Plos ONE: hipoksija Stimulira EMT želodčnega raka celic z avtokrin TGFβ Signaling

Povzetek

epitelijskih mezenhimske prehod (EMT) se šteje, da je povezana z malignosti rakavih celic in je odgovoren za invazijo raka in metastaz. Smo že poročali, da je oddaljeni metastaze, povezane s hipoksijo raka želodca. Zato smo raziskovali vpliv hipoksično stanju na EMT želodca rakavih celic. Želodčne rakave celice smo gojili v normoxia (21% O _{2) ali hipoksije (1% O 2) za 24 ur. EMT je bila ocenjena kot odstotek, vretena obliki celic v vseh celicah. Učinek preoblikovanja rastnega faktorja β1 (TGFβ1) ali zaviralci tirozin kinaz na EMT je bila ovrednotena. Stopnja izraz TGFβ1
in TGFβR
je ocenil realnem času RT-PCR. Proizvodnja TGFβ1 iz rakavih celic smo izmerili z ELISA. Hipoksija spodbudila EMT za OCUM-2MD3 in OCUM-12 celic, ne pa tudi OCUM-2M celic. Stopnja izraz TGFβ1
mRNA v skladu s hipoksijo je bila bistveno višja od tiste, ki v skladu z normoxia v vseh treh celičnih linij. Stopnja izraz je TGFβR
mRNA v OCUM-2MD3 celic znatno povečal hipoksija, vendar ne v OCUM-2M celic. TGFβR inhibitor, SB431542 ali Ki26894, bistveno zatreti EMT za OCUM-2MD3 in OCUM-12. TGFβ1 proizvodnja iz OCUM-2MD3 in OCUM-12 celic, se je znatno povečal v skladu s hipoksijo v primerjavi s tisto, pod normoxia. Te ugotovitve lahko nakazujejo, da hipoksija spodbuja EMT želodčnih rakavih celic prek avtokrinskega TGFβ /TGFβR signalizacije}

Navedba. Matsuoka J, Yashiro M, Doi Y, Fuyuhiro Y, Kato Y, Šinto O, et al. (2013) hipoksija stimulira EMT iz želodca raka celic skozi avtokrin TGFβ signalizacijo. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10,1371 /journal.pone.0062310

Urednik: Claudio M. Costa-Neto, Univerza v Sao Paulo, Brazilija

Prejeto: October 19, 2012; Sprejeto: 19. marec, 2013; Objavljeno: 17. maj 2013

Copyright: © 2013 Matsuoka et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta študija je podprl delno National Cancer Center za raziskave in razvojni sklad (23-A-9), in podpore, v pomoč za znanstvene raziskave (KAKENHI, št. 20591573, 22390262 in 23390329) od Ministrstva za izobraževanje, znanost, šport, kulturo in tehnologijo Japonske. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi. Avtorji so naslednje interese. KS, TS, in AM so zaposleni Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Ki26894, ki je bila uporabljena v tej študiji, je produkt Kyowa Hakko Kirin Co Ltd ni drugih patentov, izdelki v razvoju ali tržijo proizvodi deklarirajo . To ne spremeni pripadnost avtorjev vseh PLoS ONE politike o izmenjavi podatkov in materialov, kot je podrobno na spletu v priročniku za avtorje.

Uvod

epitelijskih mezenhimske prehod (EMT) je značilna spremembe v celično morfologijo, v katerem epitelne celice pridobijo mezenhimskih lastnosti, medtem ko izgublja celica celice interakcije in apicobasal polarnost [1], [2]. V epitelijskih raka, se EMT priznan kot eden od mehanizmov, ki so odgovorni za začetek invazivne in metastaznih vedenja [3] - [5]

A hipoksično okolje obstaja v nekaterih regijah tumorjev, ki kažejo hitro rast, ker je angiogenezo. v karcinomov je heterogena [6]. Hipoksija, se šteje, da je povezana z agresivnim tumorskih fenotipe želodčnega karcinoma [7], [8], vključno metastatskega sposobnost rakavih celic [6], [9]. Klinični in eksperimentalni podatki zagotavljajo tudi dokazov o povezavi med hipoksično okolje in slabo prognozo [10], [11]. Zato je pomembno za nadaljnji razvoj zdravljenja raka za pojasnitev mehanizma metastaz hipoksija inducirane.

To so poročali, da so različne topnih dejavnikov, vključno s preoblikovanjem rastnega faktorja β1 (TGFβ1) [12], [ ,,,0],13], epidermalni rastni faktor (EGF) [14], inzulinu podoben rastni faktor-1 (IGF1) [15], fibroblastni rastni faktor (FGF) [16], hepatocitni rastni faktor (HGF) [17] so bili v korelaciji s EMT . TGFβ signali imajo pomembno vlogo pri različnih vidikih metastaze rakavih celic, kot so migracije, invazije, in EMT [12], [13]. Je TGFβ ligande veže TGFβ tip receptorja II (TGFβRII), ki potem tvori kompleks z bodisi tipa TGFβR I ali II. TGFβR tipa I (TGFβRI) prenaša signale v celico preko drugega sel SMAD proteinov [13], [18]. Nižji stopnji signali se razmnožujejo s TGFβRI, ki fosforilira-receptorjev urejeno SMAD beljakovine [19], [20]

Številne študije so poročali, da bi lahko hipoksično pogoj povzroči EMT rakavih celic [21] -. [24] vendar molekularni mehanizem, odgovoren za EMT pod hipoksično pogojem, ostaja nejasno. Zato smo raziskovali vpliv hipoksije na morfoloških značilnostih želodčnih rakavih celic za pojasnitev mehanizmov, ki so odgovorni za-hipoksija povzročena EMT.

Materiali in metode

Cell Kultura in Celične linije

smo uporabili sedem rak želodca celične linije. OCUM-2MD3 [25] OCUM-12 [26] OCUM-2M [27], smo Kato-III [28] in MKN-45 [29] izvirajo iz karcinoma difuzna tipa želodca. MKN-74 [29] in MKN-7 [29] so bile pridobljene od črevesne tipa. OCUM-2M, OCUM-2MD3 in OCUM-12 so bili establised v našem laboratoriju, kot smo že poročali [25] - [27]. Na kratko, OCUM-12was, ki izhajajo iz ascitesa, povezanih z difuzno tipa želodčnega raka, in OCUM-2MD3 celic, hči celične linije z visokim potencialom za peritonealno metastaz a, so bili določeni z OCUM-2M celic s pomočjo orthotopic modela tumor, ascites starševski celične linije povezana z rakom difuzna tipa želodca. Druge celične linije smo dobili od celične banke JCRB (Osaka, Japonska) in American Type Culture Collection (Rockville, MD). Celice smo gojili pri 37 ° C v 21% O _{2 (normoxia) ali 1% O 2 (hipoksija). so se ohranili hipoksično pogoji z modularnim inkubator komoro (Hirasawa, Tokio, Japonska) s 5% CO 2 in 1% O 2 uravnotežena z N 2 plin. Medij kulture sestavljalo Dulbeccovem modificiranem Eagle mediju (DMEM;. Nikken Bio, Osaka, Japonska) s 10% fetalnega govejega seruma (. Nichirei Bio), 100 IE /ml penicilina (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 g /ml streptomicina (ICN Biomedicals), in 0,5 mM natrijev piruvat (Cambrex, Walkersville, MD).}

morfoloških sprememb

Rakave celice smo gojili pod normoxic ali hipoksične pogoje za 24 ur, in celično morfologijo opazili mikroskopsko. EMT je bila določena, ko je poligonalni ali vretena obliko najdemo v rakave celice s fazno kontrastnim mikroskopom. Pogostost EMT je bila ocenjena s stopnjo večkotnih ali vretena oblikovanih celic v vseh rakavih celic; EMT stopnja = število poligonskih ali vretena oblike celic /skupno število celic x 100 (%).

Učinki različnih topnih faktorjev na morfološke spremembe

smo preučevali učinke različnih topnih dejavnikov vključno ESPG (Pepro Tec, Rocky Hill, NJ), IGF1 (Pepro Tec), vaskularni endotelijski rastni faktor (VEGF; R & sistemi D, Minneapolis, MN), osnovno-FGF (Sigma, Saint Louis, MO), trombocitov -derived rastni faktor BB homodimer (PDGF-BB, Pepro Tech), HGF (Pepro Tech), TGFβ1 (King pivovarstvo Kakogawa, Japonska), o morfologiji rakavih celic. Celice smo kultivirali v DMEM, ki vsebuje eno od navedenih dejavnikov na zahtevane koncentracije pri 37 ° C v normoxia. Cell morfologija je bila preučena po 24 urah. Poskusi so bili izvedeni za vsak dejavnik v dveh izvodih.

Učinki nevtralizirajočih protiteles na morfološke spremembe

smo uporabili protitelesa, kot anti-HGF protitelesa (Genzyme techne, MPLS, MN, ZDA), anti-TGFβ protitelo (R &D systems), anti-PDGF-BB (Genzyme) anti-FGF7 (R &D systems), anti-VEGFR3 (R &D systems). Celice smo kultivirali v DMEM, ki vsebuje eno od zgornjih protiteles na 100 g /ml pri 37 ° C v hipoksijo. Cell morfologija je bila preučena po 24 urah.

Vpliv različnih inhibitorjev phospholylation na morfološke spremembe

Po celic dosegli pol-sotočje, so celice dodali TGFβ ali vsakim inhibitorjem in inkubirali pod hipoksično stanju ali normoxia 24 h. Nato so bili pregledani morfološke ugotovitve v primerjavi s kontrolo. Pet malih sintetičnih inhibitorjev phospholylation, Ki26894 (TGFβRI inhibitor, 10 mikrometrov; Kirin Pharma, Mishima, Japonska), SB431542 (zaviralec TGFβRI, 10 mikrometrov; Sigma, Saint Louis, MO), Sunitinibijev (SU11248, 20 nM, inhibitor tirozin kinaze proti VEGFR, PDGFR, c-kit, FGFR2 in flt3, LKT Laboratories, St. vedro, MN), PD173074 (FGF /VEGF receptorja tirozin-kinaze, 5 nM, santa Cruz, CA), lapatinibu (GW572016, 10 nM; tirozin kinaze proti EGFR in ErbB2, Toronto Research Chemicals) in PHA665752 (c-MET inhibitor, 2 uM;. so bili uporabljeni Pfizer, San Diego, CA, ZDA)

Kvantitativna realnem času povratne transkriptaze-polimeraze Verižna reakcija (RT-PCR)

Kvantitativne RT-PCR smo izvedli, da preuči TGFβ1
, TGFβRI, TGFβRII,
in vimentina
mRNK izraze. Rakave celice inkubiramo pod normoxic pogoji in pod hipoksične pogoje za 24 ur. Po inkubaciji smo skupno celični RNA, pridobljeni z uporabo TRIzola reagenta (Invitrogen, Carlsbad, CA) po navodilih proizvajalca. Po odstranitvi genomske DNA, ki ga DNaze, smo cDNA pripravimo iz 2 ug RNA z virusom Maloney miš levkemije reverzne transkriptaze (Invitrogen) z naključnimi primerjev (Invitrogen). Za določitev pregibom spremembe v vsakem gena, je v realnem času RT-PCR izvedli na ABI Prism 7000 (Applied Biosystems, Foster mesta, CA), z uporabo komercialno na voljo genske ekspresije teste za TGFβ1
(Hs00998130,), TGFβRI
(Hs00610319), TGFβRII
(Hs00559661), vimentin
(Hs00958116), Twist
(Hs01675818), Zeb1
(Hs 00232783), Snail1
(Hs00195591), VEGFA
(Hs00900055). PCR smo izvedli pri 95 ° C 15 sekund in 60 ° C za 60 sekund pri 40 ciklih. Gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH) smo uporabili kot interni standard za normalizacijo ravni mRNA zaradi razlik v koncentraciji vzorca in natovarjanje. Krat sprememb v izražanju vsako ciljno mRNA glede na GAPDH smo izračunali na podlagi cikla praga (Ct) kot 2 ^{-Δ (ΔCt), kjer ΔCt = Ct target- Ct GAPDH in Δ (ΔCt) = ΔCt _{hipoksija-ΔCt normoxia. Kvantitativni PCR reakcije smo izvajali v treh izvodih.}}

Western blot analiza

Pri preučevanju vpliva hipoksije na Smad2 fosforilacije, rakave celice smo inkubirali pod normoxic ali hipoksične pogoje za 24 ur, v tem zaporedju. Celice smo lizirali v liznem pufru in alikvote, ki vsebujejo 50 ig celotnega proteina izpostavimo natrijev dodecil sulfat, poliakrilamid gelno elektroforezo; je proteinski trakovi smo prenesli v poliviniliden difluorid membrano (Millipore, Billerica, MA). Membrana smo inkubirali v TBS-T (10 mM TBS in 0,05% Tween 20) z dodatkom 5% nemastnega mleka ali 5% goveji albumina (Sigma) pri sobni temperaturi 1 uro. Naslednja je bila membrana nameščena v raztopini TBS-T, ki vsebuje primarno protitelo p-Smad2 (Ser ^{465/467, 1: 1000; Cell signalizacija Technology) ali Smad2 /3 (1: 1000; Cell signalizacija Technology), vimentina (1: 1000; signalizacijo med celicami Technology), anti-βactin (1: 1000; Sigma) in pustimo reagirati pri 4 ° C preko noči. Nato je vsak protitelo izperemo trikrat s TBS-T za 10 min in peroksidazo označeno sekundarno protitelo (GE zdravstveno varstvo, Buckinghamsire, UK) reagira s dodamo primarno protitelo. Pasovih so bile ugotovljene z uporabo okrepljenega kemiluminescenco sistem (WAKO, Osaka, Japonska).}

-encimsko-imunskim testom (ELISA)

Proizvodnja TGFβ1 od rakavih celic smo merili s kvantitativno sendvič encima imunološki tehniko z uporabo kompleta Quantikine humani TGFβ1 ELISA, v skladu z navodili manufacturer`s (R &D systems). Rakave celice inkubiramo pod hipoksije ali normoxia 24 h, nato je bil medij nadomestimo s 3 ml seruma prosti DMEM. Celice inkubiramo pod hipoksije ali normoxia za dodatnih 24 h. Pogojno sredstvo (CM) so bili zbrani iz vsake jedi in centrifugirali pri 1000 g
za 5 min. Stopnja TGFβ1 serumu prostega CM smo merili z uporabo ELISA kit. ELISA zazna tako aktivno in latentno TGFβ.

Statistična analiza

Primerjave med podatkovnih nizov so bile narejene s Študent je t
-test ali Kruskal-Wallis enosmerna ANOVA, ki jih uvršča sledi preskus multiple primerjave Dunn je. Razlike naj bi bile statistično značilne, ko je bila vrednost P. ≪ 0,05

Rezultati

Vpliv hipoksije na rakava celica morfologije

A hipoksično stanje znatno povečalo število poligonska ali vretena oblike celic v postopku EMT med OCUM-2MD3 ali OCUM-12 celic, vendar ne med OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74, ali celice KATO-III (sl. 1A in sl. S1). Morfologija Celica OCUM-2MD3 in OCUM-12 se je začela spreminja po 4 urah v hipoksično kulturi. Po 12 urah kulture, je povečano stopnjo EMT videli v obeh celičnih linijah. Stopnja EMT za OCUM-2MD3 in OCUM-12 celic je bila najvišja v 24 h hipoksično kulture (sl. 1B). Ker so morfološke spremembe v 24 h kulturi pod hipoksije razvidno, so bili analizirani molekularne mehanizme EMT ob 24 h kulturi pod hipoksičnih pogojih z uporabo OCUM-2MD3, OCUM-12, in OCUM-2M celice.

učinki različnih rastnih faktorjev na morfologijo rakavih celic

topni dejavniki so bili uporabljeni pri koncentracijah 10 ali 100 ng /ml. OCUM-2MD3 in OCUM-12 celice postal vretenaste oblike po dodatku TGFβ1 ali HGF, vendar ne po dodatku ESPG FGF2, FGF7, IGF1, VEGF ali PDGF-BB po 24 h pod normoxia (tabela 1). V nasprotju s tem, OCUM-2M celic ni pokazal nobenih sprememb morfoloških naslednje dodatkom vseh dejavnikov (sl. 2).

Učinki nevtralizirajočih protiteles na morfologijo rakave celice pod hipoksija

EMT hipoksija povzročena je bila delno zavira proti TGF-β1 protiteles 100 mikrogramov /ml, ne pa proti HGF protitelesa (tabela 2).

Vpliv hipoksije na TGFβ1
, TGFβRI
in TGFβRII
mRNA izraz želodčnih rakavih celic

raven izraz TGFβ
bilo pomembno (p < 0,001) se je povečalo pod hipoksično stanju v vseh OCUM -2MD3, OCUM-12, in OCUM-2M celice, v primerjavi s stopnjo pod normoxia (sl. 3A). Ravni izraz za TGFβRI
in TGFβRII
so znatno povečal pod hipoksično stanju v OCUM-2MD3 celic. V nasprotju s tem, ravni TGFβR1
in TGFβR2
izraz so znatno znižale pod hipoksično stanju v OCUM-2M celic (sl. 3B).

Vpliv hipoksije na TGFβ1 proizvodnja izpuščen iz želodca rakavih celic

TGFβ1 proizvodnjo iz OCUM-2MD3 in OCUM-12 celic je znatno (p < 0,001) se je povečalo v skladu s hipoksijo v primerjavi z normoxia, ne pa tudi, da je od OCUM-2M celic (slika 3C. ).

Vpliv hipoksije na Smad2 fosforilacije celičnih linij raka želodca

v OCUM-2MD3 in OCUM 12 celic, Smad2 fosforilacija je povečala pod hipoksično stanju, v primerjavi z pod normoxic stanje. V nasprotju s tem, Smad2 fosforilacija ni bila povečana pod hipoksično stanju v OCUM-2M celic (sl. 4).

Učinki zaviralcev fosforilacija kinaze na EMT in vimentina izražanja v hipoksiji

Vsaka izmed inhibitorji fosforilacija TGFβR, Ki26894 in SB431542, zaviral morfoloških sprememb OCUM-2MD3 in OCUM 12 celic pod hipoksično stanju, vendar trije drugi inhibitorji, Lapatinib, Sunitinibijev in PHA665752, ni (slika 5A, 5B). Po drugi strani pa nobeden izmed inhibitorjev imel nobenega vpliva na morfologijo OCUM-2MD3 in OCUM-12 celice pod normoxia (podatki niso prikazani). Stopnja izraz vimentina
, ki je bila uporabljena kot EMT marker, se je znatno povečal hipoksija, in se je zmanjšal za eno izmed inhibitorjev TGFβR Ki26894 in SB431542 (slika 5C). Stopnja vimentina protein se je povečal tudi pod hipoksije, in se je zmanjšal za eno od zaviralcev TGFβR Ki26894 in SB431542 (Slika 5D).

Učinki hipoksično pogoja o dejavnikih, povezanih z EMT.

Hipoksično stanje znatno povečal VEGF-A
ravni mRNA v OCUM-2M, OCUM-2MD3 in OCUM-12 celic. Stopnja izraz Twist
ali Zeb1
in OCUM-2MD3 in OCUM-12 celic je znatno povečal hipoksija, vendar pa se je zmanjšala v OCUM-2M celic. Povečano izražanje Twist
ali Zeb1
in OCUM-12 celic, se je zmanjšal za eno izmed inhibitorjev TGFβR Ki26894 in SB431542. Hipoksično pogoj ni vplivala na ravni ekspresije Snail1
(slika 6).

Pogovor

V zadnjem času, so številne študije poročajo, da hipoksično mikrookolje, ki obkroža trdne tumorske celice bi lahko prispevajo k raku napredovanja [30] - [34]. Vendar pa molekularni mehanizmi, ki so odgovorni za napredovanje raka na hipoksijo še vedno nejasna. Ugotovljeno je bilo, da je hipoksija eden od sprožilcev za EMT [35]. V tej študiji je hipoksično stanje povzroča EMT v difuzna tipa želodčnega raka celičnih linij OCUM-2MD3 in OCUM-12, vendar ne v črevesnih tipa celic. želodčni rak difuzna tipa je značilno višjo malignosti kot rak želodca, intestinalnega tipa, [36]. EMT potencial rakavih celic v skladu s hipoksijo lahko eden od razlogov za visoko maligni potencial raka difuzna tipa želodca.

Številne študije so poročali, da bi lahko več molekule vplivajo EMT rakavih celic, vključno TGFβ [23 ], [37], ESPG [38], in PDGF [39]. V tej študiji TGFβ spodbudil EMT za OCUM-2MD3 in OCUM-12 celic, vendar ESPG in PDGF ni. Poleg tega je bil EMT indukcijo pod hipoksično pogojem, znatno zmanjšal, anti-TGFβ nevtralizacijskih protiteles ali zaviralci TGFβR fosforilacijo tako OCUM-2MD3 in OCUM-12 celic. Če povzamemo, ti rezultati kažejo, da je bila raven proizvodnje TGFβ v rakavih celic močno povečal pod hipoksije in stopnje izraženosti v TGFβR in Smad2 fosforilacije so se povečali za hipoksijo. Vimentina je značilna sestavina mezenhimskih celic in običajno ni izražen v epitelijskih celic. Ker je izraz vimentin
in epitelijskih celic igra pomembno vlogo pri EMT skozi interakcijo z aktin in drugi vmesni vlaken [40], vimentin je bila uporabljena kot EMT označevalec v tej študiji. Stopnja izraz vimentin
se je znatno povečal hipoksija, in se je zmanjšal za inhibitorjev TGFβR fosforilacijskih Ki26894 in SB431542. Te ugotovitve kažejo, da EMT pod hipoksično pogoj je povezan z avtokrin TGFβ /TGFβR signalizacijo pri raku difuzna tipa želodca. Številne študije poročajo korelacije med EMT in TGFβ signalizacijo na hipoksijo. [2], [21], [23], [32], [37] V raka želodca, je bilo poročali, da je EMT povezana z malignosti rakavih celic in je odgovoren za invazijo raka in metastaz. Vendar pa mehanizmi, ki so odgovorni za EMT želodčnih rakavih celic, še vedno nejasna. Ta dokument je pojasnil, da je bil EMT želodčnih rakavih celic inducirano preko TGFβ signalizacijo v skladu s hipoksijo. Zaviralci TGFβR bi torej obetavne sredstva za zdravljenje želodca metastaz raka.

hipoksija spodbudil EMT za OCUM-2MD3 celic, ne pa tudi OCUM-2M celic. EMT je bila vpletena v spodbujanje raka invazijo in metastaze. Medtem ko OCUM-2MD3 je "hči" celična linija OCUM-2M [25], [34], OCUM-2MD3 celice imajo večjo možnost za metastaz v potrebušnice v golih miših kot OCUM-2M celic [25], [34] . Rakave celice proste da migrirajo v peritonealni votlini se izpostavijo hipoksija zaradi pomanjkanja posode za hranjenje bližnji [41]. Stopnja izraz TGFβ1
mRNA v skladu s hipoksijo je bila bistveno višja od tiste, ki v skladu z normoxia v vseh treh celičnih linij. V nasprotju s tem je raven izraz TGFβRI
in TGFβRII
mRNA je v OCUM-2MD3 celic znatno povečal hipoksija, vendar ne v OCUM-2M celic. Različni odzivi TGFβR
izraz med normoxia in hipoksijo lahko eden od ključnih razlogov za EMT-hipoksija povzročena. Smo že poročali, da je v želodcu rakave celice, ki jih hipoksije pokazala EMT in visoke migracijske in invazivnih dejavnosti v primerjavi z rakavih celic v normoxia [34]. Up-ureditev EMT hipoksičnih rakavih celic je lahko eden od razlogov za večji potencial za metastaz v potrebušnice v OCUM-2MD3 celic v primerjavi z OCUM-2M celic.

Hipoksično stanje znatno povečala stopnjo izražanja za Twist
in Zeb1
in OCUM-2MD3 in OCUM-12 celic, ne pa tudi, da je v OCUM-2M celic. Dejavnost, hipoksija povečevanje Twist
in Zeb1
izraz se je zmanjšala z zaviralci TGFβR (Ki26894 in SB431542) v OCUM-12 celic. EMT v hipoksijo se lahko delno ureja transkripcijskih faktorjev, Twist
in Zeb1.

Čeprav HGF vplivala morfologijo rakavih celic v OCUM-2MD3 in OCUM 12 celic, hipoksija inducirano EMT ni zavira anti-HGF nevtralizacijskih protiteles ali zaviralec c-Met v obeh OCUM-2MD3 ali OCUM-12 celic. Proizvodnja HGF ni bila odkrita v OCUM-2MD3 ali OCUM-12 celice pod bodisi hipoksije in normoxia (podatki niso prikazani). Najbolj HGF izhaja iz stromalnih celic raka želodca [42]. Medtem ko HGF ne bi igral pomembno vlogo, hipoksija povzročena EMT, lahko HGF spodbujanje EMT rakavih celic prek interakcije raka-stromalni.

EMT-hipoksija povzročena z OCUM-2MD3 celic je delno inhibira zaviralci TGFβR , vendar različne druge inhibitorje, vključno s c-Met, inhibitor PDGF, inhibitor EGFR in inhibitor VEGFR imelo nobenega učinka na EMT-hipoksijo inducirane v tej študiji. Te ugotovitve kažejo, da je mogoče drugi (i) faktor povezano s hipoksijo inducirane EMT v nekaterih rakavih celic. V prihodnje študije, bo treba preučiti druge nove dejavnike, ki lahko spremenijo morfologijo raka.

Na koncu je avtokrin TGFβ /TGFβR signalizacija v skladu s hipoksijo lahko eden izmed dejavnikov, povezanih z agresivnim fenotip EMT v želodčni karcinom celic. pojavijo signalizacija zaviralci TGFβ /TGFβR biti terapevtsko obetaven rakom želodca.

Podpora Informacije
Slika S1.
Morfološke spremembe želodčnih celic pod hipoksično stanju. V MKN-7, MKN-45, MKN-74, in KATO-III, morfološke spremembe niso bile ugotovljene v skladu s hipoksijo
doi:. 10,1371 /journal.pone.0062310.s001
(TIF)

• Plos ONE: Janus kinaza 2 polimorfizmi so povezane s tveganjem pri bolnikih z želodčnim rakom v kitajski Prebivalstvo
• Plos ONE: Multiple-to-Multiple odnosih med MicroRNAs in ciljnih genov želodčnega raka