Plos ONE: Sinergijski Vloga med p53 in JWA: prognostičnih in Predvidevanje biomarkerjev želodčnega raka

Povzetek

Izražanje p53, ki se v korelaciji z prognozo pri bolnikih z maligno boleznijo, vendar je njegova vloga pri karcinomu želodca je ostala sporna. Pred kratkim smo poročali, da je bil JWA, ADP-RIBOZILACIJA HISTONOV podoben faktor 6 interakcije protein 5 (ARL6ip5), tako prognostični za skupno preživetje in predvidevanjem v osnovi platine zdravljenju raka želodca. V tej študiji smo želeli raziskati p53 izraz kot prognostični in napovedni marker v odstranljivega raka želodca, posamično in v kombinaciji z JWA. Izražanje p53 bila preučena v treh velikih skupin bolnikov (skupno n = 1155), raka želodca. Visoka izražanje p53 je pomembno povezana z neugodnimi clinicopathologic parametrov in zmanjšalo skupno preživetje bolnikov. Poleg tega bolniki z visokim p53 izražanja v tumorjih pridobil izjemno ugodnost za preživetje iz adjuvantno prvi liniji osnovi platine-kemoterapijo. Sinergija med p53 in JWA pri napovedovanju izida bolnikov je bilo dokazano, medtem ko ni bilo opaziti znatno povišano napovedno vrednost v zvezi s kemoterapijo. Tako, p53 izraz je močan napovedni in napovedni dejavnik za odstranljivega raka želodca s kemoterapijo na osnovi platine adjuvans. Kombinirana učinek p53 z JWA kot učinkovite prognostičnimi kazalci je bilo prvič

Navedba. Liu X, Wang S, Xia X, Y Chen Zhou Y, Wu X, et al. (2012), sinergijski vlogo med p53 in JWA: prognostičnih in Predvidevanje biomarkerjev želodčnega raka. PLoS ONE 7 (12): e52348. doi: 10,1371 /journal.pone.0052348

Urednik: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Združene države Amerike

Prejeto: 3. avgust 2012; Sprejeto: 12. november 2012; Objavljeno: 21. december 2012

Copyright: © 2012 Liu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta študija bila podprta v delu, ki ga je projekt, ki ga Priority Academic razvoj programa (PAPD) Jiangsu visokošolskih institucij (http://jsycw.ec.js.edu.cn) financira; National Natural Science Foundation of China (30930080 in 81110027) (http://www.nsfc.gov.cn); Fundacijo Cancer Center Nanjing Medical University (08ZLKF08) (http://202.195.178.127/zlsys). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca prizadene približno milijon ljudi na leto, pri čemer je drugi najpogostejši vzrok smrti, povezanih z rakom po celem svetu s skupno petletni stopnji preživetja manj kot 30% [1]. Revni rezultat je kljub izboljšavam v kirurgiji, kemo- in radioterapijo [2] je ostal v zadnjih desetletjih bistveno spremenila. Velike razlike v prognozo pri bolnikih po standardni operaciji obstaja, kar kaže, so nujno potrebne posebne biomarkerjev [3]. Poleg tega je izbira bolnikov, ki bodo imeli koristi od kemoterapije je velik problem, saj je velik del unnessesarily obravnavati le dobil hude stranske učinke [4]. Tako so učinkoviti molekularni markerji nujno potrebna, da se prepreči prekomerno ali undertreatment.

protein p53 (kodiran z humanega gena TP53
) je verjetno najbolj znan vseh tumorskih razbijal in značilno s sposobnostjo za induciranje aretaciji celičnega cikla, popravljanje DNA, staranje in apoptozo [5]. Mutacija ali funkcionalna inaktivacija p53 je skoraj univerzalna značilnost rakom pri ljudeh, ki igrajo ključno vlogo pri tumorigeneze saj mutant p53 lahko pridobijo nove onkogeni lastnosti [6] - [9]. Poleg tega, za razliko od divjega tipa p53 beljakovine, ki se hitro razgradijo, mutirane oblike imajo podaljšano razpolovno dobo, ki je dajala intranuclear skladiščenja, postane zaznati imunohistokemicno [10] - [12]. Akumulacija p53 proteina v primeru raka želodca je povezan s prognozo in napovedovanje zdravljenja [13], [14]. Vendar pa je z njo povezana vloga in mehanizem doslej še vedno sporna [15], [16].

Naše nedavne ugotovitve vpleteni, da je JWA, znan tudi kot ARL6ip5, podobno kot z p53 v nekaterih vidikih bistvenega pomena za preživetje in učinkovito celic DNK popravilo po oksidativne poškodbe DNA, kakor tudi kemično inducirano apoptozo rakavih celic [17], [18]. Poleg tega JWA in obstaja iz XRCC1, drugo DNA popravilo protein, lahko kandidat napovedni in napovedovanje biomarkerjev za bolnike z rakom želodca [19]. Poleg tega, SNP od JWA
gen so povezana s povečano nagnjenost k rakom želodca v kitajskega prebivalstva [20]. Tako smo zelo zanima, če bi JWA deluje kot sodelujoča s p53 se izboljša napovedno moč pri raku želodca.

Za tem smo želeli osvetliti translacijsko pomen in opredeliti izražanja vzorce p53 v treh velikih neodvisnih kohorte bolnikov z rakom želodca in preučiti morebitno napovedni in predvidevanje vlogo tega markerja. Več intriguingly, bi hipoteza potrjena, ali bi bilo mogoče p53 in JWA kombinaciji kot nove napovedovalec z večjo natančnost pri ocenjevanju preživetja.

Materiali in metode

Bolniki in vzorci

Tri neodvisne retrospektivne kohorte pacientov so preučevali. usposabljanje kohorte in testiranje kohorta so bile zbrane v bolnišnici Nantong raka, Nantong City, v vzhodnem delu province Jiangsu in kohorta potrditev je bil zaposlen v Yixing Ljudska bolnišnica, Yixing City, v južnem delu province Jiangsu, Kitajska. Tkiva so bili pridobljeni iz ustreznih oddelkov patologije. Merila za vključitev so bila želodčni rak, zdravljenih z radikalno želodca z ali brez adjuvantne kemoterapije. Merila za izključitev so bili bolniki s predhodnim rakom želodca ali aktivne raka niso želodca. Prav tako so bili tisti, ki so prejeli pred kirurško kemo- ali obsevanju izključena. Pisna privolitev je bila pridobljena iz vsakega bolnika pred pridobitvijo tkiva in pred operacijo ni bila opravljena. Institucionalno je bila odobritev pridobljena iz etične presoje odbora Nanjing Medical University pred to študijo.

bolnikov, zdravljenih s kirurgijo Sam

kohorta usposabljanje vključenih 103 bolnikov, ki so le radikalne želodca v Nantong Cancer Hospital 1. ^{majem 1990-1 st junij 1995. Vendar pa je bilo 20 vzorcev izpuščena zaradi manjkajočih podatkov in en vzorec je bil izgubljen v pridobivanje antigena ali brez tumorskih celic, prisotnih v jedru, tako da 82 paru tkiva bolnikov je bilo končno ocenjevali p53 izražanja.}

testiranje kohorta sestavljena iz vseh 640 kirurških primerih iz Cancer Hospital Nantong od 1 ^{st decembra 2000 1 st aprila 2005 in kohorta potrditev vključene vse 1022 kirurški primerov v Yixing Ljudske bolnišnica od 1 st januarja 1999 do 31 st decembra 2006. Ti bolniki so bili zdravljeni samo ali s pooperativno adjuvantno kemoterapijo operaciji (za podrobnosti glej sliko. S1). Razporejenost demografske značilnosti in izbranih clinicopathologic spremenljivke bolnikov med obema okrajih (Nantong in Yixing) so bile prej [19] opisano. Zaradi manjkajočih podatkov za preživetje, so bili vključeni le 578 in 998 teh bolnikov. Poleg tega je zaradi izgube jedra ali nezadostnih tumorskih celic v tkivu, so analizirali 485 in 588 tumor jedra za p53 izražanja v testiranja in potrjevanja kohorti, v tem zaporedju.}

bolnikih, zdravljenih z adjuvantno kemoterapijo

v kohorti usposabljanje, nihče od bolnikov je prejelo vsako obliko adjuvantno terapijo z. Od 485 bolnikov, ki se uporabljajo za analizo v testiranje kohorti so zdravili 111 bolnikov (22,9%) z adjuvantno kemoterapijo po kurativno resekcijo. Sheme vključeni kombinirano kemoterapijo s fluorouracilom, levkovorina in oksaliplatinom (FLO) (6 primerov); monoterapiji z mitomicina C (46 primerov); fluorouracila derivati ​​(47 primerov); in druge oblike zdravljenja (12 primerov). Od 588 bolnikov v kohorti validacije, režim za 223 bolnikov (37,9%), s pooperativno kemoterapijo vključiti kombinirano kemoterapijo z FLO (87 primerov); kombinirana kemoterapija s fluorouracilom, levkovorina in platinol (FLP) (79 primerov); kombinirana kemoterapija s fluorouracilom in paklitakselom (OP) (11 primerov); v kombinaciji s kemoterapijo s etopozidom, levkovorina, fluorouracila in platinol (ELFP) (28 primerov); in drugi tretmaji (18cases). Glede resektabilne bolnikov želodca raka s kemoterapijo, so bili razdeljeni demografskih značilnosti in izbranih clinicopathologic spremenljivke bolnikov med skupino FLO in skupine FLP podobno (vse P
> 0,05), razen histološki tip ( P
= 0,001, tabela S1). Poleg tega, 7 patološko potrdili raka na želodcu in posamezne ne-rakave sveže zamrznjene želodčne sluznice tkiva iz zadnjih bolnikov v Nantong raka bolnišnici so bili pridobljeni za Western blot analizo.

celotno preživetje (OS) je bila primarna končna točka ta analiza. Preživetja pa je bila ugotovljena na dan operacije do dneva smrti ali do zadnjega spremljanja. Datum smrti za vsak primer so bili pridobljeni iz evidenc bolnikov in družin bolnikov z nadaljnjimi telefonskih klicev in dodatno dvojno preveri lokalne službe civilne zadeve in javne varnosti oddelek. Podrobni clinicopathologic podatki so bili pridobljeni. Merila Lauren so bile uporabljene za razvrstitev tumorje v Moodle črevesno tipa ali razpršenega tipa [21] in uprizorjena v skladu s tumorjem, vozlišča, metastaze (TNM) smernice [22].

Gradnja tkiva mikromrež (TMA) in Imunohistokemija

Parafinski-vgrajeni arhivirane tkiva material tumorja in okoliških normalno želodca tkivo je bila uporabljena za TMA gradnjo. TMAs smo pripravili kot smo že prej objavljene [19]. Na kratko, dvojnik 1,0 mm premer jedra tkiva iz vsakega vzorca so bile narejene iz parafinskega tumorja bloka in ustreznimi ne-tumorskih tkivih v kohorti za usposabljanje ali iz jedra primarnih tumorjev biopsije preskušanja in potrjevanja generacij. Kot kontrolo tkiva, so biopsije normalnih želodčnih epitelija tkiva v štirih kotov in središče vsake stekelce vstavljen.

Standardni protokol smo uporabili za imunskim barvanjem v TMAs. Natančen postopek je bil opisan že prej [19]. IHC je bila izvedena s pomočjo Do7 monoklonsko protitelo (1:80; Dako, Carpinteria, CA), ki zaznava divjim tipom in mutirane oblike p53-proteina, skupaj z Elivision ™ super HRP Kits (Maixin-Bio, Fujian, Kitajska) , ki se uporablja različne metode za odkrivanje in priklic antigen. Opustitev primarnega protitelesa služil kot negativno kontrolo. Rezultat barvanje s komandami tkiva v vsakem mikromrež slide bile predhodno ocenili kot nadzor kakovosti imunskim barvanjem.

Vrednotenje imunohistokemija

Na prvi, obarvanje p53 v tkivu je bilo doseženih neodvisno z dvema patologi slepo v kliničnih podatkov, z uporabo semi-kvantitativno radioinkorporacijo rezultat (IRS) v kohorti usposabljanja. Merila točkovanja za IRS so poročali drugje [23]. Intenziteta imunskim barvanjem je prikazano na sliki. S2. Mora biti skladnost za IRS barvanja rezultatom p53 med patologi bilo 74 (90%) v 82 tumorjev niza usposabljanja; in nekaj neskladja so odpravljena soglasno uporabo multihead mikroskopom. Variabilnost v p53 obarvanje bilo 4 (5%), v dvojnih jeder 82 tumorjev. Ti primeri so se obarvali s celotnega slide IHC in nadalje zadetka.

Optimalno mejna vrednost IRS dobimo z značilnim analizo sprejemnik operaterja (ROC) in površina pod krivuljo (AUC) pri različnih vrednostih ločilne od p53 IRS za 1, 3 in 5 let skupnega časa preživetja je bila izračunana. Optimalna vrednost cutoff točk p53 IRS v Nantong okrožju kohorti (kombiniran kohorte usposabljanje in testiranje kohorte) je 4 zaradi napovedno vrednost tega mejno točko za smrt je bila najboljša (sl. S3). Pod temi pogoji so vzorci z IRS 0-4 in IRS 5-12 razvrščena kot nizko in visoko izražanje p53 v tumorjev oz. Po določitvi meril imunohistokemijske ocenjevanja v delu kohorti Nantong, je izraz p53 v Yixing okrožju kohorte (validacija kohorte) dosegel z enakimi patologi z natanko istim postopkom.

Western blot

Western blot smo izvedli kot je opisano predhodno [19]. Monoklonsko miš anti-p53 protitelo (1:1000, Dako, Carpinteria, CA), in monoklonsko miško anti-β-aktina protitelesa (1:2000; Beyotime Biotechnology, Nantong, Kitajska), so bili uporabljeni za primarno protitelo. Imunološko pasovi so bile ugotovljene z Phototope-HRP zahodni komplet za odkrivanje madež (Cell Signaling Technology Inc, Beverly, MA, ZDA). Za densitometrične analize so p53 beljakovin pasovi o blot analiz merjeno z Image J programske opreme (različica 1.44, Wayne Rasband, National Institutes of Health, ZDA), po normalizaciji na ustrezno raven beta-aktina.

Statistična analiza

povezava med p53 izražanja in clinicopathologic parametrov, je ocenil Fisherjev test. Razlika v izražanje p53 v primarnih tumorjev in njihovih ustreznih tujih tumorjev so bile ocenjene s testom Wilcoxon (združena) in Spearman rang reda korelacije (surovine ocen). Korelacija med izražanjem p53 in JWA je bil ustanovljen z Spearmanu rang reda korelacije (surovine ocen) in Fisherjev test (združena). Verjetnost razlik v OS, kot v odvisnosti od časa je ugotovljena z uporabo metode Kaplan-Meier, s testom log-rank za pomen. Univariatne in multivariatne Cox regresijska analiza je bila opravljena za oceno razmerja surove nevarnosti (h), prilagojenih urah, in njihove 95% intervali zaupanja (CIS), s prilagoditvijo za potencialne confounders. Nato smo analizirali napovedne vrednosti parametrov z uporabo časovno odvisne ROC analizo krivulje za okrnjene podatke in izračunana AUC krivulj ROC. smo ovrednotili uspešnost različnih točk, ki jih nanašamo (t, AUC [t]) za različne vrednosti spremljanja času (t). Vse statistične analize smo izvedli s Statistična analiza sistema programske opreme (različica 9.1.3; SAS Institute, Cary, NC), statistične programske opreme stata (različica 10.1, StataCorp, College Station, TX) in R programske opreme (različica 2.10.1; R fundacija za statistični Computing). A p-vrednost < 0,05 zdela statistično značilno

Rezultati

Povečana p53 Izražanje želodčnega raka Versus sosednjih zdravih tkivih

Sedem parov človeških želodčnih vzorcev raka. , vključno s primarnimi želodčni rakavih tkiv in ujema normalno želodčne sluznice so bili izbrani za testiranje izražanja p53 proteinov z Western blot. Zvišane izražanje p53 prišlo v 6 od 7 želodčnih tumorjev v primerjavi s seznanjeno normalno želodčne sluznice (sl. 1A). Imunohistokemijsko tkiva mikromrež želodčne (TMA) je bila uporabljena za nadaljnjo potrditev p53 izražanje pri 82 bolnikih želodca raka v kohorti usposabljanja. Izkazalo se je, da je p53 obarvanja je pretežno lokalizirane v jedrih (sl. 1B). Porazdelitev razlik IRS za p53 izražanja v tumorjih in izravnanih niso tumorjev je prikazano na sliki. 1C. Poleg tega je p53 izraz v 65 znatno povečalo za 82 (79,2%), želodčnih raka v primerjavi z izravnanih normalnih želodčnega tkiva ( P
< 0,001, Wilcoxonov preizkus;. Slika 1C). V vseh treh neodvisnih skupin po bolnikov, zdravljenih s samo operacijo samo, je izraz p53 negativno korelaciji z JWA v rakavih tkivih ( P
< 0,001 vseh korelacij, tabela 1).

korelacija med p53 izražanja in Clinicopathological funkcije pri bolnikih, zdravljenih s kirurgijo Sam

v vseh treh generacij, smo pričal, da je p53 izraz v rakastih tkivih značilno povezana z bezgavkah metastaze (N-kategorija). Povečano izražanje p53 je bila tesno povezana z višjo stopnjo TNM v usposabljanje in testiranje kohorte, vendar brez pomena v kohorti potrjevanja. Poleg tega se je povečala izražanje p53 zlasti v povezavi z drugimi clinicopathological značilnosti, kot so globina invazije (T-kategorija), oddaljenih metastaz (M-kategorija), premer tumorja in histološki tip v ustreznih kohorti. Zanimivo je, da pri vseh bolnikih, zdravljenih z operacijo samo (n = 817), smo našli več bolnikov črevesnih tipa pokazala nizko, medtem ko več bolnikov difuzna-type je pokazala visoko p53 izraz ( P
< 0,001, podatki niso prikazane ). Izražanje p53 nima korelacije s starostjo in spolom (tabela 1).

Korelacija p53 izražanja in OS pri bolnikih, zdravljenih s kirurgijo Sam

V kohorti usposabljanja, 82 primarni tumor vzorci primerni za analiza je pokazala statistično pomembno negativno korelacijo med p53 izražanja in splošno 5-letno preživetje z uporabo Kaplan-Meier krivulje preživetja ( P
< 0,001). Te ugotovitve so bile potrjene v dveh neodvisnih in večjih skupin po bolnikih z rakom želodca z minimalnimi petih letih spremljanja (n = 374 in n = 365, v tem zaporedju) (sl. 2A-C). Druge pomembne negativne napovednika za preživetje po univariantne analizo v treh neodvisnih generacijah so bezgavko metastaze (N-kategorije, P
< 0,01 za vse, tabela S2) in klinična faza TNM ( P
≤.001 za vse, tabela S2).

multivariatna Cox regresijska analiza je pokazala, da je bila nizka p53 izraz neodvisna pozitivni napovedni dejavnik za raka želodca v vseh treh generacij ( P
< 0,001 za vse, Tabela 2). Da bi še dodatno oceniti napovedni vrednosti p53 izražanja, smo izvedli časovno odvisne ROC analizo za okrnjene podatke, ki so pokazali, da je kombinacija klinično oceno tveganja (fazi TNM, histološki tip in premer tumorja) in p53 prispevali veliko več, kot samo kliničnih parametrov tako usposabljanje in testiranje generacij (sl. 3). Na primer, v testiranje kohorte, AUC na 5. leta je bil 0,707 (95% CI = 0,653-0,761) za klinično oceno tveganja, medtem ko se je znatno povečala na 0.856 (95% CI = 0,818-0,894), v kombinaciji z p53 tveganjem ocena. Vendar pa ta učinek ni bil pomemben v kohorti potrjevanja zaradi relativno visokega AUC (približno 0,8) kliničnih kazalcev (Slika. S4).

Korelacija med p53 izražanja in OS pri bolnikih z adjuvantno kemoterapijo

V testiranja in potrjevanja kohorte, OS je bil analiziran med bolniki, ki so prejemali adjuvantno kemoterapijo v primerjavi s tistimi, ki tega niso storili. Podatki so pokazali, da ni razlike v OS med operacijo samo skupino in kateri koli režim pooperativne adjuvantne kemoterapije (podatki niso prikazani), razen v skupini prejme fluorouracil- levkovorinu-oksaliplatin (FLO) (n = 87, log-rang test, P
= 0,032, sl. 4). Multivariatno Cox regresijska analiza vključno s šestimi spremenljivkami (starost, spol, stopnjo TNM, histološke vrste, premer tumorja in kemoterapija) je bila izvedena za označevanje koristi kemoterapije na OS. Je bila statistično pomembna prednost za tiste, ki po operaciji prejel FLO kemoterapijo v samo skupino kirurgije (HR = 0,55, 95% CI = 0,37-0,82, podatki niso prikazani). Predvsem je ta učinek najdemo le pri bolnikih z visoko izražanja p53, kjer adjuvans FLO očitno povečalo OS, v primerjavi s samo operacijo (HR = 0,56, 95% CI = 0,35-0,89, tabela S3, Log-rank test, P
= 0,014, sl. 4).

prav tako smo analizirali pomen drugega kemoterapijo na osnovi platine, fluorouracil-levkovorina-platinol (FLP) režima (n = 79) v odstranljivega rakom želodca. Rezultati niso predstavlja pomembno razliko preživetja (test log-rank, P
= 0,134, sl. S5), medtem ko so bolniki z nizko izražanje p53, ki so prejemali FLP režim celo prikaže slabše preživetje v primerjavi s tistimi, ki prejemajo operacijo le ( P
= 0,003, sl. S5). Poleg tega so imeli bolniki, ki se zdravijo FLP z visoko p53 izražanja ni pomembno preživetje razliko v primerjavi s tistimi, s samo operacijo ( P
= 0,648, sl. S5). Dodatne multivariatna analiza pojasnili, da je bilo opaziti večje tveganje za smrtnost pri bolnikih z nizko izražanje p53, ki so prejemali FLP zdravljenja v primerjavi z operacijo samo (HR = 1,91, 95% CI = 1,08-3,36, tabela S4).

Sinergija p53 z JWA izražanja na OS pri bolnikih, zdravljenih s kirurgijo ali samo adjuvantno kemoterapijo

bolniki z operacijo samo so bili nadalje porazdeli v tri različne skupine na podlagi barvanjem za p53 in JWA: p53 visoke z JWA nizko, p53 nizka JWA visoko in tako visoko ali tako nizka. Pokazalo se je, da je visoka imeli bolniki s p53 nizko in JWA najboljši izid za preživetje v teh treh skupin ( P
< 0,001, test log-rank;. Slika 2D-F). Multivariatna Cox regresijska analiza je pokazala, da je skupni izraz nizke p53 in visoke JWA neodvisno pozitivni napovedni dejavnik za raka želodca v vseh treh generacij ( P
< 0,001 za vse, Tabela 2). Da bi še dodatno oceniti napovedni vrednosti p53 plus JWA izražanja, smo izvedli drugo časovno odvisnega ROC analizo, ki bi kazali, da je kombinacija kliničnega tveganja gol in p53 plus JWA prispevala več kot sodelovanje kliničnega rezultata tveganja s samo p53 v obeh usposabljanje in testiranje kohorte (sl. 3). Na primer, v kohorti usposabljanje, AUC na 5. leta je bil 0,568 (95% CI = 0,400-0,737) za klinično oceno tveganja plus rezultat p53 tveganja, medtem ko se je znatno povečala na 0,865 (95% CI = 0,786-0,944), ko je bila uporabljena kombinacija kliničnega rezultata tveganja s p53 plus rezultatom JWA tveganja. Vendar pa je bil ta učinek še ni jasno, v kohorti validacije iz razloga zgoraj (sl. S4) zgoraj.

Na podlagi prispevku ravni p53 izražanja na izid kemoterapijo, smo stratificiran takih bolnikov v sodelovanju z JWA kot sledi: FLO skupini, zdravljeni z visoko izražanja p53 je bila razdeljena na p53 visok z JWA nizko in p53 visok z JWA visoka; in FLP zdravljenje skupina z nizko izražanje p53 bila uvrščena tudi v p53 nizko z JWA nizko in p53 nizka JWA visoko. OS je prevrednotijo ​​med temi podskupinah. Vendar pa ni bilo razvidno preživetje razlike predstavljena v sinergijsko vzorcu z JWA (sl. S6).

Pogovor

Rak želodca je heterogena bolezen, pri kateri je rezultat spreminja tudi pri bolnikih s podobnimi klinične in patološke Lastnosti. Tudi s kirurškim posegom v zgodnjih fazah, lahko prognoza je žalostna in adjuvans kemoterapija deluje samo v podskupinah bolnikov. Nove molekularni markerji so potrebni, saj so tradicionalni počivališča sistemi za rakom želodca, ne zadostuje za napovedovanje izidov [24]. V tej študiji, smo zabeležili in dokazali, da je bil visok izražanje p53 močno povezana z neugodnim clinicopathologic parametri in zmanjšalo celotno preživetje bolnikov. Poleg tega bolniki z visokim p53 izražanja v tumorjih pridobil izjemno ugodnost za preživetje iz adjuvantno osnovi platine v prvi liniji kemoterapije (FLO ali FLP). Sinergija med p53 in JWA pri napovedovanju izida bolnikov je bilo dokazano, medtem ko ni bilo opaziti očitno povišana napovedno vrednost v zvezi s kemoterapijo.

V tej študiji ugotovila, smo očitno poveča izražanje proteina p53 v želodcu tkivih rakom v primerjavi z ujemanjem normalno sluznica, kar kaže na potencialno pomemben status p53 v želodcu rakotvornost. Poročajo, da p53
gen mutiral v skoraj 50% vseh človeških tumorjev, vključno z rakom želodca [25] in mutiranega proteina ostane v celicah za daljši čas, ki omogoča detekcijo s imunohistokemijo [26], [27 ]. Zato je splošno sprejeto, da pozitivno obarvanje glavnem predstavlja mutant oblike p53, medtem ko je divji tip p53 protein hitreje razgradi in se pojavi slabo ali negativno barvanje [10], [26]. Naši podatki so v skladu s študijami iz drugih raziskovalcev, ki so razkrili, da je bil pozitiven p53 izraz povezana z neugodnimi clinicopathologic lastnosti in slabo prognozo bolnikov z rakom želodca, ki so bile opravljene kurativno želodca [28] - [30]. To je treba omeniti, da obstajajo nekatere razlike v clinicopathologic funkcij med Nantong in Yixing generacij. Ker Nantong Cancer Hospital je rak posebna bolnišnica medtem Yixing Ljudska bolnica je celovito, bolniki v nekdanji so pogosto bolj napredni stopnji v primerjavi z njimi. V skladu s tem so bolniki v Nantong kohorti so pokazali slabše clinicopathologic značilnosti. Poleg tega je bilo p53 in JWA izraz zaznali le v tkivih tukaj, vendar ne v krvi ali seruma bolnikov z rakom želodca, zaradi se ne izločajo proteine. Zanimivo je, da prejšnji študija je pokazala močno povezavo med visoko P53 avtoprotiteles v serumu bolnikov adenokarcinomom želodca in slabo prognozo, bezgavke metastazami in nizke diferenciacije [31]. Poleg tega se je izkazalo, da je p53 izraz v želodcu tkiva raka soodvisnih z serumskih protiteles p53 [32]. Nismo imeli serumi zbrane za podobno analizo, vendar bi bilo zelo zanimivo, saj je krvni test enostavnejši in verjetno bolj ponovljiv kot immonohistochemistry. Kot je za JWA, preiskovani serum je še vedno v teku in jo je treba dokazati tudi v prihodnje.

A zanimivo in pomembno vprašanje, nas najbolj pritegne je razlog, zakaj bi visoka izražanje p53 igre ravno nasprotnih vlogah na prognostičnih in predvidevanjem učinka. Ta pojav lahko pripišemo različnim oblikam p53 in njihovih različnih lastnosti v biologiji raka in odpornost zdravljenja. Splošno znano je, mutant p53 beljakovine so zelo izražene v številnih oblik raka in prispevajo k maligno transformacijo, proliferacijo in metastaz delno inhibira divjega tipa p53 kot tudi drugih družinskih članov p53 [6], [33]. Mouse modeli ležaj knock-in mutacijami p53 so pokazale, da lahko mutant p53 proteini vožnjo nastanek tumorja, invazijo in metastaze s prevladujočim negativnim inhibicijo divjega tipa p53 skupaj z dobičkom-of-funkcijo ali "neomorphic" dejavnosti, ki lahko zavirajo ali aktivirate funkcijo drugih proteinov [34], [35]. Tudi v naši raziskavi, visoke p53 izraz v želodčnih tumorjev soodvisnih z bezgavkah metastaze, višji stopnji TNM in drugim neugodnim clinicopathologic funkcije, ki vodijo k bolj agresivnemu fenotipa s slabšo prognozo, če ne zdravimo. V nasprotju s tem, pozitivna napovedna učinek visoke izražanja p53 za preživetje tako platine zdravljenih bolnikih lahko kažejo na dvojno vlogo p53 v kemičnem odpornosti. Trenutno je glavna ovira v platine kemoterapiji je popravilo platino poškodovano DNK, ki ima za posledico večjo odpornost, zmanjšano apoptoze, in na koncu zdravljenje neuspešno. Divjega tipa p53 lahko delno igrati takšno vlogo v tem procesu preko ustavitev celičnega cikla in po popravilu škode s kemičnimi sredstvi povzročeno [36] - [39]. Nasprotno, mutant p53 beljakovine ne morejo delovati v DNK škode popravil kot njihovi divji tip kolegom, kjer so bolniki postali bolj občutljivi na kemikalije [36] [40] [41]. Vendar pa je treba še raziskati podrobni mehanizem za mutanta p53 pri zdravljenju platine. Opozoriti je treba, da so bolniki prejeli več koristi za preživetje od FLO kot iz FLP, ki je lahko delno posledica tega FLO zmanjšuje toksičnost v primerjavi s FLP, kot je bilo že omenjeno [19].

JWA je tipičen odziv stres gen kot tudi tumorski supresor [18], [42]. In vitro in in vivo so potrdili, da izguba JWA zatreti diferenciacijo celic in povečano migracijo celic in metastaz [42] - [44]. Naši najnovejši rezultati kaže nizko JWA izraz v želodčnih tumorjev soodvisnih z neugodnim clinicopathologic kazalnikov, temveč boljši kemoterapije rezultata [19]. V tej raziskavi smo ugotovili, da JWA izboljšala napovedno vrednost p53, kar kaže, da izguba JWA kombinaciji s p53 mutacije lahko poveča tumorja agresivnost in metastaze, ki je verjetno zato, ker JWA je tudi član popravilo DNA poti in morebiti igrajo vzajemno vlogo želodčnega rakotvornost. Zanimivo, tudi če bi bila oba označevalci ločeno napovedni za zdravljenje platine, kombinacija ni izboljšati napovedno vrednost, vendar je ta rezultat je ovira majhno skupino bolnikov v podskupinah. Večje število bolnikov, ki so prejemali kemoterapijo na osnovi platine režimom, je treba vključiti v naše prihodnje študije za nadaljnjo potrditev naše rezultate. Poleg tega ni bilo neposredno predpisani učinek, dokazan med p53 in JWA (podatki niso prikazani), morda delujejo na različne poti za popravilo [17] [18] [45] - obstaja [48] in posredna razmerja med njimi v določenih situacijah. Poleg tega lahko p53 in JWA sinergistično urejanje iste molekule ali signalne poti, ki jo je treba pojasniti v nadaljnji študij.

Če povzamemo, smo razkrili skupni vrednosti tumorskemu p53 z JWA kot učinkovite prognostičnih dejavnikov prvič , na našem najboljšem vedenju. Čeprav je še treba dokazati določen sočasno delovanje teh dveh proteinov, lahko predvidi potencialne predvidevanja za adjuvantno kemoterapijo z režimom na osnovi platine.

dodatne informacije
sliki S1.
Consort diagram za študij v tkivo mikromrež
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s001
(IOD)
Slika S2.
Reprezentativni slike p53 imunohistokemičnim barvanjem pri raku človeškega želodca. A, negativno barvanje; B, šibko pozitiven madeži; C, zmerno pozitivno barvanje; D, močna pozitivna obarvanje (A-D: Lestvica bar, 25 mikrometrov)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s002
(IOD)
Slika S3.
ROC krivulje, ki prikazujejo razmerje med površino pod krivuljo (AUC) pri različnih vrednostih ločilne za p53 radioinkorporacijo točk (IRS) za 1, 3 in 5 let skupnega časa preživetja
doi:. 10,1371 /journal.pone. 0052348.s003
(TIF)
Slika S4.
ROC analize za klinično oceno tveganja, kombinirane p53 ali p53 plus JWA in oceno kliničnega tveganja v kohorti potrjevanja. AUC = površina pod krivuljo
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s004
(IOD)
Slika S5.
preživetje krivulje glede na p53 izražanja razporeditvi validacije kohorti zdravijo z ali brez FLP.
P vrednosti so bile izračunane s testom log-ranga. Opomba: S, sam kirurgija; . FLP, fluorouracil-levkovorina-platinol
doi: 10,1371 /journal.pone.0052348.s005
(IOD)
Slika S6.
preživetja Krivulje prikazujejo sinergijski učinek p53 /JWA izraz vzorec pri preizkušanju kohorti prejme adjuvantno kemoterapijo.
P vrednosti so bile izračunane s testom log-ranga. Opomba: S, sam kirurgija; FLO, fluorouracil- levkovorinu-oksaliplatin; FLP, fluorouracilom-levkovorina-platinol
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s006
(IOD)
Tabela S1.
Razporejenost demografskih in clinicopathologic značilnosti bolnikov, zdravljenih s kemoterapijo ali brez
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s007
(DOC)
tabeli S2.

• Plos ONE: adjuvantno kemoterapijo pri starejših bolnikih z želodčnim rakom po D2 Gastrectomy
• Plos ONE: Klinična in prognostičnih Društvo transkripcijski faktor SOX4 v želodca Cancer