PLoS ONE: iš TMPRSS4 ir ERK1 koreliuoja su metastazėmis ir blogos prognozės išraiška Kinijos sergantys skrandžio Cancer

Anotacija

Paskirtis

Šis tyrimas nagrinėjo klinikinė reikšmė transmembraniniu proteazės, serino 4 (TMPRSS4) ir ekstraceliuliniu signalo reguliuojamas kinazės 1 (ERK1) kurti, progresavimo ir metastazių skrandžio vėžio.

metodai

imunohistocheminis dirbo analizuoti TMPRSS4 ir ERK1 išraišką 436 skrandžio vėžio atvejų ir 92 ne vėžiniai žmogaus skrandžio audinius.

rezultatai

Baltymų koncentracija TMPRSS4 ir ERK1 buvo iki reguliuojama skrandžio vėžio pakitimų palyginti su gretimų noncancerous audiniuose. Aukštos raiškos TMPRSS4 koreliuoja su amžiumi, dydžiu, Lauren klasifikacija, gylis invazijos, limfmazgiuose ir tolimų metastazių, regioninės limfmazgių etape ir TNM etape, taip pat su išraiškos ERK1. Etapais I, II ir III, 5 metų išgyvenamumas pacientams, sergantiems didelio TMPRSS4 išraiška buvo žymiai mažesnis negu pacientų, su mažu išraiška. Daugiau daugiamatis analizė rodo, kad iki-reguliavimo TMPRSS4 ir ERK1 buvo nepriklausomi prognostiniai rodikliai ligos, kartu su gylio invazijos, limfmazgiuose ir tolimoje metastazių ir TNM etape.

Išvados

išraiška TMPRSS4 skrandžio vėžio reikšmingai susijęs su limfmazgiuose ir tolimoje metastazių, aukštos ERK1 išraiška, ir blogos prognozės. TMPRSS4 ir ERK1 baltymai gali būti naudingi žymekliai nuspėti naviko progresavimas ir prognozės skrandžio vėžio

nurodomoji dalis:. Lo ZY Wang MM Zhao ZS Li B Chen JF (2013) Iš TMPRSS4 ir ERK1 koreliuoja išraiška su metastazėmis ir blogos prognozės iš Kinijos sergantys skrandžio vėžio. PLoS ONE 8 (7): e70311. Doi: 10,1371 /journal.pone.0070311

redaktorius: Rajeev Samant, Alabamos universitetas Birmingeme, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Vasario 20, 2013 m Priėmė: Birželis 18, 2013 m Paskelbta: Lie 29, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Lo et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis tyrimas buvo parama dotacijos iš Zhejiang provincijos departamento mokslo ir technologijų mokslinių tyrimų fondo (2008C33040) ir nacionalinių specialiųjų fondų sveikatos fondas (200802112). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

II tipo transmembraninis serino proteazės (TTSPs) buvo pripažinti kaip naują pogrupio serino proteazių su proteolitinio domene, transmembraniniu domeno, per trumpą citoplazminio domeno ir kamieninių regione kintamo ilgio, kuriame modulinės struktūrines sričių [ ,,,0],1] - [2]. Dauguma TTSPs buvo auglio vystymąsi ir progresavimą, daugiausia remiantis jų dysregulated išraiška. Transmembraninis proteazės, serino 4 (TMPRSS4) yra TTSP, kuris yra labai išreikštas kasos, skydliaukės, plaučių ir storosios žarnos vėžio [3] - [4]. TMPRSS4 sukeltas invazyvumas ir epitelio-mezenchiminių perėjimas (EMT) aktyvuojant FAK signalizacijos ir ERK [5]. Ekstraceliulinis signalo reguliuojamas kinazės 1 (ERK1) yra MAP kinazės šeimos narys ir veikia signalizacijos kaskados, kuri reguliuoja įvairių ląstelių procesus, pavyzdžiui, platinimo, diferenciacijos ir ląstelės ciklo progresavimo reaguojant į ekstraceliulinio signalų įvairovė [6]. Biologiniai funkcijos ir klinikinė reikšmė TMPRSS4 ir ERK1 skrandžio vėžio nėra suprantama. Dabartinė tyrimas nagrinėjo TMPRSS4 ir ERK1 išraišką 436 chirurginių egzempliorių skrandžio vėžio imunohistocheminiu, ištirti galimą koreliaciją TMPRSS4 ir ERK1 išraiškos su klinikos kintamųjų ir nustatyti, prognostinę vertę TMPRSS4 ir ERK1 išraiška.

medžiagos ir metodai

Archyvas Skrandžio audinio mėginiai ir neturintys naviko gleivinės

skrandžio vėžio audiniuose buvo surinkti iš pašalintas skrandis egzempliorių iš 436 pacientų (311 vyrų, 125 moterų; vidutinis amžius 60,0 metai, amžiaus ribos 30-91) nuo chirurgijos skyrius, Zhejiang provincijos Liaudies ligoninė, nuo 1998 sausio iki 2004 audiniai buvo formalinu fiksuotos sausio parafino įterptųjų ir diagnozavo kliniškai ir histopathologically tuo departamentai iš virškinimo trakto chirurgijos ir patologijos. Visi pacientai turėjo tolesnius įrašus > 5 metų. Tolesnių terminas buvo 2008 m gruodžio išlikimo laikas buvo skaičiuojamas nuo operacijos dienos iki tolesnių termino dieną arba mirties, kurią sukėlė daugiausia karcinoma pasikartojimo ar metastazių. Devyniasdešimt du ne vėžiniai žmogaus skrandžio audiniai buvo gauti iš pašalintas skrandis gretimų skrandžio vėžio maržos > 5 cm. įtraukti mūsų tyrime rutina chemoterapija buvo skiriamas pacientams, sergantiems pažengusia liga po operacijos, bet ne radiacija gydymas buvo skiriamas bet ligoniams.

Audinių mikrogardeliq analizė

Blokai, kad buvo numatyta iš viso 436 naviko audinių mėginių ir 92 mėginių normalaus skrandžio gleivinės buvo paruoštas kaip aprašyta anksčiau [7] - [8]. Pagrindiniai audinio biopsija (2 mm skersmens) buvo paimti iš atskirų parafino įterptųjų skrandžio navikų (donorės blokų) ir išdėstyti gaunančiose parafino blokus (audinių masyvo blokų), naudojant trephine. Kadangi buvo įrodyta, kad dažymo rezultatai, gauti iš įvairių naviką srityse įvairiais navikais gerai koreliuoja [9], pagrindinis buvo imami kiekvienu atveju. Pakankamas atveju buvo apibrėžtas kaip navikas užima > 10% nuo pagrindinio srityje [10]. Kiekvienas blokas yra ir daugiau nei tris vidaus kontrolę, kad sudarė ne neoplastiniu skrandžio gleivinę. Keturių mikrometrų storio sekcijos buvo sumažinti iš kiekvienos audinių masyvo blokas, deparaffinized ir dehidratuota.

projektas buvo patvirtintas etikos komisijos Zhejiang provincijos liaudies ligoninės ir rašytinis sutikimas buvo gautas iš visų dalyvių.

imunohistocheminis

imunohistocheminis analizė [11] - [12] buvo atliktas studijuoti pakitusi baltymų ekspresiją 92 nevėžinės žmogaus skrandžio audinių pavyzdžių ir 436 žmogaus skrandžio vėžio audiniuose. Trumpai tariant, skaidres kepdavo esant 60 ° C temperatūroje 2 val, po to deparaffinization su ksileno, ir rehidrataciją. Skyriai buvo panardintas į EDTA antigeno pakartotinio buferio ir microwaved antigeno paieška, po kurio jie buvo gydomi 3% vandenilio peroksido metanolio numalšinti vidinį peroksidazės aktyvumo, po inkubacijos su 1% albumino galvijų serumo blokuoti nespecifinį. Skyriai buvo inkubuojami su triušio anti-TMPRSS4 (ProteinTech Group, Inc) ir triušių anti-ERK1 (Mobilusis Signalizacijos technologijos), per naktį 4 ° C temperatūroje. Normalus ožkos serumas buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Po plovimo, audinio skyriai buvo gydomi antrinio antikūno. tada audinio skyriai buvo counterstained hematoksilinu, dehidratuoti, ir sumontuoti.

Rezultatų įvertinimas

TMPRSS4 ir ERK1 buvo tamsintas kaip leukocitų spalvota citoplazmoje ir branduolyje. Iš imunodažymu laipsnis buvo peržiūrimi ir nepriklausomai įmušė dviejų stebėtojų remiantis dažymo [11], [13], [14] intensyvumo. Dažymo intensyvumą buvo rūšiuojami pagal tokius kriterijus: 0 (ne dažymo), 1 (silpnas dažymo = šviesiai geltonos), 2 (vidutinio dažymo = geltona rudos spalvos) ir 3 (stiprus dažymo = rudos spalvos). Saikingas ir stiprus dažymo buvo naudojamas apibrėžti navikai su dideliu TMPRSS4 ar ERK1 išraiška, ir ne, ir silpna dažymo buvo naudojamas nurodyti žemą TMPRSS4 arba ERK1 išraiška.

Statistinė analizė

buvo atliekama Visi statistinės analizės naudojant SPSS 12.0 programą. Matavimo duomenys buvo analizuojami naudojant Stjudento T
testą, o kategoriški duomenys buvo tiriami naudojant χ
^{2 arba Fisher tikslų testą. Išgyvenimo kreivės buvo apskaičiuota naudojant Kaplan-Meier metodu, o log-rank testas buvo naudojamas apskaičiuojant skirtumus tarp kreivių. Daugiamatė analizė naudojant Cox proporcinės rizikos regresijos modelį buvo atliktas siekiant įvertinti prognozavimo vertės baltymų išraiška. Koreliacijos koeficientai tarp baltymų ekspresijos ir klinikos išvados buvo apskaičiuota naudojant Pearson koreliacijos metodą. Statistinis reikšmingumas buvo nustatytas P
. ≪ 0,05}

Resuts

išraiška TMPRSS4 į suarchyvavote skrandžio audinio mėginiai ir ne naviko gleivinės pervežimas

TMPRSS4 baltymų buvo aptikta 14 d 92 (15,22%) žmogaus ir ne auglio gleivinės mėginių, ir visi mėginiai išreikštas baltymų yra žemo lygio. TMPRSS4 baltymas buvo aptiktas 245 436 (56,19%) atvejais žmogaus skrandžio vėžio, aukštos raiškos TMPRSS4 baltymų buvo aptikta 203 (46,56%) navikų. TMPRSS4 buvo lokalizuotas daugiausia citoplazmoje ar branduolio pirminio vėžio (1A pav, B ir C).

išraiška ERK1 į suarchyvavote skrandžio audinio mėginiai ir ne naviko gleivinės pervežimas

ERK1 baltymas aptikta 16 92 (17,39%) žmogaus ir ne auglio gleivinės mėginių, ir visi mėginiai išreikštas baltymų yra žemo lygio. ERK1 baltymas buvo aptiktas 231 436 (52,98%) atvejais žmogaus skrandžio vėžio, aukštos raiškos ERK1 baltymų buvo aptikta 173 (39,68%) navikų. ERK1 buvo lokalizuotas daugiausia citoplazmoje ar branduolio pirminio vėžio (1d pav, E ir F).

Koreliacija tarp TMPRSS4 Up reguliavimo ir klinikiniai požymiai skrandžio vėžio

High išraiška TMPRSS4 koreliuoja su amžiumi, dydžiu, Lauren klasifikacija, gylis invazijos, limfmazgiuose ir tolimų metastazių, regioninės limfmazgių etape ir TNM etape ( P
< 0,05) (1 lentelė). TMPRSS4 išraiška nebuvo koreliuoja su lytimi, naviko vietą, diferenciacija, ar histologinio klasifikaciją ( P
> 0,05). (1 lentelė)

Koreliacija tarp ERK1 Up reguliavimo ir klinikiniai požymiai Skrandžio Vėžys

Aukštos raiškos ERK1 koreliuoja su amžiumi, naviko vieta, dydis, gylis invazijos, diferenciacija, Lauren klasifikacija, limfmazgių ir tolimi metastazių, regionų limfmazgis etapas ir TNM stadija ( p
< 0,05) (2 lentelė). ERK1 išraiška nebuvo koreliuoja su seksu, ar histologinio klasifikaciją ( P
> 0,05). (2 lentelė)

Koreliacija tarp TMPRSS4 raiškos ir prognozavimas

I etape II ir III navikai, 5 metų išgyvenamumas pacientams, sergantiems didelio išraiška TMPRSS4 buvo gerokai mažesnis nei pacientams, sergantiems mažo raiškos ( P
< 0,05) (2 pav.) IV stadijos navikai, iš TMPRSS4 išraiška nebuvo koreliuoja su 5 metų išgyvenamumas ( P
> 0,05). (2 paveikslas)

Koreliacija tarp ERK1 raiškos ir prognozės

etape I, II ir III navikai, 5 metų išgyvenamumas pacientams, sergantiems didelio išraiška ERK1 buvo gerokai mažesnis nei pacientams, sergantiems mažo raiškos ( p
< 0,05) (pav 3). IV stadijos navikai, iš ERK1 išraiška nebuvo koreliuoja su 5 metų išgyvenamumas ( P
> 0,05). (3 paveikslas)

daugiamatė analizė klinikos parametrus ir Prognozė

su galimais prognozinių poveikio skrandžio karcinoma veiksniai buvo analizuojami Cox regresinė analizė. Tyrimas atskleidė, kad limfmazgis ir tolimi metastazių ( P
= 0,005), TNM stadija ( P
= 0,005), išraiška TMPRSS4 ( P
= 0,000) ir ERK1 ( P
= 0,000) buvo nepriklausomi prognostiniai veiksniai pacientams, sergantiems skrandžio karcinoma. Tačiau amžiaus, lyties, naviko vieta ir dydis, histologinis klasifikacija, naviko diferenciacija, invazija gylis, Lauren klasifikacija ir regioninio limfmazgio etapas neturėjo prognostinę vertę.

asociacija tarp išraiškos TMPRSS4 ir ERK1

du šimtai keturi skrandžio vėžio atvejų turėjo mažą raišką tiek TMPRSS4 ir ERK1 ir šimtas keturiasdešimt keturi skrandžio vėžio atvejų turėjo aukštą raišką tiek TMPRSS4 ir ERK1. Nebuvo tarp TMPRSS4 ir ERK1 reikšminga koreliacija (χ ^{2 = 155,1; p = 0,0001) (3 lentelė). Mes taip pat aptikta TMPRSS4 teigiamas /ERK1-neigiamas, TMPRSS4 teigiamas /ERK1 teigiamas, TMPRSS4 neigiamas /ERK1-teigiamas ir TMPRSS4 neigiamas /ERK1 neigiamas skrandžio pacientų rezultatus, ir mes nustatėme, kad ten buvo reikšmingas skirtumas bendras palyginimai (χ 2 = 256,9; p = 0,000, 4 pav.) Vidutinė išgyvenimo trukmė buvo 42,8 ± 2,23, mėnesiai TMPRSS4 (+) /ERK1 (-) grupės, 27,9 ± 1,27 mėnesiai TMPRSS4 (+) /ERK1 (+), 54,7 ± 0,72 mėnesiai TMPRSS4 (-) /ERK1 (- ), 39,2 ± 3,19 mėnesiai TMPRSS4 (-). /ERK1 (+), atitinkamai}

diskusijų

iš daugelio molekulių, dalyvaujančių kancerogenezėje ir plėtoti žmogaus navikų, proteazės intensyviai buvo tiriamas kaip svarbiausių dalyvių iš daugelio navikų kancerogenezėje. Neseniai daug dėmesio buvo sutelktas į II tipo transmembraninis serino proteazės (TTSPs) vaidmuo per auglių vystymuisi [15] - [16]. TTSPs nariai ląstelių paviršiaus susijusių proteazės, kad tarpininkauti įprastų mobiliojo ryšio funkcijų įvairovė, taip pat naviko invazija ir metastazių šeima.

TMPRSS4 yra TTSP, kad buvo žinoma, kad būti aktyvinama keliais vėžio, ypač kasos ir skydliaukės vėžio [4], [17], ir TMPRSS4 išraiška buvo koreliuoja su metastazavusio potencialo kasos vėžio [3]. TMPRSS4 yra būtina ir pakanka žmogaus plaučių vėžio ląstelių linijos NVI-H322, dvitaškis adenokarcinoma ląstelių linija Colo205 ir kolorektalinio vėžio ląstelių linija HCT15 atlikti migracijos ir invazija [18]. Tyrimas atskleidė, kad TMPRSS4 išraiška skrandžio vėžio pažeidimų buvo glaudžiai susijęs su amžiumi, dydis naviko, vietos naviko, gylis invazija, laivas invazijos, limfmazgių ir tolima metastazių ir TNM stadija. buvo nustatyta, kad TMPRSS4 išraiška žymiai koreliuoja su skrandžio vėžio prognozė. Etapais I, II ir III, 5 metų išgyvenamumas pacientai, sergantys didelio išraiška TMPRSS4 buvo gerokai mažesnis nei pacientams, sergantiems mažo išraiška. IV etapas, TMPRSS4 išraiška nebuvo koreliuoja su 5 metų išgyvenamumas. Daugiau daugiamatis analizė leidžia manyti, kad invazijos, limfmazgiuose ir tolimoje metastazėmis TNM etape ir iki-reguliavimo TMPRSS4 gylis buvo nepriklausomi prognostiniai rodikliai skrandžio vėžio. Padidėjusi TMPRSS4 turi lemiamą vaidmenį radiacijos sukeltas ilgalaikio sklaidos ir metastazių likutinės kepenų ląstelių karcinoma pagal palengvinti epitelio-mezenchiminių perėjimą (EMT) [19]. buvo rastas išraiška TMPRSS4 navikuose su suragėjusių ląstelių karcinoma (SCC) histologiją būti gerokai didesnis nei tų, su adenokarcinoma (AC) histologiją. Kaplan-Meier kreivė parodė, kad didelis TMPRSS4 buvo reikšmingai susijęs su sumažėjusiu bendro išgyvenamumo pacientams, sergantiems SCC histologiją, o ne koreliacijos AC histologiją [20] buvo nustatyta.

ERK1 dalyvauja kancerogenezėje per reguliavimo įvairūs mobilieji procesai, tokie kaip platinimo, diferenciacijos ir ląstelės ciklo progresavimo reaguojant į ekstraląsteliniuose signalų įvairovė. Hepatoma kilmės augimo faktorius yra susijęs su skrandžio kancerogenezės procesą ir skatina platinimu ir metastazių per ERK1 /2 aktyvavimo [21]. ERK1 kaip svarbus tarpininkas iš lysophosphatidic rūgšties signalizacijos, vedančio į ląstelę sphingosine kinazės 1 (SphK1) ir taško iki SphK1 ir sphingosine-1-fosfato gamybai, galimą terapinį taikinius skrandžio vėžio [22]. Tarp FVIIa ir TF sąveika skatina proteazės aktyvuota receptorių 2 aktyvavimo, tokiu būdu sukelia ERK1 /2 ir IκB-α /NF-κB signalo perdavimas kelias reguliuoti genų ekspresiją IL-8, TF ir kaspazės-7, ir, galiausiai, skatina SW620 ląstelių proliferaciją ir migraciją [23]. Iš ERK1 išraiška skrandžio vėžio ir jos klinikinė reikšmė nėra suprantama. Dabartinė tyrimas buvo išnagrinėti ERK1 išraišką 436 chirurginių egzempliorių skrandžio vėžio imunohistocheminiu. Tyrimas parodė, kad aukštos raiškos ERK1 baltymų buvo aptikta 173 (39,68%) navikų. Aukštos raiškos ERK1 koreliuoja su amžiumi, naviko vieta, dydis, gylis invazijos, diferenciacija, Lauren klasifikacija, limfmazgiuose ir tolimų metastazių, regionų limfmazgių etape, TNM etape ir blogos prognozės.

toliau nagrinėjo TMPRSS4 išraiška skrandžio vėžio egzempliorių ir jo sąsajas su ERK1 išraiška. Mes nustatėme teigiamą koreliaciją tarp TMPRSS4 ir ERK1 išraiška, o tai rodo, kad TMPRSS4 gali būti įtraukti į Kancerogeninis ir progresavimo ir metastazių skrandžio vėžio per skatinimo ląstelių proliferaciją pagal ERK1 aktyvacijos.

• PLoS ONE: Dažnis rizikos ir trukmė rizikos Santykiai tarp aspirino vartojimo ir skrandžio vėžys sisteminė apžvalga ir metaanalizė
• PLoS ONE: Pooperacinis chemoradioterapija palyginti Pooperacinis chemoterapija Visiškai rezekcijos skrandžio vėžio su D2 limfadenektomija: metaanalizė