PLoS ONE: prognostische betekenis van Tag SNP rs1045411 in HMGB1 van de agressieve maagkanker in een Chinese bevolking

Abstract

Overtuigende bewijzen hebben gesuggereerd dat een hoge mobiliteit groep box-1 (HMGB1) gen een cruciale rol in de ontwikkeling en progressie van kanker speelt. Dit onderzoek was gericht op de effecten van enkelvoudige nucleotide polymorfismen (SNPs) in evalueren HMGB1
gen op de overleving van maagkanker (GC) patiënten. Drie tag SNPs uit HMGB1
gen werden geselecteerd en gegenotypeerd met behulp van Sequenom Ipex genotypering systeem in een cohort van 1030 GC patiënten (704 in opleiding set, 326 in de validatie set). Multivariate Cox model en Kaplan-Meier Curve werden gebruikt voor de prognose analyse. AG /AA genotypen van SNP rs1045411 in HMGB1
gen waren significant geassocieerd met een betere totale overleving (OS) in een set van 704 GC-patiënten in vergelijking met de GG genotypen (HR = 0,77, 95% CI: 0,60-0,97 P
= 0,032). Deze prognostische effect werd geverifieerd in een onafhankelijke validatie set en samengevoegde analyse (HR = 0,80, 95% CI: 0,62-0,99, P
= 0,046; HR = 0,78, 95% CI: 0,55-0,98, P
= 0,043, respectievelijk). In gestratificeerd analyse, het beschermende effect van rs1045411 AG /AA genotype was duidelijker bij patiënten met negatieve lagen, in vergelijking met patiënten met gunstige lagen. Bovendien, krachtige gezamenlijke voorspellende effecten op de OS van GC patiënten werden geconstateerd tussen de rs1045411 genotype en Lauren indeling, differentiatie, podium of adjuvante chemotherapie. Bovendien, functionele test wees op een significant effect van rs1045411 op HMGB1
expressie. Onze resultaten suggereren dat rs1045411 in HMGB1
significant geassocieerd met klinische resultaten van Chinese GC patiënten na een operatie, met name bij patiënten met agressieve status die verder validatie rechtvaardigt in andere etnische populaties

Citation.: Bao G, F Qu, Hij L, Zhao H, Wang N, Ji G, et al. (2016) prognostische betekenis van Tag SNP rs1045411 in HMGB1 Website van agressieve maagkanker in een Chinese bevolking. PLoS ONE 11 (4): e0154378. doi: 10.1371 /journal.pone.0154378

Editor: Qing-Yi Wei, Duke Cancer Institute, VERENIGDE STATEN

Ontvangen: 23 januari 2016; Aanvaard: 12 april 2016; Gepubliceerd: 26 april 2016

Dit is een open toegang artikel, vrij van auteursrechten, en mag vrij worden gereproduceerd, gedistribueerd, verzonden, gewijzigd, gebouwd op, of anderszins gebruikt door iedereen voor elk rechtmatig doel. Het werk wordt onder de Creative Commons CC0 publieke domein toewijding ter beschikking gesteld

Data Availability:.. Alle relevante gegevens zijn binnen het papier en de Ondersteunende informatie bestanden

Financiering: Dit werk werd ondersteund door subsidies van National Natural Science Foundation of China (nr 81272201 en nr 81572916 GB; No. 81.200.330 naar NW)

Competing belangen. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

. introductie

Maagkanker (GC) is de vierde meest voorkomende kanker in de wereld, goed voor ongeveer 8% van de nieuwe kankergevallen en 10% van de sterfgevallen kanker [1]. Van deze gevallen, 70% deed zich voor in ontwikkelingslanden, en de helft van het wereldtotaal deed zich voor in Oost-Azië, vooral in China [2]. In de afgelopen decennia, ondanks de aanzienlijke toename van de investeringen en de vooruitgang in de diagnose en behandeling van GC, de totale overleving (OS) voor geavanceerde GC is nog steeds somber, met een 5-jaarsoverleving van minder dan 25% [3 ]. Momenteel is de overleving en de prognose van patiënten GC nog steeds afhankelijk van het stadium van de tumor op het moment van diagnose. Vanwege de belangrijke verschillen duidelijk in hetzelfde stadium, tumor stadium alleen niet voldoende om de prognose GC voorspellen [4]. Derhalve nieuwe moleculaire signaturen ontdekken betrouwbaar prognostische merkers voor GC is zeer belangrijk en veeleisend. De laatste jaren hebben studies gericht op het onderzoeken van genetische varianten die predisponeren voor de ontwikkeling en progressie van GC [5].

High mobility group box-1 (HMGB1), een belangrijk lid van high-mobility group eiwitsuperfamilie, bevat twee 80-aminozuur DNA- bindende domeinen (A-box en B-box) en een zure carboxylgroep tail [6]. Het functioneert als chromatine structurele eiwitten in de kern en een pro-inflammatoire cytokine extracellulair. Als nucleair eiwit, HMGB1 bindt niet specifiek aan de kleine groef van DNA en vergemakkelijkt de assemblage van plaatsspecifieke DNA targets [7]. Daarentegen extracellulaire HMGB1 werkt als een cytokine die Infectie of letsel opgewekt ontstekingsreacties voortplant [8]. De constante afgifte van HMGB1 van necrotische tumorcellen kan een micro lijkt chronische ontsteking te creëren; een aandoening gekend dat ze de ontwikkeling van epitheliale maligniteiten, vooral ontsteking-geassocieerde kanker [9]. In feite hebben vele studies eerder aangetoond dat de overexpressie van HMGB1 in vele soorten kanker [10-13], waaronder GC [14]. Bovendien zijn overtuigende bewijzen verder bevestigd dat HMGB1 overexpressie nauw verwant aan tumorontwikkeling door regulering van de proliferatie, invasie en migratie van kankercellen [15, 16]. Daarom kan HMGB1 een interessante kandidaat als een roman prognostische marker of therapeutische doelwit voor GC zijn.

Accumuleren bewijzen hebben gesuggereerd dat de genetische achtergronden van het risico en de prognose van GC [17] kunnen beïnvloeden. Enkele nucleotide polymorfisme (SNP) is de meest voorkomende genetische variatie, en kan de veelbelovende surrogaat biomarkers genetische achtergronden patiënten therapeutische respons en prognose [18] voorspellen. Genetische varianten geïdentificeerd in humane HMGB1
gen [19], maar het verband tussen HMGB1
polymorfisme en GC overlevingsresultaten is nooit bepaald. Gezien de cruciale rol van HMGB1 bij de ontwikkeling en progressie van kanker, is het aannemelijk dat de polymorfismen van HMGB1
kunnen hebben op de klinische resultaten van GC. Hierin, onderzochten we de effecten van de drie tag SNPs in HMGB1
op klinische uitkomsten van 1030 Chinese GC patiënten (704 in de training set, 326 in de onafhankelijke validatie set) die radicale resectie behandeling ontvangen. Daarnaast werd het effect van een geïdentificeerde relevante tag SNP op de regulering van genexpressie verder onderzocht door een In vitro
functionele test. Voor zover ons bekend, is dit het eerste onderzoek van de associatie tussen de polymorfismen van de HMGB1
en de klinische uitkomst van GC.

Materialen en methoden

Ethics

Deze studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Vierde Militaire Medische Universiteit. De procedures werden uitgevoerd volgens de goedgekeurde richtlijnen en de 1964 Verklaring van Helsinki en zijn latere wijzigingen of vergelijkbare ethische normen. De ondertekende geïnformeerde toestemming werd verkregen van elke deelnemer opgenomen in de studie.

Studiepopulatie

Een totaal van 1030 Han-Chinezen patiënten met primaire adenocarcinoom van de maag werden geïncludeerd uit twee onafhankelijke sites, Tangdu Hospital en Xijing ziekenhuis van Digestive Disease, in Xi'an, China. Alle GC gevallen ontvangen chirurgische resectie en hadden geen voorgeschiedenis van andere vormen van kanker of een preoperatieve behandeling tegen kanker of een bloedtransfusie binnen 3 maanden voor de operatie. Er waren geen leeftijd, geslacht of ziektestadium beperkingen voor case werving. Onder hen waren de 704 patiënten (Afdeling Algemene Heelkunde, Tangdu Ziekenhuis, tussen juli 2008 en juni 2013) gebruikt als een training in deze studie. Een andere groep van 326 patiënten (Xijing ziekenhuis van Digestive Disease, tussen januari 2008 en december 2010) werden gebruikt als een onafhankelijke validatie set. Het doel was om de klinisch significante prognostische waarde van SNPs binnen HMGB1
-gen van de training set identificeren en getest in de onafhankelijke validatie set.

Demografische en klinische gegevens

demografische en klinische gegevens werden verzameld door middel van in-persoon interviews op het eerste bezoek of follow-up in de klinieken, medische dossiers, of overleg met de behandelende artsen, zoals leeftijd, geslacht, etniciteit, residentieel gebied, moment van de diagnose, de tijd van de operatie en /of adjuvante chemotherapie (ACT), het tijdstip van terugval en /of de dood, tumorstadium, Lauren indeling, differentiatie, histologische type en de behandeling protocol. Follow-up informatie is bijgewerkt op 6-maands tussenpozen door middel van on-site interview, telefonische communicatie, of de herziening van de medische dossiers door getrainde onderzoek specialisten. Het laatste follow-up date was juni 2015 en de mediane follow-up duur was 51 maanden (range 6-89 maanden). Het percentage van de patiënt verloren tijdens de follow-up was 9,8%. OS werd gedefinieerd als de tijd tussen de operatie en GC-specifieke dood. RFS (ziektevrije overleving) werd gedefinieerd als de tijd tussen de operatie en de datum van de eerste herhaling of verre metastase van GC. De patiënten in leven bij de laatste follow-up werden gecensureerd.

Het verzamelen, verwerken en het behoud van specimens

Voor de operatie, 5 ml veneus bloed werd verzameld uit elk GC patiënten om DNA te extraheren met behulp van de E.Z.N.A. bloed DNA Midi Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA). Zestig maag kankerweefsel werden tegelijkertijd verzameld van de validatie set voor real-time kwantitatieve reverse transcriptie PCR (RT-PCR) testen.

SNP selectie en genotypering

De kandidaat-tag SNPs selectie van HMGB1
gen werden uitgevoerd als een twee-staps procedure. Ten eerste, gebruikten we een set van web-gebaseerde SNP selectie gereedschappen (http://snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) voor kandidaat-SNPs van zoeken HMGB1
[20]. Alle gevalideerde polymorfismen in HMGB1
gen regio, waaronder 5 kb stroomopwaarts van de eerste exon en 5 kb stroomafwaarts van de laatste exon, werden beschouwd als kandidaat SNPs zijn. Degenen SNPs met een kleinere allel frequentie ≥ 5% in de HapMap CHB (Han-Chinezen in Beijing) bevolking en een paarsgewijs verbindingsevenwichtsafwijking kwadraat correlatiecoëfficiënt (r ^{2) > 0.8 werden geselecteerd als kandidaat SNPs. Ten tweede werden tag SNPs gekozen uit deze kandidaat-SNPs met behulp van de Internationale Fase II HapMap Project databank van de Chinese bevolking (http://www.hapmap.org/, geraadpleegd 18 november 2013) en Haploview versie 4.2. Tot slot, drie tag SNPs (gemiddelde r 2 = 0,981) werden geselecteerd: rs1045411 (G > A), rs1412125 (T > C) en rs2249825 (C > G) .Genotyping werd uitgevoerd met behulp Sequenom Iplex genotypering systeem (Sequenom Inc., San Diego, CA, USA) volgens het protocol van de fabrikant. Het laboratorium personen die het genotypering assays uitgevoerd werden verblind voor informatie van patiënten. Interne kwaliteitscontroles en negatieve controles werden gebruikt voor genotypering nauwkeurigheid te waarborgen, en 5 monsters werden willekeurig geselecteerd en gegenotypeerd in duplo met 100% concordantie. Afroepingspercentage voor genotypering varieerde tussen de 99,3% en 99,7%. De gedetailleerde informatie van SNPs en genotypering resultaten werden opgenomen in Tabel S1.}

functionele test

De functionele effecten van tag SNP rs1045411 ligt in het 3'UTR van HMGB1
gen werden onderzocht door het gebruik van het luciferase reporter assay. Kort samengevat, 49-bp dubbelstrengs DNA dat of wild genotype of variant genotype van rs1045411 gesynthetiseerd en gekloneerd in de PMIR-REPORT vector (Ambion, Austin, Texas, USA) onder gebruikmaking van restrictie-enzymen SpeI en HindIII (Takara, Dalian, China). Alle constructen werden bevestigd door DNA sequentiebepaling. Menselijke GC cellijnen SGC-7901 en humane embryonale niercellijn HEK-293T, waarin over-miR-505 werd geïdentificeerd als positief worden uitgedrukt door TaqMan microRNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystem, Foster City, CA, USA) zoals eerder beschreven [21], werden geco-transfecteerd met ofwel PMIR-rs1045411-A of PMIR-rs1045411-G (200 ng /putje) met of zonder anti-miR-505 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) en de interne controle reporterplasmide pRLTK (Promega, Madison, WI, USA) (20 ng /putje) met gebruik van Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) in een 24-wells plaat met 2 x 10 ^{5 cellen per putje. SGC-7901 en HEK293 cellijnen werden gekocht van de Type Culture Collection van de Chinese Academie van Wetenschappen (CAS) (Shanghai, China), waar ze werden gecontroleerd door mycoplasma detectie, DNA-fingerprinting, isozym detectie en cel vitaliteit detectie. Een bevroren vaatje van elke cellijn 147, die onmiddellijk werd geëxpandeerd en ingevroren bij ontvangen van de leverancier werd gereanimeerd en gebruikt voor deze studie. Na 48 uur werden de cellen verzameld luciferase activiteit te bepalen met een dual-luciferase reporter testsysteem kit (Promega, Madison, WI, USA) met een luminometer (Tecan, Mannedorf, Zwitserland). Alle transfecties werden uitgevoerd in triplo en alle experimenten werden onafhankelijk driemaal herhaald.}

Om het effect van tag SNP rs1045411 genotype op de expressie van HMGB1
mRNA verder te beoordelen, werd totaal RNA geïsoleerd uit 60 weefselmonsters GC (30 met AA-genotype en 30 met AG /GG genotypen van rs1045411) in overeenstemming met de instructies van de fabrikant. Vervolgens cDNA werden gesynthetiseerd met behulp van PrimeScript RT reagens kit (Takara, Dalian, China). RT-PCR werd uitgevoerd met de volgende HMGB1
primers: forward, 5'- TAAGAAGCCGAGAGGCAAAA-3 '; omgekeerd, 5'-AGGCCAGGATGTTCTCCTTT- 3 'en β-actine werd gebruikt als een interne controle (primers: forward, 5'- AAGACGTACTCAGGCCATGTCC-3', omgekeerde, 5'-GACCCAAATGTCGCAGTCAG-3 ') [13]. Relatieve expressie van de HMGB1
mRNA werd bepaald met behulp van de relatieve kwantificatie methode en 2 ^{-ΔΔCt analyse.}

Statistische analyse

Statistische analyses werden met behulp van de IBM uitgevoerd SPSS Statistics 19.0 software (IBM). Normaal verdeelde continue variabelen werden uitgedrukt als gemiddelde ± SD, terwijl abnormaal verdeelde continue variabelen werden uitgedrukt als mediaan en bereik. Pearson χ ^{2-test werd gebruikt om de verschillen van categorische variabelen testen. Het verschil van normaal verdeelde continue variabelen tussen twee groepen werd geanalyseerd met Student's
t-test, terwijl Mann-Whitney U test werd gebruikt voor de vergelijking van abnormaal verdeelde continue variabelen. Multivariate Cox regressie model werd toegepast om het effect van de individuele SNP en de kenmerken van de patiënt op OS of RFS beoordelen. Hazard ratio (HRS) en 95% betrouwbaarheidsintervallen (CI's) werden geschat met correctie voor leeftijd, geslacht, Lauren indeling, differentiatie, TNM podium en ACT. Kaplan-Meier curves en log-rank tests werden ook gebruikt om de effecten van de individuele SNPs op de overleving tijd te evalueren. Statistieken significantie werd vastgesteld op een niveau van 0,05 en alle P
waarden gemeld in deze studie waren met twee kanten.}

Resultaten

Distributie van de kenmerken van de patiënt en de prognose analyse

kenmerken GC patiënten werd samengevat in de tabel S2. Door de late einddatum van de patiënt inschrijving voor de training set, de mediane follow-up tijd was korter in de training set (46 maanden, variërend 6-80 maanden) dan die in de onafhankelijke validatie set (72 maanden, variërend van 6-89 maanden). Dus in vergelijking met de patiënten in de onafhankelijke validatie set, die in de training set hadden lagere tarieven van de terugval (58,4% vs
. 66,8%, P
= 0,005) en de dood (41,4% vs
. 55,8%, P
= 0,001). Er waren geen verschillen tussen training set en validatie in termen van leeftijd, tumor site, Lauren indeling, TNM stadium, differentiatie en ACT ( P
waarde tussen 0,082-0,898). Ten laatste follow-up, 641 patiënten (423 en 218 in de training en validatie set, respectievelijk) ontwikkeld terugval en 482 overleden (300 en 182 in de training en validatie set, respectievelijk). Multivariate Cox regressie-analyse toonde aan dat er significant hogere sterfte en recidief risico bij patiënten met een diffuse type, de slechte differentiatie en tumor stadium III en IV in vergelijking met die van patiënten met intestinale type goed /matig differentiatie en tumor stadium I en II onder training set, validatie set en samengevoegde analyse. Bovendien, op basis van platina ACT na de operatie liet een significant beschermend effect op zowel OS en RFS van GC patiënten (S3 Table).

Vereniging van HMGB1
SNPs met de klinische uitkomst in GC patiënten

Wij hebben de associatie van HMGB1
SNP genotypen met GC klinische resultaten met behulp van de multivariate Cox regressie-analyse met correctie voor leeftijd, geslacht, tumor site, Lauren indeling, differentiatie, TNM podium en ACT (als Tabel 1). De resultaten toonden aan dat tag SNP rs1045411 was significant geassocieerd met OS van GC patiënten in de training set. In vergelijking met patiënten met de GG genotype, mensen met een variant allelen (AG en AA genotypen) hadden een significant lager risico op overlijden (HR = 0,77, 95% CI: 0,60-0,97, P
= 0,032). Deze belangrijke bevinding werd bevestigd in de onafhankelijke validatie set en samengevoegde analyse, met HRs van 0,80 (95% CI: 0,62-0,99; P
= 0,046) en 0,78 (95% CI: 0,55-0,98; P
= 0,043) resp. Kaplan-Meier curves analyse ook voorzien van een sterke associatie met OS. Patiënten dragen AG /GG genotypen van rs1045411 had beter OS dan wel mensen met GG genotype in training set ( P
= 0.024, figuur 1A), validatie set ( P
= 0,017, Fig 1B ) en samengevoegde analyse ( P
= 0,001, figuur 1C).

gestratificeerde analyse van associatie van rs1045411 met OS door hostvariabelen

Wij hebben gestratificeerde analyses om de verenigingen te evalueren tussen genotypen van rs1045411 en OS van GC patiënten naar leeftijd, Lauren indeling, differentiatie, TNM podium en ACT. De door rs1045411 verleende significant beschermend effect was meer prominent in ongunstige subgroepen met een HR-range 0,39-0,69 (figuur 2A). Voor meer informatie, de aanzienlijke daling dood risico in verband met de variant met genotypen (AG /AA) van rs1045411 werd waargenomen bij oudere patiënten (HR = 0,69, 95% CI: 0,48-0,99), diffuse type (HR = 0,67, 95% CI: 0,47-0,95), slechte differentiatie (HR = 0,66, 95% CI: 0,45-0,95), klinische fase III en IV (HR = 0,58, 95% CI: 0,37-0,93) en zonder ACT (HR = 0,39, 95 % CI: 0,20-0,76). Verder verschaft de onderhavige gestratificeerde analyse vertoonde een soortgelijke trend voor RFS met een hartslag 0,44-0,79 (figuur 2B). De resultaten gaven aan dat AG /AA genotypen van rs1045411 verleende de gunstigere prognose in de negatieve groepen.

Joint effect tussen rs1045411 en Lauren indeling, differentiatie, podium of ACT op OS

Eerdere studies hebben aangetoond dat zowel genetische variaties en klinische eigenschappen interactie kritische rollen spelen progressie GC [17]; en waarbij interacties bestaan, de effecten van klinische elementen op tumorprogressie wordt gewijzigd door genotypes. Daarom werd een gezamenlijke analyse uitgevoerd om het mogelijke effect van modulerende rs1045411 in deze klinische kenmerken (Lauren indeling, differentiatie, podium en ACT) die status van tumorprogressie OS GC patiënten evalueren. Zoals getoond in Tabel 2, was er een significante interactie tussen de genotypen van rs1045411 en Lauren indeling, differentiatie, podium of ACT (alle P
_{interactie < 0,001). In vergelijking met individuen die AG /AA genotypes en intestinale type mensen met GG genotype en diffuse soort hadden een significant verhoogd overlijdensrisico (HR = 2,09, 95% CI: 1,42-3,08, P Restaurant < 0,001). De vergelijkbare resultaten werden ook gevonden bij patiënten dragen GG genotype met een slechte differentiatie (HR = 2,48, 95% CI: 1,70-3,62, P Restaurant < 0,001), bij patiënten met GG genotype van stadium III /IV ( HR = 2,99, 95% CI: 2,04-4,38, P Restaurant < 0,001), en bij patiënten dragen GG genotype met ACT (HR = 4,49, 95% CI: 2,70-7,45, P
. < 0,001) in vergelijking met de overeenkomstige referentiegroep}

Functionele effecten van rs1045411 op genexpressie

Bioinformatica analyse (http://www.microrna.org/microrna/home. te doen) bleek een dichte nabijheid van de tag SNP rs1045411 om de voorspelde microRNA bindingsplaatsen (HSA-miR-505) in de 3'-onvertaalde regio (3'UTR) van HMGB1
gen [22] (Fig 3A ). We eerste bevestigde de expressie van miR-505 in SGC-7901 en HEK-293T cellijnen en vonden dat miR-505 een relatief hoger expressieniveau (Figuur 3B). Om te onderzoeken of de genotypen van tag SNP rs1045411 in de 3'UTR van het HMGB1
gen kan genexpressie wijzigen twee cellijnen werden getransfecteerd met luciferase reporter plasmiden die hetzij de wild (GG) of variant (AA) genotype van SNP rs1045411 (figuur 3C). De resultaten toonden aan dat SNP rs1045411 invloed op de genormaliseerde luciferaseactiviteit in zowel getransfecteerde cellen vertoonden significant. Vergeleken met cellen getransfecteerd met constructen dragen wilde genotype (GG) van SNP rs1045411, cellen getransfecteerd met constructen dragende variant genotype (AA) vertoonde een significant verminderde luciferaseactiviteit. Het effect van anti-miR-505 op de luciferase activiteit van reporter plasmiden werd ook geëvalueerd in de studie. De resultaten toonden aan dat de luciferaseactiviteit van twee constructen UTR (p-MIR-G en p-MIR-A) was significant verhoogd door anti-miR-505 in beide cellijnen met eliminated verschillen van luciferaseactiviteit tussen twee reporter plasmiden. Daarnaast gebruikten we kwantitatieve RT-PCR om het effect van SNP rs1045411 genotypes op HMGB1 mRNA expressie in 60 GC weefsels (met 30 GG genotype en 30 met AG /AA genotypen) vanaf validatieset onderzoeken. Zoals getoond in figuur 3D, bleek dat mRNA-expressieniveau van HMGB1 was significant hoger in de dragers met wilde (GG) van genotype rs1056560 dan die variant (AG /AA) genotypen (1,04 ± 0,50 vs
uitgevoerd . 0,79 ± 0,37, P
= 0,004).

Discussie

in de huidige studie, onderzochten we de associatie van genetische polymorfismen in HMGB1
gen met de prognose van de GC-patiënten door twee-traps analyse van de training en validatie sets. We hebben aangetoond dat AG /AA genotypen van tag SNP rs1045411 in HMGB1
3'-UTR significant geassocieerd met een betere OS in een set van 704 GC-patiënten in vergelijking met de GG genotypen. Deze significante associatie werd bevestigd in een onafhankelijke validatie set van 326 GC patiënten als een samengevoegde analyse van alle 1030 GC patiënten. Functionele test gaf aan dat SNP rs1045411 genotypen grote invloed op mRNA expressie van had HMGB1
in GC weefsels en twee tumorcellijnen. Bovendien de gunstige prognostische effect van rs1045411 was duidelijker in de negatieve subgroepen van patiënten GC. Daarnaast is de gezamenlijke analyse vond een significante interactie van gen-klinische elementen. Om het beste van onze kennis, deze studie voor het eerst melding gemaakt van het verband tussen de HMGB1
gen polymorfismen en GC prognose. Eenmaal gevalideerd, HMGB1
SNP rs1045411 kan worden gebruikt als een prognostische marker in combinatie met de traditionele klinische prognose factoren voor de besluitvorming van GC individuele behandeling.

De toenemende bewijzen suggereren dat verhoogde HMGB1 is geassocieerd met tumor uitzaaiingen en een slechte prognose [16, 23-26], waardoor HMGB1 een aantrekkelijke tumor biomarker. Er is gesuggereerd dat HMGB1 functioneert als een potentieel oncogeen eiwit tumor vooruitgang [15, 27, 28] te bevorderen, en de overexpressie in kankercellen beïnvloedt de anti-kanker T-celreactie door activatie van intracellulaire signalering [15, 29]. Inderdaad, de verhoogde expressie van HMGB1 waargenomen bij patiënten met GC en andere soorten kanker [30-32], en de uitdrukking is nauw verbonden met het ontstaan ​​van tumoren [33], tumorinvasie en metastase [29]. Bovendien Chung et al [34] heeft aangetoond dat serum niveaus HMGB1 ook significant geassocieerd met tumorinvasie, metastase, groei, en slechte prognose. Tezamen zijn deze bevindingen ondersteunen een belangrijke rol bij kanker HMGB1 transformatie, tumorgroei en invasie.

Ondanks de uitgebreide onderzoekingen van HMGB1 expressie in weefsels en de bijbehorende serologische activiteit op kanker evolutie er enkele studies gericht op het effect van de SNPs in HMGB1
gen op de prognose van kanker of de behandeling respons tot nu toe. In een groep van Chinese patiënten met longkanker, twee SNPs, rs141215 en rs2249825, zijn geassocieerd met platina gebaseerde chemotherapie reacties [35]. Ook bij patiënten met orale plaveiselcelcarcinoom, een HMGB1
polymorfisme op de SNP rs3742305 is in verband gebracht met tumorprogressie en ziektevrije overleving [36]. Echter uitgesloten wij SNP rs3742305 van dit onderzoek omdat het in sterke verbindingsevenwichtsafwijking met de SNP rs1045411. In deze studie bleek dat variant bevattende (AG /AA) genotypen van tag SNP rs1045411 waren significant geassocieerd met een betere OS bij patiënten met GC, ondersteunen een belangrijke rol in HMGB1 GC evolutie.

Sinds SNP rs1045411 ligt in de regio 3'UTR van HMGB1
gen, kan de expressie van HMGB1
gen beïnvloeden GC patiënten. Tot op heden zijn er echter geen studies om de functies van de SNP rs1045411 evalueren. We vonden dat rs1045411 ligt in de nabijheid van een voorspelde microRNA bindingsplaats (over-miR-505) [22], wat suggereert dat een dergelijke variatie op deze positie de stabiliteit van mRNA kunnen beïnvloeden en bindingsactiviteit aan microRNA, waardoor genexpressie [modulerende ,,,0],37]. Sterker nog, onze luciferase reporter assays bevestigde een aanmerkelijke invloed van rs1045411 op de post-transcriptionele regulatie van HMGB1
gen in een miR-505-afhankelijke manier. Bovendien, door het onderzoeken HMGB1 mRNA-expressieniveau in 60 GC weefselmonsters met genotype gegevens van SNP rs1045411, we vonden dat weefsels dragende-variant die (AG /AA) genotypen significant af HMGB1 mRNA expressie in vergelijking met die met homozygote wild (GG ) genotype. Bij elkaar genomen, onze experimentele gegevens blijkt dat de gunstige prognostische effect by-variant bevatten (AG /AA) verleende genotypen van rs1045411 was nauw geassocieerd met afwijkende expressie van HMGB1
.

Onze huidige studie aangetoond dat de aanzienlijke of borderline beschermende effecten van variant bevattende (AG /AA) genotype van SNP rs1045411 OS en RFS GC patiënten bijna volledig werden gevonden in de negatieve (maar niet gunstig) strata patiënten. Dit komt overeen met eerdere studies waaruit blijkt dat SNPs invloed op de overleving van kanker meer prominent in specifieke subgroep patiënten. Bijvoorbeeld, Wang et al
[38] hebben gemeld dat PSCA
rs2294008 is significant geassocieerd met de overleving uitkomsten onder diffuse-type maagkanker, maar niet intestinaal-type maagkanker. Pu e.a.
[39] hebben ook gesuggereerd dat microRNA-gerelateerde genetische varianten opmerkelijker is geassocieerd met niet-kleincellige longkanker overleving in jonge patiënten. We hebben ook waargenomen een significante interactie-effecten tussen rs1045411 genotype en klinische elementen zoals Lauren indeling, differentiatie, klinisch stadium, en adjuvante chemotherapie bij het moduleren van de prognose van GC. Deze significante correlaties voorgesteld SNP rs1045411 potentiële modulerende rol in deze klinische kenmerken die tumorprogressie kunnen hebben. Echter, de onderliggende mechanismen nog verder worden onderzocht in de toekomst.

Het huidige onderzoek heeft een aantal verschillende functies. Ten eerste, de ingeschreven patiënten komen vooral uit Shaanxi en de aangrenzende gebieden, die geschikt is voor het uitvoeren van de bevolking op basis van onderzoek vanwege de geografische stabiliteit met een lage mobiliteit tarief. Ten tweede, de relatief grote omvang van de bevolking die deelnamen aan deze studie liet ons toe om stage-gelaagde analyse uit te voeren op de training en validatie sets, waarvan de verstorende factoren van de tumor en de behandeling heterogeniteit beperkt. Een belangrijke beperking van deze studie is dat de relatief kleine bevolking in de validatie set kan leiden tot vals-negatieven. Aangezien onze studie was beperkt tot Han-Chinezen, we kunnen niet uitsluiten dat de generaliseerbaarheid kwestie. Toekomstige studies in grotere populaties en andere allochtonen zijn gerechtvaardigd.

Over het algemeen, als de eerste studie observeren van het effect van de HMGB1
gen polymorfismen op GC prognose in een Chinese bevolking, onze gegevens suggereren sterk dat tag SNP rs1045411 in HMGB1
gen heeft een significant effect op de klinische uitkomst van GC patiënten, met name voor patiënten met een vergevorderd stadium of andere agressieve clinicopathologische-status. De huidige studie heeft het potentieel klinisch belang in het helpen om therapeutische beslissingen te verfijnen in de behandeling van GC.

Ondersteunende informatie
S1 Table. De informatie en genotypering resultaten van HMGB1 SNPs
doi:. 10.1371 /journal.pone.0154378.s001
(DOC)
S2 Table. Geselecteerde demografische en klinische kenmerken van maagkanker patiëntenpopulatie
doi:. 10.1371 /journal.pone.0154378.s002
(DOC)
S3 Table. Verdeling van de kenmerken van de patiënt en de prognose analyse in het Training set en de validatie set
doi:. 10.1371 /journal.pone.0154378.s003
(DOC)

• PLoS ONE: Tumor Content-Chart Assisted HER2 /CEP17 Digital PCR Analyse van maagkanker Biopsie Specimens
• PLoS ONE: prognostische betekenis van moleculaire analyse van peritoneale vloeistof voor patiënten met maagkanker: A Meta-Analysis