Ploche ONE: Helicobacter pylori podporuje epitelu-mezenchymálnych prechodu v rakoviny žalúdka podľa Downregulating Programovaná bunková smrť proteín 4 (PDCD4)

abstraktné

Helicobacter pylori
, gramnegatívne baktérie, mikroaerofilní nájdených v žalúdku, sa predpokladá, že sú spojené s karcinogenézy, inváziu a metastázy do zažívacieho ústrojenstva. Cytotoxin asociované gén A (ČAGA) je onkogénne proteín H. pylori
, ktorý je kódovaný CAG patogenity ostrova v súvislosti s vývojom rakoviny žalúdka. Prechod epiteliálne-mezenchýme (EMT) je hlavný biologická udalosť v invázii a metastázovaniu epiteliálnych buniek. H. pylori
môžu podporovať EMT v ľudských nádorových bunkových líniách žalúdka, avšak konkrétne mechanizmy sú stále nejasné. Skúmali sme základné molekulárnej mechanizmus EMT vyvolané H. pylori
ČAGA u karcinómu žalúdka. V našom článku sme zistili vzorky rakovinou žalúdka a priľahlé non-rakovinové vzorky imunohistochemicky a bolo zistené zvýšené expresie regulačných proteínov TWIST1 EMT súvisiace a mezenchymálnych markerov vimentin v nádorových tkanivách, zatiaľ čo faktor programovaná bunková smrť 4 (PDCD4) a epitelu značka E-cadherin sa znížil expresiu v nádorových vzoriek. Tieto zmeny boli spojené s stupňom malignity tkaniva. Okrem toho hladiny PDCD4 a TWIST1 boli spojené. V rakovinových bunkách žalúdka cocultured s ČAGA expresným plazmidom, ČAGA aktivovaný TWIST1 a vimentin výraz, a inhiboval E-cadherinu expresiu downregulating PDCD4. ČAGA tiež podporoval mobilitu buniek karcinómu žalúdka tým, že reguluje PDCD4. Takže H. pylori
ČAGA indukované EMT v rakovinových bunkách žalúdka, ktorá odhaľuje nové signálne dráhu EMT v žalúdočných rakovinových bunkových línií

Citácia :. Yu H, J Zeng, Liang X, Wang W, Zhou Y, Sun Y, et al. (2014) Helicobacter pylori
podporuje epitelu-mezenchymálnych prechodu v rakoviny žalúdka podľa Downregulating programovanej bunkovej smrti proteín 4 (PDCD4). PLoS ONE 9 (8): e105306. doi: 10,1371 /journal.pone.0105306

Editor: Rajeev Samanta, University of Alabama v Birminghame, Spojené štáty |

prijatá: 12.02.2014; Prijaté: 21. júla 2014; Uverejnené: 21.srpna 2014

Copyright: © 2014 Yu et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bola podporovaná Národným Basic programu výskumu Číny (nie 973 Program 2012CB911202.), Národná prírodná Science Foundation of China (nos: 81171536, 81371781, 81272654, 81372680 a 81170514), lekárske vedy a Technology Development Program Shandong (no . 2013WS0209) a nezávislé inovácie Foundation Shandong University (č. 2012TS106). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Helicobacter pylori
( H. pylori
) je špirála v tvare, Gram-negatívne baktérie spojené s choroby zažívacieho ústrojenstva, vrátane chronickej gastritídy, žalúdočného vredu, rakoviny žalúdka, a slizničnej-lymfóm asociovaný s lymfoidné tkanív lymfóm. H. pylori
bola klasifikovaná ako karcinogén Svetovej zdravotníckej organizácie a Medzinárodná agentúra pre výskum rakoviny (WHO /IARC) v roku 1994 [1], [2].

H. pylori
gény majú cytotoxin spojené s gén A (ČAGA) patogenity ostrov, ktorý kóduje hlavný virulencie proteínu ČAGA a sekrečnú typ IV systému (T4SS). ČAGA je dodávaný do hostiteľských buniek T4SS a indukuje vznik rakoviny a postupu [3]. H. pylori
môže deregulácii bunkovej proliferácie, vplyv na normálne proapoptotický dráhu, tvar vplyv buniek, odstráni junkční aktivity a uľahčiť epiteliálne-to-mezenchýme prechod (EMT) fenotyp po translokuje do hostiteľskej bunky [4], [5]. H. pylori
efektorové proteín ČAGA postihuje väčšinu z týchto dráh. in vivo
experimenty ukázali, že transgénne expresie ČAGA môže spôsobiť viac malignít u myší, vrátane žalúdočné epiteliálne hyperplázia, myeloidnej leukémie a B-bunkových lymfómov, alebo žalúdočných polypov a adenokarcinóme žalúdka a tenkého čreva [6]. Avšak molekulárnej mechanizmus H. pylori
ČAGA interakciu na hostiteľských bunkách je stále nejasná.

EMT bol pôvodne uznaný ako rys embryogenézy, zásadné procese morfogenézy počas embryonálneho vývoja a srdce. Je však tiež prispieva k tkanivovej fibrózy, nádorové invázie a metastáz. EMT je charakterizovaný niekoľkých rôznych znakov, ako je strata adhézie buniek, zvýšenej mobility buniek, odolnosť voči apoptóze, a niektoré vlastnosti kmeňových buniek. S EMT, epitelové markery ako E-cadherin relácii znížená expresie a mezenchymálnych markerov, ako sú vimentin relácii zvýšenou expresiou. Ostatné regulačné molekuly, ako sú slimačie, TWIST a SLUG ukázať zmenil výraz [7], [8], [9]. Onkogénne dráhy, ktoré môžu vyvolať EMT patrí transformujúci rastový faktor beta (TGF-beta), Src, Ets, Ras, Wnt /β-katenin, Notch, nukleárna faktor-kB a integrín [10], [11], [12].

Infekcia ľudským patogénnym faktorom H. pylori
Predpokladá sa, že povedie k EMT, invázie alebo metastázy rakoviny žalúdka. Napríklad, up-regulácia z matrix metaloproteinázy 7 patogénnymi H. pylori
čiastočne závisí na tom, gastrínu a môže mať funkciu vo vývoji rakoviny žalúdka, prípadne prostredníctvom EMT, ktoré nepriamo indukujú hladiny rozpustného endoteliálny rastový faktor viažuci heparín [13]. H. pylori
ČAGA sa podieľa na inváziu nádorových buniek deregulovať c-met receptora signalizácia [14]. Rovnako tak, ČAGA by mohlo zvýšiť aktiváciu Wnt /β-katenin signálne dráhy prerušením stabilizáciu E-cadherin-β-katenin komplexu. Tak, ČAGA hrá dôležitú úlohu v rozvoji črevnej metaplázia [15]. Okrem toho, analýza microarray navrhol, že stav fosforylácie ČAGA môže ovplyvniť expresiu EMT súvisiacich génov do buniek karcinómu žalúdka [16]. Avšak, len málo je známe o mechanizmoch, ktoré sú základom EMT vyvolanú ČAGA.

programovanú bunkovú smrť proteín 4 (PDCD4) je lokalizovaný k jadru v množiacich sa buniek [17]. Ako dôležitý post-transkripčný ciele microRNA (mier) MIR-21, PDCD4 súvisí s progresiou nádoru a prognózou u ľudských pľúc, hrubého čreva, prsníka a karcinómu žalúdka [18], [19]. Nádorového supresor PDCD4 sa môže viazať na eIF4A alebo eIF4G a inhibíciu translácie. PDCD4 môže regulovať mitogénom aktivovanej proteín kinázy 4 1 alebo expresiu aktivátora plazminogénu urokinázou receptor (Upar) na inhibíciu invázie a karcinóm intravasation [20], [21]. PDCD4 by tiež mohla ovplyvniť transkripciu génov. Interaguje s DNA viažuci doménu TWIST1 a inhibuje Y-box viažuci proteín 1 expresiu [22]. Rovnako, strata PDCD4 expresia je spojená s malígnou transformáciou u karcinómu žalúdka [23], [24]. Downregulaci PDCD4 sa vzťahuje k diferenciácii nádoru u rakoviny zažívacieho traktu [25]. Avšak, či PDCD4 sa podieľa na EMT vyvolané ČAGA v karcinómu žalúdka a špecifickom mechanizmu je potrebné ešte ďalšie vysvetlenie.

Tu sme skúmali reguláciu EMT-spojených proteínov a expresie PDCD4 v žalúdočnej tkanive rakoviny a ČAGA aktivácia TWIST1 prejavu a inhibíciu E-cadherinu a prejavu PDCD4 v nádorových bunkách žalúdka.

materiály a metódy

Pacienti a tkanivové vzorky

štúdia bola schválená pre etiku Výbor Shandong University School of Medicine, a všetky vzorky a informácie boli zhromaždené na základe písomného informovaného súhlasu. Nádor žalúdka tkaniva a ich uzavreté non-rakovinové tkanivá boli v priebehu chirurgického zákroku na Qilu nemocnice, Shandong University (Jinan, Čína), od roku 2010 do roku 2012. Žiadny z pacientov zozbieraná z 30 pacientov malo adjuvantnej chemoterapiu alebo rádioterapiu dostal pred chirurgickým zákrokom. Diagnóza rakoviny žalúdka sa histopatologicky potvrdená hematoxylínom a eosínu.

Bunková kultúra a transfekcia

ľudských bunkových línií karcinómu žalúdka (AGS, BGC-823 a SGC-7901) boli získané z Číny Academia Sinice Cell Repository (Shanghai). Bunky boli inkubované v odporúčaných médií a zvlhčené atmosfére obsahujúce 5% CO _{2 pri 37 ° C bez antibiotík. SGC-7901 bunky a BGC-823 bunky boli kultivované v médiu RPMI 1640 doplnenom 10% fetálnym hovädzím sérom (FBS), a AGS bunky boli kultivované v médiu F12 doplnenom 10% FBS. FBS média a boli zakúpené od Invitrogen (USA). Potom sa bunky boli prechodne transfekovány plazmidy pCDNA3.1 alebo pCDNA3.1-ČAGA (dar od Dr. Yongliang Zhu, Zhejiang University, Čína) a pEGFP-C1 alebo pEGFP-C1-PDCD4 (konštruované a za predpokladu, Dr Chen Youhai , Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania, Philadelphia, USA) za použitia X-treme GENE HP transfekčního činidla (Roche Diagnostics, Nemecko) podľa protokolu výrobcu.}

izolácie RNA, reverzná transkripcia a QRT-PCR

Celková RNA bola extrahovaná z buniek za použitia reakčného činidla TRIzolu (Invitrogen, USA). Reverzný transkripcie podieľa súpravy Superscript III First Strand Synthesis (Invitrogen). Expresie génov bola detekovaná pomocou kvantitatívnej real-time PCR SYBR Premix Ex Taq (Takara, Čína) a normalizácie podieľajú na 2 ^{- △△ metóda ct vzhľadom k beta-aktínu. Primer sekvencie boli pre PDCD4, zmysel, 5'-CAGTTGGTGGGCCAGTTTATTG-3 'a antisencie, 5'-AGAAGCACGGTAGCCTTATCCA-3'; E-cadherin, zmysel, 5'-AATCCAAAGCCTCAGGTCATAAACA-3 'a antisencie 5'-TTGGGTCGTTGTACTGAATGGTC-3'; ČAGA, zmysel, 5'-CCGGGGTACCAATTGGAGAGCAGAACCG-3 'a antisencie 5'-CCGTCGAGTTAAGATTTTTGGAAACC-3'; a TWIST1, zmysel, 5'-GGCATCACTATGGACTTTCTCTATT-3 'a antisencie 5'-GGCCAGTTTGATCCCAGTATT-3'; vimentin, zmysel, 5'-CTCTTCCAAACTTTTCCTCCC-3 'a antisencie 5'-AGTTTCGTTGATAACCTGTCC-3'; Slimák, zmysel, 5'-GGAAGCCTAACTACAGCGAGCT-3 'a antisencie 5'-TCCCAGATGAGCATTGGCA-3'; β-aktínu, zmysel, 5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3 'a antisencie 5'-CTCCTTAATGTCACGCACGATTT-3'.}

Western blot analýza

Proteín bola extrahovaná zo vzoriek a oddelené pomocou SDS-PAGE , potom prenesené na PVDF membrány (Millipore Corp, Billerica, MA, USA), ktorá bola ihneď blokované 5% netučného mlieka v TBST s obsahom 1% Tween-20 po dobu 1,5 hodiny pri teplote miestnosti. Po premytí vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátmi (PBS) 3 krát, boli membrány inkubované s protilátkami proti PDCD4 (1: 500; Cell Signaling Technology, USA), TWIST1 (1: 2000, Novus Biologicals, USA), slimák (1: 1000 , Cell Signaling Technology, USA), ČAGA (1: 500, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), E-cadherin (1: 1000, Cell Signaling Technology, USA), vimentin (1: 1000, Cell Signaling Technology, USA ), a β-aktínu (1: 2000, Sigma-Aldrich, USA), ako normalizačné kontrolou, pri teplote 4 ° C cez noc, potom sa chrenovej peroxidázy konjugované sekundárnej protilátky pri teplote miestnosti po dobu 1 hodiny. Po premytí, imunoreaktívnych pásy boli vizualizované pomocou rozšírenej chemiluminiscencie (Millipore Corp, Billerica, MA, USA). Western blotting bol vykonávaný 3-krát pre každú vzorku. Proteín bol vložený pri teplote 20 až 50 ug v jednej dráhe.

Imunohistochémia

vzorky parafínové zaliate tkaniva boli de-paraffinized s xylénu a dehydrované s odstupňovanou radom alkoholu. Antigén vyhľadávanie pomocou tepelného spracovania vykonáva v 0,1 M citrátovom pufri. A blokovanie endogénnej peroxidázy bola používaná 3% H _{2O 2. Potom boli rezy inkubované s protilátkami proti PDCD4 (1: 200), Twist1 (1: 500), vimentin (1: 100) alebo E-cadherin (1: 500), a zodpovedajúce sekundárne protilátky chrenovej peroxidázy konjugované a DAB pre jadrá. Protilátky pre Imunohistochemické farbenie bolo ktoré sa používajú pre western blot. Konečne, hematoxylín bol použitý pre kontrastným snímok. diferenciácie nádoru rakovinových tkanív bola stanovená zaslepenej fáze. Prvý protilátka bol nahradený fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátmi ako negatívna kontrola. Vzorky boli považované za Nikon Eclipse E800 (Nikon, Tokyo, Japonsko) mikroskopom.}

boli pozorované Všetky zafarbené rezy a pripísal si 2 nezávislými zaslepených vyšetrovateľov, a sklíčka boli aplikované index celkovej farbenie (SI) strelí podľa intenzita farbenie a percento pozitívnych nádorových buniek. Farbenie intenzita bola hodnotená ako 0, bez škvŕn; 1, slabé farbenie; 2, mierne farbenie; a 3, silné farbenie. Podiel nádorových buniek bola hodnotená ako 0, ≤20% pozitívnych nádorových buniek; 1, 20% -40% pozitívne nádorové bunky; 2, 40% až 60% pozitívne nádorové bunky; 3, 60% -80% pozitívne nádorové bunky; a 4, ≥80% pozitívnych nádorových buniek. Na základe posúdenia SI, ktorých výsledky farbenie boli nakoniec zaznamenané ako 0-4, nízka prejavu; 4-6, mierny výraz; a 6-12, vysoká expresia. V prípade, že výklad farbenie líšila medzi vyšetrovateľmi, dáta pre sekciu boli vyradené.

Matrigel invázie test

Matrigel invázie test zahŕňal transjamkových komory (Costar, New York, USA). SGC-7901 bunky boli transfekovány 2 ug pCDNA3.1, pEGFP-C1; pCDNA3.1-ČAGA, pEGFP-C1; alebo pCDNA3.1-ČAGA, pEGFP-C1-PDCD4. Po 48 hodinách, 1 × 10 ^{5 bunky post-transfekovány boli trypsinizovány a nanesené na transwell komorách vopred potiahnutých 20 ug Matrigel. Média obsahujúceho 20% FBS v dolnej komore slúžil ako chemoatraktant a horná komora bola naplnená médiom obsahujúcim 10% FBS. Non-migrovaných buniek boli odstránené vatovými tampónmi po 24 alebo 48 hodín. Bunky migráciu na spodnej strane filtra boli zafarbené 0,1% kryštálovú violeťou a spočítajú na mikroskopu. Konečne, zvyšné bunky boli zozbierané na bielkoviny a izoláciu RNA. Každé ošetrenie sa opakuje 3 krát.}

Štatistická analýza

Dáta sú vyjadrené ako priemer ± SD. Študent t
testu alebo chi-kvadrát test bol použitý na porovnanie 2 skupiny. Analýza dát podieľa SPSS 12.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). P Hotel < 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú

Výsledky

1 .. Vyjadrenie TWIST1, E-cadherin, vimentin a PDCD4 v žalúdku
rakoviny

Ak chcete skúmať asociáciu EMT a rakoviny žalúdka, máme zberalo 30 vzoriek klinických tkaniva od pacientov s karcinómom žalúdka. Biopsie boli rozdelené do strednej /nízka diferenciácie tkanív, vysoká diferenciácie tkanív a non-rakovinové tkanivá, ktorý susedí s karcinómom hematoxylínom a eosínu (obr. 1A). Na imunohistochémia, TWIST1 a vimentin expresie boli vyššie v malígne tkanive, ako non-rakovinové tkanivá, zatiaľ čo expresia E-cadherinu a PDCD4 bol opačný k tomu TWIST1 (obr. 1A-E). TWIST1 a PDCD4 expresie bola spojená so stupňom diferenciácie nádoru, ale nie pohlavia alebo veku (p = 0,021 a p = 0,013, tabuľka 1). Ako aj znížená PDCD4 expresie bola nepriamo spojená so zmenenou expresiou TWIST1 pri karcinóme žalúdka (p = 0,035, tabuľka 2). Z tohto dôvodu, EMT môže hrať dôležitú úlohu v žalúdku karcinogenézy a vývoja.

2. TWIST1, vimentin alebo E-cadherin expresie v bunkových líniách žalúdočných je regulovaná ČAGA

Ďalej sme skúmali, či ČAGA, ako virulentný faktor H. pylori
ovplyvnil EMT a preto podporoval inváziu a metastázy u karcinómu žalúdka. Vybrali sme 3 rakovina žalúdka u ľudí bunkových línií diferenciácie statusy (AGS, dobre diferencovaný žalúdočné epitelové bunkové línie; SGC-7901, stredne diferencované bunkové línie a BGC-823 zle diferencované bunkové línie). ČAGA expresné plazmid bol transfekován do rôznych bunkových línií žalúdka. Aj keď sú morfologické zmeny ČAGA-transfekciou buniek neboli pozorované (dáta nie sú uvedené), expresie transkripčných faktorov a bunkových markerov boli ovplyvnené ČAGA. Expresie mRNA a proteínu TWIST1 a vimentinu bola up-regulovaná s ČAGA transfekciu (viď obr. 2A-G), a že z PDCD4 a E-cadherin sa downregulated (obr. 2A-B), ale žiadne významné zmeny v SNAIL expresie bola pozorovaná v ČAGA transfekcia skupinu. Z tohto dôvodu H. pylori
ČAGA môže ovplyvniť EMT regulátory vrátane TWIST1. Okrem toho E-cadherin, ako dôležitý ukazovateľ epiteliálne a vimentinu, ako mezenchýme markeru upravené TWIST1, bol tiež ovplyvňovaný ČAGA a EMT súvisiace gén PDCD4 bola downregulated.

3. Vyjadrenie TWIST1, vimentin a E-cadherin bol ovplyvnený PDCD4

Ďalej sme analyzovali molekulárnej mechanizmus EMT regulovaná H. pylori
ČAGA v rakovinových bunkách žalúdka. PDCD4 potláča rast buniek pomocou priamej interakcii s TWIST1 v humánnej rakoviny prostaty [22]. Imunohistochémia a štatistická analýza preukázala význam PDCD4 a TWIST1 existoval v karcinómu žalúdka (obr. 1, tabuľka 2). Avšak, mechanizmy funkciu PDCD4 do buniek karcinómu žalúdka neboli jasné. Tak AGS? GSC-7901 a BGC-823 bunky sme transfekovány plazmidmi zvýšenej expresie PDCD4. PDCD4 mRNA a expresie proteínu bola up-regulovaná vo všetkých plasmidových transfekciou bunkových líniách (Obr. 3A-G). Okrem toho, mRNA a proteínové hladiny TWIST1 a vimentinu, ale nie slimák, boli znížené v rôznej miere, a hladiny E-cadherinu bola zvýšená (obr. 3A-G). Z tohto dôvodu, TWIST1, vimentin a E-cadherin expresie môže byť regulovaná PDCD4 v žalúdočných epiteliálnych bunkách.

4. EMT je regulovaná ČAGA inhibíciou PDCD4 v žalúdočných buniek epitelu

Na základe uvedených zistení sme hypotézy, že proces EMT vyvolané H. pylori
ČAGA došlo podľa downregulating PDCD4 sme kotransfikovány žalúdočnej epitelové bunky s ČAGA plazmidu a PDCD4 nadmernou expresiou plazmidu. Znížená expresia PDCD4 bola získaná s ČAGA a nadmerne exprimovaný PDCD4 transfekcia. Ako aj zvýšená expresia TWIST1 a vimentinu bola inhibovaná a znížená expresia E-cadherinu bola up-regulované v ko-transfekovány skupiny. Tieto zmeny boli zistené na úrovni mRNA a na úrovni proteínu (obr. 4A-G). Migrácia ľudského karcinómu žalúdka bunkové línie SGC-7901 transfekovány plazmidy bola stanovená Matrigel invázia testu. Výsledky ukazujú, že bola indukovaná ČAGA plazmidu. Bunková migrácia Test tiež ukázal, že nadmerná expresia PDCD4 downregulated ČAGA indukovanej ich inváziu a metastázy schopnosť (obr. 5A). Obr. 5B ukazuje migrované počet buniek z SGC-7901 v ČAGA transfekcia skupine sú zrejme viac ako kontrolnej skupiny, zatiaľ čo množstvo preneseného bunky v ko-transfekciu skupiny je výrazne nižšia ako ČAGA transfekcia skupiny. Biologické javy ukazujú, propagácia EMT podľa ČAGA bola získaná v čiastočne zvýšenej PDCD4 výrazu. Na základe dôkazov, že vyvodil, že PDCD4 môže byť požadovaná pre H. pylori
žalúdka progresie rakoviny ČAGA sprostredkované

Diskusia

Hlavné závery tejto štúdie sú zhrnuté takto :. 1) H. pylori
ČAGA je zodpovedný za indukciu TWIST1 alebo vimentin a inhibíciu E-cadherinu v nádorových bunkách žalúdka. 2) ČAGA vyvolané epiteliálne-mezenchýme prechod je čiastočne závislá na reguláciu PDCD4. 3) TWIST1 a PDCD4 zahŕňa v EMT rakoviny žalúdka.

žalúdočné rakovina je viacstupňový a postupné ochorenia. Nadmerné proliferácia epitelových buniek je dôležitou súčasťou pôvodného nádorové angiogenézy alebo na začiatku rastu [5]. Následne, invázia buniek, najprv sa odráža cez bazálnej membrány, bol považovaný za prediktorom konečnej fáze rakoviny; to nakoniec vedie k šíreniu metastáz a úmrtnosti [26]. Patogénne infekcia môže spôsobiť tumorgenesis rakoviny a malígne transformáciu hostiteľských buniek. Ako dôležitý rizikový faktor patogénne, Helicobacter pylori
boli úzko súvisí s vredovej choroby, sliznica-lymfóm asociovaný s lymfoidné tkanív lymfómu žalúdka, adenokarcinómu žalúdka a [20], [27], [28], [29] , ČAGA, jeden z najviac hlavných faktorov virulencie o H. pylori
, vyvoláva vznik a vývoj rakoviny žalúdka. Malígny transformácie hostiteľských buniek zahrňuje v regulationary sieti, vrátane početných bunkových proteínov, nekódujúca RNA a inými biologickými molekulami činnosti. Avšak, mechanizmus stojaci ČAGA účinky na žalúdočnú sliznicu, je tak zložitá a nejasná.

EMT je vysoko konzervatívny biologický proces na embryonálneho vývoja orgánov, čo umožňuje epitelové bunky stratiť epitelu fenotyp a získať mezenchýme fenotyp. To zahŕňa stratu bunkovej polarity v epiteliálnych bunkách, stratu schopnosti spojenie s bazálnej membránou, prístup k mezenchýme fenotypu ako je vyššia migrácia a invázia, anti-apoptózu, a schopnosť degradovať extracelulárnej matrix [8], [30] , EMT hrá zásadnú úlohu pri chronických zápalových ochorení, fibrotické ochorenia, nádorové progresie a rekonštrukcie tkanivo procesu, najmä pri získavaní migrácie a invázie schopnosti pre malígne epitelové bunky. Abnormálne aktivita v EMT epith dospelých epitelových buniek inhibovaná bunkovej adhézne molekuly, spôsobenej znížila adhézie buniek kapacitu, a tým aktivovaná nádorové bunky šíriť v tele, nakoniec propagáciu metastázovaniu nádoru [31], [32], [33]. EMT preto je považovaný za začiatok invázie a metastáz a je tiež znakom silnú schopnosť invázie a metastáz nádorových buniek. H. pylori
vyvoláva epiteliálne-mezenchýmových prechod TNF-alfa indukuje proteín [34]. Táto štúdia ukazuje, ČAGA môže viesť epitelové bunky morfologických zmien. Bolo navrhnuté, že ČAGA výraz bol nielen dostatočná k narušeniu apikálnej spoje, ale tiež sa podobajú epiteliálnych na mezenchýme prechod v Madin-Darby psích obličiek buniek [35]. Epitelové bunky infikované baktériami objavili rôzne oblasti genomiky zmeny a aký vplyv má na EMT markery vyvolaných H. pylori
bol pravdepodobne na cagPaI previazane. Dáta ukázali, že epitelové mezenchýme prechod (EMT), spojené so štúdiom gény boli up- alebo down-regulované ČAGA-pozitívna H. pylori
kmene v AGS [36], [37]. Za zmienku stojí, regulačné sieť ČAGA zapojenie do EMT rakoviny žalúdka je ešte potrebné objasniť.

Ak chcete skúmať konkrétny mechanizmus EMT podporovaná ČAGA u karcinómu žalúdka, sme porovnali gény expresie priľahlé nepôvodných súčasťou nádorové tkanivá a karcinóm žalúdka tkaniva imunohistochemicky. Výsledky ukázali, že Twist1 /vimentin expresiu v rakovinových tkanivách boli vyššie ako okolitom normálnom tkanív, a jeho expresie v stredných /diferenciácie rakovinových tkanivách nízke vyššia ako vysoká diferenciácie tkanív. Avšak, E-cadherin a PDCD4 znížila v procese epiteliálnych-mezenchýmových prechodu karcinómu žalúdka. Je zaujímavé, že existuje na negatívne koreláciu s expresiou TWIST1 a PDCD4. Naša štúdia navrhol gény EMT súvisiace sú spojené s procesom rakoviny žalúdka, v súlade s predchádzajúcimi výskumami pozorovaní stratou epitelu bielkovín a /alebo nadobudnutie expresiu mezenchymálnych bielkovín došlo v karcinómu žalúdka. Navyše, oni boli resp korelovala zle diferencované histológia, pokročilom štádiu a zlou prognózou pacienta [38]. Okrem toho, PDCD4 je novo zistené, molekula, ktorá hrá dôležitú úlohu v rade biologických procesov, ktoré môžu spôsobiť ochorenie alebo vznik a vývoj nádoru. PDCD4 spomaľuje proces prekladu väzbou na translačný iniciačný faktor eIF4A alebo eIF4G. Rôzne induktory apoptózy stimulujú bunky a spôsobí zvýšenie expresie PDCD4, čo by mohlo ďalej regulovať P21, CDK4, karboanhydrázy II a JNK /c-Jun /AP-1. PDCD4 môže inhibovať inváziu súvisiace urokináza aktivátor receptoru výraz, inváziu alebo infiltráciu krvných ciev a metastáz; Preto, zníženie expresie PDCD4 hrá dôležitú úlohu pri vzniku nádorov, vývoji a prognóze [17], [33], [39], [40]. Takže sme premýšľal, či Twist1 a PDCD4 podieľal sa na EMT ČAGA indukované.

Potom sme zistili EMT asociované transkripčných faktorov a markerov expresie v ČAGA-transfekciou bunkových línií karcinómu žalúdka. Naše dáta ukazujú, že H. pylori
ČAGA mohol up-reguláciu expresie TWIST1 a vimentin, ale nie slimák, a dole regulovať E-cadherinu a PDCD4 v žalúdočnej bunkových líniách (AGS, SGC-7901 a BGC-823). Výsledky neboli ovplyvnené stavom diferenciácie transfekované bunky. Aj keď sme nespozorovali morfologické zmeny ČAGA-transfekciou buniek, invázia a metastázy schopnosť buniek karcinómu žalúdka by mohla byť urýchlená prostredníctvom ČAGA transwell invázie buniek testu. To je čiastočne spôsobené funkčné heterogenite ČAGA v rôznych tkanivách. Takže účinok EMT vyvolané H. pylori
treba ešte ďalej skúmať. MIR-21 podporovaný TGF-β-indukovanú proces diferenciácie myofibroblastů zacielením PDCD4. TGF-β indukovanú MIR-21 expresie vo fibroblastoch a Mir-183 downregulated PDCD4 a inhibuje TGF-β-indukovanú apoptózu u ľudských buniek hepatocelulárneho karcinómu [41], [42]. Medzitým, TGF-β regulované slimák, krútiť, alebo ZEB1 a ovplyvnila EMT a metastáz [43]. Okrem toho PDCD4 bolo zistené, aby sa zapojili do transkripcie taky. Naozaj, COOH koniec Twist1 obsahujúce základné helix-loop-helix doménu, bolo navrhnuté, aby sprostredkoval priamu interakciu s PDCD4 proteínmi. Tak, PDCD4 interaguje s DNA väzobnou doménu Twist1 a inhibuje jej schopnosť väzby DNA do cieľových génov do ľudských buniek rakoviny prostaty [22] .Preto sme ďalej testovali, či by mohla upravovať PDCD4 TWIST1 do buniek karcinómu žalúdka. Naša štúdia ukázala, že bola TWIST1 dole upravené PDCD4 vysoká expresia plazmidu real-time PCR a western blotting, zatiaľ čo E-cadherin výraz bol opačný TWIST1 v AGS, SGC-7901 a BGC-823. Expresia mRNA Snail bol downregulated v AGS a SGC-7901, zatiaľ čo preotein expresie nebolo pozorované rovnaké zmeny. To môže byť v dôsledku zložitosti syntézy proteínov. To znamená, že proteín je nielen regulovaná na transkripčný úrovni, ale aj preklady a otočiť úrovni. Občas sa zdá, že mRNA nie je priamy údaj o úrovni proteínu v bunkách. Naposledy sme vykonali ďalší výskum o úlohe PDCD4 v ČAGA indukovanej epiteliálne-mezenchýmových prechod. Žalúdočné epitelové bunky boli transfekovány expresným plazmidom ČAGA a PDCD4 nadmernou expresiou plazmidu súčasne. Obnova PDCD4 prejavu môže zabrániť TWIST1 a vimentin, a vyvolávajú E-cadherin, ktorý regulovanú ČAGA, PDCD4 bolo potvrdené, že by mohli ovplyvniť invázie a metastáz schopnosť v žalúdočných bunkách Matrigel invázie testu. Aj keď sú potrebné ďalšie štúdie na testovanie tejto hypotézy sme dospeli k záveru, že v podstate ČAGA-indukovanej epiteliálne-mezenchýmových prechod je čiastočne závislá na reguláciu PDCD4.

Stručne povedané, ukážeme, že H. pylori
ČAGA indukovať expresiu TWIST1 a EMT do buniek karcinómu žalúdka regulovaním PDCD4 (obr. 6). Zabezpečujeme nejaké nahliadnutie do molekulárnej siete rakovinou žalúdka vyvolané H. pylori
infekcie, a poskytnúť teoretický základ pre PDCD4 ako biologický cieľ pre diagnostiku a liečenie rakoviny. Budúci myšiach modelov výskum zahŕňajúci môže viesť k lepšiemu pochopeniu role PDCD4 vo H. pylori
indukovaná EMT rakoviny žalúdka.

• Ploche ONE: Mir-30b, down-regulované v rakoviny žalúdka, podporuje apoptózu a potláča rast nádorových zacielením inhibítor aktivátora plazminogénu-1
• Ploche ONE: Helicobacter pylori z rakoviny žalúdka a dvanástnikové vredy Show Same Phylogeographic pôvodu v andskom regióne v Kolumbii