PLoS ONE: prognostinis reikšmė miR-181b ir miR-21 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, gydomiems S-1 /oksaliplatina arba oksaliplatinos Doxifluridine /

Anotacija

Fonas

Šios studijos tikslas yra įvertinti S-1 /oksaliplatina vs Doxifluridine /oksaliplatina režimas efektyvumą ir nustatyti miRNAs dėl galimų prognozinių biologinių žymenų skrandžio vėžio pacientai. Šalių kandidačių miRNAs išraiška buvo įvertintas 50-5 vėlai skrandžio vėžys FFPE egzempliorių

eksperimentinio projektavimo

skrandžio vėžio pacientai, kurių KPS >. 70 buvo įdarbinti į teismą. Kontrolinė grupė buvo gydomi 400 mg /du kartus /dieną Doxifluridine plius, i.v.
Su oksaliplatina 130 mg /m ^{2 /Pirmoji diena /4 savaičių ciklas. Testavimo grupė buvo gydomi S-1 esant 40 mg /du kartus /dieną /4 savaičių ciklo ir i.v.
Su oksaliplatina 130 mg /m 2 /pirmą dieną /4 savaičių ciklas. Iš viso RNR buvo paimti iš normalių ir skrandžio naviko egzempliorių. Į miRNAs koncentracija kiekybiškai naudojant realaus laiko KRL-PGR išraiška analizę.}

Rezultatai

bendras objektyvaus atsako dažnis (CR + PR) gydomiems pacientams S-1 /oksaliplatina buvo 33,3% (CR + PR) vs 17,6.
% (CR + PR) su Doxifluridine /oksaliplatina pažengęs skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Vidutinis bendras išgyvenamumas pacientams, gydomiems S-1 /oksaliplatina buvo 7,80 mėnesio vs 7.30 mėnesį su pacientais, gydytų Doxifluridine /oksaliplatina. Iš miR-181b ( P
= 0,022) ir miR-21 ( P
= 0,0029) išraiška buvo žymiai ekspresija skrandžio auglių, palyginti su įprastais skrandžio audinius. Kaplan-Meier išgyvenamumo analizė parodė, kad mažas PPN-21 raiškos (Prisijungti rank testas, rizikos santykis: 0.17, PI = 0.06-0.45; P
= 0,0004) ir Pasaulis-181b (Prisijungti rank testas, pavojingumo santykis:. 0,37, PI = 0,16-0,87; p
= 0,018) yra glaudžiai susijęs su geresniais paciento bendro išgyvenamumo abiem s-1 ir Doxifluridine turinčiais režimais

Išvada

Pacientams, gydomiems S-1 /oksaliplatina turėjo geresnį atsaką negu vartojant Doxifluridine /oksaliplatina. Pasaulis-21 ir Pasaulis-181b surengti didelį potencialą kaip prognozinių biologiniai žymekliai vėlai skrandžio vėžio

nurodomoji dalis:. Jiang J Zheng X Xu X Zhou Klausimas Yan O Zhang X et al., (2011) prognozinė reikšmė miR-181b ir miR-21 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, gydomiems S-1 /oksaliplatina arba oksaliplatinos Doxifluridine /. PLoS ONE 6 (8): e23271. Doi: 10,1371 /journal.pone.0023271

redaktorius: Michailas V. Blagosklonny, Roswell Park vėžio instituto, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: 19 Gegužės, 2011; Priėmė: 10 Liepos 2011 m Paskelbta rugpjūčio 18, 2011

Visos teisės saugomos: © 2011 Jiang et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis tyrimas projektą parėmė Nacionalinės Gamtos mokslo fondo Kinijos (30.950.022 ir 30.972.703) ir visuomenės plėtros planų, departamento mokslo ir technologijų Changzhou (BS20092019). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys išlieka viena iš maždaug 870.000 naujų atvejų ir 650,000 mirčių per metus labiausiai paplitusių vėžio formų pasaulyje. Skrandžio vėžys yra viena iš dažniausiai pasitaikančių vėžio mirties Kinijos [1]. Pradžioje klinikiniai aptikimas skrandžio vėžio buvo mažesnė nei 15%, o apie 85% atvejų buvo išplitusiu skrandžio vėžiu, [2]. Vidutinis mirtingumas skrandžio vėžiu Kinijoje yra daugiau nei 26% vyrų ir 15% už moterų. Skrandžio vėžys yra gana sudėtingas ir mįslingas sutrikimas ir daug veiksnių, kurie veda į šios ligos eigą. Epigenetics vaidina svarbų vaidmenį skrandžio vėžio vystymosi ir montavimo įrodymų visumos matyti, kad ne-kodavimo miRNAs yra vienas iš pagrindinių dalyvių skrandžio vėžio.

miRNAs yra mažų nekoduojamame RNR 20-22 nukleotidų ilgio klasė, kuri gaminamos iš didesnių anksto miRNAs pagal RNazės III fermento Kauliukų žaidimai (DICER1) į Mirna per du aukštus [3]. Vienas kryptis šio dvipusis asocijuojasi su RNR sukeltas triukšmo slopinimo kompleksas (RISC), o kita kryptis paprastai yra nevisavertis, Cellular nukleazių [3]. Mirna-RISC kompleksas jungiasi prie konkrečių mRNR tikslų, todėl pritaikymo represijoms ar skilimo šių mRNR. Taigi, miRNAs moduliuoti baltymų raišką, skatinant RNR degradacija, slopina iRNR vertimą, o kai kuriais atvejais, turinčių įtakos transkripcijos. Nors Mirna tarpininkaujant iRNR degradacija vyksta žinduolių, dauguma žinduolių miRNAs yra manoma, kad nuslopinti tikslinio geno ekspresiją tuo pritaikymo lygį [4], [5], [6] per netobulos bazinių Kergimas į 3'-neišverstų regionų (3 ' -UTRs) jų tikslinių mRNR. Šis transliacijos reguliavimo forma suteikia ląstelę su tikslesniu, nedelsiant ir efektyviai energiją vartojančias būdu kontroliuoti tam tikro baltymo [7], nes ji skatina sparčius pokyčius baltymų sintezę be perteklinio transkripcijos aktyvavimo ir vėlesnių etapų iRNR perdirbimo išraiška. Be to, pritaikymo kontrolė genų ekspresijos turi būti lengvai grįžtamas, teikiant narvelį su dideliu lankstumu reaguoja į įvairias streso pranašumą.

fluoropirimidinas chemoterapijos (pvz S-1 /oksaliplatina ir Doxifluridine /oksaliplatina) išlieka pagrindinis gydymo būdas išplitusiu skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Ankstesni tyrimai atrado miRNAs, susijusių su Atsparumas cheminėms 5-FU ir S1, pagrįstą gydymo gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio [8] skaičių, [9], [10], [11], [12], [13]. S-1 yra naujas žodžiu dihidropirimidindehidrogenazei (DPD) slopinantis fluoropirimidinas (TIF), remiantis biocheminių moduliavimo 5-fluorouracilu (5-FU); S-1 yra tegafurą, (ff) ir dviejų tipų fermento inhibitoriaus, 5-chlor-2,4-dihidroksipiridin (CDHP) ir kalio oxonate (okso) A moliniu santykiu 1:0.4:1. Doxifluridine yra fluoropirimidinas darinys ir yra įjungta 5-fluorouracilo uridino fosforilazė, kuri yra daugiau labai išreikštą piktybinių ląstelių. Daugelyje ataskaitų įrodė miRNAs svarbą skrandžio vėžio [14], [15], [16], [17]. Tačiau šiuo metu nėra studija miRNAs susijusių su flupyrimidine remiantis chemoterapiją. Yra skubiai reikia atrasti prognostinius biologinius žymenis padėti klinikinę valdymą išplitusiu skrandžio vėžiu, nes tai padės atrinkti pacientus, kurie turės išgyvenimo naudos iš gydymo išvengti toksinio poveikio į nereagavo, ir sumažinti sveikatos priežiūros išlaidas pacientams.

Nors keletas Mirna profiliavimo tyrimai buvo pranešta, kad atskleisti Mirna svarbą skrandžio vėžio poveikį ląstelių ciklo kontrolę, apoptozės, naviko invazija ir metastazių [14], [17], šiuo metu nėra ataskaita nurodo Mirna su chemoterapiniais gydymo su S-1 /oksaliplatina ir Doxifluridine /oksaliplatina. Šiame tyrime mes sistemingai ištirti pasirinktų kandidačių miRNAs santykius (pvz Pasaulis-21, PPN-181b, PPN-192, PPN-140, leiskite-7g), kalbant apie jų klinikinį naudingumą skrandžio vėžio naudojant archyvinius skrandžio vėžio FFPE egzemplioriai , Šie miRNAs buvo ankstesnis odurzeń su fluoropirimidino remiantis Atsparumas cheminėms į gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio [9], [10], [11], [12], [13]. Pasirengimo chemoterapijos mėginiai buvo atrinkti iš S-1 /oksaliplatina ir Doxifluridine /oksaliplatinos išplitusiu skrandžio vėžiu. Mes turime Ankstesnis parodė, kad miRNAs yra gana stabilus FFPE mėginių ir jis idealiai tinka žymenų atradimas [18]. Pacientams, gydomiems S-1 /oksaliplatina turėjo geresnį atsaką nei Doxifluridine /oksaliplatina. Tačiau nėra jokio skirtumo, bendra paciento išlikimo. Mes nustatėme, kad Pasaulis-21 ir Pasaulis-181b yra reikšmingai susijęs su skrandžio vėžiu rezultatus su S-1 /oksaliplatina chemoterapijos. Mūsų žiniomis, tai yra pirmoji ataskaita įrodyti prognostinę reikšmę miRNAs skrandžio vėžio, susijusio su S-1 /oksaliplatina ir Doxifluridine /oksaliplatina gydymo. Pasaulis-21 ir Pasaulis-181b surengti didelį potencialą kaip prognozinių biologiniai žymekliai vėlai skrandžio vėžio.

Metodai

Pacientai ir mėginių

klinikinio mėginio kohortos naudojami šiame tyrime buvo patvirtinta pagal įstaigos peržiūros valdybos Trečiojo filialas ligoninės Soochow universitete. Parafino blokai, kurių sudėtyje yra formalinu fiksuotos egzempliorių audinių (FFPE) buvo įsigytas iš archyvinių kolekcijų patologijos katedros ir naudojami vėliau RNR gavyba. Šių pacientų charakteristikos parodytos 1 lentelėje

RNR išskyrimas

Naudojant archyvinius FFPE audinius, atskiros sritys kieto naviko ir normalus skrandžio epitelio buvo nustatytas naudojant atitinkamą hematoksilinu ir eozinas tamsintas skyrius ir branduolių matavimo 1,5 mm skersmens ir 2 mm ilgio (maždaug 0,005 g) buvo paimti. Vėliau mėginiai buvo gydomi deparaffinization, hidratacijos, proteinazės K, ir galiausiai iš viso RNR buvo išskirta naudojant TRIZOL reagentą (Invitrogen, CA, JAV) [18].

Realaus laiko KRL-PGR analizė Mirna išraiška

mir-21, PPN-140, leiskite-7g, PPN-181b, PPN-200c, PPN-192 specifiniai pradmenys ir vidaus kontrolės RNU44 genas buvo įsigytas iš "Applied Biosystems (CA, USA). kDNR sintezės atlieka didelės talpos kDNR sintezės Kit (Applied Biosystems) su Mirna konkrečių gruntams. Nekilnojamasis laiko kiekybine PGR (KRL-PGR) buvo atliktas ant Applied Biosystems 7500 Realaus laiko sistemos (ABI 7500HT prietaisų) su Mirna konkrečių gruntams pagal TaqMan genų ekspresijos tyrimu. Išraiška miRNAs vertybių normalizavosi pagal vidaus RNU44 kontrolės ir buvo brėžiamas santykiniai išraiškos vertes.

Statistinė analizė

Visos statistinė analizė atlikta naudojant GraphPad Prism programinė įranga 5.0. Genų ekspresijos ΔCt vertės miRNAs iš kiekvieno mėginio buvo apskaičiuojamas normalizuoti pagal vidaus kontrolės RNU44 išraiška, o santykinis kiekybinio vertės buvo grafikas. Skirtumai tarp naviko ir normaliuose audiniuose skirtumai buvo analizuojami pagal Wilcoxon suderintos porų tyrimas. Kaplan-Meier išgyvenamumo kreivės buvo sukurtas atliekant Cox proporcinės pavojai regresinę analizę, siekiant įvertinti raiškos lygis PPN-21 ir MIR-181b su išgyvenamumas. Statistinis reikšmingumas buvo nustatytas iki P
. ≪ 0,05 kiekvienu bandymo

Rezultatai ir jų aptarimas

milžinišką pastangų buvo skirta atrasti prognozavimo ir prognostinius biologinius žymenis dėl skrandžio Vėžys [19]. Dėl ligos bendrininkavimo skrandžio vėžio, ji vis dar išlieka labai svarbus uždavinys nustatyti klinikinių naudingų biologinių žymeklių. Su plačiu poveikiu miRNAs multi tikslus ir kelius pripažinimo, tai yra mūsų interesas nustatyti naują klasę prognozavimo ir prognozės biologinių žymenų skrandžio vėžio remiantis miRNAs. Yra keletas privalumų naudojant miRNAs kaip biologinis, palyginti su mRNR kaip miRNAs turi didelę reguliavimo funkciją, gana nedideliais kiekiais ir geriau stabilumą archyvinių FFPE pavyzdžių [18]. Mes pranešti, kad čia raiškos lygį PPN-181b ir miR-21 sudaro stiprius prognostinius veiksnius išplitusiu skrandžio vėžiu pacientams tiek S-1 /oksaliplatina ir Doxifluridine /oksaliplatina režimų. Klinikinių ir patologiniai parametrai skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, gydomiems Doxifluridine /oksaliplatina arba S-1 /oksaliplatina buvo išvardytos 1 lentelėje

diferencinė ekspresija miRNAs skrandžio vėžio

kruopščiai atrenkami numeris iš mirna kandidatų, kurie buvo ankstesnis odurzeń su fluoropirimidino remiantis Atsparumas cheminėms į gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio [9], [10], [11], [12], [13]. Sąvoka lygiai miRNAs buvo kiekybiškai per realaus laiko KRL-PGR analizei naudojant bendrą RNR išskirtą iš skrandžio vėžys FFPE egzempliorių ir normalių skrandžio audinių kaip kontrolės. Į Mirna ekspresijos lygis toliau buvo normalizuotas naudojant vidaus kontrolės RNU44. Dauguma miRNAs (pvz Pasaulis-140, PPN-200c), mes kiekybiškai parodyta diferencialinę išraišką tarp normalių ir vėžinių audinių (1 paveikslas). Svarbų Mirna, PPN-200C, išraiška buvo gerokai sumažintas skrandžio vėžio. Pasaulis-200c buvo pranešta tiesiogiai susijęs su cheomosensitivity ir epitelio-to-mezenchiminių perėjimo (EMT) [20]. Iš miR-181b ( P
= 0,022) ir miR-21 ( P
= 0,0029) išraiška buvo svarbiausia ekspresija skrandžio auglių, palyginti su įprastais skrandžio audinių (2 paveikslas). Mūsų rezultatai atitinka ankstesnių pranešimų, kad šie miRNAs buvo liberalizuotas skrandžio vėžio [21].

asociacija miR-21 ir miR-181b su atsakas į S-1 /oksaliplatina ir Doxifluridine /oksaliplatina gydymą

bendras objektyvaus atsako dažnis (CR + PR) gydomiems pacientams S-1 /oksaliplatina buvo 33,3% (CR + PR) vs 17,6.
% (CR + PR) su Doxifluridine /oksaliplatina už IV skrandžio vėžiu sergantiems pacientams ir III etape. Mes pasirinkome keletą miRNAs, kad buvo įrodyta, kad būti susijęs su fluoropirimidino remiantis Atsparumas cheminėms į gaubtinės žarnos vėžio [9], [10], [11], [12], [13] ir sistemingai įvertintos jų galimą ryšį su Doxifluridine /oksaliplatina ir S -1 /oksaliplatina skrandžio vėžio. Mažas išraiška miR-21 ( P
= 0,001) ir miR-181b ( P
= 0,001) buvo reikšmingai susijęs su s-1 /oksaliplatina gelbėtojams (2 lentelė). Tai labai dera su ankstesnėje ataskaitoje, kad Pasaulis-181b išraiška buvo susijęs su S1 gydymo kolorektalinio vėžio [8]. Buvo pranešta, kad Pasaulis-181b buvo susijęs su įvairių atsparumo vaistams (MDR) nukreipiant BCL2 [22]. Kalbant PPN-21, mūsų rezultatai atitiko naujausioje ataskaitoje, kad miR-21 slopinimas anti-miR sensitizes kasos vėžio ląstelių linijas gemcitabinui (fluoropirimidinas analoginės) gydymas [23]. Tačiau palankus atsakas neturėjo įtakos paciento bendrą išgyvenimą kaip vidutinis bendras išgyvenamumas pacientams, gydomiems S-1 /oksaliplatina (7,80 per mėnesį) buvo panašus pacientų, gydytų Doxifluridine /oksaliplatina (7,30 mėn.) Tai nestebina, nes dažnai laikas palankus atsakas nėra išversti į išlikimo labui.

Pasaulis-21 ir Pasaulis-181b buvo reikšmingai susijęs su paciento išlikimo

Norėdami nustatyti, ar kai kurie iš šių miRNAs turi potencialą kaip prognostinis biologinis į skrandžio vėžio, mes atliekame paciento išgyvenamumo analizė naudojant Kaplan-Meier išgyvenimo kreivė Daugiafunkciniai variantas Cox regresinė analizė. Kaplan-Meier išgyvenamumo analizė Cox regresijos parodė, kad mažas PPN-21 raiškos (Prisijungti rank testas, rizikos santykis: 0.17, PI = 0.06-0.45 P
= 0,0004) ir Pasaulis-181b (Prisijungti rangą testus, rizikos santykis: 0.37, PI = 0,16-0,87; P
= 0,018) yra glaudžiai susijęs su geresniais paciento bendras išgyvenimas tiek s-1 ir Doxifluridine turinčiais režimais (3 paveikslas). MiR-21 ir miR-181b svarbą skrandžio vėžio buvo labai remia neseniai pranešime, kad miR-21 ir miR-181b išraiškos buvo aktyvuota STAT3, medijuojamų IL-6. Pasaulis-21 ir Pasaulis-181b aktas kaip epigenetinio jungikliu slopinti PTEN ir CYLD auglio slopintuvai, todėl padidėja NF-kB veiklos reikia išlaikyti transformavesis [24]. Mes taip pat atskleidė, kad tiek miR-21 ir miR-181b išraiška yra teigiamai susijęs kalbant apie saviraiškos vertę remiantis statistine analize (Pearsono koreliacija r = 0,38 P
= 0,018; Ietininkas koreliacijos R _{s = 0,38 P
= 0,018). Tai gana tikėtina, kad Pasaulis-21 ir Pasaulis-181b aktas kaip epigenetinio jungiklis skrandžio vėžio vystymosi ir prisidėti prie Atsparumas cheminėms keičiant pagrindinę tikslinę navikų supresorinių genus, pavyzdžiui, PDCD4, ANP32A ir SMARCA4 genų [25]. Padidėjęs Pasaulis-21 išraiška buvo pranešta daugelyje naviko tipų, o tai rodo, kad PPN-21 svarbą kaip bona fide onkogeno. Buvo pranešta, Mir-21 buvo siejamas su H. pylori
infekcijos ir skrandžio vėžio vystymąsi, rodo, kad Pasaulis-21 gali būti potencialus epigenetinius grandis uždegimas H. pylori
infekcija ir naviko inicijavimas skrandžio vėžio [26].}

Taigi, mes pranešti čia pirmą kartą, kad miR-181b ir miR-21 išraiška buvo susiję su S-1 /oksaliplatina ir Doxifluridine /oksaliplatina gydymas ir paciento išgyvenimo. Ji taip pat remia pasiūlymą dėl galimo svarbą PPN-181b ir miR-21 skrandžio vėžys ligos vystymosi sąvoką. Jis nustato pagrindą toliau tirti pabrėžiant molekulinį mechanizmą skrandžio vėžio išsivystymo, susijusią su miR-181b ir miR-21, ir visiškai patvirtinsime išvadas didelio būrio, multi-centro klinikinių tyrimų pacientams. Pasaulis-181b ir Pasaulis-21 taip pat gali turėti potencialą, kad būtų kaip naujų terapinių tikslų skrandžio vėžio.

Padėka

Haifeng Dan, Mingyang Louis, Bin Xu Min Li Jian Liu Zhengguang li ir Hongbing Shi suteikė puikią techninę pagalbą.

• PLoS ONE: mir-29a slopina ląstelių proliferaciją ir indukuoja ląstelės ciklo arešto per p42.3 downregulation į žmogaus Skrandžio Cancer
• PLoS ONE: Genomo profiliavimo gleivine invazinės Skrandžio vėžio masyvas-Based lyginamosios Genomo Hybridization