PLoS One: prognosztikai miR-181B és a miR-21 gyomorrákban kezelt betegeknél S-1 /oxaliplatin vagy doxifluridin /Oxaliplatin

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

A tanulmány célja az hogy értékelje a hatékonyságát S-1 /oxaliplatin vs. doxifluridin /oxaliplatin kezelés és azonosítani miRNS potenciális prognosztikai biomarkerek gyomorrákos betegek. A kifejezés a jelölt miRNS mennyiségileg 50-5 késői stádiumú gyomorrák FFPE példányok. Katalógusa

Kísérleti elrendezés katalógusa

A gyomorrák betegek KPS > 70 vettek fel a tárgyalást. A kontroll csoport kezeltük 400 mg /kétszer /nap doxifluridin plusz i.v..
Oxaliplatin 130 mg /m ^{2 /első nap /4 hét ciklust. A vizsgálati csoport kezeltük s-1 40 mg /kétszer /nap /4 hetes ciklus plusz i.v..
Oxaliplatin 130 mg /m 2 /első nap /4 hét ciklust. Összesen RNS-eket kivontuk a szokásos és a gyomor tumor minták. A szintek miRNS mennyiségi meghatározását valós idejű qRT-PCR analízis kifejezés. Katalógusa}

Eredmények katalógusa

Az összesített objektív válaszarány (CR + PR) kezelt betegek S-1 /oxaliplatin 33,3% volt (CR + PR) vs. katalógusa 17,6% (CR + PR) a doxifluridin /oxaliplatin előrehaladott stádiumban gyomorrákos betegek. Az átlagos teljes túlélés kezelt betegek S-1 /oxaliplatin volt 7,80 hónap vs. 7,30 hónap kezelt betegekhez doxifluridin /oxaliplatin. A kifejezés a miR-181B ( P katalógusa = 0,022) és a miR-21 ( P katalógusa = 0,0029) volt, jelentős túltermelõdik gyomor tumorok, mint a normális gyomor szövetekben. Kaplan-Meier túlélési analízis kimutatta, hogy az alacsony miR-21 expresszióját (Log rank teszttel, kockázati arány: 0,17, CI = 0,06-0,45; P katalógusa = 0,0004) és a miR-181B (Log rank teszttel, veszély arány: 0,37, CI = 0,16-0,87; P katalógusa = 0,018) szoros kapcsolatban állnak a jobb beteg teljes túlélés mind az S-1 és doxifluridin alapú sémák. katalógusa

Következtetés

kezelt betegeknél S-1 /oxaliplatin jobban reagáltak, mint a kezelt doxifluridin /oxaliplatin. miR-21 és miR-181B nagy potenciállal prognosztikus biomarkerek késői stádiumú gyomorrák. katalógusa

Citation: Jiang J, Zheng X, Xu X. Zhou Q, Yan H, Zhang X, et al. (2011) prognosztikai miR-181B és a miR-21 gyomorrákban kezelt betegeknél S-1 /oxaliplatin vagy doxifluridin /oxaliplatin. PLoS ONE 6 (8): e23271. doi: 10,1371 /journal.pone.0023271 katalógusa

Szerkesztő: Mikhail V. Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: 2011. május 19., Elfogadva: július 10, 2011; Megjelent: augusztus 18, 2011 katalógusa

Copyright: © 2011 Jiang et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: A kutatás projektet támogatta a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (30950022 és 30972703) és társadalom fejlesztési tervek, Department of Science and Technology Changzhou (BS20092019). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák továbbra is az egyik leggyakoribb rákfajta világszerte mintegy 870.000 új esetet és 650.000 haláleset évente. Gyomorrák egyik leggyakoribb oka a rák a halál Kínában [1]. A korai klinikai detektálását gyomorrák kevesebb volt, mint 15%, és körülbelül 85% esetet előrehaladott gyomorrák [2]. Az átlagos halálozási arány a gyomorrák Kínában több mint 26% a férfiak és 15% a nő. A gyomorrák egy meglehetősen bonyolult és titokzatos betegség, és valószínűleg sok faktor vezet a fejlődés a betegség. Epigenetics kulcsszerepe gyomorrák fejlesztés és szerelési bizonyíték azt mutatta, hogy a nem kódoló miRNS az egyik fő előidézője gyomorrák. Katalógusa

miRNS egy osztály a kis nem kódoló RNS 20-22 nukleotid hosszúságú, amely feldolgozása a nagyobb pre-miRNS-ek által a RNáz III enzim Dicer (DICER1) a miRNS duplexek [3]. Az egyik szála ezt duplex asszociálódik az RNS által indukált silencing komplex (RISC), míg a másik szál általában lebontják a celluláris nukleázok [3]. A miRNS-RISC komplex kötődik specifikus mRNS célokat, ami transzlációs elnyomás és a hasítás ezek mRNS. Így miRNS modulálják fehérje expresszió előmozdítása révén RNS-lebomlás gátlása mRNS transzlációs, és bizonyos esetekben, ami befolyásolja a transzkripciót. Bár a miRNS-mediálta mRNS lebomlás következik be az emlősök, a legtöbb emlős miRNS úgy gondolják, hogy elnyomják a megcélzott gén expressziójának transzlációs szinten [4], [5], [6] keresztül tökéletlen bázispárok a 3'-nem transzlatált régiók (3 ' -UTRs) az a cél mRNS. Ez a forma a transzlációs szabályozása biztosítja a sejtet egy pontosabb, azonnali és energiatakarékos módon szabályozni a kifejezés egy adott fehérje [7], mert ezzel gyors változások fehérje szintézis nélkül a felesleges transzkripciós aktivációs és az ezt követő lépéseket mRNS feldolgozás. Továbbá, transzlációs szabályozása génexpresszió megvan az az előnye, hogy könnyen felfüggeszthető, a sejtben nagy rugalmasságot reagál a különböző feszültségek.

Fluor-pirimidin-alapú kemoterápiát (pl S-1 /oxaliplatin és doxifluridin /oxaliplatin) marad, mint a fő kezelési lehetőség az előrehaladott gyomorrák betegek. Korábbi tanulmányok már felfedezték számos miRNS társított kemorezisztencia az 5-FU és az S1 alapú terápia colorectalis rák [8], [9], [10], [11], [12], [13]. S-1 egy új, orális dihidropirimidin-dehidrogenáz (DPD) gátló fluor-pirimidin (DIF) alapján egy biokémiai moduláció az 5-fluorouracil (5-FU); S-1 tartalmaz tegafur (FF) és kétféle enzim inhibitor, 5-klór-2,4-dihidroxi-piridin (CDHP) és kálium-oxonate (oxo) mólarányban az 1:0.4:1. Doxifluridin egy fluor-pirimidin-származékot, és aktiválódik, hogy 5-fluor-uracil által uridin-foszforilázt, amely több erősen expresszálódik a malignus sejtekben. Számos beszámoló demonstrálta, hogy fontos a miRNS-ek a gyomorrák [14], [15], [16], [17]. Jelenleg azonban nincs tanulmány miRNS kapcsolatos flupyrimidine alapú kemoterápiát. Sürgősen szükség van ahhoz, hogy felfedezze prognosztikai biomarkerek, hogy segítse a klinikai kezelés az előrehaladott gyomorrák, mert ez segít a válassza ki a betegek, akik majd túlélési előny a kezelés, kerülje a toxicitás a nem reagáló, és csökkenti az egészségügyi költségek a betegek számára.

Bár több miRNS profil vizsgálatok kimutatták, hogy felfedje a fontosságát miRNS gyomorrákban kiható sejtciklus szabályozásában, az apoptózis, tumor invázió és metasztázis [14], [17], amely jelenleg nincs jelentés Link miRNS kemoterápiás kezelések S-1 /oxaliplatin és doxifluridin /oxaliplatin. Ebben a tanulmányban azt rendszeresen vizsgálja a kapcsolatot a kiválasztott jelölt miRNS (pl miR-21, miR-181B, miR-192, miR-140, a let-7 g) szempontjából a klinikai gyakorlatban a gyomorrák a levéltári gyomorrák FFPE példányok . Ezek miRNS már korábban leírták, hogy társul fluoropyrimidin alapú kemorezisztenciájának vastagbélrákban [9], [10], [11], [12], [13]. Pre-kemoterápia mintákat választott S-1 /oxaliplatin és doxifluridin /oxaliplatin előrehaladott gyomorrákban. Van előző bizonyította, hogy a miRNS-ek meglehetősen stabilak FFPE mintákat és ez ideális biomarker [18]. Kezelt betegeknél S-1 /oxaliplatin jobban reagáltak, mint doxifluridin /oxaliplatin. Azonban, nincs különbség a teljes beteg túlélését. Azt találtuk, hogy a miR-21 és miR-181B szignifikánsan társul gyomorrák eredmény az S-1 /oxaliplatin alapú kemoterápiát. Ahhoz, hogy a legjobb tudásunk szerint, ez az első, mely kimutatta prognosztikai jelentősége miRNS gyomorrákban kapcsolódó S-1 /oxaliplatin és doxifluridin /oxaliplatin kezelést. miR-21 és miR-181B nagy potenciállal prognosztikus biomarkerek késői stádiumú gyomorrák. katalógusa

Módszerek katalógusa

A betegek és minták katalógusa

A klinikai minta kohorsz vizsgálat során alkalmazott hagyták jóvá az intézmény által Review Board of Third Kapcsolt Kórház Soochow Egyetemen. Parafintömböket tartalmazó formalin-fixált mintát a szövetek (FFPE) szerezték a levéltári gyűjtemény a Pathológiai Intézet, és használtuk a további RNS kivonása. Jellemzi ezeket a betegek az 1. táblázat mutatja

RNS Isolation

Az archív FFPE szöveteket külön területeket a szilárd tumor és a normális gyomornyálkahártya azonosítottuk a megfelelő hematoxilin-eozin festett metszeteket és magok mérése 1,5 mm átmérőjű és 2 mm hosszúságú (kb 0,005 g) extraháljuk. Ezt követően, a mintákat kezeltük deparaffinization, hidratáció, proteináz K, és végül a teljes RNS-eket izoláljuk a TRIZOL reagenssel (Invitrogen, CA, USA) [18].

Valós idejű QRT-PCR analízis miRNS kifejezés katalógusa

a miR-21, miR-140, let-7 g, miR-181B, miR-200c, miR-192 specifikus primerek és a belső ellenőrzési RNU44 gén Applied Biosystems (Kalifornia, USA). cDNS szintézisét úgy végeztük, a nagykapacitású cDNA Synthesis Kit (Applied Biosystems), miRNS specifikus primerek. Valós idejű kvantitatív RT-PCR (QRT-PCR) végeztünk egy Applied Biosystems 7500 rendszer valós idejű (ABI 7500HT eszköz) A miRNS specifikus primerek TaqMan Gene Expression Assay. Kifejeződése miRNS-értékeket normalizálni szerint a belső ellenőrzési RNU44, és a relatív expressziós értékeket ábrázoltuk. Katalógusa

Statisztikai elemzés katalógusa

Minden statisztikai analízist GraphPad Prism szoftver 5.0. Génexpressziós ΔCt értékei miRNS minden mintából számítottuk normalizálásával szerint a belső kontroll RNU44 kifejezés, és relatív mennyiségi értékeket ábrázoltuk. A különbségek a tumor és a normális szöveteket elemeztük Wilcoxon-párok teszt. A Kaplan-Meier túlélési görbét vettünk elvégzésével Cox-féle regressziós elemzés értékelése expressziós szintjének miR-21 és miR-181B a túlélési arány. A statisztikai szignifikancia létre P katalógusa < 0,05, az egyes vizsgálatokban. Katalógusa

Eredmények és megbeszélés katalógusa

óriási erőfeszítéseket tett felfedezésére prediktív és prognosztikai biomarkerek gyomor- rák [19]. Mivel a betegség bűnpártolás gyomorrák, még mindig nagy kihívást jelent, hogy azonosítsa a klinikai hasznos biomarkerek. Az elismerés a széles hatása miRNS a multi célokat és utakat, ez a mi érdekünk, hogy azonosítani egy új osztályt a prediktív és prognosztikai biomarkerek gyomorrákban alapján miRNS. Számos használatának előnyei miRNS mint biomarker képest mRNS miRNS széles körű szabályozó funkciót, viszonylag kisszámú és jobb stabilitást archiválási FFPE mintákban [18]. Mi jelentés itt ezt a kifejezést szintje miR-181B és a miR-21 képeznek erős prognosztikai faktorok előrehaladott gyomorrák betegek mind az S-1 /oxaliplatin és doxifluridin /oxaliplatin kezelésben. A klinikai és patológiai paraméterek a gyomorrák kezelt betegek doxifluridin /oxaliplatin vagy S-1 /oxaliplatin voltak az 1. táblázatban felsorolt ​​

differenciális expressziója miRNS-ek a gyomorrák

gondosan kiválasztott egy szám miRNS jelöltek, hogy már korábban leírták, hogy társul fluoropyrimidin alapú kemorezisztenciájának vastagbélrákban [9], [10], [11], [12], [13]. Az expressziós szintek miRNS mennyiségileg keresztül valós időben QRT-PCR analízis alkalmazásával kivont teljes RNS gyomorrák FFPE példányok és a normál gyomor szövetek kontrollként. A miRNS expressziós szinteket tovább normalizálódott a belső ellenőrzés RNU44. A legtöbb miRNS (például miR-140, miR-200C) hoztunk számszerűsített kimutatták differenciális expressziója között a normális és a tumoros szövetekben (1. ábra). A kifejezés egy fontos miRNS, a miR-200C, szignifikánsan csökkent a gyomorrák. miR-200c leírták, hogy közvetlenül kapcsolódó cheomosensitivity és epithelialis-mesenchymalis to-átmenet (EMT) [20]. A kifejezés a miR-181B ( P katalógusa = 0,022) és a miR-21 ( P katalógusa = 0,0029) volt a legnagyobb mértékben túltermelõdik gyomor tumorok, mint a normál gyomor szövetek (2. ábra). Eredményeink összhangban vannak a korábbi jelentéseket, hogy ezek a miRNS voltak szabályozatlan gyomorrákban [21]. Katalógusa

Szövetsége miR-21 és miR-181B a válasz S-1 /oxaliplatin és doxifluridin /oxaliplatin kezelési

Az összesített objektív válaszarány (CR + PR) kezelt betegek S-1 /oxaliplatin 33,3% volt (CR + PR) vs. katalógusa 17,6% (CR + PR) a doxifluridin /oxaliplatin színpadi és IV gyomorrákos betegek. Kiválasztottunk néhány miRNS, amelyek kimutatták, hogy összefüggésbe hozható fluoropyrimidin alapú kemorezisztenciájának vastagbélrák [9], [10], [11], [12], [13] és rendszeresen értékelték esetleges összefüggést a doxifluridin /oxaliplatin és S -1 /oxaliplatin gyomorrákban. Az alacsony kifejeződése miR-21 ( P katalógusa = 0,001) és a miR-181B ( P katalógusa = 0,001) szignifikáns összefüggést az S-1 /oxaliplatin reagáló (2. táblázat). Ez nagymértékben összhangban van a korábbi jelentést, hogy a miR-181B expresszió kapcsolódó S1 kezelésére colorectalis rák [8]. Leírták, hogy a miR-181B társult multi drog rezisztencia (MDR) célzásával BCL2 [22]. Ami a miR-21, eredményeink összhangban voltak a legutóbbi jelentésében, hogy elnyomása miR-21 anti-miR érzékennyé hasnyálmirigy rákos sejtek A gemcitabin (fluoropirimidinnel analóg) kezelés [23]. Ugyanakkor a kedvező válasz nem befolyásolta a betegek általános túlélési az átlagos teljes túlélés kezelt betegek S-1 /oxaliplatin (7,80 hónap) hasonló volt a kezelt betegek doxifluridin /oxaliplatin (7,30 hónap). Ez nem meglepő, hiszen gyakran idő kedvező válasz nem fordítja a túlélési előny. Katalógusa

miR-21 és miR-181B szignifikáns összefüggést mutattak a beteg túlélési katalógusa

Annak eldöntésére, hogy ezek közül néhány miRNS potenciális prognosztikus biomarker gyomorrákban végeztünk páciens túlélési analízis Kaplan-Meier túlélési görbe többváltozós Cox regressziós analízissel. Kaplan-Meier túlélési analízis Cox regressziós kiderült, hogy az alacsony miR-21 expresszióját (Log rank teszttel, kockázati arány: 0,17, CI = 0,06-0,45; P katalógusa = 0,0004) és a miR-181B (Log rank vizsgálat, kockázati arány: 0,37, CI = 0,16-0,87; P katalógusa = 0,018) szoros kapcsolatban állnak a jobb beteg teljes túlélés mind az S-1 és doxifluridin alapú sémák (3. ábra). Különösen fontos a miR-21 és miR-181B gyomorrákban határozottan támogatta a legutóbbi jelentésében, hogy a kifejezést a miR-21 és miR-181B aktiváljuk STAT3 közvetíti az IL-6. miR-21 és miR-181B pontként epigenetikus kapcsolót gátolják PTEN és CYLD tumor szupresszor, ami növeli az NF-kB aktivitás fenntartásához szükséges a transzformált állapotban [24]. Azt is kimutatta, hogy ez a kifejezés egyaránt miR-21 és miR-181B pozitív összefüggést tekintve a kifejezés értéke alapján meghatározott statisztikai analízis (Pearson korreláció r = 0,38, P katalógusa = 0,018; Spearman korrelációs r _{s = 0,38 P katalógusa = 0,018). Nagyon is elképzelhető, hogy a miR-21 és miR-181B pontként epigenetikus kapcsolót gyomorrák fejlődést és hozzájárulhatnak a kemorezisztenciájának modulálja legfontosabb cél a tumor szuppresszor gének, mint például PDCD4, ANP32A és SMARCA4 gének [25]. Emelkedett a miR-21 expresszióját leírták sok tumor típusokban, ami arra utal, hogy fontos a miR-21-bona fide-onkogén. Leírták a miR-21 társult H. pylori fertőzés
és gyomorrák fejlesztés, ami arra utal, hogy a miR-21 lehet a potenciális epigenetikus linket gyulladás H. pylori fertőzés katalógusa és tumor megindítása gyomorrák [26]. katalógusa}

Végeredményben beszámolunk itt az első alkalom, hogy a kifejezés a miR-181B és miR-21 kapcsolódó S-1 /oxaliplatin és doxifluridin /oxaliplatin kezelés és a betegek túlélését. Ez tovább erősíti a fogalom a potenciális fontosságát miR-181B és a miR-21 gyomorrákban betegség kifejlődését. Megállapítja egy alapítványt, hogy tovább vizsgálja a hangsúlyozva molekuláris mechanizmusa gyomorrák fejlődés részt miR-181B és a miR-21, és teljes mértékben eredmények validálása a nagy csoportjában, multicentrikus klinikai vizsgálatban résztvevő betegeknél. miR-181B és miR-21 is van lehetőség, hogy mint új terápiás célpont lehet a gyomorrák. katalógusa

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Haifeng Deng, Mingyang Lu, Bin Xu, Min Li, Jian Liu, Zhengguang Li és Hongbing Shi nyújtott kiváló technikai segítséget. katalógusa

• PLoS One: Mir-29a gátolja a sejtek proliferációs és sejtciklusleállást keresztül downregulációját p42.3 Humán gyomorkarcinóma
• PLoS One: Genomikai profiljának elemzése Submucosalis invazív gyomorkarcinóma által tömbalapú összehasonlító genomi hibridizáció