Ploche ONE: prognostický význam Mir-181b a Mir-21 v rakovina žalúdka u pacientov liečených S-1 /oxaliplatinou alebo doxifluridín /Oxaliplatin

abstraktné

Pozadie

Cieľom tejto štúdie je vyhodnotiť účinnosť s-1 /Oxaliplatin vs. doxifluridín /Oxaliplatin režimu a identifikovať miRNA ako potenciálny prognostické biomarkery u pacientov s karcinómom žalúdka. Expresia kandidátskych miRNA bola kvantifikovaná päťdesiat-päť neskorom štádiu vzoriek žalúdočnej rakovina FFPE

experimentálneho dizajnu

pacientov s rakovinou žalúdka s KPS >. 70 bolo prijaté pre súd. Kontrolná skupina sa nechá reagovať s 400 mg /dvakrát /deň doxifluridín a i.v.
S oxaliplatinou na 130 mg /m ^{2 /Prvý deň /4 týždeň cyklu. Testovacia skupina bola ošetrovaná s S-1 v dávke 40 mg /dvakrát /deň /4 týždne cyklu a i.v.
S oxaliplatinou na 130 mg /m 2 /Prvý deň /4 týždňoch cyklu. Celkové RNA sa extrahuje z normálnych a žalúdočných nádorových vzoriek. Hladiny miRNA boli kvantifikované za použitia v reálnom čase QRT-PCR analýzu expresie.}

Výsledky

Celková objektívna odpoveď (CR + PR) pacientov liečených S-1 /Oxaliplatina bola 33,3% (CR + PR) vs.
17,6% (CR + PR) s doxifluridín /Oxaliplatinu pre pokročilých fázu pacientov s rakovinou žalúdka. Priemerná doba prežívania u pacientov liečených S-1 /Oxaliplatina bola 7,80 mesiacov vs. 7,30 mesiaca s pacientmi liečenými doxifluridín /oxaliplatiny. Expresie MIR-181b ( P
= 0,022) a Mir-21 ( P
= 0,0029) bola významne nadmerne vystavený u nádorov žalúdka v porovnaní s normálnymi žalúdočných tkanivách. Analýza prežitie Kaplan-Meier bolo zistené, že nízke hladiny MIR-21 expresie (log rank test, pomer rizika: 0,17, CI = 0.06-0.45; P
= 0,0004) a mier-181b (log rank test, nebezpečnosti pomer :. 0,37, CI = 0,16 - 0,87; P
= 0,018) sú úzko spojené s celkovým prežitím lepšieho pacientovho pre režimy s-1 a doxifluridín na základe oboch

Záver

u pacientov liečených s-1 /Oxaliplatina mal lepšiu odozvu ako u pacientov liečených doxifluridín /oxaliplatiny. Mir-21 a mier-181b ponúkajú obrovský potenciál ako prognostické biomarkery v pokročilom štádiu rakoviny žalúdka

Citácia :. Jiang J, Zheng X, Xu X, Zhou Q, Yan H, Zhang X, et al. (2011) prognostický význam MIR-181b a Mir-21 s rakovinou žalúdka u pacientov liečených S-1 /oxaliplatinou alebo doxifluridín /oxaliplatiny. PLoS ONE 6 (8): e23271. doi: 10,1371 /journal.pone.0023271

Editor: Mikhail V. Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, Spojené štáty |

prijatá: May 19, 2011; Prijaté: 10.07.2011; Uverejnené: 18.septembra 2011

Copyright: © 2011 Jiang et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Tento výskum projekt bol podporený Národnej prírodnej Science Foundation Číny (30950022 a 30972703) a spoločnosť rozvojových plánov, Ústav pre vedu a techniku ​​Changzhou (BS20092019). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

karcinóm žalúdka zostáva jedným z najčastejších foriem rakoviny po celom svete približne 870.000 nových prípadov a 650.000 úmrtí ročne. Rakovina žalúdka, je jednou z najčastejších príčin úmrtí na rakovinu v Číne [1]. Skorá klinická detekcia karcinómu žalúdka bola nižšia ako 15%, a asi 85% prípadov boli pokročilého karcinómu žalúdka [2]. Priemerná miera úmrtnosti na rakovinu žalúdka v Číne je viac ako 26% u mužských a 15% pre ženy. Rakovina žalúdka, je pomerne zložitý a záhadné poruchy a mnoho faktorov, ktoré pravdepodobne viedlo k vývoju choroby. Epigenetics hrá kľúčovú úlohu v rozvoji rakoviny žalúdka a montážne Dôkazy preukázali, že nekódujúca miRNA sú jedným z hlavných prispievateľov k rakovine žalúdka.

miRNA sú trieda malých nekódujúca RNA 20-22 nukleotidov, ktoré sú spracované z väčších pre-miRNA pomocou RNázy III enzýmu Dicer (DICER1) do miRNA duplexy [3]. Jedna z častí tohto duplex asociuje s RNA-indukovanej tlmenie hluku komplexu (RISC), zatiaľ čo druhá vetva je všeobecne degradovaná bunkovými nukleázy [3]. Komplex miRNA-RISC viaže na špecifické ciele mRNA, čo vedie k transláciu, alebo štiepením týchto mRNA. Tak, miRNA modulovať expresiu proteínu tým, že podporuje degradácii RNA, inhibíciu translácie mRNA, a v niektorých prípadoch, ktoré ovplyvňujú transkripciu. Aj keď miRNA-sprostredkovanej degradácie mRNA sa vyskytuje u cicavcov, väčšina cicavčích miRNA sa predpokladá, že potlačiť génovú expresiu cieľového na úrovni translácie [4], [5], [6] cez nedokonalé párovanie báz na 3'-nepřekládané oblasti (3 ' -UTRs) svojich cieľových mRNA. Táto forma translačný regulácia poskytuje bunku s presnejším, bezprostredné a energeticky efektívny spôsob riadenia expresie daného proteínu [7], pretože vyvoláva rýchle zmeny v syntéze bielkovín bez nadmerného aktiváciu transkripcie a následné kroky v oblasti spracovania mRNA. Naviac translačný regulácia génovej expresie má tú výhodu, že je ľahko zrušiť, poskytnutie bunky s veľkou flexibilitou v reakcii na rôzne napätia.

lfuorpyrimidinu chemoterapie na báze (napr S-1 /Oxaliplatina a doxifluridín /Oxaliplatina) zostáva hlavná možnosť liečby pre pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka. Predchádzajúce štúdie objavili rad miRNA spojených s chemorezistence na 5-FU a S1 terapie založené u kolorektálneho karcinómu [8], [9], [10], [11], [12], [13]. S-1 je nový orálny dihydropyrimidíndehydrogenázy (DPD) inhibičné lfuorpyrimidinu (DIF), založený na biochemické moduláciu 5-fluorouracil (5-FU); S-1 obsahuje tegafuru (FF) a dva druhy enzýmu, 5-chlór-2,4-dihydroxypyridin (CDHP) a oxonate draselného (oxo) v molárnom pomere 1: 0.4: 1. Doxifluridín je fluorpyrimidinu derivát a aktivuje sa na 5-fluorouracil podľa uridinfosforylázy, ktorý je vysoko exprimovaný v malígnych bunkách. Rad správ preukázali význam miRNA v rakoviny žalúdka [14], [15], [16], [17]. V súčasnej dobe však neexistuje žiadna štúdia miRNA súvisiacich s flupyrimidine na báze chemoterapie. Existuje naliehavá potreba objaviť prognostických biomarkerov napomáhať klinické riadenie pokročilou rakovinou žalúdka, pretože to pomôže pri výbere pacientov, ktorí budú mať prínos pre prežitie z liečby, vyhnúť sa toxicitu nonrespondéry, a znížiť zdravotné náklady pre pacientov.

Hoci niekoľko miRNA profilovanie štúdií boli hlásené odhaliť význam miRNA u karcinómu žalúdka s dopady na riadenie bunkového cyklu, apoptóza, nádorové invázie a metastáz [14], [17], v súčasnej dobe neexistuje žiadna správa odkaz miRNA s chemoterapeutikami ošetrenie s s-1 /oxaliplatinou a doxifluridín /oxaliplatiny. V tejto štúdii sme systematicky skúmať vzťah vybraných kandidátskych miRNA (napr MIR-21, MIR-181b, MIR-192, MIR-140, let-7 g), pokiaľ ide o ich klinicky využiteľné v karcinómu žalúdka za použitia archívnych vzoriek žalúdočnej rakovina FFPE , Tieto miRNA boli predchádzajúce hlásené byť spájaný s chemorezistence báze fluóropyrimidínmi u kolorektálneho karcinómu [9], [10], [11], [12], [13]. Pre-chemoterapie vzorky boli vybrané z S-1 /Oxaliplatina a doxifluridín /Oxaliplatina v pokročilého karcinómu žalúdka. Máme predchádzajúce preukázala, že miRNA sú pomerne stabilné vo vzorkách FFPE a je ideálny pre biomarkerov [18]. U pacientov liečených S-1 /Oxaliplatina mal lepšiu odozvu než doxifluridín /oxaliplatiny. Avšak, neexistuje žiadny rozdiel v celkovom prežívaní pacienta. Zistili sme, že mier-21 a mier-181b sú významne spojené s žalúdka výsledkom rakoviny s S-1 /chemoterapie Oxaliplatina na báze. Do našich najlepších znalostí, toto je prvá správa, ktorá preukazuje prognostický význam miRNA v žalúdočnej rakoviny súvisiace s S-1 /Oxaliplatina a doxifluridín /Oxaliplatina liečby. Mir-21 a mier-181b ponúkajú obrovský potenciál ako prognostické biomarkery v neskorom štádiu rakoviny žalúdka.

Metódy

Pacienti a vzorky

Klinické vzorka kohorty použité pre túto štúdiu boli schválené zo strany inštitúcie Review Board tretieho Affiliated nemocnice Soochow univerzity. Parafínové bloky, ktoré obsahujú formalínu fixovanej vzorky tkanív (FFPE) bola získaná z archívnych zbierok Ústavu patológie a použiť pre následné extrakciu RNA. Charakteristiky týchto pacientov sú uvedené v tabuľke 1.

RNA Isolation

Použitie archívne FFPE tkaniva, oddelené oblasti pevného nádoru a normálne žalúdočnej epitel boli identifikované za použitia zodpovedajúceho hematoxylínom a eosínu zafarbené časti a jadra meracie 1,5 mm v priemere a 2 mm na dĺžku (približne 0,005 g) boli extrahované. Následne boli vzorky ošetrené Deparafinizace, hydratácia, proteinázy K, a v konečnom dôsledku celkovej RNA boli izolované pomocou TRIzolu činidlo (Invitrogen, CA, USA) [18].

v reálnom čase QRT-PCR analýza miRNA výraz

MIR-21, MIR-140, let-7 g, MIR-181b, MIR-200 ° C, MIR-192 špecifické primery a gén vnútorná kontrola RNU44 boli zakúpené od Applied Biosystems (CA, USA). Syntéza cDNA bola vykonávaná pomocou High Capacity cDNA Synthesis Kit (Applied Biosystems) s miRNA špecifickými primermi. V reálnom čase kvantitatívnej RT-PCR (QRT-PCR) bola vykonaná na Applied Biosystems 7500 v reálnom čase systéme (ABI 7500HT nástroj) s miRNA špecifickými primermi podľa testu TaqMan Gene Expression. Expresia hodnôt miRNA bola normalizovať vzhľadom vnútornej kontroly RNU44, a relatívnej hodnoty expresie boli vynesené do grafu.

Štatistická analýza

Všetky štatistická analýza bola vykonaná za použitia softvéru GraphPad Prism 5.0. Génové hodnoty ΔCt výraz pre miRNA z každej vzorky boli vypočítané normalizáciou podľa RNU44 vyjadrenia vnútornej kontroly, a relatívnej hodnoty kvantifikácie boli vynesené. Rozdiely medzi nádorom a normálne tkanivá boli analyzované pomocou Wilcoxonova uzavreté pary testu. Krivka prežitia Kaplan-Meier bol vytvorený prevedením regresnej analýzy pomerného rizika Cox pre vyhodnotenie hladiny expresie Mir-21 a mier-181b sa miera prežitia. Štatistická významnosť bola zriadená na P Hotel <0,05. V každom teste

Výsledky a diskusia

obrovské množstvo úsilia bolo zamerané na objavovanie prediktívnych a prognostických biomarkerov pre žalúdočných rakoviny [19]. Vzhľadom k spoluúčasti ochorenia rakoviny žalúdka, stále zostáva hlavnou úlohou identifikovať klinické užitočné biomarkery. S uznaním širokého vplyvu miRNA na multi cieľov a ciest, je to nášho záujmu identifikácia novú triedu prediktívnych a prognostických biomarkerov v žalúdočnej rakoviny založené na miRNA. Existuje niekoľko výhod používania miRNA ako biomarker v porovnaní s mRNA ako miRNA majú široký regulačnú funkciu, relatívne malé množstvo a lepšiu stabilitu v archívnych vzorkách FFPE [18]. Máme správy, že tu hladín expresie Mir-181b a Mir-21 predstavujú silné prognostické faktory u pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka na oboch S-1 /oxaliplatina a doxifluridín /oxaliplatina režimov. Klinické a patologické parametre u pacientov s karcinómom žalúdka liečených doxifluridín /oxaliplatinou alebo S-1 /Oxaliplatin boli uvedené v tabuľke 1.

Diferenciálne expresie miRNA v karcinómu žalúdka

starostlivo vybraných
číslo Mirny kandidátov, ktoré boli predchádzajúce hlásené byť spájaný s chemorezistence báze fluóropyrimidínmi u kolorektálneho karcinómu [9], [10], [11], [12], [13]. Hladiny expresie miRNA boli kvantifikované pomocou reálnom čase QRT-PCR analýzou za použitia celkovej RNA extrahované zo vzoriek žalúdočnej rakovina FFPE a normálne žalúdočné tkaniva ako kontroly. Hladiny expresie miRNA boli ďalej normalizované pomocou ovládacieho RNU44 vnútorné. Väčšina miRNA (napr. MIR-140, MIR-200 ° C) nevyčíslujeme znázornené diferenciálnej expresie medzi normálnou a nádorového tkaniva (obrázok 1). Expresia významného miRNA, MIR-200 ° C, bola významne znížená u karcinómu žalúdka. MIR-200C bola označená priamo spojená s cheomosensitivity a epiteliálne-to-mezenchýme prechodu (EMT) [20]. Expresie MIR-181b ( P
= 0,022) a mier-21 ( P
= 0,0029) sa najvýraznejšie nadmerne exprimovaný u nádorov žalúdka v porovnaní s normálnou žalúdočné tkaniva (obrázok 2). Naše výsledky sú v súlade s predchádzajúcimi správami, že tieto miRNA boli deregulovaných u karcinómu žalúdka [21].

Združenie Mir-21 a mier-181b s odpoveďou na S-1 /Oxaliplatin a doxifluridín /Oxaliplatin liečebného režimu

celková miera objektívnej odpovede (CR + PR) pacientov liečených s-1 /Oxaliplatina bola 33,3% (CR + PR) vs.
17,6% (CR + PR) s doxifluridín /Oxaliplatinu pre fázu III a pacientov s karcinómom žalúdka IV. Vybrali sme niekoľko miRNA, ktoré sa ukázali byť spájaný s chemorezistence so sídlom fluoropyrimidinovým v rakovine hrubého čreva [9], [10], [11], [12], [13] a systematicky vyhodnocované ich možnému vzťahu s doxifluridín /Oxaliplatinu a S -1 /Oxaliplatina u karcinómu žalúdka. Nízka expresie MIR-21 ( P
= 0,001) a mier-181b ( P
= 0,001) boli významne spojené s S-1 /oxaliplatina responder (tabuľka 2). To je veľmi konzistentné s predchádzajúce správy, že mier-181b expresie bola spojená s liečbou S1 u kolorektálneho karcinómu [8]. Bolo oznámené, že mier-181b je spojená s viacerými liekovej rezistencie (MDR), zacielením BCL2 [22]. S ohľadom na Mir-21, naše výsledky boli v súlade s nedávnou správou, že potlačenie Mir-21 anti-MIR sensitizes pankreatické rakoviny bunkových línií na gemcitabín (fluoropyrimidinovým analóg) liečbu [23]. Avšak, priaznivá odozva nemal vplyv na prežitie pacienta ako priemerné celkové prežívanie u pacientov liečených S-1 /Oxaliplatina (7,80 mesiac) bola podobná ako u pacientov liečených doxifluridín /oxaliplatina (7,30 mesiac). To nie je prekvapujúce, pretože často časovo priaznivá odozva neprekladá na podporu prežitie.

Mir-21 a mier-181b boli významne spojené s prežitím pacienta

Ak chcete zistiť, či niektoré z týchto miRNA majú potenciál ako prognostického biomarkeru u rakoviny žalúdka, sme vykonali analýzu prežitie pacienta s použitím krivky prežitia Kaplan-Meierovej od viac variantov Cox regresnej analýzy. Kaplan-Meierovej analýzy prežitia pomocou Coxovho regresie ukázala, že nízke hladiny MIR-21 výrazu (log rank test, pomer rizika: 0,17, CI = 0.06-0.45; P
= 0,0004) a mier-181b (Log rank test, pomer rizika: 0,37, CI = 0,16 - 0,87; P
= 0,018) sú úzko spojené s celkovým prežitím lepšieho pacientovho pre oba s-1 a režimy doxifluridín báze (obrázok 3). Význam Mir-21 a mier-181b u karcinómu žalúdka bol silne podporovaný nedávnej správy, že výrazy Mir-21 a mier-181b boli aktivované STAT3 sprostredkovaná IL-6. Mir-21 a mier-181b pôsobí ako epigenetické prepínač inhibovať Ptení a CYLD nádorové supresormi, čo vedie k zvýšeniu NF-kB aktivity potrebné na udržanie transformovaného stavu [24]. Ďalej bolo zistené, že expresia oboch Mir-21 a mier-181b je pozitívne súvisí s ohľadom na hodnote výrazu na základe štatistickej analýzy (Pearson korelácia r = 0,38, P
= 0,018; Spearmanův korelačný r _{s = 0,38, P
= 0,018). Je celkom možné, že mier-21 a mier-181b pôsobí ako epigenetické spínač v rozvoju rakoviny žalúdka a prispievajú k chemorezistence moduláciou kľúčové cieľové tlmiacich nádory génov, ako sú PDCD4, ANP32A a SMARCA4 génov [25]. Zvýšené MIR-21 expresie bola zaznamenaná u mnohých typov nádorov, čo naznačuje, že je dôležité MIR-21 ako bona fide onkogénu. To bolo hlásené MIR-21 bol spájaný s H. pylori
infekciu a rozvoj rakoviny žalúdka, čo naznačuje, že mier-21 by mohla spočívať epigenetické odkaz zápalu H. pylori
infekcie a nádoru začatí rakoviny žalúdka [26].}

Na záver sme sa hlásiť tu prvýkrát, že expresia Mir-181b a Mir-21 boli spojené s S-1 /Oxaliplatinu a doxifluridín /liečba Oxaliplatina a prežitie pacienta. Ďalej podporuje predstavu o potenciálnom význame Mir-181b a Mir-21 pri vývoji žalúdočných ochorení rakovinou. To vytvára základ pre ďalšie skúmanie podčiarknutie molekulárnej mechanizmus žalúdočnej vzniku rakoviny spojené s Mir-181b a Mir-21, a aby plne overiť naše poznatky k veľkej skupine, multicentrických klinických štúdií u pacientov. Mir-181b a mier-21 môžu mať tiež potenciál byť tak nové terapeutické ciele u karcinómu žalúdka.

Poďakovanie

Haifeng Deng, Mingyang Lu Bin Xu, Min Li, Jian Liu, Zhengguang Ak a Hongbing Shi poskytla vynikajúcu technickú pomoc.

• Ploche ONE: Mir-29a Inhibuje Cell proliferáciu a indukuje zastavenie bunkového cyklu cez znižujúce množstvo p42.3 v žalúdočnej rakoviny u ľudí
• Ploche ONE: Genomická Profilovanie LIEKU Submukózna invazívnej rakoviny žalúdka podľa založená na poli Komparatívna genomická hybridizácia