PLOS ONE: disminución de expresión de AZGP1 se asocia con un mal pronóstico en Gástrico Primario Cancer

Extracto

Antecedentes

2-zinc-glicoproteína 1 (AZGP1) es una proteína multidisciplinar que participa en muchas funciones importantes en el cuerpo humano, incluyendo la fertilización, la inmunorregulación y la movilización de lípidos. Recientemente, se ha demostrado que AZGP1 también está implicado en la carcinogénesis y la diferenciación del tumor. En este estudio, hemos investigado los niveles de expresión y valor pronóstico de AZGP1 en los cánceres gástricos primarios.

Métodos y Resultados

Se examinó la expresión de AZGP1 en 35 emparejado mucosa gástrica no cancerosa adyacente canceroso y emparejado tejidos por tiempo real RT-PCR cuantitativa (QRT-PCR) y Western Blot. Además, analizamos la expresión AZGP1 en 248 pacientes que se sometieron a procedimientos de resección entre 2005 y 2007 mediante inmunohistoquímica. Las relaciones entre los niveles de expresión AZGP1, se investigaron los factores clinicopatológicos, y la supervivencia del paciente. expresión AZGP1 se redujo significativamente tanto en el mRNA ( P
= 0,023) y los niveles de proteína ( P
= 0,019) en muestras de tejido tumoral, en comparación con la expresión en muestras de tejidos no tumorales adyacentes emparejados . Los datos de tinción inmunohistoquímica demostraron que la expresión AZGP1 fue significativamente menor en 52,8% (131/248) de los casos de adenocarcinoma gástrico. El análisis clínico-patológico mostró que la expresión reducida de AZGP1 se correlacionó significativamente con la localización del tumor ( P = 0,011
), el grado histológico ( P
= 0,005) y la etapa T ( P
= 0,008). Kaplan-Meier de supervivencia revelaron que la expresión reducida de AZGP1 se asocia con un mal pronóstico en pacientes con adenocarcinoma gástrico ( P
= 0,009). Multivariante de Cox análisis identificó la expresión AZGP1 fue un factor pronóstico independiente de la supervivencia global de los pacientes con adenocarcinoma gástrico (HR = 1,681; IC del 95% = 1,134 a 2,494, P = 0,011
).

Conclusiones

Nuestro estudio sugiere que AZGP1 podría servir como un supresor tumoral candidato y un potencial biomarcador pronóstico en la carcinogénesis gástrica

Visto:. Huang Cy, Zhao JJ, Lv L, Chen Yb, Li Yf, Jiang Ss, et al. (2013) disminución de la expresión de AZGP1 se asocia a peor pronóstico en el cáncer gástrico primario. PLoS ONE 8 (7): e69155. doi: 10.1371 /journal.pone.0069155

Editor: Alfons Navarro, Universidad de Barcelona, ​​España |

Recibido: 5 de Marzo, 2013; Aceptado: 5 Junio ​​2013; Publicado: 23 de julio 2013

Derechos de Autor © 2013 Huang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Fondo de Doctorado del Ministerio de Educación de China (20100171110084). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

el cáncer gástrico es la segunda causa más común de muerte por cáncer en todo el mundo, con 988.000 nuevos casos y 736.000 muertes por año [1] - [2]. En China, el cáncer gástrico se prevé que sea el tercer cáncer más común en el año 2005 con 0,4 millones de nuevos casos y 0,3 millones de muertes reportadas [3]. El tratamiento del cáncer gástrico incluye una combinación de cirugía, quimioterapia y terapia de radiación. Sin embargo, casi el 60% de los pacientes afectados sucumben al cáncer gástrico después de una resección curativa por sí sola o después de una resección curativa con la terapia adyuvante posterior [4]. El cáncer gástrico es una enfermedad heterogénea tanto en la histología y la genética; por lo tanto, el resultado del paciente es difícil predecir el uso de las clasificaciones histológicas clásicas. carcinogénesis gástrica es un proceso multifactorial y de múltiples etapas que implica la activación de oncogenes y la inactivación de genes supresores de tumores en diferentes etapas de la progresión del cáncer gástrico. Recientemente, se han identificado varios nuevos oncogenes y genes supresores de tumores asociados con el cáncer gástrico. Por lo tanto, es clínicamente importante encontrar nuevas dianas eficaces para el diagnóstico precoz y el tratamiento eficaz del cáncer gástrico.

AZGP1 (2-zinc-glicoproteína 1, Zn-alfa-2-glicoproteína) es una proteína soluble de 41 kDa con un complejo mayor de histocompatibilidad-1 (MHC-1) -como pliegue en su estructura, y se identificó inicialmente y se purificó de suero humano en 1961 [5]. El gen de la AZGP1, asignado al cromosoma 7q22.1 través de cariotipo hibridación fluorescente, se compone de cuatro exones y tres intrones [6], [7]. El uso de los estudios inmunohistoquímicos, se ha encontrado que AZGP1 se expresa principalmente en las células epiteliales de la mama, la próstata, el hígado y otros órganos gastrointestinales [8]. En línea con su producción por las células epiteliales secretoras, AZGP1 se encuentra en una serie de fluidos corporales [9], [10], [11].

AZGP1 es una proteína multidisciplinar que participa en muchas funciones importantes en el cuerpo humano, incluyendo la fertilización [11], la inmunorregulación [12] y la movilización de lípidos [13], [14], [15]. AZGP1 también está asociada con la caquexia por cáncer. AZGP1 tiene un alto nivel de amino-ácido de homología de secuencia con el factor de lípidos movilizar derivado del tumor [14], y en un modelo de ratón de tumores AZGP1 productoras, AZGP1 estimula la lipólisis en los adipocitos que conducen a la caquexia [16]. Recientemente, se ha demostrado que AZGP1 también está implicado en la carcinogénesis y la diferenciación del tumor. ensayos de proteínas y de expresión de ARNm han demostrado una relación entre los niveles AZGP1 y el grado histológico de los tumores de cáncer de mama [17], [18]. Además, muchos estudios sugieren que AZGP1 es un marcador sérico potencial de cáncer de próstata [9], [19]. Además, se ha demostrado que los AZGP1 actúa como una novela supresor de tumores en el cáncer de páncreas [20]. Sin embargo, no se han reportado hasta el momento el estado de la expresión de AZGP1 y el valor pronóstico de esta proteína en los cánceres gástricos primarios.

En este estudio, se analizó el nivel de expresión AZGP1 en el cáncer gástrico mediante el uso de tiempo real RT cuantitativa -PCR (QRT-PCR), Western Blot e inmunohistoquímica. Por otra parte, hemos identificado la relación entre la expresión AZGP1 y las características clínico-patológicas de cáncer gástrico, y se evaluó el valor pronóstico de la expresión AZGP1 para la supervivencia después de la resección de los pacientes con cáncer gástrico.

Resultados

AZGP1 mRNA Expresión Analizado con QRT-PCR

Los niveles de transcripción de AZGP1 se determinaron con ensayos de QRT-PCR usando 35 pares de muestras resecadas (muestras de tejido tumoral y muestras de tejidos no tumorales adyacentes emparejados) de pacientes con cáncer gástrico. Los niveles de ARNm de AZGP1 se redujeron significativamente en muestras de 28 (80%) de tejido tumoral en comparación con las muestras de tejido no tumoral adyacentes emparejados ( P
= 0,023, Figura 1).

Expresión AZGP1 analizados por Western Blot

los niveles de proteína AZGP1 en las muestras de cáncer gástrico resecado se determinaron por Western Blot. Los resultados mostraron una banda para AZGP1 a 41 kDa, y la cantidad de proteína presente AZGP1 se midió mediante densitometría y la altura. En consonancia con los resultados QRT-PCR, se observó una disminución en la expresión AZGP1 en 25 (71,4%) de los tejidos tumorales gástrico en comparación con los tejidos no tumorales adyacentes emparejados ( P
= 0,019, Figura 2A). Ocho pares de tejidos tumorales gástricas representativos y los tejidos no tumorales adyacentes emparejados se muestran en la Figura 2B.

Análisis inmunohistoquímico de la expresión AZGP1 en muestras de tejido de cáncer gástrico y su relación con el clínico-patológica características

con el fin de confirmar los hallazgos de biología molecular e investigar las clinicopatológicas el valor pronóstico de la expresión AZGP1, se realizó un análisis inmunohistoquímico en 248 secciones de cáncer gástrico incluidos en parafina. La expresión positiva de AZGP1 se localizó en el citoplasma (Figura S1). Entre las 248 muestras de cáncer gástrico, 117 (47,2%) mostraron una expresión de alto AZGP1 (AZGP1 ++ o AZGP1 +++), mientras que los 131 casos restantes (52,8%) que se muestra una baja expresión AZGP1 (AZGP1- o AZGP1 +) (Figura 3, Tabla 1). tejidos gástricos normales mostraron la tinción positiva más fuerte AZGP1 (Figura 3A).

Sobre la base de las categorías que hemos definido en los métodos antes mencionados, los datos mostraron que la baja expresión de AZGP1 se correlacionó significativamente con la localización del tumor ( P = 0,011
), el grado histológico ( P
= 0,005) y la etapa de T ( P
= 0,008), pero no con la edad, el sexo, el tamaño del tumor, la resección radical , estado ganglionar (estadio N) o el estado de metástasis (fase M). Las micrografías se muestran en la Figura 3.

correlación entre la expresión AZGP1 Sobre la base de inmunohistoquímica y paciente Supervivencia

El tiempo medio de supervivencia de los 248 pacientes con cáncer gástrico fue de 45 meses (rango 2-89 meses) . La tasa de supervivencia global y la tasa de supervivencia a 5 años se mejoraron significativamente en el grupo de alta expresión AZGP1 que el grupo de baja expresión [64,2% frente a 49,5% (tasa de supervivencia global) y el 65,1% frente al 50,4% (tasa de supervivencia a 5 años), respectivamente, P = 0,009
, Figura 4].

los análisis univariados y multivariados

univariante y multivariante se realizó para comparar el impacto de expresión AZGP1 y otros parámetros clínico en pronóstico. Con base en un análisis univariado que incluía todos los 248 pacientes, se encontró que 8 factores a tener una asociación estadísticamente significativa con la supervivencia global. Este análisis tuvo en cuenta los factores siguientes: la localización del tumor, el tamaño del tumor, el grado histológico, los niveles de expresión AZGP1, por etapas TNM (7ª edición clasificación TNM) e independientemente de si se realizó una resección radical (Tabla 2). Los 8 factores se incluyeron en un modelo de riesgos proporcionales de Cox multivariado para los efectos de las covariables. Sobre la base de este modelo, la ubicación del tumor, AZGP1 niveles de expresión, estadio T y N etapa del tumor fueron confirmados como factores pronósticos independientes (Tabla 2).

Discusión

El cáncer gástrico sigue siendo una de los tumores malignos humanos más mortíferos. Incluso con los avances en el diagnóstico y el tratamiento, el pronóstico para el cáncer gástrico sigue siendo pésimo [1], [21]. La evolución clínica del cáncer gástrico depende de una serie de características del tumor, tales como el crecimiento tumoral, la diferenciación, invasión y metástasis a distancia, que están reguladas por una variedad de genes relacionados. Por lo tanto, en general se considera que las alteraciones genéticas que conducen a la activación de oncogenes y la inactivación de supresores de tumores son las causas subyacentes de la patogénesis del cáncer. La ganancia secuencial de oncogenes y la pérdida de supresores de tumores constituyen la base necesaria para la progresión gradual de los tumores sólidos, desde el inicio de la transformación y la progresión tumoral [22], [23], [24]. Anteriormente, AZGP1 ha informado que poseen propiedades supresoras de tumores en el cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de páncreas y algunos otros tumores malignos [17], [20], [25]; sin embargo todavía no se ha evaluado el papel de AZGP1 en el cáncer gástrico primario. Nuestro estudio indica que la expresión AZGP1 se redujo significativamente en los niveles de ARNm y de proteína en muestras de tejido tumoral, en comparación con la expresión en muestras de tejidos no tumorales adyacentes emparejados. De acuerdo con nuestro estudio, Brysk MM et al. también demostraron que los niveles AZGP1 son más altos en los tejidos orales normales que en los tumores orales [26]. Gagnon S et al. También demostró que AZGP1 estaba presente en las glándulas hiperplásicas benignas en el 91,1% de los casos, pero sólo en el 40,7% (componente pobremente diferenciado) al 48,5% (también componente diferenciado) de los adenocarcinomas prostáticos y sólo el 8% de las metástasis [27]. Estos resultados del estudio apoyan la hipótesis de que AZGP1 puede servir como un supresor tumoral en algunos tipos de cáncer.

A fin de validar esta reducción de la expresión AZGP1 en el cáncer gástrico primario, se realizó un análisis inmunohistoquímico con un anticuerpo anti-conejo hAZGP1. Hemos observado una menor expresión de AZGP1 inmunotinción en el cáncer gástrico proximal o total en comparación con los tejidos de cáncer gástrico distantes. Algunos estudios han demostrado que los pacientes con cáncer gástrico proximales tienen una supervivencia peor que los pacientes con cáncer gástrico distantes [28]. Estos datos sugirieron que la baja expresión de AZGP1 en el cáncer gástrico se asocia con fenotipos más malignas. Además, descubrimos que la disminución de la expresión de AZGP1 se asoció con adenocarcinomas pobremente diferenciados (G3 vs. G1 /G2), lo que indica que AZGP1 puede inducir la diferenciación de cáncer gástrico. Estos resultados son consistentes con los hallazgos de Diez et al. [17], [18] que describe una asociación entre la expresión de alto AZGP1 y los altos niveles de diferenciación en el cáncer de mama. Resultados similares también se han reportado para el cáncer de próstata [19], cáncer de mama y cáncer de páncreas [26]. Por otra parte, hemos detectado que la baja expresión de AZGP1 se asoció con T etapa avanzada. Estos resultados implican que la baja expresión de AZGP1 podría promover el crecimiento del tumor. De acuerdo con nuestro estudio, Irmak S et al. sugirió que AZGP1 está relacionado con el desarrollo de cáncer superficial de vejiga y su transformación en un fenotipo invasivo [29]. Estos hallazgos indican colectivamente un papel importante para AZGP1 en la diferenciación y el crecimiento de cáncer gástrico.

Utilizando el análisis de supervivencia de Kaplan-Meier, los pacientes en nuestro estudio con baja expresión AZGP1 tenían una supervivencia global significativamente más corto que los de alto los niveles de expresión. El análisis univariado mostró que la disminución de expresión de AZGP1 en tejidos de cáncer gástrico se asoció significativamente con la tasa de supervivencia global y la tasa de supervivencia a 5 años. El análisis multivariado demostró que la expresión AZGP1, junto con algunos de los factores tradicionales de pronóstico, tales como la ubicación del tumor, estadio T y estadio N, fueron factores de riesgo independientes en el pronóstico de los pacientes con cáncer gástrico. Estos resultados sugieren que AZGP1 podría servir como un nuevo predictor de pronóstico en pacientes con cáncer gástrico después de la resección quirúrgica.

Los mecanismos moleculares de propiedades supresoras tumorales de AZGP1 aún no están claros. AZGP1 pertenece a la familia macroglobulina, un enlace antiguo y evolutivamente conservador del sistema inmune. Zorin NA et al. sugirió que la capacidad de las macroglobulinas para hidrolasas de unión hace que la inhibición de la invasión tumoral mediada por enzima posible [30]. Al mismo tiempo, un exceso de complejos de macroglobulina /hidrolasa puede activar la apoptosis [31]. Él N et al. informó de que AZGP1 también regula a la baja la quinasa dependiente de ciclina, que es responsable de la regulación de la transición G2-M, un paso limitante de la velocidad en el ciclo celular. Esto sugiere que AZGP1 indirectamente juega un papel en la progresión de tumor obstaculizar [32]. AZGP1 fue propuesto como un supresor tumoral en el cáncer de páncreas en un Kong B. et al. Su estudio sugiere que el gen AZGP1 induce transdiferenciación-mesenquimal a epitelial mediante la inhibición mediada por TGF-b señalización de ERK [20]. El papel funcional y los mecanismos de AZGP1 en el cáncer gástrico es preciso seguir investigando.

En conclusión, lo primero que investigó los niveles de expresión y valor pronóstico de AZGP1 en los cánceres gástricos primarios en este estudio. Nuestros resultados del estudio sugieren que AZGP1 podría servir como un supresor tumoral candidato y biomarcador pronóstico en los cánceres gástricos primarios y ser un objetivo potencial para la intervención terapéutica; Sin embargo, los mecanismos moleculares implicados en la regulación de AZGP1 en órdenes de cáncer gástrico investigación más a fondo.

Materiales y Métodos

Declaración de Ética

Esta investigación fue aprobado por el Comité de Ética de Sun Yat-sen Universidad del Centro del cáncer, y el consentimiento informado por escrito se obtuvo de cada paciente involucrado en el estudio.

muestra de tejido humano s

Un total de 35 emparejados cancerosos y en los tejidos de la mucosa gástrica emparejados adyacentes no cancerosos se recogieron de pacientes con cáncer gástrico sometidos a gastrectomía en Sun Yat-sen Centro de cáncer de la Universidad de 2010 a 2011. Después de la resección quirúrgica, los tejidos frescos se sumergieron inmediatamente en RNAlater (Ambion, Inc., EE.UU.) para evitar la degradación del ARN, se almacena a 4 ° C durante la noche para permitir la penetración profunda de RNAlater en el tejido y luego se congeló a -80 ° C hasta que se realizó la extracción de RNA y proteínas. Otro de 248 muestras de carcinoma gástrico primarias incluidas en parafina que habían sido recogidas entre 2005 y 2007 se obtuvieron del Centro de Cáncer de la Universidad Sun Yat-sen. Ninguno de estos pacientes habían recibido radioterapia o quimioterapia antes de la cirugía. El tipo histológico y el estadio del cáncer gástrico se determinaron de acuerdo con los criterios de la clasificación de la Organización Mundial de la Salud y el estadio TNM establecido por la Unión Internacional contra el Cáncer.

Extracción de ARN total y cuantitativa en tiempo real RT-PCR

el ARN total fue extraído por medio de TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, California, EE.UU.) de acuerdo con el protocolo del fabricante. La concentración total de ARN se evaluó midiendo la absorbancia a 260 nm utilizando un espectrofotómetro NANO DROP (ND-1000, Thermo Scientific, EE.UU.). La transcripción inversa (RT) para sintetizar la primera hebra de ADNc se realizó utilizando 2 g de ARN total tratado con M-MLV transcriptasa inversa (Promega, EE.UU.) según las recomendaciones del fabricante. El ADNc resultante se sometió a cuantitativa en tiempo real RT-PCR para la evaluación de los niveles de ARNm relativos de AZGP1 y GAPDH (gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, como control interno) con los siguientes cebadores: AZGP1 adelante: 5'-GGAAGCAGGACAGCCAACTT -3 ', e inverso: 5'-TTATTCTCGATCTCACAACCAAAC-3'; GAPDH hacia adelante: 5'-CTCCTCCTGTTCGACAGTCAGC-3 'y revertir: 5'-CCCAATACGACCAAATCCGTT-3'. la amplificación de genes específicos se realizó utilizando un sistema de PCR en tiempo real ABI 7900HT (Life Technologies, Carlsbad, California, EE.UU.) con una mezcla de PCR de 15 l que contiene 0,5 l de cDNA, 7,5 l de 2 × SYBR Green Master Mix (Invitrogen, Carlsbad, California, EE.UU.), y 200 nM de los cebadores de oligonucleótidos apropiados. La mezcla se precalentó a 95 ° C (10 min) y después se amplificó a 95 ° C (30 segundos) y 60 ° C (1 min) durante 45 ciclos. La curva de resolución se midió a 95 ° C durante 15 seg, 60 ° C durante 15 seg y 95 ° C durante 15 s. El valor Ct (ciclo umbral) de cada muestra se calcula a partir de los ciclos de umbral con el software del instrumento (SDS 2.3), y la expresión relativa de ARNm AZGP1 se normalizó al valor GAPDH. Los datos fueron analizados utilizando la comparativa ciclo umbral (2 ^{-ΔCt) como método de la siguiente fórmula: nivel de expresión relativa = 2 -ΔCt = 2 -Ct (GAPDH) - 2 -Ct (AZGP1), en la que Ct (GAPDH) significa el valor de Ct GAPDH y Ct (AZGP1) significa el valor Ct de AZGP1.}

Análisis de transferencia Western

los homogeneizados muestras de cáncer gástrico, incluyendo tejidos tumorales y no tumorales, se lisaron en tampón de lisis RIPA, y los lisados ​​se recogieron por centrifugación (12.000 rpm) a 4 ° C durante 30 min. Aproximadamente 20 g muestras de proteína se separaron a continuación por electroforesis en un gel de sodio dodecil sulfato poliacrilamida 12% y se transfirieron a membranas de fluoruro de polivinilideno. Después de bloquear los sitios de unión no específicos para 60 min con leche no grasa al 5%, las membranas se incubaron durante la noche a 4 ° C con un anticuerpo monoclonal de conejo contra AZGP1 (PTG Company, EE.UU., a una dilución 1:200). A continuación, las membranas se lavaron tres veces con TBST (solución salina tris-tamponada con Tween-20) durante 10 min y se sondaron con la peroxidasa de rábano picante (HRP) anticuerpo IgG anti-conejo de cabra conjugado (Inmunología consultores Laboratory, EE.UU., en un 1: dilución 2000) a 37 ° C durante 1 hora. Después de tres lavados, las membranas fueron desarrolladas por un sistema de quimioluminiscencia (Tecnología de Señalización Celular, Danvers, Massachusetts, EE.UU.). La intensidad de la banda se midió mediante densitometría usando el software Quantity One (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, EE.UU.). Los niveles de proteína se normalizaron a la de GAPDH detectado utilizando un anticuerpo de ratón GAPDH monoclonal anti-humano (Shanghai Kangchen, China, a una dilución 1:10000).

Análisis Inmunohistoquímica

Las secciones de tejido fueron desparafinados con dimetilbenceno y rehidratada a través de 100%, 95%, 90%, 80% y 70% de etanol. Después de tres lavados en PBS (solución salina tamponada con fosfato), los portaobjetos se hirvieron en tampón de recuperación de antígeno que contiene ácido 0,01 M citrato de sodio-clorhídrico (pH = 6,0) durante 15 min en un horno microondas. Después de enjuagar con PBS, las secciones de tejido se incubaron con el anticuerpo primario y los portaobjetos se enjuagaron en 3% de solución de peroxidasa de temple (Invitrogen) para bloquear la peroxidasa endógena. Las secciones fueron incubadas con un anticuerpo monoclonal de conejo contra AZGP1 (PTG Company, EE.UU., a una dilución 1:200) a 4 ° C durante la noche y después se incubaron con peroxidasa de rábano picante (HRP) (kit de detección EnvisionTM DAKO ChemMateTM) a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después de lavar en PBS, la señal de visualización se desarrolló con una solución de 3, 3'-diaminobencidina (DAB), y todos los portaobjetos se contratiñeron con hematoxilina. Como controles negativos, las secciones adyacentes se procesaron como se describe anteriormente, excepto que se incubaron durante la noche a 4 ° C en solución de bloqueo sin el anticuerpo primario.

Las muestras se analizaron por tres observadores (Chunyu Huang, Lin LV, y Jingjing Zhao) que fueron cegados a los resultados clínicos de los pacientes. Las discrepancias entre los observadores se encuentran en menos del 10% de las láminas examinadas, y se llegó a un consenso después de una revisión adicional. La puntuación total AZGP1 inmunotinción se calculó como la suma de la positividad por ciento (el porcentaje de las células tumorales teñidas positivamente) y la intensidad de la tinción. El porcentaje de positividad fue marcado como "0" (< 5%, negativo), "1" (5-25%, esporádica), "2" (25-50%, focal), o "3" (> 50 %, difusa). La intensidad de la tinción se puntuó como "0" (sin manchas), "1" (débilmente teñida), "2" (moderadamente manchado), o "3" (fuertemente teñidas). La puntuación total AZGP1 inmunotinción varió de 0 a 9. Se definieron los niveles de expresión AZGP1 de la siguiente manera: "-" para una puntuación de 0-1, "+" para una puntuación de 2-3, que se define como una baja expresión; "++" Para una puntuación de 4-6, y "+++" para una puntuación >. 6, que se define como alta expresión

Seguimiento

El seguimiento postoperatorio -up se llevó a cabo en nuestro departamento de atención ambulatoria e incluido exámenes clínicos y de laboratorio cada 3 meses durante los 2 primeros años, cada 6 meses durante los treinta y los cincuenta años, y anualmente durante 5 años más o hasta la muerte del paciente, lo que ocurra primero. La supervivencia global, que se definió como el tiempo desde la operación a la muerte del paciente o el último seguimiento, se utilizó como una medida de pronóstico. Había alrededor de 4% de los pacientes perdieron el seguimiento.

Análisis estadístico Se utilizó

A-muestras apareadas prueba t para comparar los niveles de mRNA AZGP1 en las muestras de tejido tumoral y la no adyacentes muestras de tejido tumoral. El χ
^{2 test de proporción y los coeficientes de correlación de Pearson se utilizó para analizar la relación entre la expresión AZGP1 y varias características clinicopatológicas. curvas de supervivencia global se calcularon con el método de Kaplan-Meier y se analizaron con la prueba de log-rank. Se utilizó el análisis de riesgo proporcional de Cox para el análisis univariante y multivariante para explorar el efecto de las variables clinicopatológicas y la expresión AZGP1 en la supervivencia. A dos caras P-valor
< 0,05 se consideró estadísticamente significativa. Todos los análisis estadísticos se realizaron con el software SPSS (versión 17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.).}

Apoyo a la Información
Figura S1.
Detección inmunohistoquímica de la expresión de la proteína AZGP1 en tejido de cáncer gástrico. La expresión positiva de AZGP1 se localiza en el citoplasma
doi:. 10.1371 /journal.pone.0069155.s001 gratis (TIF)

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