Plos ONE: obtoku tumorske celice (CTCs) RT-PCR in njeno prognostičnih vlogi želodčnega raka Zaznane: Meta-analiza Objavljeno Literature

Povzetek

Cilj

The prognostičnega pomena v obtoku tumorske celice (CTCs) je sporna v raka želodca (GC). Izvedli smo meta-analizo razpoložljivih študijah za presojo njene napovedno vrednost z RT-PCR, zabeleženega za bolnike z diagnozo GC.

Metode

Embase, PubMed, Ovid, Web of Science, Cochrane knjižnica in Google Scholar iskanje Baza podatkov je bila izvedena na vseh študij, ki poročajo o rezultatih interesov. Študije so bile ustanovljene v skladu z merili za vključitev /izključitev. Meta-analiza je bila narejena s pomočjo model naključnih učinkov; razmerje ogroženosti (HR), razmerje tveganj (RR) in njihove 95% intervali zaupanja (95% CIS) so bile določene kot veljavi ukrepi. Informacije o poskusno oblikovanje, je posledica podatkov, neodvisno pridobljeni. Heterogenost študijah je bil testiran za vsak skupni analizi.

Rezultati

devetnajst študije, objavljene ujema merila za izbor in so bili vključeni v to meta-analizo. CTCs pozitivnost je značilno povezana s slabim recidivno preživetje brez (RFS) (HR 2,42, 95% IZ: [1,94-3,02]; P < 0,001) in slabo celokupno preživetje (OS) (HR 2,42, 95% IZ: [1,94-3,02 ]; P < 0,001). CTCs pozitivnost so tudi bistveno povezana z regionalne bezgavke (RLNs) metastaze (RR 1,42, 95% IZ: [1,20-1,68]; p < 0,0001), globino infiltracije (RR 1,51, 95% IZ: [1.27-1.79]; p < 0,0001), žilna invazija (RR = 1,43, 95% CI: [1,18-1,74], p = 0,0002) in faza TNM (I, II primerjavi III) (RR 0,63, 95% CI [0,48-0,84]; p = 0,001)

Zaključek

Predoperativno CTCs pozitivnost kaže slabo prognozo pri bolnikih z rakom želodca in povezana s slabimi clinicopathological prognostičnih dejavnikov

Navedba:.. Wang s, Zheng G Cheng B, Chen F, Wang Z, Chen Y, et al. (2014) v obtoku tumorske celice (CTCs) RT-PCR in njeno prognostičnih vlogi želodčnega raka Zaznane: meta-analiza objavljene literature. PLoS ONE 9 (6): e99259. doi: 10,1371 /journal.pone.0099259

Urednik: Andreas-Claudius Hoffmann, West nemški Cancer Center, Nemčija

Prejeto: 28. september 2013; Sprejeto: 12. maj 2014; Objavljeno: 5. junij 2014

Copyright: © 2014 Wang et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Delo je podprl državnega visoko tehnologijo raziskovalnega in razvojnega programa Kitajske (Grant No. 2012AA02A502, 2012AA02A506) s. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

V svetovnem merilu je rak želodca (GC) je četrti najpogostejši rak in je drugi najpogostejši vzrok raka -povezana smrti [1]. Na Kitajskem, ima raka na želodcu, na tretjem mestu v obolevnosti med prebavil raka, zaradi težav zgodnjega diagnosticiranja, so bile količine bolnikov z diagnozo GC, dokler je v zaključni fazi; žal tudi po radikalni operaciji in adjuvantno terapijo, 5-letno skupno preživetje (OS) GC pacienta je relativno nizka (pod 50%) [2]; v zadnjem desetletju, strategija zdravljenje raka želodca stalno spreminja, vendar še vedno ne izboljša splošno prognozo pomembno, večina bolnikov umre zaradi oddaljenih metastaz in ponovitve. Tako, da se izboljša klinični izid bolnikov GC, potrebujemo nove biomarkerjev, ki nam lahko pomagajo odkriti bolnike z visokim tveganjem za metastaze in opravljanje posebne strategije terapije.

Kot je znano, da nam, tumorskih metastaz sestavlja niz bioloških postopkov, en pomemben korak je tumorske celice razširijo v krvni obtok in krožijo [3]; Tako, da bi dobili več vpogleda v metastaz kaskade, študije obtoku tumorske celice (CTCs) močno postane eden od vročih akademskih vsebin. Koncept CTCs segajo v študiji Ashworth [4] in1869 je pokazala Engell [5] leta 1955, ki so dokazale obstoj teh redkih celic. Obstaja precej dokazov kaže, da so CTCs odcepi od osnovne mase tumorja na najzgodnejših fazah malignega napredovanja [6]; Te celice, ki krožijo skozi krvni obtok, ki potujejo v različnih tkivih telesa, so glavni vzrok vidnih metastaz [7]. Danes so številne študije raziskovali napovedni pomen CTCs pozitivnosti bolnic z rakom dojke [8], kolorektalnega raka [9], in dokazal, da je lahko CTCs slaba prognostični označevalec.

Glede na raka želodca čeprav obstajajo številne študije, katerih namen je ugotoviti odnos med CTCs in prognozo ali drugih clinicopathologic parametrov, pomanjkanje statističnih moči skupaj s svojo drugačno zasnovo študije in rezultatov omejeno individualno klinično vrednost in napovedni učinek CTCs pozitivnosti. Še posebej, vrednost predoperativnega CTCs pozitivnosti pri bolnikih z rakom želodca še ni jasno prikazano. Tako smo izvedli kombinirano analizo razpoložljivih študij, ki bo zagotovil bolj natančno oceno o prognostično pomembnosti CTCs pri bolnikih z GC.

metod

književnosti Poiskati

PubMed, Embase, Ovid, Web of Science, Google Scholar in Cochrane podatkov knjižnice baze sistematično iskali brez časovnih omejitev. so bile ugotovljene Študije poročanje o molekularno detekcijo CTCs in njegov vpliv na prognozo raka želodca. Uporabljene so bile naslednje ključne besede: '' obtoku tumorske celice '' ali '' CTCs '', "želodčnega raka '," napoved "in" PCR "so bili uporabljeni kot ključne besede. Da bi preprečili manjka ustreznih publikacij, "povezani izdelki" funkcija PubMed in Google Učenjak so bili uporabljeni za opredelitev drugih potencialno pomembnih publikacij. Reference člankov so ročno iskati ustrezne člene, vključno s pregledom člankov. Dve pregledovalci (S.Y. Wang in G Zheng) neodvisno pregledani in najdena seznam literature in, v primeru morebitnih ustreznih referenc, dobimo polno člankov; Primeri nestrinjanja so razrešili razpravljali naslov in povzetek; Full-članki (n = 39) so bile pregledane in 20 so bili izključeni po merilih spodaj.

Merila Literatura prebiranje

Da se vključi v analizo, je bilo študije, da se ujemajo naslednja merila vključevanja : (1) vsaka oblika reverzne transkripcije PCR (RT-PCR), ki se uporablja za vrednotenje zveze med domnevno označevalcev obtoku tumorske celice in bodisi celotno preživetje (OS), ponovitve preživetje brez (RFS), ali prognostični dejavniki rak želodca; (2) > 20 analizirali bolnike in dovolj podatkov za izračun razmerja ogroženosti (HR) ali razmerje tveganj (RR) z intervalom zaupanja 95% (95% CI) kot primerljive ocene učinka; (3) vzorcev, ki se uporabljajo v teh študijah mora biti periferne krvi in ​​jih je treba zbirati pred operacijo; (4) izključitev pisem uredniku, kritike in člankov, objavljenih v non-angleški jezik knjig ali dokumentov.

Podatki Pridobivanje

Dve pregledovalci (SY Wang in G Zheng) neodvisno ekstrahira naslednje podatke iz vsake študije: leto objave, priimek prvega avtorja, število primerov in kontrol, število različnih kliničnih in patoloških parametre in metode ocenjevanja izražanja preživetje. Nesoglasja so razrešili in razpravi so preverili tretja raziskovalec

Statistična analiza

Statistična analiza je bila opravljena z revizijsko Manager (RevMan) (različica 5.2 Kopenhagnu.. Nordic Cochrane Centre, The Cochrane sodelovanje, 2012). Za statistično oceniti napovedni učinek CTCs, smo ga dobili razmerje ogroženosti (HR) in pripadajoči standardne napake za recidivno preživetje brez (RFS) in /ali skupno preživetje (OS) iz vključenih študij. Če HRS in pripadajoče standardne napake, intervali zaupanja (CIS), ali P vrednosti niso bili neposredno na voljo v izvirnih člankih smo približati HRS v skladu z metodo, ki jo Parmar et al [10] opisanega. Po dogovoru, ki je VP > 1 pomeni slabšo prognozo v CTCs-pozitivni skupini v primerjavi z negativno skupino. združeni smo ekstrahirane HRS z uporabo generičnega obratno metodo variance na voljo v pregledni Manager. Ker smo pričakovali interstudy heterogenost, smo uporabili model naključni učinek [11], ker je bolj konzervativno z ustvarjanjem širšega CI okoli združenih VP kot model za analizo fiksni učinek. Ko analizirali povezavo med CTCs in drugih parametrov, smo izračunali relativno tveganje (RR), v RR > 1 implicitno CTC-pozitivne skupina je bila povezana s parametrom. Vsi podatki ekstrakcije smo izvedli ločeno SY Wang in G Zheng. Nesoglasja so razrešili razpravo. Heterogenost med študijami smo testirali s testom Q in I ^{2 statistiko. Smo ocenili potencialno objave pristranskosti s lijak parcelo, ki jo je Egger [12] in Begg testu [13] z uporabo stata programske opreme (različica 11.0, College Station, TX) dodatno preučiti. Je skupna analiza za diagnostične točnosti CTCs pozitivnosti izračuna tudi STATA.}

Rezultati

Baseline Študijski Značilnosti

sistematično iskanje literature (sl. 1) dobimo skupaj 19 študij [14] - [32] za končno analizo. Študije so bile izvedene v 6 državah (Kitajska, Nemčija, Japonska, Koreja in Združene države) in objavljena med letoma 2000 in 2013. Vsi 19 študij, ki analizirajo periferno kri pred operacijo uporabili metodo molekularno detekcijo (PCR, RT-PCR ali RT sledi s kvantitativno PCR) tumorskih celic, smo CEA mRNA testirana v 6 študijah in drugi geni, smo testirali ne več kot 3 študije. Izhodiščne značilnosti vključenih študij so povzeti v (Tabela 1)

Diagnostična točnost CTCs Detection

Za oceno splošne testno delovanje vključenih študij [14] - [17]. [ ,,,0],19], [21] - [32], smo izračunali zbrani diagnostično natančnost odkrivanja CTCs. Kombinirana občutljivost in specifičnost je bila 0,45 (95% interval zaupanja: [0,34-0,57]) in 0,99 (95% interval zaupanja: [0,96-1,00]) v tem zaporedju (slika S1), z znatnim heterogenosti (I ^{2 = 91%, p 0.05 in I 2 = 69,83%, p 0.05). Pozitivna Verjetnost Ratio (PLR) je 37,1 (95% IZ: [11,7-118,1]), je bila negativna Verjetnost Ratio (NLR) 0,55 (95% IZ: [0,38-0,89]) (Slika S2). Kombinirani količnik diagnostični kvote je bila 67,08 (95% interval zaupanja: [19,75-227,86]) (slika S3) in površina pod SROC krivuljo je bilo 0,93 (95% IZ:. [0,91-0,95] (slika S4)}

na splošno Analiza preživetja pri želodčnih bolnikih z rakom

Podatki o RFS so bili na voljo v 10 študijah [16] [18] [19] [22] - [24] [26] [28] [29] [31], je združena analiza je pokazala napovedni učinek CTCs pozitivnosti (HR = 2,42, [95% iZ: 1.94-3.02]; P < 0,001) (Slika 2), brez med-študija heterogenosti (I ^{2 = 0%, p = 0,54). Smo tudi stratifikacije študije CEA-mRNA pozitivnih CTCs [16] [18] [19] [22] [29] podskupine, skupna analiza nakazujejo povezavo med slabim RFS in CTCs pozitivnosti (HR = 2,51, 95% IZ: [1,32-4,76], p < 0,001%), in med študija heterogenost je bila zmerna (I 2 = 44%, p = 0,13) Objava. pristranskosti, testiral Egger testu (p = 0,578) in lijak ploskve (slika S5), je bil zanemarljiv združeni analizi RFS.}

Združena analiza študij [21] [23] [25] [27], [30], [32] v OS je pokazala, da je bila prisotnost CTCs povezana s slabim OS (HR = 1,66, 95% CI: 1.26-2.19; p < 0,001) (slika 3), ter heterogenosti med študijami (I ^{2 = 35%, p = 0,15) ni pomen. Egger je preskus (p = 0,017) in lijak zemljišče (. Slika S6) je pokazala ta kombinirana analiza imel objave pristranskosti}

Korelacija Obratna tumorskih celic z Clinicopathologic parametri,

14 študij [16]. - [ ,,,0],18], [20] - [23] [25] [26] [28] - [32] so ocenili odnos med CTCs pozitivnosti in regionalnih bezgavk (RLNs) metastaz (RR = 1,42, 95% CI: [1,21-1,66], p. < 0,0001) (slika 4A), brez pomembne heterogenosti med študijami (I ^{2 = 32%, p = 0,08), analiza podskupin pokazala, da CEA-mRNA pozitivni CTCs so bile povezane z RLNs metastaze (RR = 1,69, 95% IZ: [1,27-2,23]; p = 0,0003) in heterogenost med-študiji zmanjšala (I 2 = 0%, p = 0,44). Študije [16] - [18], [20] - [23] [26] [30] - [32] ocenila skupni analizi pokazali veliko združenje CTCs pozitivnosti z globine tumorske infiltracije (RR = 1,51, 95 % CI:. [1,27-1,79]; p < 0,0001) (slika 4B), je heterogenost med študijami značilna (I 2 = 41%, p = 0,04), analiza podskupin pokazala, da so CEA-mRNA pozitivni CTCs povezana z globino tumorsko infiltracijo (RR = 1,56, 95% iZ: [1,09-2,23], p = 0,01), z istim med študijami heterogenosti (I 2 = 51%, p = 0,09). Vaskularne invazije [18], [22] - [25] [28] [30] [32] (RR = 1,43, 95% IZ: [1,18-1,74]; p = 0,0002) je bila povezana z CTCs pozitivnosti ( . Slika 4C), vendar heterogenost med-študiji je bila značilna (I 2 = 55%, p = 0,01)}

Osem študije [14] -. [17] [20] [22 ], [23] [29] poroča razmerje med CTCs pozitivnosti in stopnji TNM je bila skupna pozitivna stopnja CTCs v fazi I in skupine II 36,7% v primerjavi z 56,6% v stadiju III skupine. Skupna analiza je pokazala, da je CTCs pozitivnost na stopnji III večja kot na odru I in II (RR 0,63, 95% CI 0,48-0,84; p = 0,001), z med-študija heterogenosti (I ^{2 = 52%, p = 0,01), kot je prikazano na sliki 4D. Ko se združijo analiza [14] - [17] [20] [22] [23] [26] [29] je bil uveden za primerjavo CTC pozitivnosti v fazi I s stopnjo II, je CTCs pozitivnost višja v fazi II v primerjavi s stopnjo I (RR = 0,55 [95% IZ 0,36-0,84], p = 0,005). Vendar, ko smo primerjali skupine faza II in faza III [15] - [17] [20] [22] [23] [29], podatki, ni pokazala statistično pomembne (RR = 0,87; [95% IZ: 0,73-1,04], p = 0,93).}

Pogovor

iz kliničnega vidika, lahko presoja prognozo bolnikov z odkrivanjem CTCs v PB priskrbi pomembno prognostično informacije. Bizard et al [33] je pokazala, da je tudi sam CTC odkrili pri 7,5 ml krvi je bilo povezano z nadaljnji razvoj metastaz, kar pomeni, CTCs imajo velik potencial oddaljenih metastaz. Poleg tega, odkrivanje CTCs, z prednost časovno in stroškovno varčevanje, se zdi, udobna za bolnika in jih lahko ponovi kot orodje za spremljanje. Do danes, spodbujanje rezultate o pridružitvi med CTC pozitivnosti in metastatsko napredovanje pri bolnikih z metastatskim prsi [34], prostate [35], in kolorektalnega [36] raka so bili pred kratkim objavljeni. Vendar pa je trenutno zelo malo podatkov o kliničnem pomenu CTC pozitivnosti v GC bolnika, rezultati naše skupne ocene kažejo, da bi bilo CTCs pozitivnost v PB dejansko obravnavati kot prognostični označevalec.

Med procesom naša meta-analiza, omejimo čas vzorčenja in spletno stran za naše načrtovanje, da bi zmanjšali heterogenost, vendar smo še vedno opazili določeno stopnjo heterogenosti. Možni viri heterogenosti lahko izhajajo iz razlik v protokolu za odkrivanje, vrste in število ciljnega izbora genov, standard za CTCs pozitivnosti, kot tudi v demografskih ali clinicopathologic podatkov vključenih bolnikov. V teoriji, lahko postoperativne CTCs stanje pomembno in informativno, to odraža v kombinaciji informacije predoperativnega CTCs in intraoperativnim sproščanja tumor celic s kirurškim manipulaciji [37]. Vendar se lahko hitro apoptotske smrt sveže zdrobljenih CTCs javnost množično tumorja gen ali antigenov zaradi izgube preživetje mikrookolja v sistemski krvni obtok; To lahko povzroči določeno stopnjo pristranskosti odkrivanja. Vzorčenje čas je še en pomemben dejavnik, ki posegajo v prognositic vrednost CTCs pozitivnosti in vodi k heterogenosti. Ikeguchi M et al. [21] raziskovali povezavo med pooperativne CTCs pozitivnosti in prognozo, so ugotovili, da, če so vzorci krvi po operaciji zbrani v 48 urah, je imel CTCs pozitivnih bolnikih boljšo prognozo kot CTCs negativnimi. Zato bi bilo treba nadaljnje študije CTCs vzeti čas vzorčenja upoštevati, ovrednotiti in potrditi najboljši čas vzorčenja. Dodaten vir za opazovano heterogenosti lahko CTCs bazen sama, je bila sestavljena iz heterogene populacije rakavih celic, v tej skupini so imeli le določen del napovedni učinek [38]. Poleg tega karakterizacija CTCs z rakom dojke, rak želodca ali kolorektalnega raka, je pokazala, da le manjšina teh celic izražajo označevalce orožja povezana, receptorji rastnega faktorja, antigene imunskega odziva, adhezijske molekule in proteaze ali-proteaze, povezane beljakovine [39] .Poleg tega, tumorske celice razširjanje je zgodnji dogodek v daljni metastaze, in naključni aberacije za gen metastaz specifične se lahko pridobi po CTCs prašijo v krvni obtok [40]. Ta model lahko pojasni genomske in funkcionalno heterogenost CTCs.

Obstaja nekaj omejitev te meta-analize. Prvič, omejitve, ki jih je heterogenost prej omenjenim in nezmožnosti dostopa do primarnih podatkov vključenih študij povzroča. vprašanje heterogenosti naslovljena smo s strogim metodološkim pristopom, ki se uporablja za naključni učinki model za bolj konservativne ocene. Napovedni dejavniki raka želodca so zapleteni, naši podatki za meta-analize je bil od vključenih študij in osnovni podatki je težko dobiti, nismo mogli izključiti vse možne zavajajočih dejavnikov; pristopi, ki temeljijo na RT-PCR imajo visoko občutljivost za odkrivanje CTCs, vendar ne morejo oceniti število CTCs in nimajo biološke posebnosti [38]. Drugič, izbor jezikov prinaša še eno pristranskosti, smo omejeni naše analize objavljenih študij, napisane v angleščini, drug jezik, kot so japonski, nemški, so bili izključeni na podlagi meril, jezika. To lahko povzroči jezika pristranskosti vodi do precenjevanja velikosti učinka [41]. Tretjič, smo opazili, da obstaja določena stopnja objave pristranskosti, zlasti v skupni analizi za OS, eden od razlogov je lahko, da študije poročajo pozitivni rezultati so veliko lažje biti objavljena in dostopna; poleg tega študije uvedel skupni analizi imajo relativno majhne velikosti vzorca. Čeprav nismo mogli izvajati analize upoštevamo nekatere potencialno pomembne dejavnike, je CTC pozitivnost predstavlja kazalnik slabo prognozo pri bolnikih GC stalno prisoten v kumulativni analizi; Vendar pa je treba naše rezultate je treba razlagati previdno in zahteva več podrobnih in točnih podatkov za preverjanje.

Skratka, naša raziskava na podlagi razpoložljivih dokazov podpira idejo močnega prognostično vrednost CTCs v periferni krvi in nanaša na slabo prognozo GC. Identifikacija različnih metodoloških napak in virov heterogenosti v trenutno na voljo prognostičnih študij dejavnikov bi lahko prispevala k izboljšanju načrtovanja in poročanja o prihodnjih prognostičnih in predvidevanjem študij dejavnikov. Naši rezultati ponujajo tudi namig, da bi bilo dodatne študije uporabljajo standardizirane metode testiranja, optimiziran čas vzorčenja, popolno analizo in poročilo o rezultatih ali identifikacijo določenega mobilnega podskupine, kot so kroženje izvornih podobnih celic [42]; Na ta način lahko pridobijo jasnejše in natančnejše napovedni pomen CTCs pri bolnikih GC.

Podpora Informacije
Slika S1.
Forest Zemljišče združeni analizi PUP in SPE. SEN, občutljivost; . SPE, specifičnost
doi: 10,1371 /journal.pone.0099259.s001
(IOD)
Slika S2.
Forest Zemljišče združeni analizi PLR in NLR. PLR, pozitivno razmerje verjetnosti; . NLR, negativno razmerje verjetnost
doi: 10,1371 /journal.pone.0099259.s002
(IOD)
Slika S3.
Forest Zemljišče združeni analizi DOR. . DOR, razmerje diagnostični kvote
doi: 10,1371 /journal.pone.0099259.s003
(IOD)
Slika S4.
Povzetek ROC krivulja z zaupanjem in napoved regijah občutljivosti in specifičnosti
doi:. 10,1371 /journal.pone.0099259.s004
(IOD)
Slika S5.
Lijak parcelo za povzetek ocene RFS. . RFS, preživetje ponovitve-free doi: 10,1371 /journal.pone.0099259.s005
(IOD)
Slika S6.
Lijak parcelo za skupne ocene OS. . OS, celokupno preživetje
doi: 10,1371 /journal.pone.0099259.s006
(IOD)
Kontrolni seznam S1.
PRISMA kontrolni
doi:. 10,1371 /journal.pone.0099259.s007
(DOC)

• Plos ONE: Interlevkin 17A Spodbuja Rak želodca invazivnost preko NF-κB posredovana Matrix metaloproteinaz 2 in 9 Expression
• Plos ONE: histon HDAC4 Spodbuja želodca Rak SGC-7901 celice napredovanje preko p21 represije