Plos ONE: Helicobacter pylori Spodbuja epitelijskih-mezenhimskih Prehod želodčnega raka, ki ga Downregulating Programirana celična smrt Protein 4 (PDCD4)

Povzetek

Helicobacter pylori
, z Gram-negativne, mikroaerofilnih bakterijo najdemo v želodcu, se predpostavlja, da je povezana z karcinogenezi, invazijo in metastaziranje pri prebavnih bolezni. -Citotoksin povezan gen A (CagA) je onkogeni beljakovin H. pylori
ki je kodiran z CAG patogenim otoku povezana z razvojem raka želodca. Prehod epitelnih-mezenhimskih (EMT), je glavni biološki dogodek v invaziji ali metastaz epitelnih celic. H. pylori
lahko spodbujajo EMT v človeške želodčne raka celičnih linij, vendar so posebni mehanizmi so še vedno nejasna. Raziskovali smo osnovno molekularni mehanizem EMT s H inducirane. pylori
CagA raka želodca. V našem članku smo zaznali Rak želodca vzorce in sosednjih niso rakave vzorce, ki jih imunohistokemijo in ugotovila povečano izražanje, povezanih z EMT regulatorni protein TWIST1 in mezenhimskega marker vimentina v tumorskih tkivih, medtem ko je programirana celična smrt faktor 4 (PDCD4) in epitelijskih dvojno podajo E-kadherina izraz se je v vzorcih raka. Te spremembe so bile povezane s stopnjo tkiva malignosti. Poleg tega so bile ravni PDCD4 in TWIST1 povezani. V rakavih celicah želodca cocultured z CagA izražanja plazmida CagA aktivira TWIST1 in vimentina izraz, in inhibirana E-kadherina izražanje downregulating PDCD4. CagA spodbuja tudi mobilnost želodčnih rakavih celic z ureditvijo PDCD4. Tako, H. pylori
CagA povzroča EMT v želodčnih rakave celice, ki razkriva novo signalno pot za EMT v želodčnih raka celičnih linijah

Navedba. Yu H, Zeng J, Liang X, Wang W, Zhou Y, ne Y, et al. (2014) Helicobacter pylori
Spodbuja epitelijskih-mezenhimskih Prehod želodčnega raka, ki ga Downregulating programirana celična smrt Beljakovine 4 (PDCD4). PLoS ONE 9 (8): e105306. doi: 10,1371 /journal.pone.0105306

Urednik: Rajeev Samant, University of Alabama v Birminghamu, Združene države Amerike

Prejeto: 12. februar 2014; Sprejeto: 21. julij 2014; Objavljeno: 21. avgust 2014

Copyright: © 2014 Yu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprl Nacionalni Temeljni raziskovalni program Kitajske (no 973 Program 2012CB911202.), National Natural Science Foundation of China (št: 81171536, 81371781, 81272654, 81372680 in 81170514), Medical Science in Program tehnološki razvoj Shandong (no . 2013WS0209) in neodvisni Foundation inovacije Shandong University (št. 2012TS106). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Helicobacter pylori
( H. pylori
) je a-helix oblike, Gram-negativna bakterija povezana z prebavne bolezni, vključno kronični gastritis, peptične razjede, raka želodca in sluznice povezano limfnem tkivu limfom. H. pylori
je bila razvrščena kot rakotvorna s strani Svetovne zdravstvene organizacije in Mednarodne agencije za raziskave raka (WHO /IARC) leta 1994 [1], [2].

H. pylori
geni imajo-citotoksin povezan gen A (CagA) patogenosti otok, ki kodira glavni virulence beljakovin CagA in sistem za izločanje tipa IV (T4SS). CagA dostavljen na gostiteljske celice, ki jih T4SS in povzroča nastanek raka in napredovanja [3]. H. pylori
lahko deregulirati proliferacijo celic, vpliva na normalno apoptotske poti, obliko vpliv celic, odpravi plošcicnih dejavnost ter olajšati epitelijskih-to-mezenhimskih prehoda (EMT) fenotip po premikanjem v gostiteljsko celico [4], [5]. H. pylori
efektor protein CagA vpliva na večino teh poteh. vivo
poskusi so pokazali, da bi Transgenska izražanje CagA povzroči številne malignosti pri miših, vključno želodčni epitelijske hiperplazija, mieloične levkemije in B-celičnih limfomov, ali želodca polipov in adenokarcinomov na želodcu in tankem črevesu [6]. Vendar pa molekularni mehanizem H. pylori
CagA interakcije celic gostiteljic še vedno ni jasno.

EMT je bila prvotno pripoznana kot značilnost embriogeneze, bistvenega procesa morfogenezi med zarodka in srca razvoja. Vendar pa prispeva tudi k tkiva fibroze, tumorske invazije in metastaz. EMT je označen z več različnih lastnosti, kot so izguba adhezijo celic, povečano mobilnost celic, odpornost proti apoptoze in nekatere lastnosti matičnih celic. Z EMT, epitelne označevalci, kot so E-kadherina kažejo zmanjšano izražanje in mezenhimskih označevalci, kot vimentin kažejo povečanega izražanja. Drugi regulativni molekule, kot polž, TWIST in polž kažejo spremenjeno ekspresijo [7], [8], [9]. Onkogenih poti, ki lahko povzroča EMT vključujejo preoblikovanje rastni faktor ß (TGF-beta), Src, Ets, Ras, NT /β-catenin, Notch, jedrska faktor-κB in integrin [10] [11] [12].

Okužba s človeško patogeni dejavnik H. pylori
Predpostavlja se, da vodi do EMT, invazijo ali metastaz raka želodca. Na primer, Povecanje izmed MMP 7 s patogeno H. pylori
delno odvisna od gastrina in ima lahko svojo funkcijo v razvoj raka želodca, lahko skozi EMT, ki jo posredno indukcijo ravni topnega heparina veže na endotelijski rastni faktor [13]. H. pylori
CagA se ukvarja z invazijo tumorskih celic z deregulacijo-c izpolnjeni receptor signalizacijo [14]. Kot je dobro, lahko CagA poveča aktivacijo /β-catenin signalne poti NT s prekinitvijo stabilizacijo E-kadherina-β-catenin kompleksa. Tako CagA igra ključno vlogo pri razvoju intestinalno metaplazijo [15]. Poleg tega je analiza mikromrež predlagal, da se status fosforilacijo CagA vplivajo na ekspresijo povezanih EMT genov v želodčnih rakavih celic [16]. Vendar pa je malo znanega o mehanizmih, ki so osnova za EMT s CagA povzročeno.

Programirana celična smrt protein 4 (PDCD4) je lokaliziran v jedro v razraščajo celic [17]. Kot pomemben post-transkripcijski cilj microRNA (miR) miR-21, PDCD4 je povezana do napredovanja tumorja in prognozo v človeški pljuč, debelega črevesa, dojke in rakom želodca [18], [19]. Supresor tumor PDCD4 lahko veže na eIF4A ali eIF4G in zavirajo prevajanje. PDCD4 regulira mitogenom aktivirana protein 4 kinaze 1 ali urokinaznega aktivator plazminogena receptor (uPAR) izraz zavira karcinom invazijo in intravazacijo [20], [21]. PDCD4 lahko vpliva tudi na transkripcijo genov. Je povezana z domeno vezavo DNA TWIST1 in zavira Y-box vezavni protein 1 izraz [22]. Kot je dobro, je izguba PDCD4 izražanja, povezane z maligno transformacijo in rakom želodca [23], [24]. Downregulation od PDCD4 je povezan z diferenciacijo tumorja pri rakavih obolenj prebavnega trakta [25]. Vendar, ali je PDCD4 vključena v EMT ga CagA inducirane z rakom želodca in posebnega mehanizma je treba še dodatno pojasnitev.

Tukaj smo raziskovali ureditev EMT-povezanih proteinov in PDCD4 izražanja želodčnega tkiva raka in CagA aktivacija TWIST1 izražanja in zaviranje E-kadherina in PDCD4 izražanja v želodcu rakavih celic.

materiali in metode

Bolniki in tkiva primerkov

študijo je odobrila etike Odbor Shandong University School of Medicine in vse vzorce in podatke smo zbrali s pisnim privoljenjem. Tumorja želodca tkiva in njihovi ujema niso rakave tkiva smo zbrali od 30 bolnikov, med operacijo v bolnišnici Qilu, Shandong University (Jinan, Kitajska), od leta 2010 do 2012. Nobena od teh bolnikov so bili adjuvantno kemoterapijo ali radioterapijo pred operacijo. Diagnoza želodčnih rakov je histopathologically potrjujejo Hematoxylin in eozinom barvanje.

celične kulture in transfekciji

Človekove želodca rakave celične linije (AGS, BGC-823 in SGC-7901) smo pridobili iz Kitajske Academia Sinica Cell Repository (Shanghai). Celice inkubiramo v priporočenih medijih in navlaženi atmosferi, ki vsebuje 5% CO _{2 pri 37 ° C, brez antibiotikov. SGC-7901 celice in BGC-823 celice smo kultivirali v RPMI 1640 mediju, dopolnjenem z 10% fetalnega govejega seruma (FBS), in AGS celice smo gojili v F12 mediju z dodatkom 10% FBS. Mediji in FBS so bili kupljeni od Invitrogen (ZDA). Nato so bile celice začasno transfekciji s plazmidi pCDNA3.1 ali pCDNA3.1-CagA (darilo dr Yongliang Zhu, Zhejiang University, Kitajska) in pEGFP-C1 ali pEGFP-C1-PDCD4 (izdelan in pod pogojem, dr Youhai Chen , Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania, Philadelphia, ZDA) z uporabo X-treme GENE HP transfekciji Reagent (Roche Diagnostics, Nemčija) v skladu s protokolom proizvajalca.}

RNA izolacija, obratno transkripcijo in QRT-PCR

Celotna RNA je bila ekstrahirana iz celic z uporabo TRIzola reagenta (Invitrogen, ZDA). Reverzno transkripcijo vključenih Superscript III First Strand zbirno komplet (Invitrogen). Izražanje genov je bila odkrita z uporabo kvantitativne PCR v realnem času SYBR premiks Ex Taq (Takara, Kitajska) in normalizacijo vključeval 2 ^{- △△ metodo ct glede na P-aktina. Primer zaporedja so za PDCD4, občutek, 5'-CAGTTGGTGGGCCAGTTTATTG-3 'in antisense, 5-AGAAGCACGGTAGCCTTATCCA-3 "; E-kadherina, občutek, 5'-AATCCAAAGCCTCAGGTCATAAACA-3 'in protismiselno, 5'-TTGGGTCGTTGTACTGAATGGTC-3'; CagA, občutek, 5'-CCGGGGTACCAATTGGAGAGCAGAACCG-3 'in protismiselno, 5'-CCGTCGAGTTAAGATTTTTGGAAACC-3'; in TWIST1, občutek, 5'-GGCATCACTATGGACTTTCTCTATT-3 'in protismiselno, 5'-GGCCAGTTTGATCCCAGTATT-3'; vimentin, občutek, 5'-CTCTTCCAAACTTTTCCTCCC-3 'in protismiselno, 5'-AGTTTCGTTGATAACCTGTCC-3'; POLŽ, občutek, 5'-GGAAGCCTAACTACAGCGAGCT-3 'in protismiselno, 5'-TCCCAGATGAGCATTGGCA-3'; β-aktin, občutek, 5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3 'in protismiselno, 5'-CTCCTTAATGTCACGCACGATTT-3'.}

Western blot analizo

Protein je bila vzeta iz vzorcev in ločimo s SDS-PAGE nato prenese na PVDF membrano (Millipore Corp., Billerica, MA, ZDA), ki so neposredno blokirani s 5% nemastnim mlekom v TBST vsebuje 1% Tween-20 za 1,5 h pri sobni temperaturi. Potem ko izperemo v-fosfatnim pufrom (PBS), 3-krat, smo membrane inkubirali s protitelesi proti PDCD4 (1:500; Cell signalnega Technology, ZDA), TWIST1 (1:2000, Novus Biologicals, ZDA), POLŽ (1:1000 , celična signalizacija Technology, ZDA), CagA (1:500, santa Cruz Biotechnology, santa Cruz, CA), E-kadherina (1:1000, celična signalizacija Technology, ZDA), vimentin (1:1000, celična signalizacija Technology, ZDA ) in β-aktin (1:2000, Sigma-Aldrich, ZDA), kot kontrola preračunavanja, pri 4 ° C preko noči, nato pa s hrenovo peroksidazo konjugiranih sekundarnih protiteles pri sobni temperaturi 1 uro. Po izpiranju smo imunološko trakovi vizualiziramo z okrepljeno kemiluminiscentnim (Millipore Corp., Billerici, MA, ZDA). Western blot smo izvedli 3-krat za vsak vzorec. Protein je bil naložen na 20 do 50 ng na stezi.

Imunohistokemija

vzorce tkiva-Parafinski vgrajeni so bili de-paraffinized z ksilen in dehidrirani z stopenjski seriji alkohola. Preiskovalna antigen, s toplotno obdelavo izvedemo v 0,1 M citratnem pufru. In blokiranje endogenega peroksidaze dejavnost je bila za 3%, H _{2O 2 uporabljena. Nato smo drsi inkubirali s protitelesi proti PDCD4 (1:200), Twist1 (1:500), vimentina (1:100) ali E-kadherina (1:500) in ustreznih s hrenovo peroksidazo konjugiranih sekundarnih protiteles in DAB za jeder. Protitelesa za imunohistokemičnim barvanjem so tisti, ki se uporablja za zahodni blot. Nazadnje je bila hematoksilin uporablja za counterstaining diapozitive. Tumor diferenciacijo tumorskih tkivih je bila določena v slepo način. Prvo protitelo bil nadomeščen s fosfatnim pufrom kot negativno kontrolo. Osebki so vidna v okviru Nikon Eclipse E800 (Nikon, Tokio, Japonska) mikroskopom.}

so opazili vsi obarvajo sekcije in dosegel 2 neodvisna slepo preiskovalcev in diapozitivi so imele indeks skupno obarvanje (SI), rezultat po intenzivnost obarvanja in odstotek pozitivnih tumorskih celic. Obarvanje intenzivnost je bila ocenjena kot 0, brez kamna; 1, šibka madeži; 2, zmerno obarvanje; in 3, močno obarvanje. Tumorske celice delež je dosegel kot 0, ≤20% pozitivnih tumorskih celic; 1, 20% -40% pozitivne tumorske celice; 2, 40% -60% pozitivne tumorske celice; 3, 60% -80% pozitivne tumorske celice; in 4, ≥80% pozitivnih tumorske celice. Z oceno SI, so bili rezultati barvanje končno zabeležiti kot 0-4, nizko izražanja; 4-6, zmerna izražanje; in 6-12, visoka ekspresija. Če bi bila razlaga obarvanje razlikovala med preiskovalci, so bili izločeni podatki za odsek.

poskus vdora v Matrigel

poskus vdora v Matrigel vključenih transwell komoro (Costar, New York, ZDA). SGC-7901 celice smo transfektirali z 2 ug pCDNA3.1, pEGFP-C1; pCDNA3.1-CagA, pEGFP-C1; ali pCDNA3.1-CagA, pEGFP-C1-PDCD4. Po 48 h, 1 x 10 ^{5-post transfekcije celice tripsiniziramo in nanese na transwell zbornice predhodno prevlečene z 20 mikrogramov Matrigel. Medij, ki vsebuje 20% FBS v spodnji komori služil kot chemoattractant in zgornja komora je napolnjen z medijem, ki vsebuje 10% FBS. Non-preseljene celice so bile odstranjene z bombažnimi blazinicami po 24 ali 48 ur. Celice se selijo na spodnji strani filtra smo obarvali z 0,1% kristal vijoličnim prešteli pod mikroskopom. Na koncu so bile pridelane preostale celice za beljakovine in izolacije RNA. Vsako zdravljenje smo ponovili 3-krat.}

Statistična analiza

Podatki so izraženi kot povprečje ± SD. Študent t
preskus ali test hi-kvadrat smo uporabili za primerjavo 2 skupin. Analiza podatkov je izbral SPSS 12.0 (SPSS, Chicago, IL, ZDA). P
< 0.05 smo imeli statistično značilno

Rezultati

1.. Izražanje TWIST1, E-kadherina, vimentin in PDCD4 želodčnega
raka

Da bi raziskali združenje EMT in raka želodca, smo pridelane 30 kliničnih vzorcev tkiv bolnikov z rakom želodca. Biopsije so bili razdeljeni v srednji /nizki diferenciacija tkiva, visoko diferenciacijo tkiva in ne-rakasto tkivo, ki mejijo na raka, ki ga hematoksilinom in eozinom obarvanje (sl. 1A). Na imunohistokemija so TWIST1 in vimentin izraz višja v malignem tkivu, kot ne-rakavo tkivo, medtem ko je izraz E-kadherina in PDCD4 nasproten tistemu TWIST1 (sl. 1A-E). TWIST1 in PDCD4 izraz je bila povezana s stopnjo diferenciacije tumorja, ne pa spola ali starosti (p = 0,021 in p = 0,013, tabela 1). Kot je dobro, zmanjšala PDCD4 izraz je obratno povezana s spremenjenim TWIST1 izražanja med rakom želodca (p = 0,035, tabela 2). Zato lahko EMT igrajo pomembno vlogo pri želodca kancerogenosti in razvoj.

2. TWIST1, vimentin ali E-kadherina izraz v celičnih linijah želodčnih ureja CagA

Naprej, smo raziskali, ali CagA, kot nalezljive faktor H. pylori
, vplivala na EMT in zato spodbuja invazijo in metastaz pri raku želodca. Izbrali smo 3 človeške želodčne linij raka celične diferenciacije statusov (AGS, dobro diferenciranih želodčne epitelne celične linije; SGC-7901, zmerno razlikuje celične linije in BGC-823 celična linija slabo diferenciran). CagA osnovi plazmidov smo transfektirali v različnih želodca celičnih linij. Čeprav morfološke spremembe CagA-transfektiranih celic niso bile opažene (podatki niso prikazani) so izraz transkripcijskih faktorjev in celičnih označevalcev prizadela CagA. MRNA in proteinov izraz TWIST1 in vimentina bilo molekul z CagA transfekciji (sl. 2A-G) in da za PDCD4 in E-kadherina je navzdol reguliranih (sl. 2A-G), vendar v CagA niso opazili pomembnih sprememb v polža izražanja transfekciji skupina. Zato, H. pylori
CagA lahko vpliva EMT regulatorje, vključno TWIST1. Poleg E-kadherina, kot pomemben epitela marker in vimentina, kot mezenhimskega označevalca, ki ga TWIST1 urejene, so vplivale tudi CagA, in v zvezi z EMT gen PDCD4 je navzdol reguliranih.

3. Izražanje TWIST1, vimentina in E-kadherina je vplivalo PDCD4

smo poleg analizirali molekularni mehanizem EMT z H urejena. pylori
CagA v želodčnih rakavih celic. PDCD4 zavira rast celic preko direktne interakcije z TWIST1 v človeškega raka na prostati [22]. Imunohistokemija in statistična analiza je pokazala pomembnost PDCD4 in TWIST1 obstajala želodčnega raka (sl. 1, tabela 2). Vendar pa mehanizme, ki podpirajo funkcijo PDCD4 v želodčnih rakave celice niso bile jasne. Torej AGS? GSS-7901 in BGC-823 celice smo transfektirali z plazmida s čezmerno izraženim PDCD4. PDCD4 mRNA in izražanje proteina je bila povečana pri vseh-plazmida transficirane celične linije (sl. 3A-G). Poleg tega se ravni mRNA in proteinske TWIST1 in vimentina, ne pa polž, so se zmanjšale na različnih stopnjah in so zvišane vrednosti E-kadherina (sl. 3A-G). Zato lahko TWIST1, vimentin in E-kadherina izraz ureja PDCD4 v epitelijskih celic želodca.

4. EMT ureja CagA z zaviranjem PDCD4 v epitelijskih celic želodca

Na podlagi zgoraj navedenih ugotovitev smo hipoteze, da je proces EMT povzročena s H. pylori
CagA prišlo, downregulating PDCD4 smo kotransfektiramo želodčne epitelijskih celic z CagA plazmida in PDCD4 Čezmerno plazmida. Zmanjšana izraz PDCD4 izločilo z CagA in prekomerno PDCD4 transfekciji. Kot dobro, je povečana ekspresija TWIST1 in vimentina zaviral in zmanjšana ekspresija E-kadherina bila povečana pri sočasno transfektirana skupino. Te spremembe so se zgodile na ravni mRNA in koncentracije proteina (sl. 4A-G). Migracija človeškega raka celične linije želodčni SGC-7901 transfektirana z plazmidov smo določili z poskus vdora v Matrigel. Rezultati so pokazali, da je bila povzročena z CagA plazmida. Cell migracije Test je prav tako pokazala, da PDCD4 prekomerno navzdol reguliranih CagA inducirane svojo invazijo in metastaz sposobnost (sl. 5a). Fig. 5B prikazuje preseljene število celic iz SGC-7901 v CagA transfekciji skupine so očitno bolj kot kontrolno skupino, medtem ko je višina migriral celice v co-transfekciji skupine je bistveno manj kot CagA transfekcijskem skupino. Biološki pojavi kažejo, promocija EMT s CagA izločilo v delu, ki ga povišani PDCD4 izražanja. Na podlagi dokazov, je sklepati, da se PDCD4 lahko zahtevajo za H. pylori
-CagA posredovano želodca napredovanja raka

Pogovor

Glavne ugotovitve te študije so povzeti na naslednji način: 1). H. pylori
CagA je odgovoren za indukcijo TWIST1 ali vimentina in zaviranje E-kadherina v želodcu rakavih celic. 2)-CagA povzroča epitelijskih-mezenhimskih prehod je deloma odvisna od urejanja PDCD4. 3) TWIST1 in PDCD4 vključuje v EMT raka želodca.

Rak želodca je multi-step in postopno bolezen. Presežek proliferacije epitelijskih celic je pomemben del začetnega tumorsko angiogenezo ali zgodaj rasti [5]. Kasneje celica invazija, najprej odraža skozi bazalne membrane, se je štelo napovedovalec končni fazi raka; sčasoma vodi do metastaze in umrljivosti [26]. Patogeno infekcijo lahko povzroči raka tumorgenesis in maligne transformacije celic gostiteljic. Kot pomemben patogeni dejavnik tveganja, Helicobacter pylori
so tesno povezane s peptičnega,-sluznice povezana limfnem tkivu limfoma želodca in adenokarcinomom želodca [20] [27] [28] [29] . CagA, eden izmed najbolj načelo virulentnih dejavnikov H. pylori
, povzroča nastanek in razvoj raka želodca. Maligna transformacija gostiteljskih celic vključuje v regulationary omrežja, vključno s številnimi celičnih beljakovin, ne- RNA kodiranja in drugih bioloških molekul dejavnosti. Vendar pa mehanizem osnovne CagA učinki na želodčne sluznice je tako zapleten in nejasen.

EMT je zelo ohranjen biološki proces na razvoj zarodka organov, ki omogoča epitelnih celic izgubiti epitelne fenotip in pridobiti mezenhimskih fenotip. To vključuje izgubo polarnosti celic v epitelnih celic, izguba sposobnosti za povezovanje z bazalne membrane, dostop do mezenhimskega fenotipa, kot so večja migracije in invazije, anti-apoptoza, in sposobnost, da razgradijo v zunajcelični matriks [8], [30] . EMT igra pomembno vlogo pri kroničnih vnetnih bolezni, fibroznih bolezni, napredovanja tumorja in procesu obnove tkiva, zlasti pri pridobivanju migracij in invazijo sposobnost za malignih epitelijskih celic. Nenormalna aktivnost v EMT epith odraslih epitelnih celic, zavirajo celične adhezijske molekule, povzročil zmanjšanje oprijem celic zmogljivosti in s tem omogočili tumorske celice za širjenje v telesu, na koncu spodbujanje tumorskih metastaz [31] [32] [33]. Zato je EMT štejemo za začetek invazije in metastaz in je tudi znak močne sposobnosti invaziji in metastaziranju tumorskih celic. H. pylori
inducira epitelne-mezenhimskih prehod s TNF-a inducira protein [34]. Sedanja študija kaže CagA lahko povzroči epitelijskih celic morfološke spremembe. Predlagano je bilo, da CagA izraz ni samo dovolj, da prekinejo apikalno spoje pa tudi podobni epitelijskih da mezenhimskega prehod v Madin-Darby pasje ledvičnih celic [35]. Epitelne celice, okužene z bakterijo pojavile različne spremembe genomika, in učinek na EMT označevalcev, ki jih H induciranih. pylori
je verjetno s tem povezanim-cagPaI način. Podatki so pokazali, da so bili epitelijskih mezenhimske prehod (EMT) -povezana geni gor ali dol, ureja CagA pozitivni H. pylori
sevov v letnem pregledu rasti [36], [37]. Pomembno je omeniti, regulativni mrežo CagA vključevanju v EMT raka želodca, je še vedno treba pojasniti.

Da bi raziskali poseben mehanizem EMT jih CagA spodbuja raka želodca, smo primerjali gene izražanje sosednjih brez porekla tumor tkiva in želodčnih karcinom tkiva z imunohistokemijo. Rezultati so pokazali, da so bili Twist1 /vimentin izraz v karcinomom tkivih višji od sosednjih ne-tumorskih tkivih, in njen izraz v srednje /nizko diferenciacijo karcinomom tkiv višja od visoke diferenciacije tkiv. Vendar E-kadherina in PDCD4 zmanjšal v procesu epitelnega-mezenhimskih prehod raka želodca. Zanimivo je, da obstaja na negativno korelacijo z izražanjem TWIST1 in PDCD4. Naša raziskava je predlagal, povezanih z EMT geni so povezane s procesom raka želodca, ki je skladen z rezultati predhodnih raziskav opazovanje izgubo epitelijskega beljakovin in /ali pridobitve izražanje mezenhimskih proteinov zgodila na raka želodca. Poleg tega so bili oziroma korelaciji s slabo diferencirano histologijo fazi in slabega izida bolnikov [38]. Poleg tega PDCD4 je na novo ugotovljeno molekula, ki ima ključno vlogo v številnih bioloških procesih, ki lahko povzročijo bolezni ali pojav in razvoj tumorja. PDCD4 zavira proces prevajanja z vezavo na prevod začetek faktor eIF4A ali eIF4G. Različne induktorji apoptoze spodbujajo celice in upregulate izražanje PDCD4, ki bi lahko dodatno urejanje P21, CDK4 karboanhidraze II in JNK /c-Jun /AP-1. PDCD4 lahko zavira povezanih invazijo urokinaznega plazminogenskega aktivatorja receptorja izražanje, invazijo ali infiltracijo krvnih žil in metastaz; Zato, zmanjšano izražanje PDCD4 igra pomembno vlogo pri tumorski nastanku, razvoju in prognozo [17] [33] [39] [40]. Torej, smo se spraševali, če Twist1 in PDCD4 sodeloval v EMT-CagA povzroča.

Potem smo ugotovili, EMT povezana transkripcijske faktorje in markerji izražanja v CagA-transfekciji želodčnega raka celičnih linijah. Naši podatki so pokazali, da je H. pylori
CagA lahko up-regulacijo izraz TWIST1 in vimentina, vendar ne Polž, in dol urediti E-kadherina in PDCD4 v celičnih linijah želodca (AGS, SGC-7901 in BGC-823). Rezultati niso bili prizadeti s statusom diferenciacijo transfektirane celice. Čeprav nismo upoštevati morfološke spremembe CagA-transfekciji celic, bi invazija in metastaze sposobnost želodca rakavih celic se pospeši z CagA preko transwell mobilni invazijo testom. To je delno funkcionalno heterogenost CagA v različnih tkivih povzročil. Torej učinek EMT povzročene s H. pylori
še vedno je bilo treba dodatno raziskati. MIR-21 napredoval TGF-β-inducirano proces diferenciacije myofibroblast z usmerjanjem PDCD4. TGF-β povzroča miR-21 izraz v fibroblastih in mir-183 navzdol reguliranih PDCD4 in zaviral TGF-β-inducirano apoptozo v človeških karcinomom jetrnih celic [41], [42]. Medtem, TGF-β urejeno polž TWIST ali ZEB1 in vplivala na EMT in metastaze [43]. Poleg tega je bilo ugotovljeno, PDCD4 da sodelujejo pri transkripciji preveč. Dejansko je COOH terminus Twist1 vsebuje osnovno helix-loop-vijačnice domeno, je predlagal, da posreduje neposredno interakcijo z PDCD4 beljakovin. Torej, PDCD4 komunicira z veznim področjem DNA Twist1 in zavira njegovo DNK zavezujočo sposobnost za ciljanje genov v človeških rakavih celic prostate [22] .Zato smo dodatno testirali, ali bi PDCD4 urediti TWIST1 v želodčnih rakavih celic. Naša raziskava je pokazala, da je bila TWIST1 navzdol ureja PDCD4 visoke izraz plazmida s PCR v realnem času in zahodni s sušenjem, medtem ko je bil E-kadherina izraz nasproti TWIST1 v letnem pregledu rasti, SGC-7901 in BGC-823. MRNA izraz Polž je navzdol reguliranih v letnem pregledu rasti in SGC-7901, medtem ko preotein izraz ni bilo opaziti enake spremembe. To je lahko posledica kompleksnosti sintezo beljakovin. To se pravi, protein ni urejeno le na nivoju transkripcije, ampak tudi prevajanje in predati ravni. Občasno se zdi, da je mRNA ni neposredna indikacija nivoja proteina v celicah. Nazadnje smo izvedli nadaljnje raziskave o vlogi PDCD4 v-CagA inducirane epitelija-mezenhimskih tranzicije. Želodčne epitelne celice smo transfektirali z ekspresijskim plazmidom CagA in PDCD4 čezmernim plazmida hkrati. Obnova PDCD4 izražanja lahko zavira TWIST1 in vimentina in povzroči E-kadherina ki urejeno z CagA, je PDCD4 tudi potrjeno, da bi lahko vplivale na invazijo in metastaz sposobnosti pri želodčnih celic s poskus vdora v Matrigel. Čeprav so dodatne študije, potrebne za to hipotezo preverili, smo v bistvu ugotovila, da-CagA povzroča epitelijskih-mezenhimskih prehod je deloma odvisna od urejanja PDCD4.

Če povzamemo, smo pokazati, da je H. pylori
CagA povzroči TWIST1 izražanja in EMT v želodcu rakave celice, ki jih ureja PDCD4 (sl. 6). Ponujamo nekaj vpogleda v molekularno mrežo raka želodca s H inducirane. pylori
okužbe, in dobavo teoretično podlago za PDCD4 kot biološki cilj za diagnostiko ali zdravljenje raka. Prihodnje raziskave, ki vključuje modele miško lahko vodi k boljšemu razumevanju vloge PDCD4 v H. pylori
inducirano EMT raka želodca.

• Plos ONE: miR-30b, Down urejeno želodčnega raka, spodbuja apoptozo in zavira rast tumorja, ki ga ciljanje aktivator plazminogena inhibitor-1
• Plos ONE: Helicobacter pylori iz želodca raka in dvanajstnika Show Same filogeografska izvora v andski regiji v Kolumbiji