Plos ONE: CD147 Izražanje v humani Rak želodca je povezana s ponovni pojav tumorja in Prognosis

Povzetek

CD147 je v korelaciji s tumorsko agresivnost v različnih človeških malignih bolezni. Tukaj smo raziskovali CD147 beljakovin izražanje pri 223 bolnikih z rakom želodca s imunohistokemijo in analizirajo svoje povezave z brez bolezni in celokupnega preživetja. CD147 je v raka želodca poveča v primerjavi z običajnimi tkiva. Poleg tega je bil CD147 izraz povezana z invazijo raka želodca, metastaz in stopnji TNM, ker ni bila povezana s starostjo, spol, status diferenciacije, mestu tumorja ali razvrščanje Lauren. Kaplan-Meier analiza je potrdila, da je bil CD147 povezana z boleznijo brezplačno in celokupnega preživetja pri bolnikih z rakom želodca; to so bolniki s pozitivnim CD147 obarvanjem imajo ponavadi slabše preživetje in na splošno brez bolezni. Poleg tega, Cox je sorazmerna nevarnosti, analiza je pokazala, da je bil CD147 neodvisna označevalec brez bolezni in celokupno preživetje pri bolnikih z rakom želodca. Ti rezultati potrjujejo združenje CD147 s želodca invaziji raka in metastaz in dokazati, da lahko CD147 pokazatelj tumorja ponovitve in prognozo raka želodca

Navedba. Chu D, Zhu S, Li J, ji G, Wang W, Wu G, et al. (2014) CD147 Izražanje v humani Rak želodca je povezana s ponovni pojav tumorja in prognozo. PLoS ONE 9 (6): e101027. doi: 10,1371 /journal.pone.0101027

Urednik: Irina V. Lebedeva, Columbia University, Združene države Amerike

Prejeto: 30. avgust 2013; Sprejeto: 2. junij 2014; Objavljeno: 30. junij 2014

Copyright: © 2014 Chu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprta s sredstvi iz državnega Natural Science Foundation Kitajske (št 81201927, 81272204 in 31270812) in China podoktorski znanstvene fundacije (št 2012M521862). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca je eden izmed najpogostejših človeških malignostmi svetu [1], [2]. Najvišje stopnje raka želodca v državah vzhodne Azije. Skoraj 42% moških in 19% bolnic želodca z rakom po celem svetu najdemo na Kitajskem, kjer je rak želodca predstavlja tretji najpogostejši vzrok smrti zaradi raka [3], [4]. Kirurška resekcija je še vedno glavni zdravljenje raka želodca. Vendar pa je približno 60% bolnikov z rakom želodca lokalno napredovalo in metastatski bolezni v času kirurgije, kar ima za posledico relativno nizki terapevtski učinkovitosti s kirurško resekcijo. Razgradnja zunajceličnega matriksa (ECM), je ključnega pomena za želodčne rakave celice na invazijo v okoliška tkiva. Nedavne študije se osredotočajo na mehanizme osnovni želodca invazijo kažejo, da matriko metaloproteinaz (MMP), ključno vlogo v tem procesu [5].

ekstracelularnega matriksa metalo induktor (EMMPRIN), znan tudi kot CD147, je 57- kilodalton (kDa) transmembranski glikoprotein, ki pripada imunoglobulin (IgG) naddružina [6]. CD147 je sestavljena iz 2 zunajceličnih domen Ig, enotne transmembransko domeno potreben za boj receptorja vezave, ki je vključen v matriko metaloproteinaz (MMP) indukcijo in kratek citoplazemsko domeno, ki komunicira s CAV-1 [7], [8]. CD147 se obilno izraženo na zunanji površini različnih vrst tkiva tumorja v primerjavi z normalnim tkivom in lahko olajša tumorskih metastaz z moduliranjem celičnih površinskih in adhezijske procese [9] - [11]. CD147 lahko spodbudijo sosednje vmesne normalne celice, da proizvajajo MMP, skupina cinka odvisen od proteinov, ki lahko poslabša ekstracelularnega matriksa (ECM) [12], [13]. Razgradnja ECM tako na primarnem mestu tumorja in na sekundarne kolonizacije strani je ključnega pomena za tumorske invazije in metastaz [12]. Pred kratkim je bila vloga CD147 tumorja invazivnosti potrjena v več ljudi raka, vključno z rakom želodca [14] - [16]. Zaviranje CD147 izražanja RNA interference zmanjša invazije tumorskih celic in tumorjev, pa tudi pri povečani chemosensitivity paklitaksel [17]. Za nekatere vrste tumorjev, kot so pljučni adenokarcinom, seminoma, sline lepilnim raka, raka prostate, kolorektalnega raka, raka sečnega mehurja in rak dojke, je bila EMMPRIN izraz povezan z prognozo bolnikov [18] - [22]. Pri raku želodca, se poveča izražanje CD147 povezani s slabo celokupnega preživetja [23]. Vendar pa je združenje CD147 z želodčno ponovitve raka ni bila raziskana.

V tej študiji smo analizirali izražanje CD147 v kliničnih želodca vzorcev in njegovo povezavo s preživetjem brez bolezni in celokupno preživetje pri bolnikih naslednje operacija.

materiali in metode

Klinični želodca osebki rakom

Ta študija je bila odobrena Odbor za etiko četrtega vojaške Medical University. Vsi bolniki ali družinski člani vpletenih če pisno soglasje. Na kratko, sveže klinični želodčni rak osebki in sosednje normalne tkiva zbirajo od 223 bolnikov, ki so bili operirani v obdobju od januarja 2006 do junija 2007 v bolnišnici Xijing prebavnih bolezni. Nobeden od teh bolnikov je prejelo kemoterapijo pred operacijo. Poleg tega so bile običajne vzorce tkiva vzeta iz 21 bolnikih z operacijo, ki niso maligne bolezni razlogov, ki predstavljajo normalne kontrolne vzorce. Histomorfologija vseh vzorcev tkiva je potrdil Oddelek za patologijo, Xijing Hospital. Osebki so bile določene v 10% formaldehida in vlit v parafin za histološko odseke. Bolnik klinične podatke, kot so starost, spol, status diferenciacije in stopnji TNM, so bili zbrani in shranjeni v bazi podatkov. Nadaljnje informacije za vse udeležence je bila posodobljena vsak 3 mesec pomočjo telefonskih intervjujev in vprašalnikov. Preživetje bolezni brez je definiran kot čas, ki je potekel po operaciji do prvega pojava kateregakoli izmed naslednjih dogodkov: ponovitve raka želodca; želodčni rak oddaljene metastaze; Razvoj drugega brez želodca malignosti, z izjemo karcinomov bazalnih celic kože in karcinom in situ materničnega vratu; ali smrt zaradi kateregakoli vzroka brez dokumentacijo dogodka, povezanih z rakom. Diagnozo ponovitev in oddaljenih metastaz je temeljila na metodami slikanja, vključno z endoskopijo, ultrazvokom, računalniško tomografijo, magnetno resonanco in pozitronska emisijska tomografija, in kadar je to mogoče, analize citološka ali biopsijo. Celokupno preživetje je opredeljen kot čas, ki je potekel od operacije do smrti zaradi kateregakoli vzroka bolnikov z rakom želodca.

imunohistokemičnim testih

Sveže vzorce tkiva so deparaffinized v ksilena in dehidrirani z merilno serije alkohola. Endogene peroksidaze aktivnost smo blokirali z 0,5% H _{2O 2, metanola 10 minut. Za pridobivanje antigenov so odseki microwaved v 0,01 M raztopino natrijevega citrata (pH 6,0). Nespecifično vezavo smo blokirali z inkubacijo odseke z 10% normalno kozji serum v PBS 1 uro pri sobni temperaturi. Brez pranje, so bili ti oddelki inkubirali z protitelesa miške anti-človeški CD147 monoklonskih (1:200), ki je bila potrjena s predhodnih študijah, v PBS pri 4 ° C čez noč v vlažnem polje [24], [25]. Nato so bili odseki inkubirana z biotiniranimi zajcev proti mišjim IgG (1:400) za 1 h pri sobni temperaturi, in CD147 ekspresijo detektiramo z uporabo streptavidin-peroksidaze kompleks. Rjava barva kaže aktivnosti peroksidaze je bil razvit z inkubacijo odseke z 0,1% 3, 3-diaminobenzidine v PBS, ki vsebuje 0,05% H 2o 2 za 5 minut pri sobni temperaturi. Ustrezne pozitivne in negativne kontrole smo izvedli v vsakem poskusu.}

Vrednotenje obarvanje

Tkivo smo vzorce obravnavati ločeno dva patologi brez predhodnega poznavanja kliničnega ali clinicopathological status osebkov. Obarvanje je bila ocenjena s skeniranjem celotno tkiva osebek v okviru majhnih povečavah (× 40), sledi potrditev pod visokim povečave (× 200 in x 400). je bil uporabljen sistem ocena radioinkorporacijo (IRS), ki temelji na deležu in intenzivnosti pozitivno obarvanih rakavih celic: A: število pozitivno obarvanih celic ≤ 5%, dosegel zadetek za 0; 6% ~25%, dosegel zadetek za 1; 26% ~50%, dosegel 2; 51% ~75%, dosegel 3; ≫ 75%, dosegel 4. B: intenzivnost madež: brezbarvna, dosegel zadetek za 0; bledo rumeno, dosegel zadetek za 1; rumena, dosegel 2; rjava, dosegel 3. točke iz A in B se je povečal, in položaj barvanja je bil stratificiran kot negativno (-, 0 točk), šibko (+, 1~4 ocena), zmerno (++, 5~8 točk) ali močna (+++, 9~12 ocena). Druga patolog, ki je bil slep podatkih študije razlagati tudi barvna stekelca. Osebki so rescored če je razlika v rezultatih, iz obeh patologi več kot 3 [26], [27].

Statistična analiza

Združenja med CD147 izražanja in kategorične spremenljivke smo analizirali z Mann Whitney preizkus ali preizkus Kruskal Wallis, kot je primerno. Krivulji preživetja so bile ocenjene po metodi Kaplan-Meier, in razlike v razdelitvi preživetja so bile ocenjene s testom log-ranga. Cox je sorazmernih tveganj modeliranje dejavnikov, ki se nanašajo na preživetje je bila izvedena prepoznati dejavnike, ki bi lahko imele velik vpliv na preživetje. Razlike z ap vrednosti 0,05 ali manj, so bile obravnavane statistično značilne.

Rezultati

CD147 obarvanje želodčnega raka

V rezultatov imunohistokemija testu CD147 obarvanje je predvsem lokalizirana na celico membrane in v citoplazmi želodčnih rakavih celic. Negativen, šibek, zmeren in močan obarvanje CD147 s IRS ocenili je pokazala na sliki 1. obarvanje vzorec CD147 pri raku želodca je bila v skladu s prejšnjimi poročili [28]. Med 223 želodčnih osebkov rakaste, negativna (-) je bila CD147 obarvanje odkrili v 90 vzorcih, je bila šibka pozitivna (+) CD147 obarvanje odkrili v 57 vzorcih, je zmerno pozitiven (++) CD147 obarvanje odkrili v 44 vzorcih in močan pozitivni (+ ++) CD147 obarvanje je bila odkrita v 32 vzorcih. V nasprotju s tem pa med 223 sosednjih normalnih tkiv, negativna (-), šibko pozitivni (+) in zmerno pozitiven (++) CD147 obarvanje je bila odkrita v 175 vzorcih, 36 vzorcev in 12 vzorcev, v tem zaporedju, pri čemer ni močne pozitivne (++ +) smo zaznali obarvanje. Razlika v CD147 izražanja med rakom želodca in sosednjih normalnih tkivih je bila statistično značilna ( P
< 0,001)., Kar pomeni, da je CD147 izraz v raka želodca poveča v primerjavi z običajnimi sosednjih tkiv

Association od CD147 onesnaženjem z Clinicopathological značilnosti

na podlagi IRS sto imunohistokemičnim barvanjem, smo dodatno analizirali odnos med CD147 barvanjem in clinicopathological značilnosti bolnikov z rakom želodca (tabela 1). CD147 obarvanje je bila povezana z želodčno invazijo raka, saj je večjo pozitivno obarvanje CD147 pogosteje odkriti v T3 in T4 tumorjev v primerjavi s T1 in T2 tumorjev ( P =
0,035). Poleg tega je bila CD147 obarvanje povezano z bezgavkah metastaz in oddaljenih metastaz, saj je bolj verjetno, da bo odkrita v tumorjih z bezgavkah metastaze ( P <
0.001) večjo pozitivno obarvanje ali oddaljenih metastaz ( P <
0,001). CD147 obarvanje je bila tesno povezana s stopnjo TNM raka želodca, saj je obarvanje trdnejše od razreda I razred IV tumorjev ( P <
0.001, Tabela 1). Vendar pa CD147 obarvanje ni bila povezana s spolom bolnikov, starosti, diferenciacije tumorja, lokacija tumorja ali razvrščanje Lauren (tabela 1). Ti rezultati kažejo, da je CD147 obarvanje povezano z želodčno invaziji raka in metastaz.

Razmerje med CD147 izražanja in bolezni, preživetje brez

Ker je CD147 obarvanje, povezane z želodčno invaziji raka in metastaz, smo še dodatno analizirati svojo povezavo s preživetjem brez bolezni, ki se v glavnem določena z obsegom invaziji in metastaz. V obdobju spremljanja, 129 od 223 bolnikov z rakom želodca predstavili dogodke. The-brez bolezni čas Mediano preživetje vseh bolnikov je bila 41,8 meseca (95% IZ: 36.2-47.4 mesecev). Kot je bilo relativno majhno število vzorcev v močni pozitivni CD147 barvanja skupine zaradi majhne velikosti vzorca, smo združili močno, zmerno in šibko pozitivni CD147 obarvanje v eno skupino, ki je opredeljena kot pozitivno CD147 obarvanjem (+) skupine. Kaplan-Meier analiza je bila uporabljena za oceno preživetja brez bolezni bolnikov z rakom želodca v zvezi z CD147 izražanja. Naši rezultati kažejo, da so imeli bolniki s CD147 pozitivnimi tumorji preživetje slabše brez bolezni v primerjavi z bolniki z CD147 negativnimi tumorji (slika 2A, log-rank test: P
= 0,008). Pooperativno Mediana brez bolezni čas preživetja bolnikov s pozitivnim CD147 barvanjem je bil 34,4 meseca (95% IZ: 27.3-47.5), medtem ko se je pri bolnikih z negativnim CD147 barvanjem je bil 48,9 meseca (95% IZ: 35,2-62,6). Nadaljnje analize preživetja brez bolezni v podskupinah pozitivnih CD147 obarvanje tumorjev pokazala, da je stopnja preživetja zmanjšal s šibko pozitivni (+), zmerno pozitiven (++) do močna pozitivna (+++) CD147 obarvanje skupino (slika 2B, log -rank test: P
< 0,001). Ko je bilo razmerje neprilagojene ogroženosti (HR) nastavljen na 1,0 (za referenco) v CD147 negativnim (-) obarvanje skupino so imeli bolniki s CD147 pozitivnega raka želodca za 1,63-krat večje tveganje za ponovitev bolezni v primerjavi s tistimi z CD147 negativnim rakom želodca (95 % IZ: 1,13-2,36; P
= 0,009). Glede clinicopathological značilnosti, stanje tumorska invazija (test log-rank: P
= 0,016), bezgavko metastaze (test log-rank: P
< 0,001) in faza TNM (log- rang test: P
< 0,001), so bile povezane tudi s preživetjem brez bolezni pri bolnikih z rakom želodca. Bolniki z rakom želodca in kaže globoko invazijo, bezgavko metastaze ali poznejši fazi TNM imel preživetje slabši brez bolezni in večje tveganje za ponovitev bolezni kot tisti brez. Vendar pa je imel spol, starost, lokacija tumorja, stanje razlikovanje ali razvrščanje Lauren ne napovedno vrednost na preživetje brez bolezni pri bolnikih z rakom želodca. Neprilagojena VP je prikazano v tabeli 2.

V multivariatne analize, je Cox sorazmernih tveganj model, prilagojen glede na spol, starost in stopnjo TNM in CD147 izraz je neodvisen napovedni dejavnik preživetja brez bolezni pri bolnikih z rak želodca. Prilagojena HR je bila 1,00 (kot referenco) in 1,51 v CD147 negativnih in pozitivnih bolnikov, v tem zaporedju (95% IZ: 1,05-2,16; P
= 0,026, tabela 2). Tako bi lahko CD147 izraz na raka želodca neodvisen napovedovalec preživetja brez bolezni pri bolnikih, ki kažejo, da imajo bolniki s pozitivnim CD147 barvanjem z večjim tveganjem za ponovitev bolezni kot tisti z negativnim barvanjem. Poleg tega je bila TNM oder tudi prognostični dejavnik za preživetje brez bolezni v multivariatne analize. (Tabela 2)

Razmerje med CD147 izražanja in celokupno preživetje

Ker je CD147 obarvanje povezana s preživetjem brez bolezni raka želodca, smo dodatno analizirali svoje povezave z celokupnega preživetja. Mediana celokupnega čas preživetja pri vseh bolnikih je bil 58,0 meseca (95% IZ: 46.7-69.3 mesecev). Kaplan-Meier analiza je bila uporabljena za oceno celokupno preživetje bolnikov z rakom želodca kaže, da so imeli bolniki s CD147 pozitivnih tumorjev slabše celokupno preživetje v primerjavi z bolniki z CD147 negativnimi tumorji (slika 3A, log-rank test: P
= 0,003). Pooperativno Mediana celokupnega čas preživetja bolnikov s pozitivnim CD147 barvanjem je bil 45.0 meseca (95% IZ: 32.5-57.5), medtem ko se je pri bolnikih z negativnim CD147 obarvanje ni bilo mogoče oceniti zaradi boljšega celotnem preživetju. Analiza podskupin na celokupno preživetje je pokazala, da je bila stopnja preživetja zmanjšal s šibko pozitivni (+), zmerno pozitiven (++) do močna pozitivna (+++) CD147 obarvanje skupine (slika 3B, log-rang test: P
< 0,001). Bolniki z CD147 pozitivnega raka želodca, je imela 1,79-krat večje tveganje za smrt v primerjavi s tistimi z CD147 negativnim rakom želodca. (95% IZ: 1.20-2.67; P
= 0,004, tabela 3)

V multivariatne analize, je Cox sorazmernih tveganj model, prilagojen glede na spol, starost in stopnjo TNM in CD147 izraz je neodvisen napovedni dejavnik za celokupno preživetje bolnikov z rakom želodca. Prilagojena HR je bila 1,59 pri CD147 pozitivnih bolnikih (95% IZ: 1.05-2.40; P
= 0,028, tabela 3). Tako bi lahko CD147 izraz na raka želodca neodvisen napovednik za celokupno preživetje bolnikov, kar kaže, da imajo bolniki s pozitivnim CD147 barvanjem večje tveganje za smrt.

Pogovor

Tumor ponovitev je odličen nevarnost za bolnike z rakom želodca po vsem svetu. Tudi za stopnjo I raka želodca, približno 5% do 30% bolnikov razvije ponovitve bolezni, in sčasoma odmrejo za metastatsko bolezen. Tako nadzor ponovni pojav tumorja je eden izmed najbolj učinkovitih strategij za izboljšanje napovedi pri obvladovanju raka želodca. Kemoterapija zmanjša tumorja ponovitev in povečuje življenjsko dobo bolnikov z rakom želodca. Vendar pa poleg svojih terapevtskih učinkov pri tumorskih celicah, kemoterapija neizogibno povzroči znatnih učinkov kliničnih toksičnosti in stranskimi v normalnih organov in tkiv. Tako, da upravlja najbolj učinkovito zdravljenje in zmanjša neželene učinke, ki pa je nujno potrebno za bolj občutljive označevalcev, da napovedujejo ponovni pojav tumorja in prognozo.

V tej študiji smo raziskovali CD147 beljakovin izraz v 223 primerih klinična rak želodca in njegova povezava s preživetjem brez bolezni. CD147 protein izraz je bil v želodčnih tkivih raka poveča v primerjavi s sosednjimi zdravega tkiva in večjo pozitivno obarvanje CD147 je pogosteje odkrijejo raka želodca z globokim invazije, bezgavk metastaze, oddaljenih metastaz in poznejši fazi TNM, ki je skladen s predhodnimi študijami o razmerju med CD147 in rakom pri ljudeh želodca [23]. Vendar pa CD147 izraz ni bila povezana s starostjo, spolom, status diferenciacije, mestu tumorja ali razvrščanje Lauren. Nedavne študije kažejo, da RNAi posredovano navzdol ureditev CD147 zmanjšala proliferacije celic, MMP-2 in MMP-9 aktivnosti in invazivni potencial SGC7901 celic, ki podpirajo naše rezultate, ki dokazujejo združenje CD147 s želodca invaziji raka in metastaz [16] . Če povzamemo, ti podatki kažejo, da bi lahko CD147 vključeni v želodcu napredovanju raka.

Ker je CD147 povezana z želodčno invazijo in metastaz raka, ki se lahko določi tumorja ponovitve, smo dodatno analizirali njegove povezave z boleznijo brezplačno in splošne preživetje. Kaplan-Meier analiza je pokazala bistveno slabši brez bolezni in celokupno preživetje pri bolnikih z CD147 pozitivnih tumorjev, kar kaže, da je stopnja CD147 protein označevalec ponovitve in prognozo pri bolnikih z rakom želodca. Cox sorazmernih tveganj model, prilagojen za starosti, spola in TNM odru pokazala enak trend kot analizo preživetja Kaplan-Meier, ki potrjuje CD147 izraz kot pokazatelj slabe bolezni-prost in celokupnega preživetja, ki je neodvisen od znanih kliničnih prognostičnih kazalcev, kot so stopnje TNM. Preživetje Daljša brez bolezni v CD147 negativno barvanja skupine predlagal, da bi bilo CD147 potencialni napovedni označevalec zgodnje ponovitve ali metastaz v želodcu raka. In celokupnega preživetja je pomemben klinični meritve za oceno tveganja za bolnike. Zato bi CD147 dragoceno klinični kazalnik za oceno tveganja za bolnike z rakom želodca.

združenje CD147 z rakom želodca invazije, metastaz in ponovitve lahko vsaj delno zaradi njenega vpliva na MMP, kot MMP dovoli celice aktivno preoblikovanje v zunajcelični matriks. CD147 je znano, da spodbujajo tumorske invazije in metastaziranja preko stimuliranje MMP sintezo v sosednjih fibroblastih [8]. S tega vidika, CD147 stimulira proizvodnjo MMP, ki lahko poslabša ECM in olajša invazije tumorskih celic in metastaz; zato spodbuja ponovni pojav tumorja. Nedavne študije tudi pokazale, da EMMPRIN ne le povzroča različne MMP, ampak tudi uravnava parametre urokinaznega aktivatorja plazminogena (uPA) sistem in vaskularni endotelijski rastni faktor (VEGF) [29], [30].

Na koncu CD147 izraz je v kliničnih želodčnih osebkov rakom povečuje in je bilo povezano s tumorsko invazijo in metastaz. Naša raziskava ponuja tudi prvi dokaz, da je CD147 neodvisen napovedni dejavnik tako brez bolezni in celokupno preživetje bolnikov z rakom želodca. Te ugotovitve tudi kažejo, da bi CD147 potencialni napovedni označevalec tumorja ponovitve in prognozo pri bolnikih z rakom želodca.

• Plos ONE: Zveza med Dairy s hrano in želodca raku: Meta-analiza opazovalne študije
• Plos ONE: Inhibicija JAK2 /stat3 Pathway Zmanjšuje Rak želodca rast in vitro in in vivo