PLoS ONE: циркулирующие опухолевые клетки (CTCs) Обнаруженные методом ОТ-ПЦР и его прогностической роли в рака желудка: Мета-анализ опубликованных Literature

Абстрактный

Цель
<р> прогностическое значение циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) является спорным в рак желудка (GC). Мы провели мета-анализ имеющихся исследований, чтобы оценить его прогностическое значение обнаруженного RT-PCR для пациентов с диагнозом GC.

Методы
<р> EMBASE, PubMed, Овидий, веб-математических наук, Cochrane Library и Google Scholar поиск в базе данных проводился на всех исследованиях, сообщающих результаты, представляющие интерес. Исследования были созданы в соответствии с критериями включения /исключения. Мета-анализ проводили с использованием модели случайных эффектов; отношение рисков (HR), отношение рисков (ОР) и их 95% доверительный интервал (95% ДИ) были установлены в качестве меры эффекта. Информация о разработке испытаний, результаты данных были извлечены независимо друг от друга. Неоднородность исследований была испытана для каждого объединенного анализа.

Результаты
<р> Девятнадцать исследований, опубликованных соответствовали критериям отбора и были включены в этот мета-анализ. ЦОК позитивности в значительной степени связано с плохим безрецидивная выживаемость (RFS) (HR 2,42, 95% ДИ: [1.94-3.02]; P &л; 0,001) и плохой общей выживаемости (ОВ) (HR 2,42, 95% ДИ: [1.94-3.02 ]; Р &л; 0,001). ЦОК положительность были также значительно связаны с регионарных лимфатических узлов (RLNs) метастазирования (1.42 RR, 95% ДИ: [1.20-1.68]; р &Лт; 0.0001), глубина проникновения (1.51 RR, 95% ДИ: 1.27-1.79 []; р &л; 0,0001), сосудистая инвазия (ОР = 1,43, 95% ДИ: [1.18-1.74], р = 0,0002) и TNM стадии (I, II по сравнению с III) (0,63 RR, 95% ДИ [0.48-0.84]; р = 0,001)

Вывод
<р> Предоперационное ЦОК положительность указывает плохой прогноз у пациентов с раком желудка, а также связанные с плохим клинико-патологическими прогностическими факторами
<р> Цитирование:.. Ван S, G Чжэн , Ченг B, F Чен, Ван Z, Y Chen и др. (2014) циркулирующих опухолевых клеток (CTCs), обнаруженное RT-PCR и его прогностической роли в желудочном рака: мета-анализ опубликованной литературы. PLoS ONE 9 (6): e99259. DOI: 10.1371 /journal.pone.0099259
<р> Редактор: Andreas-Клавдий Hoffmann, западногерманская Cancer Center, Германия
<р> Поступило: 28 сентября, 2013 года; Принято: 12 мая 2014 года; Опубликовано: 5 июня 2014
<р> Copyright: © 2014 Wang и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Работа была поддержана Национальной программы исследований и разработок высоких технологий Китая (грант № 2012AA02A502, 2012AA02A506). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> Во всем мире рак желудка (GC) является четвертым наиболее распространенным видом рака и является второй ведущей причиной рака смерти о связанных [1]. В Китае, рак желудка занимает третье место среди заболеваемости пищеварительных рака системы, в связи с трудностями ранней диагностики, количество больных не были диагностированы с GC, пока в продвинутой стадии; К сожалению, даже после радикальной операции и адъювантной терапии, 5-летней общей выживаемости (ОВ) ГК пациента относительно невелика (менее 50%) [2]; за последнее десятилетие, стратегия терапии рака желудка непрерывно изменяется, но до сих пор не в состоянии улучшить общий прогноз значительно, большинство больных умирают из-за отдаленных метастазов и рецидивов. Таким образом, в целях улучшения клинического исхода больных ГЦ, нам нужны новые биомаркеры, которые могут помочь нам выявить пациентов с высоким риском метастазирования и проводить определенную стратегию терапии.

Как известно нам, метастазирование опухоли состоит ряд биологических процедур, одним важным шагом является распространение опухолевых клеток в кровоток и циркулируют [3]; Таким образом, чтобы получить больше проникновения в суть метастазирования каскада, исследования циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) энергично становится одним из горячих научных тем. Концепция ЦОК, датируемые к изучению Ашворта [4] in1869 и была продемонстрирована Engell [5] в 1955 г., который доказал существование этих редких клеток. Существует значительный объем данных, свидетельствующих о том, что ЦОК опадает от массы первичной опухоли на ранних стадиях через злокачественной прогрессии [6]; эти клетки, циркулирующие через кровоток, путешествующие в различных тканях тела, являются основной причиной явных метастазов [7]. В настоящее время многочисленные исследования изучали прогностическую значимость ЦОК положительности пациентов с раком молочной железы [8], колоректального рака [9], и доказал, что ЦОК может быть плохим прогностическим маркером.
<Р> Что касается рака желудка, хотя есть много исследований, предназначенных, чтобы выяснить отношения между ЦОК и прогнозом или других клиникопатологическими параметров, отсутствие статистической силы вместе с их различным дизайном исследования и результаты ограничили индивидуальную клиническую ценность и прогностическое эффект ЦОК позитивности. В частности, значение предоперационной ЦОК положительность в больных раком желудка еще не ясно показано. Таким образом, мы провели совместный анализ имеющихся исследований, что обеспечит более точную оценку по прогностической значимости ЦОК у больных с GC.

Методы

Литература Поиск
<р> PubMed, Embase, Овидий, веб-науки, Google Scholar и Cochrane базы данных библиотеки были систематический поиск без ограничений по времени. Были определены Исследования отчетности по молекулярной обнаружения ЦОК и его влияния на прогноз при раке желудка. Были использованы следующие ключевые слова: '' циркулирующих опухолевых клеток '' или '' ЦОК '', "рак желудка", "прогноз" и "ПЦР" были использованы в качестве ключевых слов. Для того, чтобы не пропустить соответствующие публикации, "связанные статьи" функция Pubmed и Google Scholar были использованы для выявления других потенциально соответствующих публикаций. Список литературы статей были вручную искали соответствующие статьи, в том числе обзорных статей. Два составителя обзора (С.Ю. Ван и G Чжэн) независимо друг от друга на экране и извлекается список литературы и, в случае потенциально соответствующие ссылки, были получены полные статьи; Случаи разногласий были решены путем обсуждения название и аннотация; Полный текст статьи (п = 39) были рассмотрены и 20 были исключены следующие ниже критериев.

Критерии Литература Скрининг
<р> Для того, чтобы быть включены в анализ, исследования должны были соответствовать следующим критериям включения : (1) любая форма обратной транскрипции ПЦР (оТ-ПЦР), используемый для оценки связи между предполагаемыми маркеров циркулирующих опухолевых клеток и либо общей выживаемости (ОВ), безрецидивной выживаемости (RFS), или прогностическими факторами рак желудка; (2) > 20 проанализировали пациентов, и достаточное количество данных для расчета отношения рисков (ОР) или отношение рисков (ОР) с доверительным интервалом 95% (95% ДИ) в качестве оценки сравнимого эффекта; (3) образцы, использованные в этих исследованиях, должны быть в периферической крови и должны быть собраны до операции; (4) исключение из письма к редактору, обзоров и статей, опубликованных в не на английском языке книги или бумаги.

Извлечение данных
<р> Два исследователя (SY Wang и G Чжэн) независимо друг от друга извлечена следующие данные из каждого исследования: год издания, фамилии первого автора, число случаев и контроля, количество различных клинических и патологических параметров, а также методов оценки выражения выживания. Разногласия были урегулированы путем обсуждения и были проверены третьим исследователем

Статистический анализ
<р> Статистический анализ проводили с использованием программы Review Manager (RevMan) (версия 5.2 Копенгаген:.. Кохрановская центр Nordic, Кокрановская Сотрудничество, 2012). Для того, чтобы статистически оценить прогностическое эффект ЦОК, извлеченный отношение рисков (ОР) и связанные с ними стандартные ошибки на безрецидивная выживаемость (RFS) и /или общей выживаемости (ОВ) из включенных исследований. Если ГКР и связанные с ними стандартные ошибки, доверительные интервалы (ДИ), или значения Р не были непосредственно представлены в оригинальных статьях, мы аппроксимирована подголовников в соответствии с методом, описанным Пармар и др [10]. По соглашению, HR &GТ; 1 означает худший прогноз в ЦОК-положительные группы по сравнению с отрицательной группой. Мы объединили распакованные подголовников с использованием общего метода обратной дисперсии доступного в диспетчере обзора. Потому что мы ожидали interstudy гетерогенность, мы применили модель случайного эффекта [11], так как он является более консервативным, создавая более широкий CI вокруг объединенных HR, чем модель анализа фиксированного эффекта. При анализе связи между ЦОК и другими параметрами, рассчитывался относительный риск (ОР), а RR > 1 подразумеваемые CTC-позитивная группа была связана с параметром. Все экстракции данных были выполнены отдельно SY Wang и G Чжэн. Разногласия были урегулированы путем обсуждения. Неоднородность между исследованиями была проверена с помощью теста Q и I ^{2 статистики. Мы оценили потенциальную систематическую ошибку с помощью воронки участка, который был дополнительно изучена Эггер [12] и тест Бегг [13] с использованием программного обеспечения STATA (версия 11.0, College Station, TX). И Обобщенный анализ диагностической точности ЦОК позитивности была также рассчитана по STATA.}

Результаты

Базовое исследование характеристики
<р> Систематический поиск литературы (рис. 1) дает в общей сложности 19 исследований [14] - [32] для окончательного анализа. Исследования были проведены в 6 странах (Китай, Германия, Япония, Корея и Соединенные Штаты) и опубликованные в период между 2000 и 2013 Все 19 исследований, анализирующих периферической крови перед операцией применили метод молекулярного обнаружения (ПЦР, RT-PCR или RT с последующим с помощью количественной ПЦР) опухолевых клеток, СЕА мРНК была протестирована в 6 исследований, и другие гены были протестированы не более чем 3 исследования. Исходные характеристики включенных исследований обобщены в (Таблица 1)

Диагностическая точность обнаружения ЦОК
<р> Для оценки общей производительности тест-включенных исследований [14] - [17]., [ ,,,0],19], [21] - [32], мы рассчитали Отстоявшийся диагностической точности обнаружения ЦОК. Комбинированная чувствительность и специфичность составляет 0,45 (95% ДИ: [0.34-0.57]) и 0,99 (95% ДИ: [0.96-1.00]), соответственно (рис S1), со значительной неоднородностью (I ^{2 = 91%, р &л; 0,05 и I 2 = 69,83%, р &л; 0,05). Положительная правдоподобие Соотношение (ГНР) составляет 37,1 (95% ДИ: [11.7-118.1]), отрицательный результат отношения правдоподобия (NLR) составила 0,55 (95% ДИ: [0.38-0.89]) (рис S2). Комбинированный диагностический отношение шансов составило 67,08 (95% ДИ: [19.75-227.86]) (рис S3) и площадь под кривой СДОК составляет 0,93 (95% ДИ:. [0.91-0.95] (рис S4)}

Общий анализ выживания для рака желудка пациентов
<р> Данные о RFS были доступны в 10 исследованиях [16], [18], [19], [22] - [24], [26], [28], [29], [31], то объединенный анализ показал, прогностический эффект ЦОК позитивности (HR = 2,42, [95% ДИ: 1.94-3.02]; P &лт; 0,001) (рисунок 2), без каких-либо между исследованиями гетерогенности (I ^{2 = 0%, р = 0,54). Мы также слоистые исследования CEA-мРНК положительных ЦОК [16], [18], [19], [22], [29] для подгруппы, объединенный анализ предложил ассоциацию между плохим RFS и ЦОК позитивности (HR = 2,51, 95% ДИ: [1.32-4.76], р &л; 0,001%), а также между исследованиями гетерогенность была умеренной (I 2 = 44%, р = 0,13) Публикация. смещения, испытанные в тесте Эггера (р = 0,578) и воронка участка (рис S5), была незначительной для обобщенном анализе RFS.
<р> объединенном анализе исследований [21], [23], [25], [27], [30], [32] на OS показали, что наличие ЦОК было связано с плохим ОС (HR = 1,66, 95% ДИ: 1.26-2.19; р &л; 0,001) (рисунок 3), а также между исследованиями гетерогенность (I 2 = 35%, р = 0,15) не было значение. тест Эггера (р = 0,017) и воронкой участок (. рис S6) показали, что это комбинированный анализ имел уклон публикации}

Корреляция циркулирующих опухолевых клеток с клиникопатологическими параметрами

14 исследований [16]. - [ ,,,0],18], [20] - [23], [25], [26], [28] - [32] оценивали взаимосвязь между ЦОК позитивности и регионарных лимфатических узлов (RLNs) метастазирования (ОР = 1,42, 95% ДИ: [1.21-1.66]; р &л;. 0,0001) (рис 4A), без существенного между исследованиями гетерогенности (I ^{2 = 32%, р = 0,08), анализ подгрупп показал, что CEA-мРНК положительные ЦОК были связаны с RLNs метастаз (ОР = 1,69, 95% ДИ: [1.27-2.23]; р = 0,0003), а также гетерогенность между исследованиями уменьшилось (I 2 = 0%, р = 0,44). Исследования [16] - [18], [20] - [23], [26], [30] - [32] оценивали по объединенном анализе показал значительное объединение ЦОК позитивности с глубиной проникновения опухоли (ОР = 1,51, 95 % ДИ:. [1.27-1.79]; р ≪ 0,0001) (фиг.4В), между исследованиями гетерогенность было статистически значимым (я 2 = 41%, р = 0,04), анализ в подгруппах показал, что СЕА-мРНК положительные ЦОК были связано с глубиной проникновения опухоли (ОР = 1,56, 95% ДИ: [1.09-2.23], р = 0,01), с той же между исследованиями гетерогенности (I 2 = 51%, р = 0,09). Сосудистая инвазия [18], [22] - [25], [28], [30], [32] (ОР = 1,43, 95% ДИ: [1.18-1.74]; р = 0,0002) была связана с ЦОК позитивности ( . рис 4C), но между исследованиями гетерогенность было статистически значимым (I 2 = 55%, р = 0,01)
<р> Восемь исследований [14]. - [17], [20], [22 ], [23], [29] сообщили о взаимосвязи между ЦОК позитивности и стадии TNM, общая положительная скорость ЦОК в стадии I и II группы была 36,7% по сравнению с 56,6% в стадии III группы. Объединенную анализ показал, что ЦОК позитивности на стадии III больше, чем на стадии I и II (0.63 РР, 95% ДИ 0.48-0.84, р = 0,001), с между исследованиями гетерогенности (I 2 = 52%, р = 0,01), как показано на фиг.4D. При объединенном анализе [14] - [17], [20], [22], [23], [26], [29] был введен для сравнения CTC положительность на стадии I с II стадии, ЦОК позитивности была выше в стадии II по сравнению с I стадии (RR = 0,55; [95% ДИ 0.36-0.84], р = 0,005). Тем не менее, при сравнении группы II стадии и стадии III [15] - [17], [20], [22], [23], [29], данные показали, не выявлено статистически значимой (ОР = 0,87; [95% ДИ: 0.73-1.04], р = 0,93).}

Обсуждение
<р> с клинической точки зрения, оценка прогноза пациентов путем выявления ЦОК в ПБ может предоставить важную прогностическую информацию. Bizard и др [33] обнаружили, что даже один CTC обнаружен в 7,5 мл крови был связан с последующим развитием метастазов, что означает ЦОК имеют сильный потенциал отдаленных метастазов. Кроме того, обнаружение ЦОК, с преимуществом затрат времени и экономичен, оказывается удобным для пациента и может быть легко повторен в качестве инструмента мониторинга. На сегодняшний день обнадеживающие результаты, касающиеся связи между CTC позитивности и метастатического прогрессирования у пациентов с метастатическим раком молочной [34], простаты [35], а также толстой и прямой кишки [36] рака были недавно опубликованы. Тем не менее, в настоящее время очень ограниченные данные о клинической значимости CTC положительности в GC пациента, результаты нашей коллективной оценки предполагают, что ЦОК позитивности в ПБ на самом деле следует рассматривать в качестве прогностического маркера.
<Р> В процессе наш мета-анализ, мы ограничиваем время выборки и сайт для нашего проекта, чтобы минимизировать гетерогенность, но мы все же заметили определенную степень неоднородности. Потенциальные источники неоднородности могут происходить из-за различий в протоколе обнаружения, типов и количества отбора генов-мишеней, стандартных ТХМ позитивности, а также в демографических или клиникопатологическими данных, включенных пациентов. Теоретически, статус послеоперационные ЦОК может быть важным и информативным, он отражает комбинированную информацию о предоперационной ЦОК и интраоперационной высвобождения опухолевых клеток с помощью хирургических манипуляций [37]. Но быстрое апоптозу свежесобранных измельченных ЦОК может освободить ген массы опухоли или антигены из-за потери микросреды выживания в системный кровоток; это может привести к некоторой степени смещения обнаружения. Время выборки является еще одним важным фактором, который мешает в prognositic значение ЦОК позитивности и приводит к неоднородности. Ikeguchi M и др. [21] изучали связь между послеоперационные ЦОК позитивности и прогнозом, они обнаружили, что, если образцы крови были собраны в послеоперационном периоде в течение 48 часов, CTCs положительные пациенты имели лучший прогноз, чем ЦОК отрицательные. Таким образом, дальнейшие исследования ЦОК должны принять время выборки во внимание, оценить и подтвердить лучшее время выборки. Еще одним источником для наблюдаемой неоднородности может быть сам ЦОК бассейн, он состоял из гетерогенной популяции раковых клеток, в пределах этой популяции только специфическая фракция имела прогностический эффект [38]. Кроме того, характеристика ЦОК с раком молочной железы, рак желудка, или колоректального рака показали, что лишь небольшая часть этих клеток экспрессируют пролиферации ассоциированных маркеров, рецепторов фактора роста, иммунные антигены отклика, молекулы адгезии и протеаз или протеаз-ассоциированных белков [39] .Кроме того, распространение опухолевых клеток является ранним событием в отдаленными метастазами, и случайные аберрации для гена метастаз специфические могут быть приобретены после того, как ЦОК истекающих в кровоток [40]. Эта модель может объяснить геномную и функциональная гетерогенность ЦОК.
<Р> Есть некоторые ограничения этого мета-анализа. Во-первых, ограничения, вызванные неоднородностью упомянутой ранее и невозможности доступа к первичной информации о включенных исследований. Мы рассмотрели вопрос о гетерогенности путем строгого методологического подхода, который использовал модель случайных эффектов для более консервативных оценок. Прогностические факторы рака желудка являются сложными, наши данные для мета-анализа был из включенных исследований и первичные данные было трудно получить, нам не удалось исключить все возможные искажающие факторы; подходы, основанные на ОТ-ПЦР обладают высокой чувствительностью для обнаружения ЦОК, но они не могут определить число ЦОК и отсутствие специфичности биологической [38]. Во-вторых, выбор языка приносит другой уклон, мы ограничили наш анализ опубликованных исследований, написанных на английском языке, другой язык, такие как японский, немецкий, были исключены на основе критериев языка. Это может привести к смещению языка, ведущей к завышению величины эффекта [41]. В-третьих, мы замечаем, что определенная степень смещения издания существует, особенно в объединенном анализе для операционной системы, одной из причин может быть то, что исследования сообщили положительные результаты намного легче быть опубликованы и доступны; Кроме того, исследования, внесенные в объединенном анализе имеют относительно небольшой размер выборки. Несмотря на то, что мы были не в состоянии провести анализ с учетом некоторых потенциально значимых факторов, CTC положительность, представляющий показатель плохого прогноза у больных ГХ постоянно присутствует в объединенном анализе; Тем не менее, наши результаты следует интерпретировать с осторожностью, и это требует более подробные и точные данные для проверки.
<р> В заключение, наше исследование на основе имеющихся данных поддерживает понятие сильной прогностической ценности ЦОК в периферической крови и относится к плохим прогнозом ГХ. Выявление различных методологических недостатков и источников неоднородности имеющихся в настоящее время прогностических исследований фактора могут способствовать улучшению дизайна и отчетности будущих прогностические и прогностических исследований фактора. Наши результаты также предлагают подсказку, что дополнительные исследования должны использовать стандартизированный метод тестирования, оптимизированное время выборки, полный анализ и отчет о результатах, или идентификацию определенной клеточной подгруппы, такие как циркулирующие стволовые клетки типа [42]; таким образом, мы можем извлечь более четкое и точное прогностическое значение ЦОК у больных ГЦ.

Поддержка информации Рисунок S1 изображения.
лесной участок для обобщенном анализе SEN и SPE. SEN, чувствительность; . SPE, специфика
DOI: 10.1371 /journal.pone.0099259.s001
(TIF) Рисунок S2
.
лесной участок для обобщенном анализе ГНР и РНБ. PLR, положительное отношение правдоподобия; . NLR, отрицательное отношение правдоподобия
DOI: 10.1371 /journal.pone.0099259.s002
(TIF) Рисунок S3
.
лесной участок для обобщенном анализе ДОР. . ДОР, соотношение диагностические коэффициенты
DOI: 10.1371 /journal.pone.0099259.s003
(TIF) Рисунок S4
.
Резюме ROC кривая с уверенностью и прогнозирования областей чувствительности и специфичности
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0099259.s004
(TIF) Рисунок S5
.
Воронка сюжет для кратких оценок RFS. . RFS, безрецидивная выживаемость
DOI: 10.1371 /journal.pone.0099259.s005
(TIF) Рис
S6.
Воронка сюжет для кратких оценок ОС. . ОС, общая выживаемость
DOI: 10.1371 /journal.pone.0099259.s006
(TIF)
CheckList S1.
ПРИЗМА Контрольный список
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0099259.s007
(DOC)

• PLoS ONE: интерлейкин 17А Содействует рака желудка инвазивности через NF-kB опосредованной матриксных металлопроте…
• PLoS ONE: гистондеацетилазу HDAC4 Содействует Рак желудка SGC-7901 Клетки прогрессию с помощью p21 Репрессии