Background VerfÜgung
Den ARID1A VerfÜgung Gentherapie encodes adenine-thymine (OP) Geméis interaktiv Domain-haltege FAQ 1A, déi zu chromatin Remodeling bedeelegt. ARID1A VerfÜgung huet awer schonn als entholl suppressor zu verschiddenen Kriibs Zorte ze fonktionnéieren. An der aktueller studéieren, ze propagéieren mir den Ausdrock an hätt Wäert vun ARID1A VerfÜgung am primäre gastric Kriibs. Mëttlerweil huet sech d'biologesch Roll vun ARID1A VerfÜgung weider Zell Modell kënschtlech propagéieren benotzt. VerfÜgung Methodik /Principal effektiv VerfÜgung Fir d'Roll vun ermëttelen ARID1A VerfÜgung Gene am primäre gastric Kriibs pathogenesis, real-Zäit grouss Hinnen alleguer a westlech blotting sech benotzt den ARID1A VerfÜgung Ausdrock an vläit kriibserreegend a noncancerous Stoffer ze iwwerpréifen. Resultater réischt ofgeholl ARID1A VerfÜgung mRNA ( P VerfÜgung = 0.0029) an FAQ ( P VerfÜgung = 0.0015) Ausdrock am meeschte entholl-Träger Stoffer Verglach mat der stemmt bascht Net-entholl Stoffer, an zu gastric Kriibs Zell Linnen. Fir weider der clinicopathological an prognostic Rollen vun ermëttelen ARID1A VerfÜgung Ausdrock, mir standing immunohistochemical Analysë vun der 224 paraffin-Ënnerbewosstsinn gastric Kriibs Otemschwieregkeeten spären. Donnéeën verroden, datt de Verloscht vun ARID1A VerfÜgung Ausdrock vill mat T Bühn soll war ( P VerfÜgung = 0.001) an Schouljoër ( P VerfÜgung = 0.006). Konsequent mat deene Resultater, fonnt mir dass Verloscht vun ARID1A VerfÜgung war Ausdrock vill mat aarmséileg Iwwerliewe vun gastric Kriibs Patienten soll ( P VerfÜgung = 0.003). Cox Réckgang Analysë weisen, datt ARID1A VerfÜgung Ausdrock war eng onofhängeg Estimatioun vun globale Iwwerliewe ( P VerfÜgung = 0.029). Ausserdeem, goufen d'Funktiounen vun ARID1A VerfÜgung zu der Verbreedung a Kolonie Équipe vun gastric Zell Linnen analyséiert vun Zellen mat voller-Längt transfecting ARID1A VerfÜgung Ausdrock Vecteure oder siRNA gezielt ARID1A VerfÜgung . Staatsfinanzen ARID1A VerfÜgung Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen vill inhibited Zell Prolifératioun a Kolonie Équipe. Silencing ARID1A VerfÜgung Ausdrock vun gastric epithelial Zell Linn vill Zell Taux gestäerkt. VerfÜgung Konklusiounen /Grousses VerfÜgung Eis Daten hindeit, datt ARID1A VerfÜgung eng wichteg Leeschtung vläicht Roll am gastric Kriibs a kann als wäertvoll prognostic Bewaacher geflitzt an Potential Zil fir Gentherapie an der Behandlung vun gastric Kriibs déngen VerfÜgung Fro:. Wang dd, Chen Yb, Pan K, Wang W, Chen SP, Chen JG , et al. (2012) ofgeholl Expression vum ARID1A VerfÜgung Gene mat Poor hätt an primär Gastric Cancer Associéierten Ass. PLoS NËMMEN 7 (7): e40364. Doi: 10.1371 /journal.pone.0040364 VerfÜgung Redakter: Patrick Tan, Herzog-National Universitéit vu Singapur CSL Medical School, Singapur VerfÜgung Arnaque: 19. Januar 2012; Akzeptéiert: 6 Juni 2012; Publizéiert: 13. Juli 2012 zu Copyright: © 2012 Dandan et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht gouf vun der National Natural Science Foundation of China (30973398) an Guangdong Natural Science Foundation (925100890) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Gastric Kriibs ass déi véiert stäerkste gemeinsam weltwäit malignancy an d'zweet Équipe gemeinsam Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doudesfäll all Joer (10.4% vun Kriibs Doudesfäll) [1]. Traitement vun gastric Kriibs ëmfaasst eng Kombinatioun vun Agrëff, Chimiotherapie goen, oder Bestrahlung. Allerdéngs, bal 60% vun de Patienten betraff Loosst gastric Kriibs souguer no enger curative resection eleng oder no adjuvant Therapie [2]. Et huet laang datt gastric Kriibs Resultater vun enger Kombinatioun vun Ëmwelt- Faktoren an der Heefung vun generaliséiert a speziell genetesch hire Restaurant bekannt ginn. Vill vun de genetesch oder epigenetic hire Restaurant mat gastric Kriibs assoziéiert, dorënner Verloscht vun heterozygosity, microsatellite an chromosomal Onstabilitéit an hypermethylation, muss gemellt ginn [3]. Versteesdemech vun gastric carcinogenesis Équipe dës hire Restaurant an der molekulare Mechanisme gëtt fir d'Verbesserung vun der Diagnos, Therapie an hätt Cepheid vun dëser Krankheet kritesch ginn. VerfÜgung D'eukaryotically conserved SWI /SNF chromatin-Remodeling komplex spillt wesentleche Rollen vun enger Rei vun bewosst Prozesser, wéi dat, Prolifératioun an DNA Reparatur [4]. Verloscht vun SWI /SNF subunits gouf am meeschte erhéijen, an enger grousser Zuel vun experminteller Observatioune proposéiere confirméiert, datt dës komplex fir entholl Ennerdréckung kritesch ass [5]. D'investéiert enthale siwen oder méi noncatalytic subunits dass viraussiichtlech den gezielt an Aktivitéit vun der ATPase hëllefen well [6]. One subunit vun dëse komplexe, hSNF5 /Ini1 /BAF47, gouf als entholl suppressor identifizéiert [7], [8]. Wéinst noncatalytic subunit, p270 /ARID1A /BAF250a (adenine-thymine OP-räiche interaktiv Domain-haltege FAQ 1A), huet bewisen ginn fir normal Zell Zyklus verhaft essentiel gin [9]. Knockdown vun ARID1A VerfÜgung zu enger Leukämie Zell Linn jidferengem Resistenz zu Sekondär-mediated apoptosis [10]. VerfÜgung Viru Kuerzem, ARID1A VerfÜgung kennen an Verloscht vun BAF250a FAQ fonnt goufen zu vergläichen staark mat der spillt kloer-Zell carcinoma an Joan niddereg-Schouljoer endometrioid carcinoma [11] - [13]. Dës Observatiounen weisen, datt ARID1A VerfÜgung ass e potentielle Kandidat entholl suppressor Gentherapie. Allerdéngs bleiwen d'Medeziner Bedeitung vun esou Ënnerscheed Ausdrock an d'Funktioun vun der ARID1A FAQ ondefinéiert wéinst dem Manktem vun Studien frësch Mënsch entholl Echantillon benotzt. Am Moment studéieren, analyséiert mir den ARID1A VerfÜgung Ausdrock Niveau vun gastric Kriibs mat real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer, westlech blotting an immunohistochemistry. Mëttlerweil, identifizéiert mir d'Relatioun tëschent ARID1A VerfÜgung Ausdrock an clinicopathological Fonctiounen a bewäert seng prognostic Wäert am Post-resection Iwwerliewe vun gastric Kriibs Patienten. Ausserdeem, évaluéiert mir der funktionell Roll vun ARID1A VerfÜgung an der tumorigenesis vun der Primärschoul gastric Kriibs vun der kënschtlech Prolifératioun a Kolonie Équipe an gastric Zell Linnen iweerpréifen. VerfÜgung ARID1A VerfÜgung mRNA Expression analyséiert vun Real-Zäit Chemeschen RT-Hinnen alleguer VerfÜgung D'mRNA Niveau vun ARID1A VerfÜgung vun real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer assays alles war an 66 vläit kriibserreegend a der stemmt bascht normal gastric mucosa Stoffer. D' ARID1A VerfÜgung war Ausdrock Niveau vill manner an 43 (65.15%) entholl-Träger Stoffer Verglach mat der bascht Net-entholl Stoffer ( P VerfÜgung = 0,0029, well 1). VerfÜgung ARID1A Protein Expression analyséieren Western blotting VerfÜgung Western blotting gouf op 25 gastric Kriibs uplanzen standing an bascht Net-kriibserreegend gastric mucosa Stoffer aus der 66. vläit Echantillon entspriechend. D'Resultater weisen eng ARID1A Band um erwaart Gréisst vun 242 kDa an der Zomm vun ARID1A FAQ präsent war weider vun densitometry gemooss. Konsequent mat der grouss real-Zäit Hinnen alleguer Resultater, war vun 13 (52%) vun der gastric entholl Stoffer Verglach mat reagéiert bascht Net-entholl Stoffer ( P VerfÜgung = 0,0015, Dorënner 2A enger Ofsenkung ARID1A Ausdrock gesinn an Figur 2B). Anerersäits, war d'ARID1A FAQ Ausdrock ofgeholl bemierkenswäert zu gastric Kriibs Zell Linnen, SGC7901, AGS, virun allem zu MGC803, am Verglach mat normal gastric Zell Linn GES1 (Dorënner 2C). VerfÜgung Immunohistochemical Analys vun ARID1A Expression zu Gastric Cancer Ray Echantillonen an hirer Bezéiung mat der VerfÜgung clinicOpathological Parameter der clinicopathological an prognostic Rollen vun ARID1A Ausdrock fir weider z'ënnersichen, mir standing immunohistochemical Analysë vun der 224 gastric Kriibs Otemschwieregkeeten Bleck paraffin-Ënnerbewosstsinn. Am Allgemengen, 115 vun 224 (51.3%) Fäll zougedréckt negativ ARID1A Ausdrock vun kriibserreegend Stoffer (Dorënner 3B), wobäi 109 (48.7%) Fäll positiv immunostaining (Dorënner 3C & D) gewisen. Normal gastric mucosa zougedréckt stäerkst ARID1A positive staining (Dorënner 3A). D'kennenzeléieren tëscht dem Wëllen vun ARID1A a verschidde clinicopathological Parameteren an Table opgezielt sinn 1. D'Donnéeën gewisen, datt de Verloscht vun ARID1A Ausdrock vill mat Déift vun entholl einfach (T Etapp, P VerfÜgung = 0.001) soll war an entholl Schouljoër ( P VerfÜgung = 0.006), mee net mat Alter, Geschlecht, entholl Gréisst, wäit Metastasen (M Etapp), an entholl nët oder lokal lymph Node Metastasen (N Etapp). VerfÜgung Expression vun ARID1A a Séminairen Konklusiounen VerfÜgung De 5-Joer globale Iwwerliewe Tauxe Patienten mat positiv an negativ ARID1A Ausdrock sech 68,8% an 52,2%, respektiv. Déi gesamt Iwwerliewe vu Patienten mat negativen ARID1A Ausdrock war vill méi schlëmm wéi déi vun ARID1A-positiv Patienten ( P VerfÜgung = 0,003, Log-Platz Test, Dorënner 4). Univariate Cox Réckgang Analysë weisen, datt Déift vun entholl einfach, lokal lymph Node Metastasen, wäit Metastasen, entholl Gréisst a ARID1A Ausdrock vill mat globale Iwwerliewe (Table 2) verbonne waren. Doriwwer eraus, eng multivariate Analyse Cox Réckgang bestätegt d'Déift vun entholl einfach, lokal lymph Node Metastasen, wäit Metastasen an ARID1A Ausdrock als onofhängeg dacks vun de globale Iwwerliewe vun gastric Kriibs Patienten (Table 2). VerfÜgung D'Roll vun ARID1A VerfÜgung zu Zell prolifération a Kolonie Formatioun an MGC803 an GES1 Zell zesummeféieren VerfÜgung fir d'Auswierkunge vun ARID1A VerfÜgung op Zell Prolifératioun, déi ARID1A VerfÜgung Ausdrock Vecteure diskutéieren an der Kontroll Vecteure goufen respektiv an MGC803 Zellen transfected. ARID1A VerfÜgung Ausdrock vun transfected Zellen sech duerch westlech blotting (Dorënner 5A) fonnt. D'Zell Wuesstem assay Teamchef Zell Taux vun ARID1A VerfÜgung -transfected gastric Kriibs Zellen sech wesentlech méi wéi Kontroll Vecteure-transfected gastric Kriibs Zellen (Dorënner 5C). Mëttlerweil huet sech d'Effizienz vun Amphipolis Opstellung vill ( P VerfÜgung = 0.0379) inhibited zu ARID1A VerfÜgung -transfected gastric Kriibs Zellen am Verglach mat Kontroll Vecteure-transfected gastric Kriibs Zellen (Dorënner 5D). Fir weider d'Prolifératioun Ennerdréckung Funktioun vun ARID1A VerfÜgung bestätegen, mir entsat d' ARID1A VerfÜgung Ausdrock vun GES1 Zell Linn mat siRNA. D' ARID1A VerfÜgung Ausdrock vun transfected Zellen sech duerch westlech blotting (Dorënner 5B) fonnt. Mir hu fonnt, datt silencing den Ausdrock vun ARID1A VerfÜgung zu GES1 bedeitend verstäerkt Zell Prolifératioun Verglach mat mierkt siRNA Behandlung (Dorënner 5E). VerfÜgung An trotz groussen Schrett zu Diagnos an eng Therapie, gastric Kriibs bleift ee vun de stäerkste déidlecher neoplasms, mat engem schlechten hätt no radikal gastrectomy [14], [15]. D'Medeziner Resultat vun gastric Kriibs ass vun enger Serie vun entholl Charakteristiken, wéi locoregional entholl Wuesstem an Invasioun, dat Schouljoer, angiogenesis, wäit Metastasen an Zell Zyklus Werdegang alles, wat vun enger Rei vu Logbicher Genen regulariséiert ginn, dorënner oncogenes an entholl suppressor Genen. Dofir, Identifikatioun vun gastric Kriibs-spezifesch biomarkers an dës Prozeduren Équipe ass ganz wichteg fir Diagnos, Therapie an hätt Cepheid an Klinik. VerfÜgung ARID1A VerfÜgung, eng nei Gene identifizéiert entholl suppressor deen e Member encodes vun der SWI /SNF komplex, huet eng héich stattfannen Frequenz zu BBC Kriibs, Joan endometrioid carcinoma, spillt endometrioid a kloer Zell carcinoma [11] - [13], [16], [17]. Am spillt kloer Zell carcinoma, ass et confirméiert, datt ARID1A VerfÜgung stattfannen ass vill mat ARID1A immunoreactivity [18] assoziéiert. Kuerzem, studéieren exome sequencing Teamchef ARID1A VerfÜgung och zu gastric Kriibs dacks mutated ass [19], [23]. Allerdéngs, esou wäit den Ausdrock, Medeziner Bedeitung a biologescher Funktiounen vun ARID1A VerfÜgung zu gastric Kriibs net lant ginn. Dofir, évaluéiert mir den Ausdrock vun ARID1A VerfÜgung zu gastric Kriibs vun real-Zäit Hinnen alleguer, westlech blotting an immunohistochemistry, zousätzlech zu senger clinicopathological an prognostic Bedeitung an eng grouss mënschlech Prouf. Ausserdeem, an eng kënschtlech Zell Modell mat, mir propagéieren och de entholl suppressor Roll vun ARID1A VerfÜgung zu gastric Zellen am Detail. VerfÜgung An der aktueller Etude, mir bewisen, dass ARID1A VerfÜgung war op zwou ënneschten mRNA an FAQ Niveau vun gastric Kriibs Stoffer ausgedréckt Net-kriibserreegend mucosa wéi entspriechend. Am Accord mat dëse molekulare biologescher Conclusiounen, immunohisto- Chimie mat engem antibody anti-ARID1A zougedréckt dass ARID1A VerfÜgung komplett an 115 aus 224 Patient gastric Kriibs Echantillon entsat war, mat positiven Ausdrock an aneren 109 Patienten. Eis Observatioun ass am Accord mat enger Rei vu Studien demaskéierte dass ARID1A VerfÜgung Ausdrock gëtt dacks vun enger Zuel vu Kriibs Stoffer an Zell Linnen, wéi Broscht Kriibs, Joan endometrioid carcinoma, spillt kloer Zell an endometrioid carcinoma verluer oder reduzéiert [13,18,20, an 21]. VerfÜgung fir Datum, d 'Ursaachen vun ARID1A VerfÜgung silencing net vollstänneg opgekläert. D'bestehend Studien konzentréieren op déi kennen ARID1A VerfÜgung, besonnesch am gynecologic Cancers. Et ass confirméiert datt e lächerlech oder indel stattfannen vun ARID1A VerfÜgung mat Verloscht oder Reduktioun vun FAQ Ausdrock vun der Joan endometrioid carcinoma, spillt endometrioid carcinoma a kloer Zell carcinoma [11] soll war - [13], [18]. An eng integréiert Frankräich Enquête, Mamo et al VerfÜgung. nëmmen fonnt ee gekierzt stattfannen vun ARID1A VerfÜgung an der T47D Broscht Kriibs Zell Linn, ouni stattfannen an der 11. Broscht Kriibs Echantillonen, déi bei der 1p36.11 nët bascht ze ARID1A An der Etude vun Wang et al. VerfÜgung, den Ausdrock vun ARID1A VerfÜgung nëmmen gouf an enger klenger-Gréisst Prouf (32 Fäll) festgestallt, an do war keen weider Weltraum vu sengem Medeziner Bedeitung [19]. Hei, zu engem groussen gastric Kriibs Bevëlkerung (224 Fäll), hunn mir datt de Verloscht vun ARID1A VerfÜgung Ausdrock war vill mat enger héijer T Etapp vun gastric Kriibs soll, dass déi zousätzlech Flichte vun ARID1A VerfÜgung Ausdrock kënnt entholl Wuesstem an Invasioun förderen. Zousätzlech, nogewise mir manner ARID1A immunoreactivity zu kaum ënnerscheet gastric Kriibs Stoffer wéi gutt-ënnerscheet erklären, suggeréiert datt ofgeholl ARID1A VerfÜgung Ausdrock kéint eng Roll an entholl de-dat spillen. Konsequent mat eis Conclusiounen, aner Enquêteuren fonnt och dass ofgeholl ARID1A VerfÜgung Ausdrock vill mat enger héijer Schouljoer vun Broscht Kriibs [22], souwéi eng héich Figo Etapp vun spillt kloer Zell carcinoma [21] verbonnen ass. ARID1A ënnerstëtzt d'Équipe vun BRG1 oder BRM-haltege SWI /SNF chromatin Remodeling investéiert, wat fir normal Zell Zyklus verhaft Grondlinne sinn [9], [26]. VerfÜgung A Kaplan-Meier Iwwerliewe Analyse huet e wesentleche Korrelatioun tëschent de Verloscht vun ARID1A VerfÜgung Ausdrock an aarmen Medeziner Resultat vun gastric Kriibs Patienten der radikal Operatioun. Cox iwwerschloen Verhältnis Réckgang Analysë weider bewisen, dass d' ARID1A VerfÜgung Ausdrock Niveau war eng onofhängeg Risk Faktor fir Iwwerliewe, suggeréiert, dass et wéi e wäertvolle prognostic uweist fir gastric Kriibs Patienten an der Chirurgie an e Potential Zil fir Gentherapie déngen kann an d'Behandlung vun gastric Kriibs. Am spillt kloer Zell carcinoma, gouf et am Rapport och dass Patienten mat positive ARID1A VerfÜgung Ausdrock engem méi Werdegang-gratis Iwwerliewe wéi déi mat negativen haten ARID1A VerfÜgung Ausdrock [21]. Desweideren, Verloscht vun ARID1A VerfÜgung Ausdrock ass vill mat chemoresistance zu spillt kloer Zell carcinoma soll, wat och mat schlechte hätt vun Kriibs verbonnen ass. Dës Donnéeë hindeit, datt ARID1A VerfÜgung Ausdrock an stattfannen Ënnersichung hëllefräich sinn kéint Medeziner Gestioun ze fillen. Geholl zesummen, eis logesch, datt de Verloscht vun ARID1A VerfÜgung Ausdrock vun gastric Kriibs mat méi malignant phenotypes verbonnen ass an engem verschlechtert hätt zou, datt et eng entholl suppressor Roll an gastric carcinogenesis spille kann. VerfÜgung Mir weider propagéieren der funktionell Roll vun ARID1A VerfÜgung zu gastric Zell Linnen. Staatsfinanzen ARID1A VerfÜgung Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen vill inhibited Zell Prolifératioun a Kolonie Équipe. Silencing den Ausdrock vun ARID1A VerfÜgung zu gastric epithelial Zellen verstäerkte bedeitend der Zell Taux. Dës Resultater uginn dass ARID1A VerfÜgung kann en Import Roll spillen entholl Zell Wuesstem zu inhibiting. Kuerzem, funktionell assays vun ARID1A VerfÜgung zu gastric Kriibs Zell Verse Zang et al VerfÜgung. ARID1A ugeholl datt zu entholl-suppressor Aktivitéit [23] noutwänneg. Guan et al VerfÜgung. bewisen, datt den Ausdrock vun Wildwest-Typ Staatsfinanzen ARID1A VerfÜgung genuch ass d'Verbreedung an tumorigenecity vun xenografts mat Mënsch spillt Kriibs Zell Linnen ausser ARID1A VerfÜgung Projet'en ze oofgesinn, iwwerdeems RNS Amëschen-mediated ARID1A VerfÜgung silencing verbessert bewosst Prolifératioun an tumorigenicity zu zwee net-transforméiert Mënsch spillt epithelial Zell Linnen, IOSE-80PC an OSE4 [27]. Dës Donnéeën, zesumme mat eis, proposéiere datt Verloscht vun ARID1A VerfÜgung eng wichteg Roll am Prozess vun carcinogenesis spille kann. VerfÜgung An Conclusioun, hu mir de Verloscht vun bewisen ARID1A IFLA- breakpoint VerfÜgung d'Fuerschung vun den IFLA- Comité vun Sun Yat-sen University Cancer Center guttgeheescht huet, a schrëftlech informéiert Averständnes war vun all Patient an der Etude. VerfÜgung Zell zesummeféieren a Kultur Konditioune Équipe kritt d'gastric Kriibs Zell Linnen, SGC7901, AGS, MGC803, an der gastric GES1 epithelial mucosa Zell Linn sech aus dem Comité vun Type Kultur Collection vun Chinese Akademie vun de Wëssenschaften (Shanghai, China) kritt. D'Zell Strecken an RPMI cultured 1640 Medien mat 10% Hëtzt-Aarbechtslosegkeet An et Bovine serum (FBS) geliwwert. D'Zellen bei 37 ° C an enger humidified Chamber mat 5% CO incubated waren 2. VerfÜgung Mënscherechter Ray Sample den A Ganzen 66 vläit kriibserreegend a iwwereneestëmmen bascht noncancerous Stoffer gastric mucosa sech aus gastric Kriibs Patienten gesammelt op Sonn Yat-sen University Cancer Center tëscht 2009 an 2011, an der Diagnos amgaang gastrectomy war vun agebousst Bedenken confirméiert. Déi 25 vläit kriibserreegend a bascht noncancerous gastric mucosa Stoffer entspriechend benotzt der ARID1A FAQ Ausdrock am Südweste blotting z'entdecken vum 66. vläit Echantillon ausgewielt goufen. No chirurgesch resection, sech frësch Stoffer direkt gouf zu RNAlater (Ambion Galaxy, USA) RNS ofgeschnidden ze verhënneren, bei 4 ° C gespäichert Iwwernuechtung en- Pénétratioun vun RNAlater an der Otemschwieregkeeten ze erlaben an dann bei -80 ° C bis RNS gefruer an FAQ Extraktioun war gesuergt. Aner 224 paraffin-Ënnerbewosstsinn Primärschoul gastric carcinoma Echantillonen, déi tëscht 2003 an 2005 gesammelt goufen haten, sech vun der Sonn Yat-sen University Cancer Center kritt. Keen vun dësen Patienten hu radiotherapy Chimiotherapie virewech ze gesin kritt. De Suivi Daten vun der gastric Kriibs Patienten an dëser Etude gi sinn a komplett. Thes Suivi Priedegt eis am Departement an abegraff Medeziner an Labo Examen all 3 Méint fir d'éischt 2 Joer, all 6 Méint während der drëtter zu fënneften Joer, pro Joer fir eng zousätzlech 5 Joer oder bis Patient Doud, jee nodeems éischt Priedegt. D'histopathological Aart a Etapp vun gastric Kriibs sech no der Critèren vun der Klassifikatioun Weltgesondheetsorganisatioun sech an der TNM Etapp vun der Unioun fir International Cancer Control geplangt. VerfÜgung Reduktioun vun Total RNS a Real-Zäit Chemeschen Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS war mat TRIzol (Invitrogen, Karlsbad, Kalifornien, USA) ofgebaut no de Protokoll d'Hiersteller. Total RNS Konzentratioun gouf duerch Miessunge absorbance bei 260 nm mat engem Nanotechnike DROP spectrophotometer (ND-1000, Thermo Wëssenschaftlech, USA) évaluéieren. Ëmgekéierte Transkriptiouns (RT) den éischten-staarkt vun cDNA zu synthesize war mat M-MLV ëmgedréint transcriptase (Promega, USA) laut den Hiersteller d'Recommandatiounen behandelt mat 2 μg vun insgesamt RNS gesuergt. Déi doraus resultéierend cDNA war dann real-Zäit grouss Hinnen alleguer ënnerworf fir eng Evaluatioun vun der famill mRNA Niveau vun ARID1A VerfÜgung a GAPDH VerfÜgung (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, wéi eng intern Kontroll) mat der folgenden primers: ARID1A VerfÜgung vir: 5'-CTTCAACCTCAGTCAGCTCCCA-3 ", an ëmgedréint: 5'-GGTCACCCACCTCATACTCCTTT-3"; GAPDH VerfÜgung vir: 5'-CTCCTCCTGTTCGACAGTCAGC-3 ", an ëmgedréint: 5'-CCCAATACGACCAAATCCGTT-3". Gene-spezifesch amplification war standing eng Abi 7900HT real-Zäit Hinnen alleguer System benotzt (Life Technologies, Karlsbad, Kalifornien, USA) mat enger 15 μl Hinnen alleguer Mix mat 0,5 μl vun cDNA, 7.5 μl vun 2 x SYBR Green Meeschtesch Mëschung (Invitrogen, Karlsbad , Kalifornien, USA), a 200 nm vun de passenden oligonucleotide primers. De Mix war bei 95 ° C (10 min) virgehëtzten an dann op 95 ° C (30 sec) an 60 ° C (1 min) fir 45 Zykle Kick. Der Resolutioun rop war fir 15 sec op 95 ° C gemooss, 60 ° C fir 15 sec a 95 ° C fir 15 sec. Der CT (loung Zyklus) Wäert vun all Prouf vum loung Zykle mat der Instrument d'Software (SDS 2,3), an der famill Ausdrock vun berechent war ARID1A VerfÜgung mRNA war normalized dem GAPDH VerfÜgung Wäert . Data mat de Komparativ loung Zyklus analyséiert (2 Western Blotting Analys VerfÜgung D'homogenized gastric Kriibs Echantillonen, dorënner entholl an nontumor Stoffer, souwéi Zell Linnen , sech zu Ripa lysis gefiermt lysed, an der lysates vun centrifugation (12.000 Ziichter) bei 4 ° C fir 30 min gesammelt goufen. Ongeféier 50 μg FAQ Echantillon waren dann vun electrophoresis zu engem 12% Natrium dodecyl sulfate polyacrylamide gelies an transferéiert op engem polyvinylidene fluoride Membran getrennt. No Outil d'Net-spezifesch bindend Siten fir 60 min mat 5% Nët-Fett Mëllech, waren d'Schläimhait Nuecht op 4 ° C mat enger Maus monoclonal antibody géint ARID1A (Abgent primär Antibody Company, USA, bei engem 1:1000 dilution) incubated . D'Schläimhait sech gewäsch dann dräimol mat TBST (Tris-gefiermt Salins mat tween-20) fir 10 min an mat der horseradish peroxidase (HRP) -conjugated Kanéngchen anti-Maus IgG antibody (Immunologie Consultants schafft, USA Komedie, bei engem 1: 2000 dilution) bei 37 ° C fir 1 Stonn. No dräi Mëtten, goufen d'Schläimhait vun engem verstäerkte chemiluminescence System (Zell sécher Technology, Danvers, Massachusetts, USA) entwéckelt. D'Band Intensitéit war vun densitometry mat der Quantitéit One Software (Bio-Rad Laboratoiren, Inc. Hercules, CA, USA) gemooss. D'FAQ Niveauen sech normalized fir datt vun GAPDH erwëscht andeems Maus anti-Mënsch GAPDH monoclonal antibody (Shanghai Kangchen, China, bei engem 1:10000 dilution). VerfÜgung Immunohistochemistry Analys VerfÜgung D'Otemschwieregkeeten Rubriken huet deparaffinized mat dimethylbenzene an rehydrated duerch 100%, 95%, 90%, 80% an 70% Ethanol. No dräi Mëtten an PBS (phosphate-gefiermt Salins), waren d'drënner an antigen retrieval gefiermt wouvun 0,01 M Natrium citrate-Salz- Seier (pH = 6.0) fir 15 min an enger Schleck erëm Uewen gekacht. No mat PBS falsch, goufen d'Otemschwieregkeeten Sektiounen mat Primärschoul antibody incubated an der drënner waren dann zu 3% peroxidase Duuscht Léisung (Invitrogen) endogenous peroxidase ze blockéieren rinsed. D'Sektiounen sech dann mat enger Maus monoclonal antibody géint ARID1A (Abgent primär Antibody Company, USA, bei engem 1:300 dilution) bei 4 ° C Iwwernuechtung an duerno mat horseradish peroxidase (HRP) (ChemMateTM DAKO EnVisionTM Detektioun Kit) am Sall incubated incubated Temperatur fir 30 min. Nom Wäschen mat 3, vun PBS, war d'visualization Signal 3'-diaminobenzidine (botzt) Léisung entwéckelt, an all vun der drënner mat hematoxylin sech counterstained. Als negativ Kontrollen, goufen nieft uewendriwwer ausser ëmschriwwen realiséiert, datt se um Iwwernuechtung 4 ° C incubated sech Léisung ouni d'Primärschoul antibody zu erauszesichen. VerfÜgung D'total ARID1A stoung immunostaining wéi d'Zomm vun der Prozent vun positif berechent huet Kierchefënster entholl Zellen an der staining Intensitéit. Kuerz, war de Prozentsaz vun positive staining stoung den 0 (0-9%, negativ), 1 (10% -25%, sporadesch), 2 (26% -50%, Brennwäit) oder 3 (51% -100%, diffusen), an der Intensitéit as 0 (keng staining), 1 (schwaach staining), 2 (moderéiert staining) an 3 (donkel staining). D'total immunostaining stoung et mat dem Wäert vu Prozent komm stoung × staining Intensitéit stoung berechent, déi vun 0 bis 9. Den Ausdrock Niveau vun ARID1A gounge ass definéiert als folgend: "-" (negativ, stoung 0), "+" (schwaach positiv, stoung 1-3), "++" (positiv, stoung 4-6), "+++" (ganz positiv, stoung 7-9). Baséiert op der ARID1A Ausdrock Niveauen, goufen d'gastric Kriibs Patienten an zwou Gruppen ënnerdeelt:. Negativen ARID1A Ausdrock Grupp (ARID1A-) a positiv ARID1A Ausdrock Grupp (ARID1A +, ARID1A ++ oder ARID1A +++) VerfÜgung Expression Plasmid a flüchteg Transfections A eukaryotic Ausdrock plasmid pCMV6-erfaassen der voller-Längt vum Mënsch mat ARID1A VerfÜgung cDNA war vun der Asbio Technology Company (lousoihong, China) kritt. Eidel Vecteure war den negativen Kontroll benotzt. MGC803 Zellen sech zu 6-gutt Placke cultured bis se 85-90% Niewebaach erreecht, an dann flüchteg transfections benotzt Lipofectamine 2000 (Invitrogen) laut den Hiersteller d'Instruktioune gesuergt. Véierzeg-aacht Stonnen no transfection, war Gentherapie Ausdrock vun westlech blotting Analyse iwwerpréift. An dann, Zell Prolifératioun a Kolonie Opstellung gesuergt huet. VerfÜgung RNS Oligonucleotides an Zell Transfections VerfÜgung Fir knockdown vun ARID1A VerfÜgung Ausdrock, goufen d'siRNAs Wierderbuch duerch GenePharma Company (Shanghai, China). D'siRNA Message sech wéi follegt zesummen: siRNA- ARID1A VerfÜgung, Sënn: 5'GCCCUAACAUGGCCAAUAUTT3 ", antisense: 5'AUAUUGGCCAUGUUAGGGCTT3". Déi negativ Kontroll (NC), Sënn: 5'UUCUCCGAACGUGUCACGUTT3 ", antisense: 5'ACGUGACACGUUCGGAGAATT3". 400 pmol siRNA- ARID1A VerfÜgung oder NC goufen an 2 transfected × 10 prolifération Assay VerfÜgung Zell Taux vun MGC803 oder GES1 Zellen vun MTS Zell Prolifératioun assay festgestallt gouf. Zellen sech zu engem 96-Meter Plack op eng Dicht vu 5 × 10 Kolonie Formatioun Assay VerfÜgung Fir d'Kolonie Opstellung assay, ARID1A VerfÜgung -expressing MGC803 Zellen oder Kontroll MGC803 Zellen sech zu enger 6-gutt plated Plack op eng Dicht vu 5 × 10 statistique Analys VerfÜgung Oneenegkeet mRNA an FAQ Ausdrock tëscht entholl Echantillonen an der vläit bascht Net-entholl Otemschwieregkeeten Echantillon waren mat der vläit-Echantillon T-Test bewäert. De χ Aféierung VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
[22]. Eight vun néng Echantillon mat DNA Kopie Zuel Verloscht um 1p36.11 hunn och niddereg ARID1A FAQ Ausdrock, en concordance tëscht DNA Kopie Zuel Verloscht suggeréiert an ARID1A VerfÜgung inactivation. An der exome sequencing Etude vum Wang et al VerfÜgung., Am Ganzen 46 Projet'en war an 32 vun 109 (29%) gastric Kriibs Echantillonen, mat 39 (85%) gekierzt kennen [19] fonnt. Twenty-véier (75%) vun der 32. gastric Kriibs Echantillon mat ARID1A VerfÜgung kennen weisen entweder Verloscht vun oder méi reduzéiert FAQ Ausdrock am Verglach zu deenen ouni ARID1A VerfÜgung stattfannen. Am Géigesaz, sinn et nëmme 6 gastric Kriibs Echantillon weist feelen oder schwaach FAQ Ausdrock an dem Fehlen vun Magnéitfeld ARID1A VerfÜgung stattfannen, wat déi aner Mechanismen mobiliséiert ze bäidroen kënnen ARID1A VerfÜgung inactivation. Kuerzem, Fuerschung aner exome sequencing vun Zang et al VerfÜgung. och zougedréckt ARID1A VerfÜgung kennen an 8% vun gastric Echantillonen, vun deenen 75% verluer oder d'FAQ Ausdrock reduzéiert [23]. Spannen méi, souwuel Studien bewisen héich ARID1A VerfÜgung hire Restaurant zu gastric Kriibs Echantillon mat microsatellite Instabilitéit (MSI) wéi déi mat microsatellite Stabilitéit (Camion wäit). Ausserdem, ass de stattfannen Spektrum vun ARID1A VerfÜgung isoléiert tëscht den zwou genetesch Zorte vun gastric Kriibs, mat meeschte indels an der MSI Aart a méi Single-neucliotide Variatioune vun de Camion wäit Typ. MSI ass wéi indel Projet'en am Nukleotid Widerhuelung (bekannt als microsatellite Regiounen) definéiert Schoss aus DNA fonnt Reparatur Gentherapie inactivation-entschlof Gedächtnis Feeler [24]. genetesch Instabilitéiten, wéi allelic Défaiten an frameshift kennen Genen Équipe zu Zell Prolifératioun Regulatioun, apoptosis an DNA Reparatioun proposéiert wéi d'domat Frankräich Evenementer vun gastric Kriibs, MSI féiert oft zu Heefung vun zousätzleche Kriibs-dinn. Et ass confirméiert ginn, dass MSI zu 25% bis 50% vun sporadesch gastric Kriibs existeiert, eng eenzegaarteg genetesch Typ Krankheet mat verschiddene clinicopathological Fonctiounen definéiren [24]. An der Etude vun Wang et al VerfÜgung., De indel stattfannen Tarif (78%) vun ARID1A VerfÜgung zu MSI gastric Kriibs ass fir déi vun ähnlecher TGFBR2 VerfÜgung zu MSI Colon Kriibs, e gutt etabléiert a System validéiert Chauffer Gentherapie vun MSI inactivated [25]. Dës Donnéeë weisen, datt d'stattfannen vun ARID1A VerfÜgung zesumme mam MSI kënnen eng wichteg Roll an gastric carcinogenesis Leeschtung. Dofir, d'Relatioun tëscht ARID1A VerfÜgung hire Restaurant an MSI Status vun gastric Kriibs, souwéi seng clinicopathological Bedeitung, brauch weider Ermëttlungen an der Zukunft Fuerschung. VerfÜgung
Ausdrock vun gastric Kriibs a seng Korrelatioun mat enger méi malignant phenotype an aarmen hätt an enger grousser Zuel vu Krankheete Echantillon. Zousätzlech, beweist mer datt ARID1A VerfÜgung kënschtlech entholl Zell Wuesstem a Kolonie Opstellung inhibit kann. Fir de beschte vun eisem Wëssen, déi zu der aktueller Etude generéiert Donnéeën vertrieden d'éischte Rapport d'Präsenz vun ARID1A VerfÜgung mat clinicopathological Charakteristiken a Punkto Iwwerliewe vun gastric Kriibs Patienten correlating. Geholl zesumme mat de Resultater vun Wang et al. VerfÜgung an Zang et al VerfÜgung. [19], [23], mir bestätegt weider dass ARID1A VerfÜgung kéint als Kandidat entholl suppressor an prognostic uweist zu gastric carcinogenesis déngen. VerfÜgung spontan a Methode VerfÜgung
Thiopurine kéinte hëllefen eng viral Replikatioun a mënschleche Coronavirus ze stoppen
Schlofqualitéit kéint Indikator fir spéider Alzheimer Krankheet fënnt Studie
Genetesch Tweaking Darmbakterien reduzéiert de Risiko vu Kolorektalkriibs bei Mais fënnt Studie
Haushënn onwahrscheinlech SARS-CoV-2 ze iwwerdroen,
Leaky Darm a mikrobiell Dysbiose kéinte bäidroe fir den Zytokin Stuerm a schwéier kranke COVID-19 Fäll
Mëttelmier Diät fördert e gesonde Alterung mat engem méi gesonde Darmmikrobiom
Nanotechnologie a COVID-19 Diagnos a Behandlung
DEntwécklung vun Nano-Biosensoren an Nanopartikel-baséiert Impfungen a Medikamenter huet en neie Wee fir eng besser Gestioun vun der Coronavirus Krankheet 2019 (COVID-19) Pandemie opgemaach. An engem
Fuerscher hoffen datt Bluttest dee genaue Fibromyalgie diagnostizéiert kéint bannent fënnef Joer verfügbar sinn
DFuerscher vun der Ohio State University hunn Beweiser datt Bluttproben zouverlässeg Fibromyalgie detektéiere kënnen, eng Krankheet déi dacks falsch diagnostizéiert gëtt wéinst senge allgemenge Sympto
Proteinboten aus dem mënschleche Mikrobiom werfen Liicht op d'mënschlech Gesondheet
De mënschleche Kierper gouf fir Joerhonnerte studéiert, awer et ginn ëmmer nach Geheimnisser déi sech nach entfalen. Zum Beispill, et gouf entdeckt datt et Billiounen Bakterien am Kierper liewen, déi,