PLoS ONE: Associação do mTOR e AKT polimorfismos do gene com susceptibilidade e Survival of gástrica Cancer

Abstract

Fundo

O fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) /proteína quinase B (PKB, AKT ) /alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) via de sinalização desempenha um papel crítico na angiogénese e o crescimento celular, a proliferação, o metabolismo, a migração, a diferenciação e a apoptose. A diversidade genética em factores essenciais desta via pode influenciar a função da proteína e transdução de sinal, contribuir para a iniciação e progressão da doença. Estudos sugerem que o mTOR
rs1064261 e AKT
polimorfismos rs1130233 estão associados com risco e /ou prognóstico de vários tipos de câncer. No entanto, essa relação com o câncer gástrico (GC) permanece obscuro. O objetivo deste estudo foi investigar o papel da MTOR Comprar e AKT
polimorfismos no risco e prognóstico de GC.

Métodos

A Sequenom plataforma MassARRAY foi utilizada para genotipagem 1842 indivíduos para MTOR
rs1064261 T → C e AKT
rs1130233 G → a polimorfismos. ELISA foi utilizado para detectar anticorpos Helicobacter pylori
no soro. A análise imunohistoquímica foi utilizada para detectar proteínas totais e fosforiladas mTOR e AKT.

Resultados

O genótipo MTOR
rs1064261 (TC + ​​CC) e do AKT
rs1130233 genótipo (GA + AA) foram associados com risco aumentado de GC nos homens ( P
= 0,049, P
= 0,030). Em H
. pylori
indivíduos -negative, o AKT
rs1130233 GA e (AA GA +) genótipos foram relacionados ao aumento do risco de gastrite atrófica (AG; P
= 0,012, P
= 0,024). Notavelmente, o genótipo AKT
rs1130233 (GA + AA) demonstraram interações significativas com H
. pylori
na progressão da doença de controles saudáveis ​​(CON) para AG ( P
= 0,013) e da AG para GC ( P
= 0,049). Além disso, para os indivíduos com o variante AKT
rs1130233, aqueles no grupo H. pylori-positivos tinham níveis mais elevados de AKT fosforilada expressão (p-AKT). O AKT
genótipo rs1130233 foi encontrado para ser associado com os parâmetros clínico, incluindo metástases em linfonodos e beber álcool ( P Art < 0,05).

Conclusão

MTOR
rs1064261and AKT
polimorfismos rs1130233 foram associados com risco aumentado GC nos homens e aumento da AG de risco em H
. pylori
indivíduos -negative. Uma interação significativa entre o AKT
genótipo rs1130233 e H
. pylori
infecção em CON → progressão da doença AG → GC. A expressão da proteína AKT
rs1130233 genótipo influenciou p-AKT em H
. pylori
indivíduos infectados

Citation:. Piao Y, Li Y, Xu Q, Liu J-w, Xing C-z, Xie X-d, et al. (2015) Associação de MTOR
e AKT
Gene Polimorfismos com a susceptibilidade e Sobrevivência de Câncer Gástrico. PLoS ONE 10 (8): e0136447. doi: 10.1371 /journal.pone.0136447

editor: Masaru Katoh, National Cancer Center, JAPÃO

Recebido: 02 de março de 2015; Aceito: 03 de agosto de 2015; Publicação: 28 de agosto de 2015

Direitos de autor: © 2015 Piao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por subsídios da chave Programa Nacional de Pesquisa básica da China (. 973 Programa ref não 2010CB529304), a National Science Foundation Natural da China ( Ref No.31200968)

Conflito de interesses:. os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico (GC) é um dos cancros mais comuns. todo o mundo e a principal causa de morte relacionada ao câncer [1]. A iniciação e desenvolvimento de GC é um processo de múltiplos passos influenciada por factores genéticos e ambientais. Os estudos indicaram que fatores ambientais exógenas incluindo a infecção Helicobacter pylori
(HP), hábitos alimentares, tabagismo, consumo de álcool, e os factores económicos contribuem para a carcinogénese gástrica [2]. Em condições ambientais similares, indivíduos com diferentes antecedentes genéticos sofrem diferentes riscos de cancro com diversos resultados clínicos. Até agora, a interação de fatores genéticos e ambientais com carcinogênese gástrica tem sido em grande parte desconhecida.

Os polimorfismos são uma classe de fatores genéticos que participam na carcinogênese gástrica e determinam variações inter-individuais em risco GC. Os polimorfismos genéticos podem enfraquecer os mecanismos de protecção intrínseca e aumentar os danos causados ​​por agentes cancerígenos ambientais. Portadores de genótipos suscetíveis estão em maior risco de desenvolver câncer do que aqueles com genótipos resistentes em condições semelhantes. Portanto, os fatores genéticos desempenham um papel crucial no risco GC e evolução clínica.

O fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) /proteína quinase B (PKB, AKT) /target da rapamicina em mamíferos (mTOR) via regula vários celular funções, incluindo o crescimento, proliferação, migração, e a apoptose. Tapia et al. relatou que a via PI3K /AKT /MTOR é ativado em GC e que a maioria das proteínas (formas fosforilada e não fosforilados) estudou até agora nesta via são sobre-expressos em tecidos tumorais [3]. MTOR é um membro chave da AKT /PI3K /MTOR e uma molécula de sinalização metabólica núcleo [4, 5]. polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) podem afetar a expressão MTOR e atividade transcricional, alterando assim a função da proteína. Até agora, um total de 14 polimorfismos neste gene têm sido estudados, três dos quais SNPs (rs2295080, rs1883965 e rs2536) têm sido mais amplamente relatado. O polimorfismo rs2295080 na região promotora é relatado para reduzir o risco de carcinoma de células renais [6], GC [7], e cancro da próstata [8], através da regulação negativa expressão da proteína endógena. O polimorfismo rs1883965 tem sido associada a um risco aumentado de GC [9] e do cancro escamoso esofágico [10]. Além disso, o polimorfismo rs2536 está relacionada com um aumento significativo do risco de cancro da próstata [8]. Além disso, o MTOR
polimorfismo rs11121704 está associada a piores parâmetros clínicos (morte, metástase e resistência à quimioterapia) [11]. Existem 45 exões no gene MTOR
, e o polimorfismo rs1064261 está localizada no exão 18. A variação T → C está localizado na fronteira do exão 18 e intrão 19, mas a sua relação com a doença ainda não é claro .

o AKT
gene é essencial para a sobrevivência da célula e codifica uma importante efetor a jusante da PI3K / AKT
/ MTOR
via que regula chave funções celulares, incluindo o metabolismo da glucose e a síntese de proteínas. AKT
, alternativamente conhecido como AKT1
, tem cinco polimorfismos amplamente estudados (rs3803300, rs1130214, rs2494732, rs2498804 e rs1130233); os quatro primeiros têm sido associados ao risco ou prognóstico do carcinoma da nasofaringe, carcinoma de células escamosas oral, e cancro do pulmão de células não pequenas. O polimorfismo rs1130233 está localizado no exon 8 e do G → Uma variação está localizada na fronteira do exão 8 e 7. O intrão AKT
1 AA haplótipo para ambos rs1130233 e rs2494732 é relatado para conferir um elevado risco de carcinoma da nasofaringe [12]; o haplótipo contendo alelos variantes de rs1130214 e rs3803300 polimorfismos aumenta significativamente a susceptibilidade ao carcinoma de células escamosas oral [13]. Portadores do genótipo (GT + GG) da AKT
1 rs2498804 ou o genótipo CT /TT da AKT
1 rs2494732 foram encontrados para ter um risco aumentado de metástases cerebrais de não-pequenas células cancro do pulmão [14]. AKT
1 rs3803300, rs1130214 e rs2494732 ter efeitos significativos sobre a sobrevivência em pacientes não-pequenas de câncer de pulmão de células: os pacientes com o alelo alelo rs3803300 G e rs1130214 G teve sobrevida global (SG) e sobrevida livre de doença mais curto (DFS) vezes [15].

Apesar de variações no MTOR
e AKT
desempenham papéis importantes na carcinogênese gástrica, nenhum estudo investigou a relação de AKT
polimorfismo com o risco GC e prognóstico. Além disso, a ligação mecânica entre o rs1064261 e tanto suscetibilidade e de sobrevivência de câncer MTOR
são desconhecidos. Para elucidar se MTOR Comprar e AKT
polimorfismos podem servir de risco e /ou marcadores prognósticos para o GC, investigamos MTOR
rs1064261 e AKT
rs1130233 polimorfismos em relação ao risco de GC e suas interações com H
. pylori
em um estudo de 1842 indivíduos de caso-controle. Em 205 indivíduos com dados suficientes, os parâmetros clínico foram analisados ​​para explorar a associação destes dois polimorfismos com prognóstico GC e, assim, identificar novos biomarcadores para o risco GC e prognóstico.

Materiais e Métodos

Desenho do estudo e população de estudo

o projeto deste estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Seres Humanos do primeiro Hospital Afiliado da China Medical University (Shenyang, China). Cada participante forneceu consentimento informado por escrito durante uma investigação epidemiológica. O desenho do estudo incluiu duas partes (polimorfismo e nível de proteína análises) e associações entre polimorfismos e risco de doença eo prognóstico foram investigados. Na análise de risco GC, os pacientes do GC eram do Primeiro Hospital Afiliado da China Medical University que obteve ressecção operação de cirurgia ou diagnóstico gastroscópico /tratamento entre 2004 e 2013. Os pacientes e controles AG foram recrutados a partir de um programa de controlo sanitário em Zhuanghe, Liaoning província, entre 2002 e 2013. Todos os diagnósticos foram baseados em gastroscópico e exames histopatológicos

Além disso, casos de GC foram classificadas em tipo intestinal e tipo difuso baseado na classificação de Lauren [16, 17].; classificação e estadiamento AG foram baseados no novo sistema Sydney [18, 19]. participantes de controle tiveram resultados normais do estômago, ou gastrite apenas. As informações sobre a história tabagismo, consumo de álcool e a família foram adquiridas pela "face a face" inquérito por questionário. Os fumantes e bebidas alcoólicas foram definidos da seguinte forma: se um fumavam mais do que uma vez por dia e se este durou mais de 1 ano, então este indivíduo foi definido como fumantes, e esta situação incluídos fumantes atuais e ex-fumantes que tinham parado de fumar há mais de 1 ano. As pessoas que não satisfaçam esta situação foram definidos como nunca fumaram. Se um consumido uma garrafa de cerveja ou um quinto libra de bebidas alcoólicas por dia e se esta situação durou mais de 1 ano, então essa pessoa era considerada bebedores. Indivíduos que não se encaixam nesse padrão foram definidos como pessoas que não bebem. sangue venoso em jejum foi obtido de cada participante e armazenadas a -20 ° C como soro e as células coagulado.

Para avaliar a relação dos polimorfismos com os parâmetros clínico e sobrevivência de GC, foi realizada uma análise de prognóstico de pacientes GC para quem os dados clínicos suficientes estava disponível. dados histológicos foram avaliadas de acordo com critérios da Organização de Saúde e tumor-nódulo-metástase (TNM) de espécimes patológicos pós-operatórias foi feita de acordo com a 7ª edição do da União Internacional Contra o Câncer (UICC) /Comité Misto Americana do Câncer (AJCC) ( 2010) critérios. Os pacientes com metástases à distância, antes da cirurgia, os que receberam radioterapia ou quimioterapia antes da cirurgia, e aqueles com informações insuficientes para a análise de prognóstico foram excluídos. A análise de sensibilidade foi realizada para testar se os pacientes excluídos teve efeito à análise de sobrevivência. Follow-up para todos os pacientes foi concluída em maio de 2014.

SNP genotipagem

DNA genômico foi extraído de amostras de sangue utilizando o método de fenol-clorofórmio [20] e diluído a concentração de trabalho de 50 ng /mL para MTOR
rs1064261 T → C e AKT
rs1130233 G → a genotipagem. As amostras foram colocadas aleatoriamente em placas de 384 poços e analisados ​​de forma cega para o estado da doença. A genotipagem foi realizada utilizando a plataforma Sequenom MassARRAY (Sequenom, San Diego, Califórnia, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. Para o controlo de qualidade, 5% das amostras foram submetidos a genotipagem repetido; os resultados foram de 100% consistente.

H. pylori exame de sorologia

análise de sorologia para detectar H
. pylori
infecção foi realizada utilizando ELISA ( H
. pylori
IgG kit ELISA, BIOHIT, Helsínquia, Finlândia), como descrito anteriormente [21]. Uma leitura de > unidades imunes 34 enzima foi considerado para indicar H
. positividade pylori
.

Detecção de proteínas mTOR e AKT em tecido

A análise imunohistoquímica foi utilizada para determinar a expressão de MTOR total e fosforilada e AKT (p-MTOR e p -Akt) proteínas em 65, amostras de tecido GC embebidos em parafina fixadas em formalina. As amostras de tecido foram cortadas em secções de 4 um de espessura e montadas em lâminas de vidro com poli-L-lisina-revestidas. Após a recuperação de antigénios de ácido cítrico, o anticorpo primário foi incubada com cortes de tecidos a 4 ° C durante a noite (concentração de diluição: MTOR e p-MTOR 1: 100, AKT 1: 300, e p-AKT 1:50, todos foram adquiridos a partir de Cell Signaling Tecnologia). Depois de três lavagens de 5 minutos em solução salina tampão de fosfato, as secções de tecido foram incubadas com anticorpo secundário biotinilado (Maixin, Fujian, China) e peroxidase de estreptavidina-biotina, durante 10 minutos cada, a 37 ° C. Para controlos negativos, o anticorpo primário foi substituído com tampão PBS.

A análise estatística

A análise estatística foi realizada usando SPSS (versão 18.0) software estatístico (SPSS, Chicago, IL, EUA). Hardy-Weinberg (EHW) foi avaliada em primeiro lugar em controlos saudáveis. odds ratio ajustados e intervalos de confiança de 95% (IC) para a relação entre ambos os polimorfismos e risco de doença foram calculados por regressão logística multivariada, com ajuste para sexo, idade, e H
. pylori
estado da infecção. . Em uma análise estratificada, quando estratificados por idade, o sexo e H
pylori
estado de infecção foram ajustados; . Quando estratificados por sexo, a idade e H
pylori
estado de infecção foram ajustados; e quando estratificada por H
. pylori
estado da infecção, o sexo e idade foram ajustados. O teste da razão de verossimilhança foi realizado para avaliar os efeitos da interação do genótipo e H
. pylori
no risco de doenças, comparando o modelo envolvendo apenas os principais efeitos do sexo, idade, H
. pylori
status, e do genótipo com o modelo completo (também contendo o termo de interação do genótipo com o H
. pylori
status). χ de Pearson foi utilizado ^{2 teste para avaliar a relação entre diferentes genótipos com os parâmetros clínico de GC. método exacto de Fisher foi utilizado quando a frequência esperada era menos do que cinco. O método de Kaplan-Meier foi utilizado para visualizar OS por grupo de genótipo. O teste de log-rank foi usado para investigar diferenças nas distribuições de sobrevivência. modelos de risco proporcional univariáveis ​​e multivariados de Cox foram realizadas para calcular o bruto ou rácios perigos ajustadas e IC de 95% para cada genótipo para estimar o efeito sobre a sobrevivência, com ou sem o ajuste para fatores de confusão. A análise de regressão logística foi utilizada para explorar o efeito de polimorfismos sobre a expressão da proteína ajustada por sexo, idade, e H
. Status pylori
. Bicaudal valores P
de <. 0,05 foram considerados estatisticamente significativos}

Resultados

características do paciente de linha de base

As características demográficas e clínicas de 1842 indivíduos envolvidos na análise de risco, compreendendo 483 doentes GC, 686 pacientes AG e 673 controles saudáveis ​​são apresentados na Tabela 1. Ambos os SNPs estiveram presentes em HWE; a distribuição dos genótipos está listada na Tabela 2. O resultado da análise de sensibilidade foi mostrado na Tabela S1, que verificou os pacientes excluídos não teve nenhum efeito na análise de sobrevivência. As características demográficas e clínicas dos 205 pacientes GC envolvidos na análise de sobrevivência, incluindo idade, sexo, classificação Borrmann, a classificação de Lauren, estágio TNM, padrão de crescimento, profundidade de invasão, metástase ganglionar, fumar, beber, história familiar, e H
. pylori
infecção são apresentados na Tabela 3.

Associação de SNPs com CG e AG risco

regressão logística multivariada foi utilizada para investigar a associação de MTOR
rs1064261and AKT
rs1130233 com GC e do risco AG. Não houve diferença significativa de MTOR
rs1064261 e AKT
rs1130233 sobre o risco de CON → AG, AG → GC, CON → GC, ou CON + AG → progressão GC (Tabela 2) .

na análise estratificação do sexo masculino (Tabela 2), os portadores do genótipo TC do MTOR
rs1064261 tinha um 1,55 vezes maior risco de GC em comparação com AG ( P
= 0,049, IC 95% 1,00-2,38); o alelo de AKT
rs1130233 conferido 1,32 vezes, 1,29 vezes e 1,30-fold aumentos na AG → GC, CON → GC, e (CON + AG) → progressão GC, respectivamente, sobre o G alelo ( P
= 0,013, IC 95% 1,06-1,64; P
= 0,038, IC 95% 1,01-1,64; e P
= 0,008, IC 95% 1,07-1,58, S2 Tabela). Na H
. pylori
grupo -negative, o AKT
rs1130233 genótipo GA foi associado com um risco 1,69 vezes maior de AG comparação com CON ( P
= 0,012, IC 95% 1,12-2,54, Tabela 2). Além disso, nenhuma associação significativa foi encontrada entre esses dois polimorfismos e do tipo intestinal ou do tipo difuso GC nas análises globais e estratificadas (S3 e S4 tabelas).

Em seguida, realizamos uma análise de interação para mTOR
rs1064261 e AKT
rs1130233 com o H
. pylori
. Os resultados indicaram que o AKT
rs1130233 (GA + AA) genótipo teve uma interação significativa com o H
. pylori
em CON → AG e progressão AG → GC ( P = 0,013
e P
= 0,049; Tabela 4). No entanto, nenhuma interação significativa de MTOR
rs1064261 com o AKT
rs1130233 foi observado para CON → AG → progressão GC nas análises globais e estratificadas (S5 tabela). Além disso, não houve interação significativa entre estes dois polimorfismos e H
. pylori
em CON → AG → progressão GC (Tabela 4).

Associações de SNPs com os parâmetros clínico de pacientes GC

Análise da relação de MTOR
rs1064261 e AKT
rs1130233 com os parâmetros clínico em pacientes GC sugeriu que o AKT
rs1130233 GA e AA (+ GA) genótipos variantes ocorrem mais frequentemente em pacientes GC sem metástases em linfonodos do que naqueles com metástases em linfonodos (GA 89,1% vs. 71,1%, P
= 0,012; GA + AA 92,2% vs. 81,1%, P
= 0,030). A GA, AA, e (GA + AA) genótipos foram mais frequentes em bebedores do que em pessoas que não bebem (GA 61,0% vs. 95,8%, P
= 0,047; AA 63,6% vs. 88,9%, P
= 0,047; GA + AA 76,8% vs. 96,9%, P
= 0,038; Tabela 5). No entanto, não houve associação significativa entre a MTOR
variantes rs1064261 e os parâmetros clínico em pacientes GC.

Não houve associação entre SNPs e sobrevida do paciente GC

univariáveis ​​e multivariada de riscos proporcionais de Cox modelos foram realizados para avaliar o efeito de mTOR
rs1064261 e AKT polimorfismos
rs1130233 sobre a sobrevivência GC (Tabela 6). Como a classificação de Lauren, estágio TNM, padrão de crescimento, profundidade de invasão e metástases linfonodais foram significativamente associados com a sobrevivência ( P Art < 0,05, mostrada na Tabela 3), eles foram considerados como co-variáveis ​​ajustadas no Cox proporcional perigos modelo de regressão. Os resultados não mostraram associação significativa entre os dois SNPs e prognóstico GC (Tabela 6). Da mesma forma, a análise estratificada não demonstrou qualquer associação significativa entre o genótipo SNP e prognóstico GC (S6 Tabela).

SNP genótipo se correlaciona com a expressão de proteínas totais e fosforiladas

A expressão de MTOR total e fosforilada e proteínas AKT foi analisada nos tecidos a partir de diferentes grupos de participantes (Fig 1). No geral, não houve associação significativa entre as mTOR
rs1064261 ou AKT
rs1130233 polimorfismo e proteínas totais ou fosforilada mTOR e AKT. Na H
. pylori
subgrupo -positivo, a proporção de células P-AKT-positivas foi significativamente maior no grupo de genótipo variante do que no grupo de tipo selvagem ( P
= 0,045; Tabela 7).

Discussão

neste estudo, relatamos pela primeira vez uma associação de MTOR
rs1064261 e AKT
polimorfismos rs1130233 com risco GC e prognóstico . Nos machos, o MTOR
rs1064261 (TC + ​​CC) genótipo eo alelo A AKT
rs1130233 foram associados com um aumento do risco GC. Em H
. pylori
machos -negative, o AKT
rs1130233 (GA + AA) genótipo foi associado a um aumento do risco AG. Além disso, o AKT
rs1130233 (GA + AA) genótipo mostraram uma interacção significativa com H
. pylori
infecção em CON → AG → progressão GC. O genótipo variante do AKT
rs1130233 foi associado com o aumento da expressão da proteína p-AKT. O polimorfismo AKT
rs1130233 foi também associada a metástases em linfonodos e beber álcool. Estes resultados fornecem evidência experimental para apoiar MTOR e AKT como potenciais biomarcadores de tipos específicos de GC e também fornecer pistas para a interação entre H
. pylori Comprar e MTOR /sinalização AKT.

O MTOR
gene está localizado no cromossoma humano 1p36.2 e codifica a proteína 289 kDa MTOR, composta por 2549 aminoácidos . O mTOR é um membro da família da cinase de fosfatidilinositol (PIK) e tem serina /treonina-cinase actividades. Descobrimos que o MTOR
gene (TC + ​​CC) genótipo variante foi associada a um aumento do risco GC nos homens, sugerindo que ele está envolvido na carcinogênese. MTOR existe principalmente no citoplasma sob condições normais e entra no núcleo após activação para regular a alvos a jusante de iniciação eucariótico factor de 4E (eIF-4E) proteína de ligação 1 (4E-BP1) e ribossomas 40S subunidade pequena proteína S6 cinase (p70S6K) [22 -24]. O último é um membro essencial da AKT /via PI3K /MTOR e uma molécula de sinalização metabólica central. MTOR integra uma variedade de sinais celulares de fatores de crescimento e estado nutricional e energia; Assim, tem funções biológicas importantes na angiogénese e o crescimento celular, a proliferação, o metabolismo, a migração, a diferenciação e a apoptose [25]. Sua função é estreitamente ligada à transformação do normal para células cancerosas e a proliferação de células cancerosas. variações genéticas nos genes da via de sinalização MTOR ( PI3K
, AKT
, e PTEN
) pode promover carcinogênese [26-28]. mTOR
SNPs são relatados para ser associado com a susceptibilidade a GC [7, 9], carcinoma de células renais [6], o cancro da próstata [8], e cancro escamoso esofágico [10]. Estes SNPs podem afectar os níveis de expressão e a actividade de transcrição MTOR, alterando assim a função da proteína. O alelo G de MTOR
polimorfismo rs2295080 está associada com um risco reduzido de GC, possivelmente resultante da actividade do promotor reduzida e a expressão de ARNm [7]. Outra MTOR
polimorfismo localizado na região promotora, rs1883965 G → A, confere a um aumento dos riscos de GC [9] e câncer epidermóide do esôfago [10]. Os nossos resultados sugerem que a (TC + ​​CC) genótipo está associada com um risco aumentado de GC no sexo masculino, embora tenha sido observado nenhum efeito sobre a expressão da proteína. MTOR
pode promover a proliferação celular e um tanto características "oncogênicos". O genótipo variante pode ter ainda mais actividade oncogénica. Como os homens são mais susceptíveis de serem expostos a múltiplos fatores de exposição ao risco (tabagismo, etilismo e hábitos de vida pouco saudáveis), portadores de determinado genótipo pode ser suscetível a um risco aumentado de GC.

AKT
, a V- AKT
timoma murino homólogo de oncogene viral, mapeia para o cromossoma humano 14q32.32 e codifica uma proteína de 56 kDa, que consiste de 480 aminoácidos [15]. AKT é um efector importante da via de sinal de PI3K /AKT /mTOR e de mutação genética ou a expressão anormal da proteína podem alterar uma variedade de processos celulares, incluindo a migração, a proliferação, crescimento e sobrevivência. Além disso, a activação AKT está envolvida na proliferação celular e apoptose, o que está relacionado com e progressão de cancro [29]. AKT
SNPs são relatados para ser associados com a susceptibilidade a e /ou o prognóstico de vários tipos de câncer, incluindo carcinoma da nasofaringe [12], carcinoma de células escamosas oral [13, 30], o cancro do pulmão de não pequenas células [14 , 15], o adenocarcinoma ductal pancreático [31], e GC [32] através de efeitos sobre a expressão da proteína e a actividade de transcrição. Wang et al. estudaram quatro SNPs incluindo rs1130233 em uma população chinesa [13], e descobriu que três polimorfismos foram associados com susceptibilidade ao carcinoma de células escamosas oral ou DFS, mas sem nenhuma relação significativa para rs1130233. Zhang et al. informou que haplótipos AA de AKT
rs1130233 e rs2494732 conferido um aumento do risco nasofaríngea carcinoma [12] e que alguns AKT
haplótipos causar expressão aumentada da proteína AKT [33, 34], levando a celular alterado migração e proliferação. Portanto, o AKT
rs1130233 alelo pode ter aumento da atividade proliferativa. Neste estudo, verificou-se que o AKT
rs1130233 alelo conferido um risco aumentado de GC nos machos. Geralmente, os homens têm uma maior incidência GC e uma taxa de mortalidade GC mais elevado do que mulheres adultas [35]. O alto nível de exposição dos homens a fatores ambientais de risco (tabagismo, consumo e hábitos de vida pouco saudáveis) aumenta a sua susceptibilidade para GC [36]. Como o alelo pode ter atividade proliferativa mais forte, o efeito combinado da AKT
polimorfismo e gênero poderia explicar parcialmente o risco GC alta observada associada ao AKT
rs1130233 polimorfismo no sexo masculino.

Além disso, descobrimos que na H
. pylori
subgrupo -negative, o AKT
rs1130233 genótipo (GA + AA) foi associado com aumento do risco AG. O AKT
rs1130233 polimorfismo mostrou uma interação significativa com o H
. pylori
infecção em CON → AG → progressão GC. É amplamente aceito que H
. pylori
é uma das principais causas de GC. H
. pylori
fatores virulentos podem induzir a proliferação celular anormal e apoptose através da regulação das vias de sinalização (incluindo PI3K /AKT); este é um hotspot pesquisas recentes [37-39]. Tabassam et ai. sugerido que a fosforilação de AKT induzida pela H
. pylori
fatores de virulência CAG PAI e OIPA regula sinais intracelulares responsáveis ​​por uma série de funções celulares envolvidas na carcinogénese gástrica. A promoção específica de AKT serina ou treonina 473 308 fosforilação por cag PAI e OIPA pode perturbar sinais de proliferação e apoptose a jusante. Uma combinação de cag PAI e OIPA é suficiente para activar a via PI3K /AKT PDK1 e /ERK /sinalização a jusante [39]. Nakayama et al. informou que H
. pylori
factor de virulência VacA induz a função β-catenina através da activação da via PI3K /AKT e inactivação GSK33β [38], regulando, assim, a proliferação celular, a diferenciação e a apoptose. Estes dados sugerem que a interacção de H
. pylori
com AKT activada tem uma função biológica. No entanto, nenhum dos dois SNPs incluídos neste estudo nem H
. pylori
no contexto desses SNPs mostraram uma interacção significativa com GC. No geral, esses dados enfatizam a importância do papel do AKT
rs1130233 polimorfismo na via PI3K /MTOR /AKT. Além disso, no H
. pylori
subgrupo -positivo, aqueles com a AKT
genótipo variante rs1130233 tinha aumentado expressão p-AKT. Como esse polimorfismo mostrou uma interação com H
. pylori
, o efeito desse polimorfismo na expressão de proteínas só pode surgir na presença de H
. pylori
. Uma mutação genética que conduz a expressão anormal de AKT é relatado para promover a migração e proliferação de células [40, 41], o que pode explicar por que este polimorfismo aumentou o risco de AG. Futuros estudos de grande escala são necessários para confirmar estes resultados.

Nós também comparou a distribuição genotípica destes dois polimorfismos em grupos com diferentes parâmetros clínico e avaliou sua relação com o prognóstico GC. Descobrimos que o AKT
rs1130233 GA, AA, e (GA + AA) genótipos foram mais frequentes em bebedores do que em pessoas que não bebem. Nós, portanto, supor que os bebedores com AKT
rs1130233 GA, AA, e (GA + AA) genótipos são mais suscetíveis a GC. Avan et ai. [31] relatou que o AKT
rs1130233 Um alelo é associado à menor sobrevida dos pacientes de adenocarcinoma ductal pancreático, o que pode ser atribuído à eficiência a apoptose reduzida AKT1
mRNA e expressão de proteínas e reduzida [33 , 42]. O AKT
rs1130233 alelo A é um genótipo de risco para o câncer, possivelmente em associação com o consumo de álcool como o consumo de álcool foi um dos fatores de risco aumentado de GC [43-46]. No entanto, não houve associação significativa destes dois SNPs com a sobrevivência GC foi encontrado por análise de regressão de Cox. Devido ao tamanho relativamente pequeno da amostra, o viés de memória pode existir no estudo caso-controle e status resultado pode ter causado casos de alterar o seu perfil de risco. Portanto, mais experimentos e estudos de grande escala são necessários para confirmar nossos resultados.

O presente estudo tem algumas limitações. Em primeiro lugar, o tamanho da amostra foi relativamente pequeno, especialmente para análises de sobrevivência e expressão de proteína, sendo que ambos precisem de ser confirmados em grandes populações. Em segundo lugar, apenas a OS foi analisada na análise de sobrevivência e outros parâmetros prognósticos tais como a sobrevida livre de progressão também são garantidos. Em terceiro lugar, a análise de sobrevivência foi realizada somente em um subconjunto de toda a pacientes GC e que possam tornar a probabilidade de uma polarização selectiva, e um tamanho de amostra para o estudo prognóstico deve ser realizada no futuro próximo. Em quarto lugar, as experiências funcionais são necessários para elucidar o mecanismo da doença subjacente.

Conclusão

Em resumo, a relação de MTOR
rs1064261 e AKT
polimorfismos rs1130233 com susceptibilidade GC e oS foi mostrado pela primeira vez. mTOR
rs1064261 e AKT polimorfismos
rs1130233 foram significativamente associados com o risco GC em homens. O AKT
polimorfismo rs1130233 e H
. pylori
mostrou uma interação significativa no CON → AG → progressão GC. O polimorfismo AKT
rs1130233 foi associado com o aumento da expressão da proteína p-AKT em H
. pylori
indivíduos -positivas.

• PLOS ONE: Dietary consumo de gordura e risco de câncer gástrico: A Meta-análise de estudos observacionais
• PLOS Computational Biology: Descoberta de Drogas Sinergias em células de câncer gástrico previsto por modelagem lógica