PLoS ONE: Interleukin 17A fördert Magenkrebs Tumorinvasivität über NF-kappaB Mediated Matrixmetalloproteinasen 2 und 9 Expression

Abstrakt

Interleukin 17A (IL-17A), als pro-inflammatorischen Zytokins, wird in der Pathologie von entzündlichen Erkrankungen und Tumor-Mikroumgebung beteiligt. Das Ziel dieser Studie ist es, die Wirkung von IL-17A auf der Invasivität von Magenkrebs (GC) zu untersuchen. In der Studie fanden wir, dass IL-17A, die Migration und Invasion von GC-Zellen fördern könnte. Ferner wird, nachdem mit IL-17A, die Ausdrücke und Aktivitäten von Matrix-Metalloproteinase-2 (MMP-2) und MMP-9 behandelt wurden, nach oben reguliert, während die Ausdrücke von TIMP-1 und TIMP-2 herunterreguliert wurden. Darüber hinaus wurden die Kern /Gesamtanteile von p65 und p50 dramatisch durch IL-17A erhöht. Vorbehandlung mit Helenalin, einem nuclear factor &kgr; B (NF &kgr; B) Inhibitor, wurde bewiesen, die fördernde Wirkung von IL-17A auf der Invasionsfähigkeit von GC-Zellen und Hochregulation von MMP-2 und MMP-9 aufzuheben. Zusammenfassend veranschaulicht unsere Ergebnisse, dass IL-17A, die Invasion von GC-Zellen durch Aktivierung von NF &kgr; B-Weg fördern könnte, und upregulating anschließend die Expression von MMP-2 und MMP-9. Diese Ergebnisse können zur Identifizierung neuer diagnostischer Marker und therapeutische Ziele von GC führen

Citation:. Wang Y, Wu H, Wu X, Bian Z, Gao Q (2014) Interleukin 17A fördert Magenkrebs Tumorinvasivität über NF -κB Mediated Matrixmetalloproteinasen 2 und 9 Expression. PLoS ONE 9 (6): e96678. doi: 10.1371 /journal.pone.0096678

Editor: Nikos K. Karamanos, Universität Patras, Griechenland in

Empfangen: 26. November 2013; Akzeptiert: 11. April 2014; Veröffentlicht am: 6. Juni 2014

Copyright: © 2014 Wang et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Das Projekt wurde von National Natural Science Foundation of China (Nr 81070536) und Jugend Scientific Mittel des Central Hospital von Taian (2011ZRQNO35) unterstützt. Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Als eine der häufigsten Ursachen von Krebs-Todesfälle weltweit, GC für mehr als 700.000 Todesfälle pro Jahr verantwortlich ist [1]. Es ist die zweithäufigste Krebsart und die dritthäufigste Todesursache bei Krebspatienten in China [2]. Die starke Invasion und Metastasierung Fähigkeit von GC ist einer der wichtigen Faktoren, die zu einer schlechten Prognose führen [3]. Daher ist es wichtig, die zugrunde liegenden Mechanismen aufzudecken, neue molekulare therapeutische Targets zu identifizieren, die Invasion Fähigkeiten von GC Zelle regulieren und damit für GC fort Behandlungen zu entwickeln.

IL-17A das Gründungsmitglied der IL ist -17-Familie, die aus IL-17A bis IL-17F reicht [4] - [8]. IL-17 Familienmitglieder spielen eine aktive Rolle bei verschiedenen Krankheiten wie Autoimmunerkrankungen, Entzündungserkrankungen und malignen Erkrankungen. Persistent Entzündung wurde als mit einem erhöhten Risiko von GC korreliert werden [9]. Frühe Schritte in Magen Karzinogenese beteiligt Helicobacter pylori
(H. pylori) Infektion führt zu einer chronischen aktiven und atrophische Gastritis mit der Produktion von entzündungsfördernden Mediatoren [10] - [13], wie IL-1b, TNF &agr;, IFNy, IL-6 und IL-8. Jedoch war die Rolle von IL-17A in Krebs inkonsistent gemäß früheren Berichten. Einige Beweise zeigten, dass IL-17A könnte das Tumorwachstum fördern, indem sie die Angiogenese und invasive Fähigkeit von Tumorzellen stimulieren [14]. Im Gegensatz dazu vorgeschlagen, andere Studien, dass IL-17A durch die Förderung Immunsystem-vermittelten Tumorabstoßungs [15], um eine schützende Wirkung gegen chronische lymphatische Leukämie Entwicklung zeigte. Weiterhin verbessert IL-17A die cytotoxischen Wirkungen von NK-Zellen gegen die Tumorzellen durch die Expression von zytotoxischen Molekülen Vermehrung [16]. Bis jetzt gibt es weniger Bericht über die Rolle von IL-17A bei der Invasion von GC.

In der vorliegenden Studie haben wir festgestellt, dass IL-17A GC Zell-Motilität erhöhen könnte durch upregulating MMP-2 und MMP NF-kappaB-Transkript Faktoren -9 über die Aktivierung.

Materialien und Methoden

Zellkultur

Human GC-Zelllinie AGS von ATCC (American Type Culture Collection, Manassas erworben wurde, VA) und gehalten in DMEM, supplementiert mit 10% fötalem Rinderserum (FBS; Hyclone, Logan, UT), 100 U /l Penicillin und 100 mg /L Streptomycin. Menschliche GC-Zelllinien BGC-823 und SGC-7901 wurden von der chinesischen Akademie der Wissenschaften (Shanghai, China) erhalten und in RPMI-1640-Medium, das 10% Rinderserum, Penicillin (100 U /ml) und Streptomycin (100 ug /mL). Alle Zellen wurden bei 37 ° C, 5% CO _{2 Luftatmosphäre.}

Wundheilungs Assay

GC-Zellen wurden als Monoschichten in einem konfluenten 6-Well-Platte und wurden verwundet durch eine 1 mm Streifen über das Bohrloch mit einer Pipettenspitze entfernen, wenn sie an der Plattenoberfläche haftet. Die verwundeten Monoschichten wurden dann zweimal mit PBS gewaschen, um nicht-adhärente Zellen mit oder ohne IL-17A (50 ng /mL) (R & D Systems, Minneapolis, MN), bevor 1 ml Medium zu entfernen zugegeben. Nach 12 h Inkubation wurden verschiedene Konzentrationsgruppen durch invertierte Mikroskopische Aufnahmen fotografiert.

In-vitro-
Invasion Assay

Die In-vitro-
Invasionstest wurde durchgeführt unter Verwendung von das Bio-Coat Matrigel Invasionsassay-System (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), wie zuvor beschrieben [17]. Nach der Behandlung mit oder ohne IL-17A (50 ng /ml), GC-Zellen wurden in 200 &mgr; l serumfreies Medium ausgesät und in den oberen Kammern platziert bei 2 × 10 ^{5-Zellen und normale Wachstumsmedium wurden in Unterkammern platziert . später vierundzwanzig Stunden wurden die Zellen auf der oberen Oberfläche der Membran mit Wattestäbchen entfernt, während Zellen, die auf der Unterseite des Filters fixiert waren, gebeizt und gemessen. Der Prozentsatz der invasive Rate wurde als Prozentsatz der Kontrolle ausgedrückt.}

Western Blotting Analyse

Ganzzelllysate von GC-Zellen wurden mit Zelllysepuffer geerntet. Kern Lysaten aus kultivierten Zellen wurden mit NucBusterTM Protein Extraction Kit (Novagen, Deutschland) geerntet gemäß den Anweisungen des Herstellers. Western-Blot-Analysen wurden mit dem Standardprotokoll durchgeführt Antikörper gegen MMP-2, MMP-9, TIMP-1, TIMP-2, p52 und β-Aktin (Cell Signaling Technology, Beverly, MA), NF-? B-p50, p65 unter Verwendung von /RelA, c-Rel, RelB und Histon H1 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA).

Zymographie

Die Zellen wurden bei 37 ° C mit verschiedenen Konzentrationen von IL-17A behandelt für 24 h, und Proben von konditioniertem Medium wurden gesammelt. Entsprechende Volumina der Proben (eingestellt durch vitale Zellzahl) wurden mit 0,1% Gelatine-8% SDS-PAGE-Elektrophorese aufgetrennt. Nach der Elektrophorese wurden die Gele zweimal in 2,5% Triton X-100 bei Raumtemperatur für 30 min und dann inkubiert in Reaktionspuffer gewaschen (10 mM CaCl _{2, 40 mM Tris-HCl und 0,01% NaN 3, pH 8,0) bei 37 ° C für 12 h. Coomassie-Brilliantblau R-250-Gel-Färbung wurde dann verwendet, um das Gel zu färben. Die Intensitäten der Banden auf den Gelen wurden unter Verwendung eines Bildanalysesystems (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA) berechnet.}

Statistical Analysis

Alle Daten wurden als das Mittel ± SD ausgedrückt. Die statistische Analyse wurde mit der Software SPSS 16.0 durchgeführt (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA) statistische Unterschiede zu bewerten. Student t
-Test wurde für Vergleiche zwischen zwei Gruppen verwendet und Einweg- oder Zwei-Wege-Varianzanalyse verwendet wurde, statistisch signifikanten Unterschiede zwischen den Gruppen unter verschiedenen Bedingungen zu analysieren. A p
Wert von weniger als 0,05 wurde als statistisch signifikant zu sein. Alle statistischen Tests wurden zweiseitig.

Ergebnisse

• PLoS ONE: Altered Expression von Hypoxie-induzierbaren Faktor 1α (HIF-1α) und seine regulatorische Gene in Magenkrebsgewebe
• PLoS ONE: zirkulierenden Tumorzellen (CTC) Erkannt von RT-PCR und ihre prognostische Rolle in Magenkrebs: Eine Meta-Analyse der veröffentlichten Literature