Background & Ziel VerfÜgung
Gastric Kriibs ass den heefegsten gastrointestinal entholl an Erwuessener an ass déi spektakulärer Form vu mënschlecher Kriibs. Trotz vun der Verbesserungen an Traitementer, ass d'Basisdaten Mechanismus vun gastric carcinogenesis net bekannt. Fir Roman modulators definéieren, datt waat fir tumorgenesis regléieren, do hu mer op Mir-219-2-3p. VerfÜgung
Method VerfÜgung
Chemeschen RT-Hinnen alleguer war Employé de Niveau vum Mir-219-2 ze ermëttelen -3p zu gastric Kriibs (GC) Stoffer (n = 113) an hir gepasst bascht normal Stoffer (n = 113). Kënschtlech Zell Prolifératioun, apoptosis assays, Zell Migratioun, an Invasioun assays sech standing biologescht Auswierkunge vum Mir-219-2-3p entschlësselen. Zanter silencing vun miRNA vum Promoteur CpG Insel methylation eng wichteg Mechanismus zu tumorgenesis kann, sech GC Zellen behandelt mat 5-AZA-2'-deoxycytidine an trichostatin A, an Ausdrock Ännerunge vum Mir-219-2-3p sech duerch grouss dono iwwerpréift RT-Hinnen alleguer. Endlech, war d'methylation Status vun CpG Insel Offloss vum Mir-219-2-3p vun methylation-spezifesch Hinnen alleguer am GC Stoffer analyséiert (n = 22). VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Mir-219- 2-3p war verwandelt-reglementéiert GC an Zell Linnen. Zousätzlech, dokumentéiert den Experimenter déi ënnescht Ausdrock vu Mir-219-2-3p am GC uplanzen mat héichen Schouljoer a spéider Etapp erhéijen. Mëttlerweil, Nofolleg Mir-219-2-3p antiproliferative, proapoptotic, an antimetastatic Rollen a reduzéiert Niveau vun p-ERK1 /2 an GC Zellen. Ausserdeem, 5-AZA-2'-deoxycytidine an trichostatin A fräi Meenungsäusserung (~2 fantastesch) vum Mir-219-2-3p am GC Zellen. Vun methylation-spezifesch Hinnen alleguer, DNA methylation an der Offloss Regioun vum Mir-219-2-3p war an zwou bascht normal Stoffer a Kriibs Stoffer fonnt. Wéi erwaart, huet de methylation Niveau däitlech méi héich, an d'Mir-219-2-3p Grupp verwandelt-reegelen wéi up-reegelen Grupp. VerfÜgung
Konklusiounen VerfÜgung
Mir-219-2-3p as potenziell zu gastric Kriibs Werdegang an Metastasen vun Regulatioun ERK1 /2-Zesummenhang Signal Weeër Équipe, déi e Roman therapeutesch Strategie fir Behandlung vun gastric Kriibs suerge kann. Methylation Mechanismus kann zu modulating den Ausdrock Niveau vum Mir-219-2-3p zu gastric Kriibs Équipe ginn VerfÜgung
Fro:. Lei H, Zou D, Li Z, Luo M, Dong L, Wang B, et al . (2013) MicroRNA-219-2-3p Virtrag als entholl Suppressor zu Gastric Cancer a Ass duerch DNA Methylation reegelen. PLoS NËMMEN 8 (4): e60369. Doi: 10.1371 /journal.pone.0060369 VerfÜgung
Redakter: Arun Rishi, Wayne State University, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung
Arnaque: 14. Dezember 2012; Akzeptéiert: 26. Februar 2013; Publizéiert: April 23, 2013 VerfÜgung
Copyright: © 2013 Lei et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung
Funding:. Dës Aarbecht war déi Subventioune vun der National Natural Science Foundation vu China [2012, 91129716, fir JY] an der Peking Municipal Science &ënnerstëtzt; Technology Kommissioun [2010B071, fir JY]. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung
Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung
Gastric Kriibs (GC) ass de 4 Verschidde prognostic entholl biomarkers am GC wéi mënschlech epidermal Wuesstem Faktor receptor 2 (HER2 ), hunn wiere endothelial Wuesstem Faktor (VEGF), epidermal Wuesstem Faktor receptor (EGFR), mat Krankheet Charakteristiken verbonne ginn an dofir benotzt ginn Patient Gestioun ze informéieren. Zum Beispill, Patienten mat erhéijen datt positiv fir HER2 Test ka mat Stad plus Chimiotherapie [4], a Patienten mat erhéijen behandelt ginn, datt fir VEGF positiven Test ka mat bevacizumab plus Chimiotherapie [5] behandelt ginn. Allerdéngs bleiwen d'molekulare Mechanismen der Entwécklung vun GC Basisdaten eng Erausfuerderung, also zousätzlech Informatiounen biomarkers dringend sinn. VerfÜgung MicroRNAs (miRNA) zu Regulatioun vun Iwwersetzung eng Klass vu klenge RNS Molekülle implizéieren an ofgeschnidden vun mRNAs [6 ]. MiRNAs kruet ze ergänzen Message vun der untranslated Regiounen (UTR) vun hirem Ziel mRNAs "3 an mRNA ofgeschnidden oder respektiv Repressioun [7] induce. Meeschte bekannt Funktiounen vun miRNAs sinn ze negativ Gentherapie Regulatioun Zesummenhang: miRNAs Hammers Gentherapie Ausdrock, normalerweis vun der mRNA Stabilitéit oder FAQ Iwwersetzung interfering. An de leschte Joeren, waren miRNAs gegleeft wéi oncogene oder entholl suppressor Gentherapie ze handelen, an un Kriibs Initiatioun an Werdegang bäidroen vun der Gentherapie Ausdrock Regulatioun [8]. D'Entdeckung vu Kriibs-spezifesch Offloss Regioun hypermethylation vun villen miRNAs huet en epigenetic Mechanismus fir aberrant miRNA Ausdrock bewisen [9], [10]. VerfÜgung Am Mënsch an Mais, do sinn zwee Frankräich loci (Mir-219- 1 an Mir-219-2) deen Mir-219 Virleefer gët gerannt. Mir-219-1 läit op chromosome 6 (MI0000296) a mir-219-2 läit op chromosome 9 (MI0000740) [11] (Figebam. 1A). Ofwécklung vun de Virleefer gët vun dicer generéiert dräi eeler miRNAs: Mir-219-5p vun de 5 "goung vu béiden Etüd, a Mir-219-1-3p an Mir-219-2-3p aus der 3 'Enn vun Ethikcode Mir-219-1 an Pré-Mir-219-2, bzw.. Zanter de Som Regioun vun dësen dräi eeler Produiten eenzegaarteg ass, ass all miRNA eenzegaarteg Ziler ze regléieren virausgesot. Obwuel Mir-219-5p bis erof-regulariséiert ginn ass bekannt an Multiple Kriibs wéi malignant astrocytoma [12] an hepatocellular carcinoma [13], huet den Ausdrock vun Mir-219-1-3p an Mir-219-2-3p net gi studéiert. Spannen, Mir-199b an Mir-219-2-3p Genen sinn am Atomkraaftwierk zu engem Segment vu chromosome 9q34.11 (Figebam. 1A) läit. A leschter Etude gewisen, datt Mir-199b-5p war verwandelt-reglementéiert medulloblastoma vun methylation vun engem CpG Insel 3 KB Offloss vun der 5'-Site vum Mir-199b-5p Promoteur [14]. Zanter DNA methylation grouss Regiounen vun chromatin a regelt d'Reunioun vun fernen Genen Afloss kann, ass et néideg, fir ob Mir-219-2-3p Minus-reglementéiert a vun methylation als Mir-199b-5p zu Kriibs reegelen. An dëser Etude, hunn mer dat Mir-219-2-3p war verwandelt-reglementéiert GC Stoffer a mat ëmmer phenotypes vun GC assoziéiert. Desweideren, bass-Aféierung vum Mir-219-2-3p reduzéiert d'Nuetsvolen vun GC Zellen an entschlof Zell apoptosis suggeréiert datt Mir-219-2-3p engem Kandidat entholl suppressor am GC war. Weider methylation Analyse vum Mir-219-2-3p Promoteur uginn, datt seng Ausdrock vun methylation vu soll CpG Inselen gewëssermoossen reglementéiert ass. Endlech, hunn mer dat Mir-219-2-3p als entholl suppressor protokolléiert der Aktivitéit vun ERK1 /2 Signal Passerelle an GC Zellen duerch inhibiting. VerfÜgung Mir-219-2- 3p war am GC an GC Zell Linnen VerfÜgung fir Bewäert Ausdrock vu Mir-219-2-3p am GC, TaqMan RT-Hinnen alleguer Analyse gouf vun 113 Puer GC Stoffer gehaal an stemmt bascht normal Otemschwieregkeeten Echantillon differentially ausgedréckt . Als Verglach mat normal Otemschwieregkeeten Echantillonen, méi ewéi d'Halschent vun der alleréischter nidderegen Niveau vum Mir-219-2-3p (58%, 65 vun 113. Lalumi 1B) Schatzkummer erhéijen. Ausserdeem, véier Patienten deem Ausdrock vu Mir-219-2-3p sech däitlech erof-reegelen sech dëse Match gaangen (Figebam. 1D). De Mir-219-2-3p Ausdrock vun deene Patienten a véier GC Zell Linnen (MGC-803, HGC-27, MKN-45, SGC-7901) war opgedeckt analyséiert dass Mir-219-2-3p och war down- reglementéiert GC Zellen (Figebam. 1E). Dës Resultater ugeholl datt verwandelt-reegelen Mir-219-2-3p engem heefeg Event am mënschleche GC war a vläicht am gastric carcinogenesis Équipe ginn. Well vun der universeller verwandelt-Regulatioun vum Mir-219-2-3p zu getest GC Zell Linnen, MGC-803 an HGC-27 goufen fir weider studéieren zoufälleg gewielt. VerfÜgung Bezéiung tëscht clinicopathological Facteuren an Mir-219- 2-3p Ausdrock am GC VerfÜgung Dës Etude abegraff 113 GC Patienten. Fir d'Korrelatioun tëscht Mir-219-2-3p Ausdrock an clinicopathological Charakteristiken diskutéieren, Patienten goufen an Gruppe mat verwandelt-Regulatioun ënnerdeelt a weider-Regulatioun. Wéi an der Tabell 1 an fig.1C gewisen, eng statistesch relevant association war tëscht den Ausdrock vun Mir-219-2-3p an GC Medeziner Etapp observéiert. D'Patienten mat nidderegen Niveau vum Mir-219-2-3p Ausdrock war mat héije-Schouljoer an spéiden-Etapp erhéijen (p = 0,047, onofhängeg-Echantillon t Test) assoziéiert gin. Dës Donnéeë ugeholl, datt hire Restaurant vum Mir-219-2-3p konnt an GC Werdegang Équipe ginn. VerfÜgung Overexpression vum Mir-219-2-3p am GC Zellen bremst Zell Prolifératioun an Zell Iwwerliewe VerfÜgung déi bemierkenswäert Reduktioun vum mir-219-2-3p Ausdrock am GC Echantillon gefördert eis méiglech biologesch Bedeitung vum mir-219-2-3p zu tumorgenesis ze entdecken. Tatsaach, datt Mir-219-2-3p eng Roll an der Regulatioun vun Zell Prolifératioun matgereest [15], MGC-803 an HGC-27 Zellen sech transfected mat Mir-219-2-3p an Alaister mimics an analyséiert fir Zell Wuesstem, Zell apoptosis an Zell Zyklus Werdegang bzw.. Éischt vun all, war RT-Hinnen alleguer benotzt den Niveau vum Mir-219-2-3p der overexpression Experimenter ze moossen. Mir hu fonnt, datt Mir-219-2-3p fräi vun méi ewéi 100 klappt an miRNA transfected MGC-803 an HGC-27 Zellen (Fig.2A). Doriwwer eraus, war d'CCK-8 Prolifératioun assay datt Zell Taux an Mir-219-2-3p mimics-transfected MGC-803 an HGC-27 Zellen wou mat Silessia-transfected Zellen oder onbehandelt Zellen (Figebam. 2B) am Verglach reduzéiert gewisen. No transfection, war d'inhibition Verhältnis 26% (48 h) an 28% (96 h) an der MGC-803 Zellen an 13% (72 h) an 14% (96 h) an HGC-27 Zellen. Dës Resultater ugeholl, datt Mir-219-2-3p Exemplar an der negativer Regulatioun vun Zell Wuesstem Équipe war. Allerdéngs war et kee groussen Effet op Zell Zyklus verhaft an Mir-219-2-3p behandelt GC Zellen (Figebam. S1). Fir Adress ob up-Regulatioun vum Mir-219-2-3p induce géif GC Zell apoptosis an Zell Doud, d'Zuel vun fréi apoptotic MGC-803 an HGC-27 Zellen folgenden Behandlung mat Mir-219-2-3p mimics gouf iwwerpréift. Wéi erwaart, puer fréi apoptotic Zellen (10% zu MGC-803 oder 2,9% vun HGC-27) huet sech an de Match-behandelt Zellen fonnt, hierkommen Mir-219-2-3p mimics Behandlung ze iwwerdribblen fir de Prozentsaz vun fréi apoptotic Zellen (17,5 % vun MGC-803 oder 8.3 an HGC-27) wéi déi vun Annexin V staining (Figebam. 2C) Sujet. Dofir, ofgeschloss mir dat Mir-219-2-3p am GC Zellen Zell Iwwerliewe Afloss hätt. VerfÜgung Overexpression vum Mir-219-2-3p am GC Zellen Zell Wanderung an Invasioun VerfÜgung bremst Fir weider entdecken ob Mir-219-2-3p mat Werdegang vun GC, gudde Meter Heelung a transwell assay assoziéiert ass sech standing den Effet vum Mir-219-2-3p Ausdrock op den Opbau an invasiv Behuele vun MGC-803 an HGC- ze analyséieren 27 Zellen. Mir hu fonnt, datt Aféierung vum Mir-219-2-3p an MGC-803 an HGC-27 Zellen während der Fermeture vun engem kënschtlesche Meter an engem däitleche Minus vun Zell Migratioun schéinen engem Spuenien wär monolayer hunn iwwer (Figebam. 3A). Dës Zellen sech am serum-gratis mëttel- am Laf vun enger verkënnegt haten ze suergen, datt keng Lamb Opbau Verhalen net vun verännert Zell Prolifératioun beaflosst ginn hätt. Zousätzlech, Restauratioun vum Mir-219-2-3p inhibited Trainer d'normalerweis staark invasiv Kapazitéit vun MGC-803 an HGC-27 Zellen, déi niddreg endogenous Niveau vum Mir-219-2-3p (Figebam. 3B) duerchgefouert. Dës Resultater uginn dass Mir-219-2-3p overexpression dréit zu Regulatioun vun GC Zell motility an Werdegang kënschtlech. VerfÜgung Mir-219-2-3p Ausdrock ass epigenetically reegelen VerfÜgung op der Basis virun Conclusiounen, schléissen mir dat mir-219-2-3p eng wichteg regulator am GC war. Allerdéngs huet de reglementaresche Mechanisme vum Mir-219-2-3p Ausdrock nach onbekannt. Zënter ville miRNAs sech den Ziler vun methylation Regelung, wéi Mir-9 identifizéiert, Mir-34b /c an Mir-148a zu metastatic carcinomas [16], a Mir-137 an Mir-193a zu mëndlech Kriibs [17], miR- 193b an mir-145 an Aarbecht Kriibs [18], [19], huet mir d'reglementaresche Mechanismus vum mir-219-2-3p Ausdrock aus sengem Frankräich methylation ze analyséieren. Nom Frankräich Regioun analyséiert de Bord-219-2-3p Gentherapie Rennsport, identifizéiert mir eng grouss CpG Insel (Figebam. 4A). Ze ermëttelen, ob Mir-219-2-3p epigenetically am GC reglementéiert war, MGC-803, HGC-27 Zellen sech mat demethyltransferase inhibitor behandelt, 5-AZA-2'-deoxycytidine (5-December-CDR) an der histone-deacetylase inhibitor trichostatin A (TSA). Dann de Begrëff vun Mir-219-2-3p vun RT-Hinnen alleguer analyséieren (Figebam. 4B). D'Resultater gewisen, datt den Ausdrock vun Mir-219-2-3p an zwou Situatiounen an-reglementéiert ass: fir de 5-December-CDR Behandlung, dem Wëllen vum Mir-219-2-3p up-gereegelt gouf zu MGC-803 ( 5-December-CDR 1,5 μmol /L; 2.14-fantastesch) an HGC-27 (5-December-CDR 0,5 μmol /L; 3.07-fantastesch) am Verglach mat DMSO behandelt Kontroll Grupp; fir de 5-December-CDR an TSA geschéckt Behandlung, war den Ausdrock vun Mir-219-2-3p vill méi héich an MGC-803 (5.-December-CDR 1,5 μmol /L; 1.98-fantastesch) an HGC-27 (5 -Aza-CDR 1,5 μmol /L; 1.28-fantastesch) am Verglach mat TSA Kontroll Grupp. Dës Resultater uginn dass epigenetic Faktoren Mir-219-2-3p Ausdrock am GC Afloss hätt. Synergy vun demethylation an histone deacetylase inhibition Nerve der bass-Ausdrock vun Mir-219-2-3p am GC. Fir weider entdecken ob Mir-219-2-3p mat methylation vun GC verbonne war, iwwerpréift mir de methylation Status vun der Raumstatioun-219-2-3p Offloss Regioun mat methylation-spezifesch Hinnen alleguer (MSP;. Lalumi 4C). 22 Puer Stoffer (Primärschoul erhéijen an hir gepasst bascht normal Stoffer) an der 113 Puer gewielt goufen, dorënner 11 Patienten, déi ënnescht Mir-219-2-3p Niveauen haat (verwandelt-Regulatioun Grupp) a 11 Patiente wien haat héich Mir-219 -2-3p Niveauen (up-Regulatioun Grupp). Mir hu fonnt, datt DNA methylation an Offloss Regioune vum Mir-219-2-3p zu souwuel normal Stoffer a Kriibs Stoffer bascht vierdrun. Allerdéngs war d'hypermethylation Verhältnis vun Offloss Regioun vum Mir-219-2-3p Gentherapie am Ugrëff-Regulatioun Grupp 63,6% (7 vun 11), déi méi héich wéi déi an-Regulatioun Grupp war (36.3%, 4 vun de 11 ). Dës Resultater ugeholl, datt d'methylation Niveau vun der Offloss CpG Regioun vum Mir-219-2-3p héich war an der Mir-219-2-3p verwandelt-reegelen Grupp wéi an der up-reegelen eent. VerfÜgung Overexpression vum Mir-219-2-3p dampens ERK1 /2 sécher Passerelle VerfÜgung Activatiounscode vun ERK1 /2 Passerelle och zu verschiddenen entholl Typen, wéi GC [20], pancreatic Kriibs [21] an Broscht Kriibs dokumentéiert gouf [ ,,,0],22]. Virdrun Etuden hunn d'Wichtegkeet vun ERK1 /2 sécher Passerelle an der Regulatioun vun Migratioun, Iwwerfall a Metastasen vun Kriibs Zell Linnen [23] gewisen. Ze ermëttelen, ob Mir-219-2-3p Zell Aktivitéiten duerch ERK1 /2 Passerelle betreffen, huet sech d'phosphorylation Niveau vun ERK1 /2 an MGC-803 an HGC-27 Zellen der Mir-219-2-3p overexpression iwwerpréift. Bewosst Niveau vun p-ERK1 /2 ofgeholl bedeitend an Mir-219-2-3p mimics-transfected Zellen wéi mat Silessia-transfected oder onbehandelt Zellen Verglach. Allerdéngs war keng kloer Differenz am Ganzen ERK1 /2 Niveau observéiert (Figebam. 5A). Dës Conclusiounen ugeholl, datt d'denke GC Zell Wuesstem kéint deelweis wéinst Noutbrems ERK1 /2 Weeër. VerfÜgung Bioinformatik Approche fir potentiell Ziler vum Mir-219-2-3p VerfÜgung zu Sich MiRNAs Gentherapie well Ausdrock vun mat hir Zil- mRNAs geplatzt mRNA ofgeschnidden oder respektiv Repressioun proposéiert. Fir weider de Mechanismus vum Mir-219-2-3p am GC ermëttelen, mir bioinformatically (TargetScan Netflix 5.2 an miRDB) an System Mir-219-2-3p am GC agebonne, an hunn d'Genen geziilte vum Mir-219-2- 3p (Table S2). Vun der 371 virausgesot Ziler vum Mir-219-2-3p, 31 vun hinnen héich Potential gewisen well se duerch zwee Programmer virausgesot huet, iwwerdeems anerer nëmmen duerch ee vun de Programmer virausgesot huet. Vun dësen 31 Genen, ERBB3, MAPK8, SCL7A11, YOD1, TBK1, goufen SOX4 fonnt, déi virdrun publizéiert Aarbechten oncogene oder apoptosis-Zesummenhang Genen ze ginn. (Figebam. 5B a 5C). VerfÜgung An de leschte Joren huet alldeeglech Beweiser oncologists gefouert dass unrevealed molekulare Faktore ze spekuléieren, besonnesch Net-coding RNAs virdrun als klengen "Junk," Leeschtung wichteg Roll an tumorigenesis an entholl Werdegang. Demno op hir mRNA Ziler, kann miRNAs Funktioun als entholl suppressors oder Promoteuren vun oncogenesis. Allerdéngs hunn d'Mechanismussen, déi miRNAs dysregulated net dicht studéiert ginn, dorënner aberrant miRNA biogenesis an Transkriptiouns [24], [25], epigenetic Verfall [26], [27], an amplification oder Verloscht vu Frankräich Regiounen datt miRNAs [28] gerannt . VerfÜgung Well an dësem Rapport gewisen, mir den Ausdrock vun mir-219-2-3p zu 113 GC Patienten a fonnt analyséiert, datt de Niveau vun GC gin ënneschten schéngen. Obwuel Mir-219-2-3p enk Zesummenhang gemellt gouf zu zockerkrank retinopathy ginn [29], oligodendrocytes [15], Alzheimer Krankheet [30] an Gehirtumoren [12], bleift hir Funktioun am GC alles ze gin. Ausserdeem, mir gewisen, datt s-Ausdrock vun Mir-219-2-3p am GC Zellen am Aféierungs- vun Zell apoptosis duerchgesat a reduzéiert Zell Nuetsvolen. Dës Resultater erlaabt eis, datt verwandelt-Regulatioun vum Mir-219-2-3p ze spekuléieren vläicht e Survival Virdeel fir GC Zellen gëtt. Allerdéngs ass de Mechanismus responsabel fir Mir-219-2-3p verwandelt-Regulatioun am GC nach onbekannt. Well de Verloscht um 9q34.11, wou Mir-219-2-3p wellkomm ass, seelen an GC [31] fonnt gëtt, ass et onwahrscheinlech, datt allelic Verloscht fir seng verwandelt-Regulatioun responsabel ass. Wéinst dem fonnt mir dat Mir-219-2-3p Ofstand weider-reegelen wann GC Zellen, MGC-803 an HGC-27, mat zwou behandelt goufen 5-December-CDR an TSA. Zousätzlech, verréid computational Analyse datt Mir-219-2-3p zu engem CpG Insel op chromosome 9q34.11 etabléiert ass. Dofir, schéngt et méiglech, datt DNA methylation an histone deacetylation vläicht mat Mir-219-2-3p Regulatioun verbonne ginn. Vun MSP Echantillon methylation Ofstänn an der Offloss Regioun vum Mir-219-2-3p nogewise gouf héich an d'Mir-219-2-3p verwandelt-reegelen Grupp wéi an der up-reegelen Grupp. Dës Spezifizitéit aménagéierten d'Hypothes vun enger Bezéiung tëscht Mir-219-2-3p Ausdrock an DNA methylation. Am Allgemengen, proposéiert de Resultater datt methylation eng wichteg Mechanismus fir Mir-219-2-3p verwandelt-Regulatioun am GC war. VerfÜgung Mir standing Cepheid vun TargetScan an miRDB Programmer an fonnt dass 6 Genen potentiell Ziler vun Mir kéint -219-2-3p. Ënnert de Kandidaten Ziler vum Mir-219-2-3p, déi receptor tyrosine kinases ERBB3 (epidermal Wuesstem Faktor receptor Famill) Tintin eis Opmierksamkeet. Héich Niveaue vu ERBB3 ass staark mat entholl Werdegang an aarme hätt vun Patienten mat GC verbonne [32] - [34] an der EGFR kinase inhibitors gefitinib konnt EGFR an ERBB2 Aktivatioun vun ERBB3 verhënneren. Mëttlerweil, ERBB3 Ausdrock déngt och als eng effikass Estimatioun vun Empfindlechkeet op gefitinib [35]. Et ass bekannt, datt repressed ERBB3 Transkriptiouns bremst CASCADES aus ERK1 /2 Weeër [36] sécher. Allerdéngs, muss de virausgesot Zil- Gene weider experimentally validéiert ginn. Desweideren, kann miRNAs laut Funktioun zu engem combinatorial Kreesleef Modell, an deem eng eenzeg miRNA Multiple mRNAs Zil- kënnen, an e puer coexpressed miRNAs vläicht eng eenzeg mRNA viséieren. Rezent Studien hu proposéiert, datt déi biologesch Konzept vun "een Hit-Multiple Ziler" kéint an Medeziner therapeutics benotzt ginn [37]. Et ass wahrscheinlech, datt eng spezifesch miRNA duerch kooperativer Funktioun kann erof-Regulatioun vun Multiple Ziler an miRNAs Funktioun och vun der Iwwersetzung vun hirem Ziel Genen suppressing. Fir ze wëssen soll déi voll Impakt vun engem miRNA, Nepgen-grouss proteomic Studie gemaach ginn. VerfÜgung An Conclusioun, eisem Ausdrock a funktionell Studien virgeschlo, dass Mir-219-2-3p differentially vun methylation Mechanismus ausgedréckt huet an no engem tumoral Ennerdréckung Funktioun vun ERK1 /2-Zesummenhang Signal Weeër an GC Regulatioun. Mëttlerweil, den ënneschten Ausdrock vu Mir-219-2-3p am GC uplanzen war mat héijer Schouljoer a spéider Phase soll. Gesinn Ausdrock vu Mir-219-2-3p op GC Zellen Trupen Zell Prolifératioun, Migratioun, Iwwerfall a entschlof apoptosis uginn datt-miRNA baséiert theraputic Muster als Grondlag fir d'Entwécklung vun Roman Potential Therapien an gastric Kriibs déngen kéinten. VerfÜgung Ray uplanzen VerfÜgung Gastric erhéijen an hir morphologically normal Stoffer (matzen > 3 cm ewech vun der entholl) waren tëscht November 2009 an November 2011 aus 113 GC Patiente kritt amgaang Agrëff bei Cancer Hospital vun Chinese Academy vun Medical Sciences (CICAMS, n = 21), Chinese Pla Generalsekretär Klinik (301 Spidol, n = 31), an der éischt laizistesch Hospital vun Shanxi Medical University (n = 61). D'Benotzung vun der Otemschwieregkeeten Echantillon fir all Experiment war déi ethesch Verwaltungsrot vum Institut vun Grondakommes Medical Sciences, Chinese Academy vun Medical Sciences guttgeheescht. All Participant gëtt hir richteg informéiert Zoustëmmung zu dëser Etude, an hir richteg informéiert Autorisatioune goufen opgeschriwwe fir matzemaachen. Dësen Accord Prozess huet och vun der Ethik Comité ofgeseent. Ray Echantillonen an zwee Deeler geschnidde goufen, eent war fir histopathological Diagnos mat 10% formalin fest, an den aneren huet direkt an flëssegem Stéckstoff virgezunnen-gefruer, an op -196 ° C an flëssegem Stéckstoff bis RNS Extraktioun gespäichert. Dës group huet aus 95 Männercher, 17 Weibercher an een ouni Geschlecht Informatiounen mat engem Steiren Alter vun 58 Joer (Rei, 31-82 Joer) .Formalin-fix paraffin-Ënnerbewosstsinn Otemschwieregkeeten Bleck vum GC aus der Cancer Hospital vun Chinese Academy gesammelt goufen vun Medical Sciences (CICAMS, n = 4) tëscht 2009 an 2011 wéinst eenzel Ënnerscheeder tëscht Patienten, gefeelt mir Informatioune vun e puer clinicopathologic Daten. D'Benotzung vun der Otemschwieregkeeten Echantillon fir all Experiment war duerch all d'Patienten a vun Ethik Comité vun der Institutioun guttgeheescht. De Charakter vun Patienten sinn an Table 1. VerfÜgung Zell Kulturen a Transfection VerfÜgung A insgesamt 4 Mënsch GC Zell Linnen MGC-803 (mucinous gastric Kriibs, schlecht ënnerscheet), HGC-27 beschriwwen ( metastatic lymph Node, Strenz carcinoma), MKN-45 (Signet Ring carcinoma schlecht ënnerscheet), SGC-7901 (adenocarcinoma, mëttelméisseg ënnerscheet) waren an dëser Etude iwwerpréift. D'MGC-803 HGC-27, MKN-45, SGC-7901 Zell Linn war vun der Zell Ressourcen-Center vun Institut vun Grondakommes Medical Sciences, Chinese Academy vun Medical Sciences a Korea Unioun Medical College (Peking, China) kaaft. , Deen mat 10% An et Bovine serum (FBS; PAA, Spectateure, Éisträich) a streptomycin (100 μg /ml), penicillin (100 U MGC-803 war am Dulbecco d'geännert Eagle mëttelfristeg (;; Invitrogen Life Technologies, Däitschland Gibco) propagated /ml). D'HGC-27, MKN-45, SGC-7901 goufen am RPMI 1640 mëttelfristeg (PAA) mat 10% FBS (PAA) ergänzt haten. De Mënsch GC Zell Linnen MGC-803, HGC-27 mat Mir-219-2-3p mimics transfected waren an negativ Kontroll miRNA mimics (GenePharma; Shanghai, China, Table S1) op engem Finale Konzentratioun vun 10 nmol /L benotzt Dharmafect 1 (Thermo Fisher; IL, USA) am Aklang mat der Uweisungen d'Hiersteller VerfÜgung TaqMan RT-Hinnen alleguer fir miRNA Expression VerfÜgung Total RNS war vun der Zellen an Stoffer mat Trizol reagent (Invitrogen, ofgebaut Calsbad. , CA, USA). MiRNAs sech vun real-Zäit Hinnen alleguer mat TaqMan MicroRNA assay (Invitrogen, USA) quantitated. Éischt-staarkt ergänzen DNA (cDNA) Synthes gouf vum 1 μg vun insgesamt RNS zu 12 μl vun final Volumen mat 2 M Desaccord-Glück primer duerchgefouert, 10 mm dNTP Mix (Invitrogen, USA). De Mix war Plack op 65 ° C an 5 min, an dann mat 5 × RT gefiermt gemëscht, 0,1 M DTT, 200 U /μl MultiScribe transcriptase an 40 U /μl RNase inhibitor ëmgedréint (Invitrogen, USA). De Mix war Plack um 37 ° C fir 55 min, 70 ° C fir 15 min an dann bei -20 ° C ofgehalen. Real-Zäit Hinnen alleguer war mat engem Standard TaqMan Hinnen alleguer Protokoll gesuergt. Déi 20 μl PCRs Reaktioune abegraff 1 μl vun RT Produit, 1 × Universal TaqMan Master Mix an 1 × TaqMan Studiebäihëllefe /primer Mëschung (Invitrogen, USA, Table S1). All RT Reaktioune och kee-Skelett Kontrollen waren am triplicate lafen. All mRNA quantification Donnéeën war bis U6 normalized. Der relativer Montant vun ët war mat der Komparativ CT Method berechent. VerfÜgung 5-December-CDR an Trichostatin Eng Behandlung vun Zell Linnen VerfÜgung GC Zell Linnen MGC-803 mat 5-aza- behandelt goufen 2'-deoxycytidine (5-December-CDR; Fläch-Aldrich, USA) op 0,7 μmol /L 1.5 μmol /L, 3 μmol /L an HGC-27 goufen behandelt mat 5-December-CDR op 0,5 μmol /L, 1 μmol /L 1.5 μmol /L fir 3 Deeg oder 300 nmol /L trichostatin a (TSA; Fläch-Aldrich, USA) fir 24 Stonnen. Fir d'Kombinatioun Behandlung, goufen Zellen fir 48 Stonnen éischtens mat 5-December-CDR behandelt. Dunn TSA (300 nmol /L) war ugebaut, an d'Zellen sech fir eng zousätzlech 24 Stonnen behandelt. Kultur mëttelfristeg mat Drogen huet all 24 Stonnen ersat. RNS vun Zell Linnen war vun der Produktioun mat TRIzol reagent folgenden d'Instruktioune sidd. cDNA Synthes war virdrun ëmschriwwen duerchgefouert, an 1 ml vun der verdënntem cDNA fir all Prouf war Implikatioune vun RT-Hinnen alleguer mat de Protokoll virdru beschriwwen. VerfÜgung DNA Isolatioun a bisulfite Modifikatioun VerfÜgung Frankräich DNA war vun -196 ° C an flëssegem Stéckstoff Primärschoul erhéijen kritt, an hir bascht normal Stoffer (n = 22, och 11 Patienten, déi Ausdrock vun Mir-219-2-3p sech verwandelt-reglementéiert an déi aner sech weider-reegelen) reagéiert an benotzt Biomed DNA Kit (Biomed, Peking, China) laut den Hiersteller Uweisungen. (; Hilden, Däitschland QIAGEN) Bisulfite Behandlung an Erhuelung vun Echantillon waren mat der Epitect Bisulfite Kit duerchgefouert. Frankräich DNA (2 μg) zu 20 μl Waasser war fir all Reaktioun an gemëscht mat 85 μl bisulfite mix an 35 μl DNA schützen gefiermt ginn. Bisulfite Ëmbau gouf op engem thermocycler standing wéi follegt: 99 ° C fir 5 min, 60 ° C fir 25 min, 99 ° C fir 5 min, 60 ° C fir 85 min, 99 ° C fir 5 min, 60 ° C fir 175 min an 20 ° C festhält. D'bisulfite-behandelt DNA war vun Epitect spin Kolonn erholl an dono Nepgen d'Effizienz vun bisulfite Konversioun ze confirméieren. VerfÜgung Methylation Analyse VerfÜgung MSP war benotzt analyséieren methylation vum Mir-219-2-3p Offloss Regioun zu Zell Linnen an Stoffer. Methprimer war benotzt MSP primer zu Design (Table S1). MSP Reaktiounen op nei primers benotzt Methylated positiver Kontroll (M-DNA) optiméiert, déi mat Terrainen kënschtlech behandelt normale Mënsch Randerscheinung lymphocyte DNA benotzen ech methyltransferase (New England Biolabs, Beverly, MA). Den DNA vun zwee normale Mënsch Randerscheinung lymphocytes war wéi normal Kontroll benotzt. Halbzeit Hinnen alleguer aus zwou Phasë: Phase 1 eng initial denaturation vun 95 ° C an 5 min mat abegraff, gefollegt vun 45 Zykle vun denaturation bei 95 ° C fir 30 Spiller, annealing um Variabel Temperaturen fir 30 ass, a lues op 72 ° C fir 40 Spiller. Am éischte Cycle, war d'annealing Temperatur Formatioun zu 58 ° C an, bei all eenzel vun de 10 Kierzunge Monaco, war d'annealing Temperatur vun 0,6 ° C ofgeholl. Phase 2 ofgeschloss vun 35 Zykle vun 95 ° C fir 30 ass, 52 ° C fir 30 ass, an 72 ° C fir 40 ass. MSP Produiten sech op 3% polyacrylamide gels analyséiert VerfÜgung Zell Prolifératioun, apoptosis, an Zell Zyklus assay VerfÜgung BTS sech zu 10% CCK-8 incubated. (Dojindo; Kumamoto, Japan) an normal verdënntem Kultur mëttelfristeg bei 37 ° C bis visuellen Faarf Ëmbau geschitt. Prolifération Tariffer sech op 0 alles, 24, 48, 72, 96 Stonnen no transfection. D'absorbance vun all gutt war mat engem microplate Lieser bei 450 nm a 630 nm Formatioun gemooss. All Experiment an quadruplicate gesuergt. D'apoptosis assay op MGC-803 an HGC-27 Zell Linnen 72 Stonnen no transfection mat de PE Annexin V Apoptosis Detektioun Kit ech (BD Pharmingen; San Diego, CA, USA) Leeschtung war an analyséiert vum fluorescence-ageschalt Zell zortéieren (FACS) . Zell Zyklus Analyse gouf bzw. op MGC-803 an HGC-27 Zell Linnen 48 Stonnen no transfection mat Mir-219-2-3p mimics a war gesuergt. Zellen sech zweemol mam kal PBS recoltéiert, gewäsch, an Äis-kal 70% Ethanol fix, an mat propidium Kaliumiodid (PI) an RNase A incubated, dann duerch FACS analyséiert. All Prouf war zu triplicate lafen. VerfÜgung Zell Wanderung an Invasioun assays VerfÜgung MGC-803 an HGC-27 Zellen goufen ugebaut op 12-Meter Plastik Platen ze Niewebaach a behandelt mat Alaister oder Mir-219 -2-3p mimics. 24 Stonnen no transfection, linear Null Wonnen (an triplicate) goufen op d'Spuenien wär Zell monolayers eng 200 μl Pipette Tipp benotzt. Fir Zellen aus der Zell Zyklus virun wounding ewechhuelen, Zellen sech am serum-gratis mëttelfristeg haten. Fir migrated Zellen an Meter verkënnegt visualiséieren, ware Biller op 0 geholl, 12, 24, 36, 48, 60 an 72 h Stonnen. A Ganzen zéng Beräicher sech zoufälleg aus all gutt an d'Zellen am dräi Wells vun all Grupp ausgewielt goufen zum laachen. Fir d'Invasioun assays, no 24 Stonnen transfection, 1 × 10 Protein Isolatioun a westlech blotting VerfÜgung Um uginn Mol, MGC-803 Zellen an HGC-27 Zellen sech am Äis-kal PBS gesammelt an op Äis lysed zu kaal Virbereedung vun geännert radioimmunoprecipitation gefiermt mat protease inhibitors ergänzt. Protein Konzentratioun war vun der BCA Protein Assay Kit (Bio-Rad, Milan, Italien) gläichen Deeler vu Proteinen goufen analyséiert vun SDS-PAGE (10% acrylamide) alles. Gels sech op nitrocellulose Schläimhait (Millipore, Bedford, MA, USA) electroblotted. Fir immunoblot Experimenter, Schläimhait sech fir 2 h mat 5% Nët-Fett dréchen Mëllech an Tris-gefiermt Salins virbildlech mat 0,1% Tween-20, an bei 4 ° C iwwer Nuecht mat der Primärschoul antibody incubated. Detectioun war vun peroxidase-conjugated Secondaire antibodies mat der verstäerkter chemiluminescence System gesuergt. Primärschoul antibodies benotzt goufen: GAPDH aus Zhong-Shan JinQiao (Peking, China); ERK1 /2 (Kanéngchen anti-ERK1 /2, New England Biolab, NEB) an phospho-ERK1 /2 (Kanéngchen anti-phospho-ERK1 /2, New England Biolab, NEB) VerfÜgung Histologie VerfÜgung Stoffer goufen Iwwernuechtung zu gefiermt formalin fix, an paraffin Ënnerbewosstsinn, Géigewier an 3-μm deck, an Kierchefënster mat hematoxylin-eosin (H & E). staining VerfÜgung Bioinformatik an statistique Analysë vun Donnéeën VerfÜgung <
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Lungemikrobiom viraussoen d'Gravitéit vun der COVID-19 Krankheet
Mikroben kéinte fatal Resultater bei ventiléierte COVID-19 Patienten viraussoen
Darmbakteriell Ännerungen beaflossen d'Lupusbehandlungsresultater an der Schwangerschaft
Nei Strategie kann d'Gutt-Gehir Kommunikatioun stäerken
Bakterien am Gebuertskanal verbonne mat engem nidderegen Risiko fir Eierstockskriibs
Firwat brauch ech eng Koloskopie?
Nei Studie kéint hëllefen fatale Infektiounen bei Puppelcher ze vermeiden
Virzäiteg Puppelcher gebuer virum 28-30 Woche vum Liewen hunn e grousse Risiko fir vill Komplikatiounen, ënner deenen dChancen fir ze stierwen un enger Infektioun déi am Darm ufänkt ganz grouss sinn.
Probiotika kënnen hëllefen Ënnerernährung an den nächsten zwee Joerzéngten ze bekämpfen,
seet de Bill Gates Probiotika oder gutt Bakterien hu versprach am Potenzial fir e gesonde Darm zerhalen. Vill Studien hunn Beweiser iwwer dGesondheetsvirdeeler vu Probiotika geliwwert. Elo, de populär
Éischt Befunde vum Human Microbiome Project hunn "Honnerte vu spéider Studien" ausgeléist
De Human Microbiome Project (HMP) ass eng Initiativ entwéckelt vun den National Institutes of Health fir de mënschleche Mikrobiom a béid gesonde Erwuessener an an deene mat spezifesche Bedéngungen ze