd door hypoxie in OCUM-2MD3 cellen, maar niet in OCUM-2M cellen. De verschillende reacties van TGFβR
expressie tussen normoxia en hypoxie zou kunnen zijn een van de belangrijkste redenen voor de hypoxie-geïnduceerde EMT. We eerder gemeld dat maagkanker cellen onder hypoxie vertoonden EMT en hoge trek- en invasieve activiteiten ten opzichte van kankercellen in normoxia [34]. De up-regulatie van EMT van hypoxische kankercellen is wellicht een van de redenen voor de hogere kans op uitzaaiingen naar het buikvlies in OCUM-2MD3 cellen in vergelijking met OCUM-2M cellen.

Hypoxic conditie aanzienlijk toegenomen de expressie niveau van Twist Kopen en Zeb1
in OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen, maar niet dat in OCUM-2M cellen. De hypoxie toenemende activiteit van Twist Kopen en Zeb1
expressie werd verminderd met TGFβR remmers (Ki26894 en SB431542) in OCUM-12 cellen. EMT in hypoxie kan deels worden geregeld door transcriptiefactoren, Twist Kopen en Zeb1.

Hoewel HGF beïnvloedde de kankercel morfologie in OCUM-2MD3 en OCUM-12 cellen, hypoxie geïnduceerde EMT werd niet geremd door anti-HGF neutraliserende antilichamen of c-met remmer in beide OCUM-2MD3 of OCUM-12 cellen. HGF productie werd niet gedetecteerd in OCUM-2MD3 of OCUM-12 cellen onder hetzij hypoxie en normoxia (gegevens niet getoond). De meeste van HGF wordt verkregen uit stromale cellen bij maagkanker [42]. Terwijl HGF een belangrijke rol voor hypoxie geïnduceerde EMT niet kan spelen, kan HGF EMT stimuleren van kankercellen via de kanker-stromale interactie.

De hypoxia geïnduceerde EMT van OCUM 2MD3-cellen werd gedeeltelijk geremd door remmers TGFβR maar diverse andere remmers, waaronder c-Met remmer, PDGF remmer, EGFR remmer en VEGFR-remmer, had geen effect op de hypoxia-geïnduceerde EMT in deze studie. Deze bevindingen suggereren dat andere factor (en) kunnen worden geassocieerd met hypoxie geïnduceerde EMT in sommige kankercellen. In toekomstige studies zal het noodzakelijk zijn om andere nieuwe elementen die kanker morfologie veranderen onderzoeken.

Concluderend, het autocriene TGFp /TGFβR signalering onder hypoxie kan een van de factoren is die agressieve fenotype van EMT in gastrische carcinoomcellen. TGFP /TGFβR signalering remmers verschijnen therapeutisch veelbelovend bij maagkanker te zijn.

Ondersteunende informatie
Figuur S1.
morfologische veranderingen van maag-cellen onder een hypoxische toestand. In MKN-7, MKN-45, MKN-74, en KATO-III, werden morfologische veranderingen niet gevonden onder hypoxie
doi:. 10.1371 /journal.pone.0062310.s001
(TIF)

• PLoS ONE: Janus Kinase 2 polymorfismen geassocieerd met het risico bij patiënten met maagkanker in een Chinees Population
• PLoS ONE: Multiple-to-Multiple Relaties tussen MicroRNA's en Target genen in Gastric Cancer