Ploche ONE: Umlčanie XB130 je spojené s oboma prognóze a chemosenzitivity žalúdočné Cancer

abstraktné

XB130 je novo vyznačuje adaptér proteín, ktorý bol zaznamenaný na podporu rastu nádoru štítnej žľazy, ale jeho úloha v progresii iné druhy rakoviny, ako je rakovina žalúdka (GC) zostáva neznámy. V súlade s tým sme skúmali súvislosť medzi expresiou XB130 a prognóza pacientov s GC. Tieto predmety boli 411 pacientov s GC v niekoľkých fázach I až IV. XB130 expresie bola skúmaná v chirurgických vzoriek GC. Kaplan-Meierovej analýzy a Cox modelu proporcionálneho rizika boli použité posúdiť prognostický význam XB130 pre prežitie a recidívy. Okrem toho, GC bunky stabilne prenesené s XB130 krátkej vlásočnicové RNA boli stanovené pre analýzu účinku XB130 na citlivosť chemoterapie. Výsledky ukazujú, že obaja XB130 mRNA a expresie proteínu bola detekovateľná v normálnej žalúdočnej tkanive. Pacienti I-III celkovej doby prežitia pacientov fáza IV a obdobie bez príznakov ochorenia po radikálnej resekcii GC v prvej etape boli významne kratšie pri imunohistochemické farbenie na XB130 bola nízka, ako keď farbenie bola vysoká (obaja p Hotel <0,05). XB130 výraz tiež predpovedal citlivosť nádoru k niekoľkým chemoterapeutík. Životaschopnosť ako XB130-tlmičom SGC7901 bunky a bunky divokého typu bola potlačená 5-fluorouracil (5-FU), cisplatiny a irinotekanu a to spôsobom závislým od dávky, ale cisplatina a irinotekan boli citlivejšie voči sXB130-umlčených GC buniek a 5-FU vykazovali vyššiu citlivosť na bunky divokého typu. Ak sa nechajú reagovať o 5-FU, pacienti s vysokou expresiou XB130 nádorov mala vyššiu mieru prežitia ako pacienti s nízkou expresiou nádorov. Tieto zistenia naznačujú, že znížená expresia XB130 proteín je prognostický biomarker pre kratšie prežitie a vyššie recidívy u pacientov s GC, ako aj pre reakciu na chemoterapiu

Citácia :. Shi M, Huang W, Lin L , Zheng D, Zuo Q, Wang L, et al. (2012) Umlčanie XB130 je spojené s oboma prognóze a chemosenzitivity z rakoviny žalúdka. PLoS ONE 7 (8): e41660. doi: 10,1371 /journal.pone.0041660

Editor: Zilong Wen, Hong Kong University of Science and Technology, Čína

prijatá: 31. marca 2012; Prijaté: 24.júna 2012; Uverejnené: 23.srpna 2012

Copyright: © Shi et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bol podporený dotácií z Národného programu na kľúč projekt základného výskumu (2012CB945100, WL a vl), tím Program Natural Science Foundation v provincii Guangdong, Čína (S2011030003134, WL a vl). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

onkogény a anti-onkogény majú dôležitú úlohu v rozvoji a progresii karcinómu žalúdka (GC) a genetická heterogenita bolo preukázané, že vplyv na prognózu výrazne. Z tohto dôvodu, lov nových génov a proteínov s potenciálne vhodné ako diagnostické alebo prognostické nástroja je dôležitá, a zacielenie nových onkogénov je ďalší sľubný prístup k liečeniu rakoviny.

XB130 je novo označené adaptér proteín, ktorý je silne exprimovaný v sleziny a štítnej žľazy u ľudí, aj keď vykazuje oslabené v obličiek, mozgu, pľúc, pankreasu a [1]. XB130 bola zistená v folikulárnej a papilárnej karcinóm štítnej žľazy, rovnako ako v ľudskej pľúcnej karcinóm bunkových línií [2]. Hoci jeho expresie bola znížená u karcinómu štítnej žľazy, zistilo sa, XB130 byť promótor tumor [2]. Bolo oznámené, že XB130 má nielen úlohu v bunkovej proliferácii, prežitie, motilitu a invázie [2], [3], [4], ale je tiež zapojená do signálnej transdukcie [1]. XB130 je regulovaná Rac a cytoskeletu [3], a je zapojený do aktivácie c-Src [1] a fosfatidyl-inositol-3-kinázy (PI3K) /Akt dráhy [4], ktorý je zase regulovať cytoskeletu funkcie [3]. Tieto signálne dráhy bolo tiež preukázané, že majú dôležitú úlohu v rozvoji a progresii GC [5], [6], [7]. Z toho dôvodu, že došlo k úlohe XB130 v GC tiež. Avšak, žiadny výskum v tejto novo nájdené adaptéra proteínu bolo vykonané v oblasti gastroenterológie tak ďaleko. V tejto štúdii sme predpokladali, že XB130 expresia môže byť spojené so prežitie a /alebo recidívy nádoru, rovnako ako s chemosenzitivity GC.

Výsledky

XB130 expresie v normálnej žalúdočnej tkaniva a GC

na rozdiel od predchádzajúcej správy, sme potvrdili, že XB130 je konštitutívne exprimovaný v normálnych tkanivách ľudských pečene, hrubého čreva, sleziny a žalúdka (obrázok 1a). Imunohistochémia bola vykonaná na vyhodnotenie expresie XB130 vo všetkých 411 párov parafínových rezoch z GC a ich okolitom normálnom tkanív. Zistili sme, že XB130 bol exprimovaný prevažne v cytoplazme v normálnej žalúdočnej tkanive, zatiaľ čo to bolo významne downregulated v tkanivách GC. Ďalej roztriedené GCS do XB130 pozitíva (vysoká expresia sa skóre ≥3) a negatívy (nízka expresia sa skóre < 3) farbenie skóre (obrázok 1b). Výskyt XB130 klady a zápory v stupni I až III GC boli bez rozdielu, ale časť XB130 negatívov bol vyšší v stupni IV a v skupinách opakovanie pooperačných (obrázok 1c). Kvantifikované hladina mRNA XB130 bola zistená etapa IV vzorkách paliatívnej resekcie a výrazne znížiť vo vyspelých GC (obrázok 1d). Podobne, znížená expresia proteínu XB130 v pokročilom GC bola tiež overená Western Blot (obr 1e).

nízka expresia XB130 koreluje so zlou prognózou

v analýzy celkových 411 prípadov GC v štádiu I-IV, kumulovaná miera prežitia pacientov s XB130 negatívneho farbenia bola významne nižšie ako tie, s pozitívnym farbením (obrázok 2a). U pacientov s štádiu IV GC, ktorí stratili chirurgia liek príležitosť, sa ukázalo významne nižšiu mieru prežitia vo XB130 negatívne skupine (obrázok 2b). Stredná celkové prežitie pacientov v pokročilom štádiu už v XB130 pozitívny skupine, než v skupine negatívne (16,7 vs. 8,5 mesiacov, HR pre negatívne skupiny bolo 1,72, p = 0,011; Tabuľka 1). U pacientov v štádiu I-III GC, ktorí dostávali radikálnej resekcii operáciu prežitia bez ochorenia v XB130 pozitívny skupine bola vyššia ako negatívna skupine (p menšie ako 0,05; Obr 2c), pričom medián času do opakovanému výskytu bolo 36 a 24 mesiacov v pozitívnych a negatívnych skupín, v tomto poradí (tabuľka 1, HR negatívnych pacientov bol 1,2, p = 0,022). Tieto zistenia ukazujú, že nízka expresia XB130 je spojená s kratšou prežitie a vyšší recidívy u pacientov s GC.

prognostická hodnota ostatných parametrov klinicko

Vplyv ďalších klinicko parametrov na celkové prežívanie a k chorobe zadarmo miera prežitia bola uvedená v tabuľke 1 a na obrázku 3. Okrem XB130, výsledky prežitie Kaplan-Meier funkčné analýzy u pacientov s štádiu IV zoskupené podľa známych faktorov, ako je karcinoembryonálneho antigénu (CEA) sústredenie, diferenčné stupeň, metastáza , ascites a chemoterapia preukázala významný vplyv na prežitie kumulovanú (obrázok 3 a-e). V jednorozmerné regresná analýza Cox u pacientov prijatých radikálna terapia, sme zaznamenali, že etapa bola tiež významným prognostickým faktorom pre znovuobjavenie (tabuľka 1).

V viacnásobnej analýzy pomocou Coxovho modelu sme zistili, že XB130, CEA, chemoterapie a ascites (všetko p < 0,01) boli nezávislé faktory, ktoré predpovedajú HR pre úmrtia u pacientov v štádiu IV, zatiaľ čo XB130 (p = 0,044) a fázy (p < 0,000) boli nezávislé faktory, ktoré predpovedajú, vysokého predstaviteľa pre znovuobjavenie po radikálnej resekcii GC U pacientov v štádiu I-III (tabuľka 2).

Chemoterapeutiká citlivosť v reakcii na XB130 umlčanie

aby bolo možné zistiť terapeutický potenciál pri zacielení XB130 sme hodnotili životaschopnosť buniek SH- XB130 v odpovedi na 5-FU, cisplatiny a irinotekanu. Životaschopnosť buniek SH-XB130 a divokého typu skupín boli obaja potlačené všetky tri chemoterapeutických činidiel v závislé na dávke spôsobom. V tomto poradí, v porovnaní s SH-XB130, kontrola divokého typu ukázali, citlivejšie na 5-FU prejavuje významne menej životaschopnosti buniek (obrázok 4a), vzhľadom k tomu, cisplatinou (obrázok 4b) a irinotekanu (obrázok 4c) bolo preukázané, že je účinnejšia v SH- XB130 skupina než pod kontrolou divokého typu.

analýza prežitia u pacientov GC príjem 5-FU terapiou

Zoradiť podľa XB130 negatívne a pozitívne, v hodnotíme 5-FU liečby u pacientov s štádium IV GC retrospektívnej štúdie. Liečení 5-FU, pacienti s XB130 pozitívne farbenie užil vyššiu mieru prežitia než negatívne skupine (obrázok 4d). Zodpovedajúcim spôsobom XB130 pozitívnych výsledkov s liečbou 5-FU mala dlhší strednej celkové prežitie (obrázok 4D). Vzhľadom k tomu, tam bolo niekoľko pacientov liečených cisplatinou alebo irinotekanu, vplyv XB130 úrovne expresie o klinických terapeutickými účinkami neboli zrovnané v tejto štúdii.

Diskusia

XB130 je nedávno klonovaný 130 kDa adaptér proteín a je údajne prítomný prevažne v štítnej žľaze a sleziny tkaniva potvrdených Northern blot a hrá multifunkčné úlohu v prežitie buniek, proliferácie, invázie do nádoru štítnej žľazy [2], [3], [4], ale jeho mRNA a expresie proteínov v iných tkanivách nebola potvrdená pomocou real-time PCR, western blot alebo imunohistochémia. V tomto článku sa budeme najprv dali dôkaz, že XB130 mRNA a proteín bol tiež konštitutívne vyjadrený v normálnej žalúdočnej tkanive a relatívne nižšia expresiu v GC buniek. Tieto zistenia sú v rozpore s predchádzajúcimi správami, že XB130 mRNA bol ťažko zistiteľný v iných tkanivách okrem štítnej žľazy a slezina [1], [4], čiastočne preto, že iba použité Northern blot pre potvrdenie. XB130 expresie je znížená v nádoru štítnej žľazy, je však celkom jasné, či XB130 je prognostický biomarker ďalších zhubných nádorov, ako je rakovina žalúdka (GC) [2]. Tak, aby sa potvrdilo, že XB130 sa podieľa na progresiu GC, sme analyzovali prežitie alebo recidívu na 411 pacientov s GC a poznamenať, že nízka expresia XB130 predpokladá nižšia prežitie a vyššia opakovanie. Okrem toho, chemoterapeutiká citlivosť zakladá na XB130 expresie bola hodnotená prvýkrát, a bunkové experimenty a klinické retrospektívnej štúdii ukázala, že upregulace XB130 zvyšuje citlivosť liečivá k cisplatiny a irinotekanu a znižuje citlivosť liek na 5-fluorouracil.

Vzhľadom k tomu, karcinogenita v predchádzajúcich správach [2], [8], [9], XB130 by mala byť považovaná za onkogénne iný ako proteín nádoru potláčajúce, aj keď je potrebné ďalšie štúdie na overenie, či je to tiež v prípade GC. Potom, ako vysvetliť klinický význam nášho klinického pozorovania, že XB130 zníženie expresie predpovedá nízku celkovú prežitie v pokročilom GC a vyšší recidívy u pacientov liečených radikálny resekcia operáciu? V skutočnosti je známe, že môže dôjsť k vzniku nádorov z zmenami mnohých génov a proteínov, zatiaľ čo XB130, adaptér proteín s viac ako jednou funkčnou doménu, môže byť ovplyvnená niekoľkými faktormi hornom a dolnom toku. Preto, že je príliš predčasné posúdiť, či gén alebo proteín je onkogénne alebo nie len zakladá na jeho expresie v klinických vzorkách, aj keď posledne menovanej náznak nejakej stopy. V skutočnosti, downregulaci XB130 v GC, môže byť považovaný za vyrovnanie, pretože niektoré nádorové supresormi by mali byť uvoľnené odolávať XB130 počas progresie GC. Podobne bolo oznámené, že nádorový supresor p53 expresie bola v zle diferencovaný GC vyššie ako tie v dobre diferencovaných [10], zatiaľ čo v skorých karcinómov žalúdka s nízkou úrovňou apoptózy, zvýšenie expresie Bcl-2 a p53 bolo viac pravdepodobné k podpore metastáz [11], [12].

XB130 môže byť preto-onkogén, ktorý zachováva v normálnej tkanive. Takéto protoonkogeny môže prispieť k udržaniu fyzickej funkcie obnovy buniek a migrácia smerom nahor v normálnom žalúdku. Medzitým je tu ďalší sada regulačné gény, ktoré bránia normálnu bunku nad zbraní a metaplázia. Avšak, akonáhle microecological rovnováha disequilibrated, množenia buniek a metastáz je mimo kontroly, v dôsledku toho vedie k karcinogenézy [13]. Táto klasická teória protoonkogenu môže podať prijateľné vysvetlenie, prečo normálny tkanivo s takou vysokou XB130 výrazu stále zostáva "zdravé". Je známe, že mnoho génov a signálne dráhy hrajú pre-onkogénne alebo anti-onkogénne role na takým spôsobom, v závislosti na situácii, takže to nie je nezvyčajné, že rovnaký gén môže pôsobiť rôzny účinok v rôznych fázach alebo v rôznych typoch tkanív vývoja karcinómu [ ,,,0],14], [15], [16]. V tejto štúdii, aj keď sme nemali dotýkať funkcií XB130 v normálnej žalúdočnej tkanive, táto téma je zaujímavé, ako dobre a je potrebné ďalší výskum.

Ak XB130 výraz vzor môže slúžiť ako náhradný marker prediktívne chemoterapie odozva, to by tiež poskytnúť vysvetlenie pre prognózu. V súčasnej dobe, fluoropyrimidinkarbamát deriváty-based a platinovú zlúčeninou na báze kombinovanej režimy boli prijaté ako konvenčná liečba prvej línie pre GC [17], zatiaľ čo Irinotecan, je inhibítor topoizomerázy I, sa používa ako liečba druhej línie [18], a cisplatina má boli z veľkej časti používajú pri liečbe pokročilého, neodstrániteľný GC [19]. V tomto výskume, štúdie chemoterapeutickej citlivosťou Na báze XB130 úrovne expresie boli vykonané. V GC buniek, XB130 knockdown uvedené lepšiu schopnosť reagovať na cisplatiny a irinotekanu, ale s menšou citlivosťou na 5-FU. Naše klinické údaje ukázali kratšiu celkové prežívanie u 5-FU-liečených pacientov s nízkou expresiou XB130, čo naznačuje, že XB130 zníženie expresie znižuje schopnosť reagovať na 5-FU, čo môže byť ďalšie vysvetlenie pre zlou prognózou u pacientov s nízkou expresiou XB130 v tejto štúdii. Naše nálezy v bunkovej línii GC zapliesť, že v pokročilom GC, z ktorých väčšina sú uvádzané podľa XB130 nízkou expresiou, od cisplatiny a irinotekanu iný ako 5-FU môže mať väčší prospech. Vzhľadom k heterogénne genómovej pozadí, ako je iný výraz XB130 v GC, je možné, že niektoré populácie by mohli mať prospech z irinotekanu a /alebo cisplatinou, ako je navrhnuté v našej bunkovej experimentu, a je užitočné pre ďalšie vyšetrovanie. Ďalšie potenciálny vyšetrovanie môže určiť, či XB130 expresné vzory môžu byť použité pre pomoc klasifikáciu pacientov do rôznych multimodálnych liečebných režimov.

V súhrne, naša Táto štúdia poskytla prvý dôkaz, že XB130 existencie v žalúdočnej tkanive a GC prvýkrát , Overili sme, že chemoterapeutickej citlivosť vyhodnotenie Na báze XB130 výraz bol prvýkrát riadil, čo naznačuje, že pacienti XB130 nízka expresia môže byť citlivý na cisplatiny a irinotekanu, ešte staršie dôkazy vyžaduje. Klinická prospektívna štúdia zahŕňa (1) XB130 môže pôsobiť ako GC prognostického biomarkeru pre svoju nízku expresiou zapletať za nepriaznivých výsledkov; (2) Vzhľadom na to, XB130 nízku vyjadrené GC reagujú na cisplatiny a irinotekanu lepší ako 5-fluóruracil v našej chemoterapeutickej štúdií citlivosti, posúdenie XB130 prejavu môže pomôcť riadiť klinickú liečbu v GC.

Materiály a metódy

pacienti a tkanivové vzorky

Všetky 411 pacientov bola histologicky diagnostikovaná v Nanfang Hospital, južnej Medical University (Guangzhou, Guangdong, Čína) od roku 2000 do roku 2011. štádiu nádoru bola definovaná podľa 7. vydanie rakoviny AJCC staging manuálny 2010. Vzorky na diagnostické účely boli nadobudnuté so súhlasom od každého pacienta. Štúdia bola schválená Institutional Review Board nemocnice Nanfang, južnej Medical University. Priemerná doba sledovania u všetkých pacientov bolo 59,5 (95% CI: od 55,5 do 63,5) mesiacov. Klinické charakteristiky a XB130 expresie všetkých pacientov GC sú popísané v tabuľke 1. U pacientov z I-III, stupeň GC bola vykonaná radikálna resekcia, zatiaľ čo u pacientov v štádiu IV získal paliatívnej operáciu.

Pred imunohistochémia analýzu, vzorky primárnej tkaniva zaliate do parafínu boli narezané na 4 um silné oddiely, a upevnené na sklenené sklíčka. Deväť párov nádorových a rakovinou priľahlé normálneho tkaniva od pacientov s GC etapa IV boli náhodne odobraté pre kvantitatívne real-time PCR a šesť párov pre western blot analýzu.

Imunohistochémia

Imunohistochemické farbenie bolo vykonané použitím Dako Envision System (DAKO, Carpinteria, CA) a králičie anti-XB130 AB (1: 100; Abnove) nasledujúceho odporúčaného protokolu výrobcu. Pre posúdenie XB130 sekcie tkanivo bolo snímaná úplne priradiť skóre. Intenzita sfarbenia bola hodnotená ako 0 (negatívne), 1 (slabý), 2 (stredná), alebo 3 (silný). Rozsah farbenie bola hodnotená ako 0 (0%), 1 (1% -25%), 2 (26% -50%), 3 (51% -75%), alebo 4 (76% -100%), podľa percentám pozitívne zafarbených oblastí vo vzťahu k celej oblasti karcinóm (alebo celého úseku u bežných vzoriek). Súčet skóre farbenie intenzity a rozsah bol používaný ako konečné skóre farbenie (0-7) pre XB130. Za účelom vyhodnotenia prežitie, nádory, ktoré majú konečný farbenie skóre ≥3 boli považované za pozitívne. XB130 imunologické bola hodnotená nezávisle na sebe dvoma jednotlivcami nepoznali klinických parametrov.

Fluorescencia kvantitatívnej PCR

Celková RNA bola extrahovaná s použitím súpravy TRIzolu (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Reverzný transkripciu cDNA potom bola získaná s iScript ™ cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) podľa návodu výrobcu. Všetky dáta RNA boli prezentované vo vzťahu k upratovanie génu beta-aktínu metódou ΔΔCt. Rutinné PCR bolo tiež vykonané skúmať výraz XB130 v inom orgáne ľudských a myších (primer sekvencie v tabuľke S1).

Western blotting

Tkanivá boli dvakrát premyté studeným fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom ( PBS) a lyžovanie proteín lyzačného pufra po dobu 30 min. Centrifugácie bola vykonávaná, a supernatant obsahujúci proteín bol zachovaný. Proteínové lyzáty boli oddelené electrophorectically na 10% SDS-polyakrylamidovom gélu a prenesené na PVDF membránu (Immobilon P, Millipore, Bedford, MA). Potom, imunoblotování bola vykonaná pomocou králičieho anti-XB130 protilátky (PradoWalnut, CA, USA) a beta-aktínu (Santa Cruz, CA). Imunoreaktívnych pásy boli vizualizované metódou rozšírené chemiluminiscencie (Amersham) s Western blot detekčného systému (Kodak Digital Science, Rochester, NY, USA) a boli kvantifikované pomocou softvéru Image QuantityOne v4.6.2.

Bunková kultúra

bunky z bunkovej línie SGC7901 boli kultivované v kompletnom médiu [Roswell Park Memoriál Institute (RPMI) 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) s 10% fetálnym hovädzím sérom (FBS) (Hyclone)]. Stabilne transfekované bunky boli udržiavané v médiu s prítomnosťou puromycinu (Sigma-Aldrich). Bunky boli inkubované pri 5% CO _{2 pri teplote 37 ° C.}

Stabilne transfekované bunkové línie zriadenie

Tri rôzne zhrnieme sekvencie boli klonované do XB130 pSUPER-Rretro-puromycin plazmidu štiepenia enzýmom bGL II, Hind III (New England Biolabs) a T4 DNA LIGÁZA (Takara). Oba pSUPER-Rretro-Puro-shXB130 a pSUPER-Rretro-Puro boli postavené. pSUPER-Rretro-puromycin-shXB130 v kombinácii s balením plasmidového vektora alebo šifrovacím vektora ako negatívna kontrola boli zabalené do vírusu metódou fosforečnanu vápenatého. SGC7901 bunky boli transfekovány plazmidy zhrnieme za použitia Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), opakuje trikrát. Bunky boli kultivované ako je uvedené vyššie, a jednotlivé kolónie boli vybrané metódou Western blot a fluorescenčné kvantitatívne PCR a použitý pre ďalšie experimenty. Tri zhrnie cielenie XB130 a jeden scramble boli navrhnuté (tabuľka S2). Ako mRNA a expresie proteínov z XB130 (primer sekvencie v tabuľke S1, výsledky expresie na obr S1A, B) bola potvrdená real-time PCR a westernovým prenosom. Účinnosť infekcii adenovírusom bola zobrazené na obr S1C a D.

Životaschopnosť buniek analýza

trypsinizovány a schovať na 96-jamkové doštičky v počiatočnej hustote 0,2 x 10 ^{4 /jamku, boli bunky kultivované a pozorované na 1, 3, 5 a 7. deň. Životaschopnosť buniek bola stanovená pomocou testu metyl thiazolyltetrazolium (MTT), podľa inštrukcií výrobcu. Absorbancia bola meraná pri 570 nm, s 655 nm ako referenčnej vlnovej dĺžky. Všetky experimenty boli vykonávané v troch vyhotoveniach.}

posúdenia Chemoterapeutiká citlivosťou v GC buniek

Bunky kontroly divokého typu a SH-XB130 boli kultivované v médiu s 5-fluorouracil (5-FU), cisplatina alebo irinotekan o rôznych koncentráciách. Štyridsiate ôsmej hodiny neskôr, životaschopnosť buniek bola hodnotená.

Štatistická analýza

Výsledky sú uvedené ako stredná hodnota ± SEM alebo medián. Boli použité testy chi-kvadrát pre kategorické premenné a t test pre kontinuálne premenné. Prežitie a recidívy ceny boli vypočítané podľa metódy Kaplan-Meier. Štatistická významnosť bola prijatá na p
hodnotu menšiu ako 0,05.

podporné informácie
Obrázok S1.
Overenie umlčanie génu účinku malých vlásočnicové RNA z XB130 (sh-XB130) a infekčné účinnosť adenovírusu. XB130 downregulated riadok modelov bunky boli potvrdené pomocou PCR v reálnom čase (a) a Western blot (b). Bunky transfekované šifrovacím vektorom slúžili ako negatívna kontrola a non-transfekovány predstieranou ako kontrola. Infekčné účinnosť adenovírusu v 293FT kultivovaných buniek bola potvrdená normálnych (c) a fluorescencie (d) microscopies. Vložka v A je krivka zosilnenie real-time PCR
doi :. 10,1371 /journal.pone.0041660.s001
(PPT)
tabuľke S1.
Sekvencia primérov pre real-time PCR a rutinné
doi: 10,1371. /journal.pone.0041660.s002
(DOC)
Tabuľka S2.
XB130 Sh-RNA sekvencie
doi: 10,1371. /journal.pone.0041660.s003
(DOC)

• Ploche ONE: Adenovirový Dodávka EMX2 Génové tlmí rast v žalúdočnej rakoviny u ľudí
• Ploche ONE: rozdielne trendy v posledných plošnej miery prežitia v pažeráku a žalúdku Cancer