PLoS ONE: Synergistic Rolle zwischen p53 und JWA: prognostische und prädiktive Biomarker in Magenkrebs

Abstrakt

Die Expression von p53 scheint bei Patienten mit malignen Erkrankungen zu Prognose korreliert zu sein, aber seine Rolle in Magenkarzinom ist umstritten geblieben. Kürzlich berichteten wir, dass JWA, ein ADP-Ribosylierung ähnlichen Faktor 6 interacting protein 5 (ARL6ip5), prognostische war sowohl für das Gesamtüberleben und prädiktiv für Platin-basierte Behandlung von Magenkrebs. In dieser Studie wollten wir p53-Expression als prognostische und prädiktive Marker bei resectable Magenkrebs, allein und in Kombination mit JWA zu untersuchen. Die Expression von p53 wurde in drei großen Patientengruppen (insgesamt n = 1155) von Magenkrebs untersucht. Hohe Expression von p53 war signifikant mit ungünstigen klinisch-pathologische Parameter korreliert und die allgemeine Überleben der Patienten verringert. Darüber hinaus Patienten mit hoher p53-Expression in Tumoren bemerkenswerte Überlebensvorteil von einer adjuvanten First-Line-Platin-basierten Chemotherapie erworben. Die Synergie zwischen p53 und JWA in der Behandlungserfolg vorhersagen konnte gezeigt werden, während keine signifikant erhöhte prädiktiven Wert bezüglich Chemotherapie beobachtet wurde. Somit ist p53-Expression ein potenter prognostische und prädiktive Faktor für resektablen Magenkrebs mit adjuvanter Chemotherapie auf Platinbasis. . Liu X, Wang S, Xia X, Chen Y, Zhou Y, Wu X et al: Eine kombinierte Wirkung von p53 mit JWA als effiziente Prognoseindikatoren wurde zum ersten Mal

Citation gefunden. (2012) Synergistic Rolle zwischen p53 und JWA: prognostische und prädiktive Biomarker in Magenkrebs. PLoS ONE 7 (12): e52348. doi: 10.1371 /journal.pone.0052348

Editor: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Vereinigte Staaten von Amerika

Empfangen: 3. August 2012; Akzeptiert: 12. November 2012 um; Veröffentlicht: 21. Dezember 2012

Copyright: © 2012 Liu et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Diese Studie von der Priorität Academic Program Development (PAPD) von Jiangsu Hochschulen (http://jsycw.ec.js.edu.cn) wurde finanziert zum Teil durch das Projekt unterstützt haben; die National Natural Science Foundation of China (30930080 und 81110027) (http://www.nsfc.gov.cn); die Stiftung Cancer Center von Nanjing Medical University (08ZLKF08) (http://202.195.178.127/zlsys). Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Magenkrebs wirkt sich auf etwa eine Million Menschen pro Jahr die zweithäufigste Ursache der durch Krebs verursachten Todesfälle weltweit mit einem Gesamt fünf-Jahres-Überlebensrate von weniger als 30% sein [1]. Das schlechte Ergebnis blieb im Wesentlichen unverändert in den letzten Jahrzehnten trotz Verbesserungen in der chirurgischen, Chemo- und Strahlentherapie [2]. Auffällige Unterschiede in der Prognose bei Patienten nach einer Standard-Operation existieren, was auf spezifische Biomarker dringend benötigt werden [3]. Außerdem Auswahl der Patienten, die von einer Chemotherapie profitieren ist ein wichtiges Thema, wie ein großer Teil unnessesarily behandelt wird und nur schweren Nebenwirkungen kommen [4]. Somit sind effiziente molekulare Marker dringend Über- oder Unterversorgung zu vermeiden, benötigt.

Das p53-Protein (durch das menschliche Gen kodiert TP53
) möglicherweise ist die beste aller Tumorsuppressoren bekannt ist, und gekennzeichnet durch die Fähigkeit, Zellzyklusarrest, DNA-Reparatur, Seneszenz und Apoptose [5] zu induzieren. Mutation oder funktionale Inaktivierung von p53 ist ein nahezu universelles Merkmal von Krebs beim Menschen, eine entscheidende Rolle in der Tumorentstehung, da mutant p53 spielen kann erwerben neue onkogenen Eigenschaften [6] - [9]. Außerdem, im Gegensatz zu Wildtyp-p53-Protein, das schnell abgebaut wird, mutierte Formen haben eine verlängerte Halbwertszeit, die intranukleäre Lagerung begünstigen, erkennbar wird immunhistochemisch [10] - [12]. Die Akkumulation von p53-Protein in dem Fall von Magenkrebs wurde Prognose und Vorhersage der Behandlung verknüpft [13], [14]. Allerdings bleiben die damit verbundenen Rolle und der Mechanismus bisher umstritten [15], [16].

Unsere jüngsten Erkenntnisse impliziert, dass JWA, die auch als ARL6ip5 bekannt, ähnlich wie mit p53 in einigen Aspekten wesentlich ist für das Überleben der Zelle und effizient DNA-Reparatur nach oxidative DNA-Schädigung, sowie chemisch induzierte Krebszelle Apoptose [17], [18]. Außerdem JWA und XRCC1, eine andere DNA-Reparaturprotein, können Kandidaten prognostische und prädiktive Biomarker für Patienten mit Magenkrebs [19] sein. Zusätzlich SNPs der JWA
Gen sind mit einer erhöhten Neigung zu Magenkarzinom in einer chinesischen Bevölkerung verbunden sind [20]. Damit sind wir wesentlich interessiert, wenn JWA als cooperator mit p53 arbeiten würde prädiktive Potenz bei Magenkrebs zu verbessern.

Hier wollten wir die Translations Bedeutung zu erläutern und die Expressionsmuster von p53 in drei großen unabhängigen Kohorten identifizieren von Magenkrebs-Patienten und die mögliche prognostische und prädiktive Bedeutung dieser Marker zu untersuchen. Mehr intriguingly, wäre eine Hypothese auf, ob p53 und JWA validiert werden konnten in Überleben Auswertung mit größerer Genauigkeit als neuartige Prädiktor kombiniert werden.

Materialien und Methoden

Patienten und Proben

Drei unabhängige Retrospektive wurden Patientengruppen untersucht. Die Ausbildung Kohorte und Test Kohorte wurden in Nantong Cancer Hospital, Nantong City, im östlichen Teil der Provinz Jiangsu und die Validierung Kohorte wurde in Yixing Volkskrankenhaus, Yixing City, im südlichen Teil der Provinz Jiangsu, China rekrutiert gesammelt. Die Gewebe wurden aus den jeweiligen Pathologie Divisionen erhalten. Einschlusskriterien waren Magenkarzinom mit radikalen gastrectomy behandelt mit oder ohne adjuvante Chemotherapie. Ausschlusskriterien waren Patienten mit früheren Magenkrebs oder aktiven nicht-Magenkrebs. Auch diejenigen, die präoperative Chemo- oder Strahlentherapie erhalten, wurden ausgeschlossen. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde von jedem Patienten vor der Gewebe Erwerb erhalten und vor der Operation durchgeführt. Institutionelle Genehmigung wurde von der Ethik Board of Nanjing Medical University vor dieser Studie erfasst.

Patienten, die mit der Operation allein

Die Ausbildung Kohorte 103 Patienten eingeschlossen, die nur radikale Gastrektomie in Nantong Cancer Hospital unterzog von 1 ^{st Mai 1990 1 st Juni 1995 jedoch 20 Proben wegen fehlender Daten und eine Probe weggelassen wurden, die während Antigen-Retrieval oder ohne Tumorzellen im Kern verloren war, so 82 gepaart Patientengewebe waren schließlich für p53-Expression ausgewertet.}

die Test Kohorte aller 640 von 1 chirurgische Fälle aus dem Nantong Cancer Hospital bestand ^{st Dezember 2000 auf 1 st April 2005 sowie die Validierung Kohorte umfasste alle 1.022 chirurgischen nur oder mit postoperativen adjuvanten Chemotherapie Fälle in Hospital Yixing Personen von 1 st Januar 1999 bis 31. st Dezember 2006 wurden diese Patienten mit einer Operation behandelt (Einzelheiten siehe Abb. S1). Die Verteilung der demographischen Merkmale und die ausgewählten klinisch-pathologische Variablen der Patienten zwischen den beiden Bezirken (Nantong und Yixing) wurden vorher [19] beschrieben. Aufgrund Überlebensdaten fehlen, nur 578 und 998 dieser Patienten wurden eingeschlossen. Außerdem ist es aufgrund verlorene Kerne oder unzureichende Tumorzellen im Gewebe, 485 und 588 Tumorkerne für p53-Expression in der Prüfung und Validierung Kohorte analysiert wurden, respectively.}

Patienten, die mit Chemotherapie adjuvante

in der Ausbildung Kohorten keiner der Patienten erhielten jede Form der adjuvanten Therapie. Von den 485 Patienten für die Analyse in der Test Kohorten verwendet, 111 Patienten (22,9%) wurden mit einer adjuvanten Chemotherapie nach kurativer Resektion behandelt. Die Therapien enthalten kombinierte Chemotherapie mit Fluorouracil, Leucovorin und Oxaliplatin (FLO) (6 Fälle); Monotherapie mit Mitomycin C (46 Fälle); Fluorouracil-Derivate (47 Fälle); und andere Behandlungen (12 Fälle). Von den 588 Patienten in der Validierungskohorte umfasste das Regime für 223 Patienten (37,9%) mit der postoperativen Chemotherapie kombinierte Chemotherapie mit FLO (87 Fälle); kombinierten Chemotherapie mit Fluoruracil, Leucovorin und Platinol (FLP) (79 Fälle); kombinierte Chemotherapie mit Fluorouracil und Paclitaxel (FP) (11 Fälle); kombinierte Chemotherapie mit Etoposid, Leucovorin, Fluorouracil und Platinol (ELFP) (28 Fälle); und andere Behandlungen (18cases). In Bezug auf die resectable Magenkrebs-Patienten mit einer Chemotherapie, die Verteilungen der demographischen Merkmale und die ausgewählten klinisch-pathologische Variablen der Patienten zwischen FLO-Gruppe und FLP-Gruppe ähnlich waren (alle P
> 0,05), mit Ausnahme histologischen Typ ( P
= .001, Tabelle S1). Darüber hinaus 7 pathologisch Magenkrebs und jeweils nicht krebs frisch gefrorene Magenschleimhaut Gewebe aus den jüngsten Patienten in Nantong Cancer Hospital bestätigt für Western-Blot-Analyse erhalten wurden.

Das Gesamtüberleben (OS) war der primäre Endpunkt diese Analyse. Die Überlebenszeit wurde ab dem Zeitpunkt der Operation zu dem Zeitpunkt des Todes oder bis zum letzten Follow-up ermittelt. Todesdatum für jeden Fall wurde von Patientenakten oder die Familien der Patienten durch Follow-up-Anrufe und weitere Doppel verifizierten durch lokale Abteilung für zivile Angelegenheiten und Abteilung für öffentliche Sicherheit erhalten. Detaillierte clinicopathologic Informationen erhalten. Lauren Kriterien verwendet wurden, um die Tumoren in Darm-Typ oder diffuse Art zu klassifizieren [21] und in Szene gesetzt nach dem Tumor, Knoten, Metastase (TNM) Richtlinien [22].

Bau von Tissue Microarray (TMA) und Immunhistochemie

Paraffin eingebettete archivierten Gewebematerial von Tumor und umgebenden normalen Magengewebe wurde für TMA Bau verwendet. TMAs wurden hergestellt, wie zuvor veröffentlicht [19]. Kurz gesagt, doppelte Durchmesser von 1,0 mm Kerne von Gewebe aus jeder Probe aus Paraffin Tumorblock gestanzt wurden und entsprechende nicht-tumorale Gewebe in der Ausbildung Kohorte oder von Kernen der primären Tumorbiopsien bei der Prüfung und Validierung Kohorten. Als Gewebekontrolle wurden die Biopsien von normalen Magenepithels Gewebe in den vier Ecken eingefügt und der Mitte jeder Folie.

Ein Standardprotokoll für die Immunfärbung des TMAs verwendet wurde. Das detaillierte Verfahren wurde früher beschrieben [19]. IHC wurde mit DO7 monoklonalen Antikörper durchgeführt (1:80; Dako, Carpinteria, CA), die den Wildtyp und mutierte Formen des p53-Protein erkennt, zusammen mit Elivision ™ Super HRP Kits (Maixin-Bio, Fujian, China) , variierend Erkennung und Antigen-Retrieval-Methoden anwenden. Das Weglassen des primären Antikörpers diente als negative Kontrolle. Die Färbung Scores der Gewebekontrollen in jedem Microarray-Objektträger wurden als Qualitätskontrolle der Immunfärbung vorge ausgewertet.

Evaluierung von Immunhistochemie

Zunächst Färbung von p53 im Gewebe wurden unabhängig voneinander erzielt von zwei auf die klinischen Daten verblendet Pathologen durch eine semi-quantitative Punktzahl Immunreaktivität (IRS) in der Ausbildung Kohorten Anwendung. Die Bewertungskriterien für IRS wurden an anderer Stelle [23] berichtet. Die Intensität der Immunfärbung wurde die in Fig. S2. Die Konkordanz für IRS-Färbung Score von p53 zwischen den beiden Pathologen betrug 74 (90%) in 82 Tumoren des Trainingssatzes; und die wenigen Abweichungen wurden im Konsens mit einem Mehrkopf Mikroskop aufgelöst. Die Variabilität in p53-Färbung betrug 4 (5%) in den doppelten Kernen von 82 Tumoren. Diese Fälle wurden von ganzen Schlitten IHC gefärbt und hat weiter.

Die optimale Cutoff-Wert von IRS durch den Empfänger-Operator Charakteristik erhalten wird (ROC) -Analyse und die Fläche unter der Kurve (AUC) bei unterschiedlichen Cutoff-Werte von p53 IRS für 1, 3 und 5 Jahre der Gesamtüberlebenszeit wurde berechnet. Der optimale Wert von Cutoff-Punkte von p53 IRS in Nantong Bezirk Kohorte (kombinierte Ausbildung Kohorte und Test Kohorte) war 4 aufgrund der Vorhersagewert dieses Cutoff-Punkt für den Tod war das beste (Abb. S3). Unter diesen Bedingungen Proben mit IRS 0-4 und IRS 5-12 wurde als niedrig und hohe Expression von p53 in Tumoren klassifiziert sind. Nach Gründung wurde die immunhistochemischen Bewertungskriterien in der Nantong Bezirk Kohorte, die Expression von p53 in der Yixing Bezirk Kohorte (Validierung Kohorte) mit den gleichen Pathologen erzielte mit dem exakt gleichen Verfahren.

Western Blotting

Western-Blotting wurde wie früher beschrieben durchgeführt [19]. Monoklonalen Maus-Anti-p53-Antikörper (1:1000; Dako, Carpinteria, CA), und monoklonale Maus-anti-β-Actin-Antikörper (1:2000; Beyotime Biotechnology, Nantong, China) wurden für den primären Antikörper verwendet. Immunreaktive Banden wurden mit einem Phototope-HRP Westernblot-Nachweis-Kit (Cell Signaling Technology Inc, Beverly, MA, USA) detektiert. Für densitometrische Analyse, p53 Proteinbanden auf den Blots wurden von Bild J-Software (Version 1.44, Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA) gemessen, nach der Normalisierung an den entsprechenden β-Actin-Ebene.

Statistische Analyse

Die Assoziation zwischen p53-Expression und klinisch-pathologische Parameter wurde von Fisher-Test bewertet. Die differentielle Expression von p53 in Primärtumoren und ihre entsprechenden nicht Tumoren wurden durch den Wilcoxon-Test (gruppiert) und Spearman Rangordnungskorrelations (Rohwerte) bewertet. Die Korrelation zwischen der Expression von p53 und JWA wurde von Spearman Rangordnungskorrelations (Rohwerte) und Fisher-Test (gruppiert) etabliert. Wahrscheinlichkeit der Unterschiede in OS als Funktion der Zeit wurde durch Verwendung des Verfahrens Kaplan-Meier ermittelt wird, mit einem Log-Rank-Test auf Signifikanz. Univariate oder multivariaten Cox-Regressionsanalyse wurde durchgeführt, um die rohe Hazard Ratio (HRS), das bereinigte HRs und ihre 95% Konfidenzintervall (CI) zu schätzen, mit Anpassung für potenzielle Störfaktoren. Dann analysierten wir den prädiktiven Wert der Parameter unter Verwendung von zeitabhängigen ROC Kurvenanalyse für zensierte Daten und berechneten AUC der ROC-Kurven. Wir bewerteten die Leistungen der verschiedenen Noten durch Auftragen (t, AUC [t]) für verschiedene Werte von Follow-up-Zeit (t). Alle statistischen Analysen wurden von Statistical Analysis System-Software durchgeführt (Version 9.1.3, SAS Institute, Cary, NC), STATA Statistik-Software (Version 10.1; StataCorp, College Station, TX) und R-Software (Version 2.10.1; Die R-Stiftung für Statistical Computing). Ein p-Wert von < .05 wurde als statistisch signifikant erachtet

Ergebnisse

• PLoS ONE: Die adjuvante Chemotherapie bei älteren Patienten mit Magenkrebs nach D2 Gastrektomie
• PLoS ONE: Klinische und prognostische Association of Transcription Factor SOX4 in Gastric Cancer