Финансирование:. Авторы не имеют никакой поддержки или финансирования сообщать
<р> конкурирующие интересы:. авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
Введение
<р> рак желудка (GC) является четвертым наиболее распространенным. рака и второй наиболее распространенной причиной смертности от онкологических заболеваний во всем мире [1] - [3]. Большинство пациентов или метастатическим заболевания на момент постановки диагноза [4], [5]. Комбинация оксалиплатина и 5-фторурацила, с и без эпирубицином, стал наиболее широко применяемый режим в химиотерапии первой линии распространенного рака желудка [6], [7]. Тем не менее, это комбинированное лечение имеет потенциал для значительных побочных эффектов и до сих пор несет ограниченную эффективность, в то время как прогноз пациентов остается мрачен медиана выживаемости около 10 месяцев [8] - [11]. В целях улучшения выживаемости и снижения токсичности, молекулярно таргетной терапии в настоящее время активно изучается для лечения рака желудка [12].
<Р> Микротрубочки уже давно считается целевой интерес для некоторых противоопухолевых препаратов из-за их универсальная роль в пролиферирующих клетках и их существенную роль в митозе [13] - [15]. Паклитаксел и доцетаксел классические ингибиторы микротрубочек, которые проявляют свою активность путем содействия полимеризации тубулина и стабилизации микротрубочек в результате фазового ареста G2-M и отмирания клеток [15]. Отмирания клеток является режим гибели клеток происходит именно при стадиях митоза, индуцированных ДНК повреждающих агентов и ядов шпинделя /митотические ингибиторы [16], [17]; это в основном зависит от каспазы, но в редких случаях может быть также каспазы независимой [18]. Паклитаксел был протестирован для продвинутых и рецидивирующих рака желудка с частотой ответа 43% в сочетании с 5-фторурацилом и фолиновой кислоты [9], [19]. По сравнению со скоростью отклика 38~45%, полученных в результате комбинации оксалиплатина с 5-фторурацилом и фолиновой кислоты, паклитаксела не приводит к превосходной выживания, но вызванные больше побочных эффектов, особенно у пожилых пациентов [9], [20] - [ ,,,0],22]. Паклитаксел требуется эмульгирование с растворителями, чтобы позволить внутривенное введение, которое привело к реакции гиперчувствительности и потенциально драматические побочные эффекты у пациентов [23], [24]. Наночастицы альбуминсвязанного (NAB) Паклитаксел представляет собой новый альбумин, стабилизированный, Cremophor свободных и растворимый в воде препарат в виде наночастиц паклитаксела. Он хорошо переносится без каких-либо реакций гиперчувствительности после внутривенного вливания [25]. Клинические и экспериментальные исследования показали, что по сравнению с паклитакселом на основе растворителя, наб-паклитаксел имел более высокое удерживание опухоли, более низкую токсичность [23], [26] и более сильное воздействие противоопухолевых на рак молочной железы, немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ), поджелудочной железы рак, меланома, головы и шеи рак [27] - [31]. Тем не менее, потенциальная роль НАБ-паклитаксела в раковых клетках желудка не проверяется, как еще
<р> статмин, микротрубочка-дестабилизацию фосфопротеином, является важным регулятором полимеризации и динамики микротрубочек [32] - [34]. , и было установлено, что связано с сопротивлением таксанов в некоторых типах опухолей за счет изменения связывание препарата и задержки фазового перехода G2-M [33], [35]. ингибирование статмин имели синергетический антиангиогенной и противоопухолевой активностью с таксолом [36]. Выражение статмин было установлено, присутствует в широком разнообразии опухолей человека, включая рак желудка, и, следовательно, может представлять собой привлекательную мишень для терапии рака [34], [37], [38]. Джеон и др. обнаружил, что статмин может служить в качестве прогностического маркера и потенциальной терапевтической мишени для рака желудка [37]. Фосфорилирование статмин уменьшает свои микротрубочек дестабилизирующий эффект, явление, которое также предписанную таксана активности [34].
<Р> В данном исследовании оценивали противоопухолевую активность НАБ-паклитаксела в желудочном раковых клетках человека в пробирке и в естественных условиях. Мы сравнили противоопухолевая эффективность НАБ-паклитаксела с другими цитотоксическими агентами на рост местной опухоли и выживаемость животных. Мы также измеряли экспрессию общего статмин и фосфо-статмин в пробирке и естественных условиях, чтобы оценить их роль в качестве прогностических маркеров в НАБ-паклитаксел противоопухолевой реакции.
культуре клеток и реагенты
<р> желудочные линии раковых клеток человека АГС, NCI-N87 и SNU16 были получены из американской коллекции типовых культур (АТСС, Роквилл, MD) и культивировали в среде RPMI 1640 (Sigma Chemical Co. Сент-Луис, Миссури ) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) при 37 ° C в увлажненной 5% CO <суб> 2 атмосферы. Наб-паклитаксел был приобретен у Abraxis BioScience (Лос-Анджелес, Калифорния). Оксалиплатин был приобретен у компании Sanofi Aventis (Бриджуотер, штат Нью-Джерси). Доцетаксел, эпирубицин и 5-фторурацил, были получены из местной аптеке. Реагент пролиферации клеток WST-1 был приобретен у фирмы Roche Diagnostic Corporation (Indianapolis, IN).
Клетки рака желудка (1 × 10 5 клеток на камеру) помещали в 4-х камерный слайд в регулярной среде роста. После 24-часового клетки обрабатывали-паклитаксел наб в течение 16 часов, а затем фиксировали в 4% параформальдегида. Клетки инкубировали с CAS блокирующим буфером с последующей 1-часовой инкубации с фосфо-статмин антителом (1:100) и 40-минутной инкубации с Су3 (1:200 разведение) вторичным антителом. Слайды были установлены с использованием монтажного раствора, содержащего 4 ', 6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI) (Invitrogen, Carlsbad, CA). Люминесцентной микроскопии был использован для обнаружения флуоресцентные сигналы, используя IX81 Olympus микроскоп, оснащенный Хамамацу Orca цифровой камеры (Hamamatsu Corporation, Бриджуотер, штат Нью-Джерси). Sub-сливающиеся монослои клеток обрабатывали-паклитаксел наб, оксалиплатина и эпирубицина. Клеточные лизаты и опухолевые лизаты получали, как описано ранее [40]. Супернатанты выделяли центрифугированием при 13000 оборотов в минуту, определяли концентрацию белка и равное количество общего белка разделяли с помощью SDS-PAGE. Белки переносили на мембраны ПВДФ (Bio-Rad, Hercules, CA), и мембраны блокировали в течение 1 ч в TBS-T. Мембраны инкубируют в течение ночи при 4 ° С со следующими антителами: общая статмин, фосфо-статмин (ser38), расщепляется поли (АДФ-рибоза) полимераза-1 (PARP-1), расщепляется каспазы-3 (все от Cell Signaling Technology , Beverly, MA), α-тубулина и β-актин (оба от Sigma, St. Louis, МО). Затем мембраны инкубировали с соответствующими HRP-конъюгированные вторичные антитела (Pierce биотехнологиям, Santa Cruz, CA) в течение одного часа. Специфические полосы были обнаружены с помощью расширенной chemoilluminescence реагента (ЭСЛ, Perkin Elmer Life Sciences, Boston, MA) на авторадиографического пленке. выживание животных анализ Статистический анализ Выражение статмин в клетках рака желудка Наб-паклитаксел ингибирует желудочную пролиферацию раковых клеток наб-паклитаксел индуцирует G2 арест и отмирания клеток в пробирке Для того, чтобы оценить основной механизм ингибирования роста путем NAB-паклитаксела, профиль клеточного цикла анализировали. Как показано на фигуре 2А, наб-паклитаксел (100 нМ) приводит к остановке клеточного цикла G2-M в SNU16 клетках. Процент пропидийиодидом положительных клеток в G2-фазе М увеличилась с 35,6 до 71,6 после того, как 100 нМ лечения-паклитаксел наб в течение 12 часов. Аналогичные изменения произошли в AGS и NCI-N87 клеток-паклитаксела наб и лечения доцетакселом, но не с оксалиплатином и лечения эпирубицина (цифры S1 и S2). Механизмы в естественных условиях противоопухолевой активности нАБ-паклитаксел были дополнительно изучены в опухолевых тканях, полученных из SNU16 и NCI-N87 ксенотрансплантатов. Значительное увеличение экспрессии фосфо-статмин наблюдалась в SNU16 (рис 4A) и NCI-N87 (рис 4б) ксенотрансплантатов опухолей с лечением НАБ-паклитаксела с помощью иммуногистохимического как и Вестерн-блот-анализов. наб-паклитаксел повышает выживаемость животных В первом исследовании выживаемости, медиана выживаемости SCID-NOD мышей было 24 дней в контрольной группе. Это увеличилось до 86 дней после того, как паклитаксел-наб лечения (р = 0,0004 в сравнении с контрольной группой, р = 0,0005 против оксалиплатина группы) и до 37,5 дней после лечения оксалиплатина (р = 0,0004 в сравнении с контрольной группой). Диапазон выживания группа также превосходит после того, как-паклитаксел наб лечения (диапазон: от 75 до 95 дней) по сравнению с лечением оксалиплатина. (Диапазон: от 34 до 41 дней) (рис 6A) Обсуждение
Вестерн-блот анализ
Подкожный рост опухоли исследование
<р> Все эксперименты на животных проводились в соответствии с руководящие принципы и утвержденные протоколы университета Техаса Юго-западного медицинского центра (Даллас, Техас) Институциональные уходу и использованию животных комитета (разрешение номер 2012-0081). Животных наблюдали ежедневно в течение всего эксперимента для любого признака бедствия. Женский SCID мышей (от 6 до 8 недель) были использованы для сравнительного моделирования роста подкожной опухоли. Клетки рака желудка (10 × 10 6 NCI-N87 или 20 × 10 6 SNU16 клеток) подкожно вводили в каждую мышь. Мыши были взвешены в два раза в неделю. Через четырнадцать дней после инъекции опухолевых клеток, все мыши имели измеримые опухоли (средний размер опухоли от 100 до 150 мм 3). Мыши были затем случайным образом сгруппированных (п = 6~8 на группу) и обрабатывают внутрибрюшинно PBS (контроль), НАБ-паклитаксел (10 мг /кг в 100 мкл PBS, 2 раза в неделю), оксалиплатина (5 мг /кг в 100 мкл PBS, 2 раза в неделю), и эпирубицин (1 мг /кг в 100 мкл PBS, 2 раза в неделю) в течение 14 дней. Размер опухоли измеряли два раза в неделю с помощью штангенциркуля, а объем опухоли (V) рассчитывали по формуле V = ½ [L × (W) 2], L = длина и Ш = ширина. Относительный объем опухоли (RTV) определяли по формуле RTV = V <югу> п /V <к югу> 0, где V <югу> 0 и V <к югу> 1 представляют собой объем опухоли в день 0 и последующий день измерения, соответственно. Степень ингибирования роста опухоли рассчитывали с использованием формулы (1-RTVT /RTVC) × 100%, где Т и С представляют лечебной и контрольной группой. После завершения лечения, у всех мышей умерщвляли с помощью CO2, опухоли были удалены, взвешивали, рассекали и обрабатывали для гистологических, иммуногистохимических и Вестерн-блот-анализа.
иммуногистохимического анализа
<р> образцы опухолевой ткани фиксировали в 4% параформальдегидом и заливали в парафин. Внутриопухолевой пролиферацию измеряли с помощью Ki67 ядерного антигена окрашиванием согласно протоколу производителя (Abcam, Cambridge, MA). срезы ткани Парафиновые вырезались (5 мкм), депарафинизировали, регидратации и антиген извлекается. Срезы ткани инкубировали с CAS блокирующим буфером с последующим 1-часовой инкубации с 1:200 разбавления первичной Ki67 или фосфорно-статмин антитела (1:200) и 40-минутной инкубации с Су3 (1:200 разбавления) вторичного антитела. Слайды были установлены с использованием монтажного раствора, содержащего 4 ', 6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI) (Invitrogen). Внутриопухолевой пролиферативная индекс и статмин активность оценивали путем подсчета положительных клеток из пяти различных полей высокой мощности (HPF) слепым методом. Внутриопухолевой апоптическая активность оценивали путем окрашивания срезов ткани с "Apoptag Апоптоз Detection Kit" в соответствии с (Millipore) инструкциями изготовителя. Люминесцентной микроскопии был использован для обнаружения флуоресцентные сигналы, используя IX81 Olympus микроскоп, оснащенный Хамамацу Orca цифровой камеры (Hamamatsu Corporation, Бриджуотер, штат Нью-Джерси) и вращающийся конфокальной блок DSU с помощью программного обеспечения Slidebook (Intelligent визуализации Инновации, Филадельфия, штат Пенсильвания).
<р> исследования выживаемости животных были проведены с использованием 6- до 8-недельных самок мышей SCID [41]. Мышей внутрибрюшинно вводили SNU16 (40 × 10 6) клетки и массы тела измеряли два раза в неделю. Через три недели после мышей инъекции опухолевых клеток были случайным образом группироваться (п = 6 до 8 на группу).
<Р> В первом исследовании выживаемости мышей обрабатывали внутрибрюшинно PBS (контроль), НАБ-паклитаксел (10 мг /кг в 100 мкл PBS, 2 раза в неделю) и оксалиплатина (5 мг /кг в 100 мкл PBS, 2 раза в неделю) в течение 2 недель. Во втором исследовании выживаемости мышей, получавших внутрибрюшинно PBS (контроль), НАБ-паклитаксел (10 мг /кг в 100 мкл PBS, 2 раза в неделю), доцетаксел (3 мг /кг в 100 мкл PBS, 2 раза в неделю ) или оксалиплатина (5 мг /кг в 100 мкл PBS, 2 раза в неделю) в течение 2 недель. Страдания животных сократилось на эвтаназии при повороте умирающие в соответствии с заранее определенными критериями, в том числе быстрой потери веса или увеличение (> 15%), отказ от еды и питья, вялость, неспособность оставаться в вертикальном положении и отсутствие силы. выживаемость животных оценивали с первого дня лечения до смерти.
анализ <р> Выживание оценивали с GraphPad Prism 5 Software (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния). В пробирке клетки данные пролиферации выражены как среднее ± стандартное отклонение. Статистический анализ проводили с помощью ANOVA для множественного сравнения групп и Т-тест Стьюдента для индивидуальной группы сравнения. Выживание группы сравнения проводили с помощью лог-рангового в рамках анализа типа Kaplan-Meier. были признаны 0,05 представляют статистически значимые различия групп
Результаты
<р> Анализ человеческих клеток рака желудка AGS, NCI-; Значения р &л. N87 и SNU16 показали, что все три линии выражены статмин. Никакой разницы в суммарном выражении статмин не было найдено среди этих трех клеточных линий. Экспрессия фосфо-статмин колебалась от клеточных линий, в следующем порядке: SNU16 > AGS > NCI-N87 клетки (Рис. 1А)
<р> Наб-паклитаксел ингибировали желудка пролиферацию раковых клеток в зависимости от дозы, и ингибирование пролиферации клеток появились следовать в том же порядке, как выражение фосфо-статмин (рис 1B). При 100 нМ концентрации ингибирования пролиферации клеток был 94,5, 66,7 и 41,8 процента в SNU16, AGS и клеток NCI-N87 соответственно. Наб-паклитаксел показал самую высокую антипролиферативное активность с низкой эффективной дозы найдены во всех 3-х клеточных линий тестировалось по сравнению с 5-fluouracil, оксалиплатина и эпирубицина. Микросхема <суб> 50 НАБ-паклитаксел был 5 нМ в SNU16, 23 нМ в AGS и 49 нМ в клетках NCI-N87, который был меньше, чем 5-fluouracil (6,46 мкМ в SNU16, > 10 мкМ в AGS и 10.2 мкМ в клетках NCI-N87), оксалиплатина (1,51 мкМ в SNU16, 1,64 мкМ в AGS и 1,05 мкМ в клетках NCI-N87) или эпирубицин (0,12 мкМ в SNU16, 0,16 мкМ в AGS и 0,25 мкМ в клетках NCI-N87) ( Рисунок 1С).
<Р> Влияние НАБ-паклитаксела на отмирания клеток, экспрессия фосфо -stathmin и связанных с апоптозом протеинов измеряли с помощью immunocystochemistry и Вестерн-блоттинга. Наб-паклитаксел лечение вызвало разрушение микротрубочек и митотических арестов в желудочном раковых клеток, как наблюдали ядро фрагментации и кариопикноза (рис 2В). Экспрессия фосфо-статмин была увеличена после того, как-паклитаксел наб лечения, а также высшим выражением фосфо-статмин было связано с большей степенью митотических арестов, фрагментация ядра или кариопикноза и гибели клеток (рис 2B и 2C). Ядерная фрагментации и кариопикноза имели место в 16,7% клеток с низким уровнем экспрессии фосфо-статмин, но в 95,7% клеток с высоким уровнем экспрессии фосфо-статмин (г = 0,672, р &ЛТ; 0,001). Существовал также доказательства, зависящее от времени повышенной экспрессии фосфо-статмин путем обработки стащить-паклитаксел (рис 2D).
<Р> Мы рассмотрели, если митотический гибель клеток, индуцированное NAB-паклитаксела может частично быть связано с индукцией апоптоза , Оценка PARP-1 и расщепление каспазы-3 расщеплением в качестве маркеров индукции апоптоза показало, что в раковых клетках желудка-паклитаксел наб, оксалиплатина и эпирубицина лечение привело к увеличению экспрессии обоих расщепляется PARP-1 и каспазой-3. Это выражение связанных с апоптозом протеинов появились после того, как выше-паклитаксел наб лечения по сравнению с оксалиплатина или эпирубицин лечения (Рисунок 2E).
Наб-паклитаксел ингибирует рост ксенотрансплантатов рака желудка
<р> В естественных условиях противоопухолевой эффекты нАБ-паклитаксела оценивали в мышиной модели ксенотрансплантата с использованием SNU16 клеток. Наб-паклитаксел терапию в дозе 10 мг /кг два раза в неделю в течение двух недель, хорошо переносится без явных признаков токсичности, судя по весу мыши и ежедневной оценки. После двухнедельного лечения в НАБ-паклитаксел терапия привела к статистически достоверному торможению роста опухоли (р = 0,0004), который был больше, чем у оксалиплатина (р = 0,0361) и эпирубицина (р = 0,032) по сравнению с контрольным носителем, соответственно (рис 3A). Степень ингибирования роста опухоли после 2-недельного лечения с паклитаксел-наб, оксалиплатина и эпирубицина было 77, 17,2 и 21,4 процента (р = 0,002), соответственно. Только-паклитаксел наб лечение создало уменьшение размера подкожных поражений по сравнению с их предустановленным размером опухоли. Средний вес опухоли значительно уменьшились обработкой стащить-паклитаксел (0,154 ± 0,075 г против 0,756 ± 0,232 г, р = 0,037) лечения, но не оксалиплатина (0,408 ± 0,12 г) или эпирубицин (0,46 ± 0,172 г) по сравнению с носителем управления, соответственно (фиг.3А). Мы также оценивали противоопухолевое действие НАБ-паклитаксела на NCI-N87 ксенотрансплантата мыши локальных опухолей. После двух недель лечения, паклитаксел-наб терапия привела к значительному торможению объема опухоли (р = 0,0023) (рис 3B) и скорость ингибирования роста опухоли 72,8 процента. Средний вес опухоли в группе лечения-паклитаксел наб была значительно ниже, чем в группе, получавшей наполнитель (0,093 ± 0,026 г против прогноза 0,288 ± 0,02 г, р = 0,0054) (рис 3б). Никаких существенных изменений в массе тела мыши не наблюдалось ни в одном из НАБ-паклитаксел, оксалиплатин или эпирубицин терапии групп.
Наб-паклитаксел индуцирует митотическую гибель клеток в естественных условиях
<Р> Опухоль ткани из-паклитаксел стащить обработанных мышей проявляли уменьшенную скорость пролиферации опухолевых клеток. Ki67 экспрессии на основе внутриопухолевые пролиферативный индекс снизился на 90,7% (р = 0,001) по сравнению с контрольной группой в НАБ-паклитаксел группе, получавшей, в отличие от 72,6% (р = 0,004) в оксалиплатина обработанной группе и 67,7% (р = 0,003 ) в группе, обработанной эпирубицин (рис 5А). Наб-паклитаксел вызвало более сильное ингибирующее действие на пролиферацию опухолевых клеток, чем оксалиплатина и эпирубицина.
<Р> Исследование апоптоза в опухолевых тканях показало, что индукция в апоптотических индекс составил 7,9 раза в группе паклитаксел-наб (р = 0,013 ), в 5,7 раза в оксалиплатин обработанных животных (р = 0,024), и 5,2-кратный в эпирубицином группе, получавшей (р = 0,042) по сравнению с базовой линией в контрольной группе (Фиг.5В).
<р> Во втором исследовании выживаемости, медиану выживание SCID-NOD мышей составил 31 дней в контрольной группе. Это увеличило до 93 дней после того, как-паклитаксел наб лечения (р = 0,0007 по сравнению с контролем и оксалиплатина группы, и р = 0,0416 по сравнению с доцетакселом группы), до 81 дней после лечения доцетакселом (р = 0.0007 против контроль) и до 40 дней лечение оксалиплатина (контрольная группа р = 0,038 по сравнению с). Диапазон выживания группа от 75 до 96 дней после того, как-паклитаксел наб лечения по сравнению с лечением доцетакселом (диапазон: от 74 до 93 дней) и лечения оксалиплатина (диапазон: от 35 до 45 дней). (Рисунок 6B)
<р> Распространенный рак желудка является опасным для жизни и представляет собой сложную задачу лечения. Традиционные двойные или тройные схемы цитотоксической химиотерапии имеют ограниченный эффект и могут вызвать побочные эффекты и химическую устойчивость [42] - [44]. Настоящее исследование ясно показывает, что набережная-паклитаксел имеет значительно более сильные эффекты противоопухолевых на желудочную линиях раковых клеток, чем используемые в настоящее время цитостатики оксалиплатина и эпирубицин в пробирке и в естественных условиях, измеренный антипролиферативным эффектами, апоптоз, отмирания клеток, локализованных противоопухолевой реакции и выживаемости связанной обременять опухоли.
<р> в пробирке исследования показали, что стащить-паклитаксел является сильнодействующим в подавлении пролиферации клеток для желудка клеточных линий человека, чем оксалиплатина и эпирубицина. SNU16 клетки более чувствительны к стащить-паклитаксел, чем клетки NCI-N87. Некоторые исследования показали, что статмин коррелировало с сопротивлением таксана и статмин нокдауна может увеличить чувствительность к таксана [33], [36]. Мы тестировали экспрессию статмин и не обнаружили никакой разницы между этими тремя клеточными линиями. Интересно отметить, что, когда мы исследовали экспрессию фосфо-статмин мы обнаружили, что способность НАБ-паклитаксела ингибировать в пролиферации клеток пробирке был в том же самом порядке ранга, как выражение фосфо-статмин в этих трех клеток рака желудка: SNU16 > AGS > NCI-N87. Таким образом, оказалось, что первоначально фосфо-статмин экспрессия коррелирует с паклитакселом-наб эффективностью, предоставляя некоторую поддержку гипотезе, что фосфорно-статмин может служить в качестве потенциального биомаркера для предсказания наб-паклитаксел противоопухолевый ответ в желудочном лечении рака.
<р> Мы провели исследование ксенотрансплантата NCI-N87 для оценки противоопухолевого эффекта нАБ-паклитаксела. Скорее неожиданно свойствам NAB-паклитаксел значительно ингибирует рост опухоли ксенотрансплантатов NCI-N87 по сравнению с контрольной группой. Эти несколько противоречивые результаты, кажется, предполагают, что в естественных условиях противоопухолевый эффект НАБ-паклитаксела при раке желудка может быть независимым от исходного выражения фосфо-статмин или общей статмин. Так как были испытаны только три клеточные линии, мы не можем сделать однозначный вывод о взаимосвязи между статмин или фосфорно-статмин и стащить-паклитаксел эффективность при раке желудка. Дальнейшие исследования с статмин разобранном выходами должны быть полезными для решения этого вопроса и исследовать роль статмин как биомаркером-паклитаксел наб эффективности.
<Р> В этом исследовании мы затем сравнивали противоопухолевый эффект НАБ паклитаксела с оксалиплатином и эпирубицина на SNU16 ксенотрансплантатных локальных опухолей. Наб-паклитаксел показали сильную противоопухолевую эффективность, чем оксалиплатина и эпирубицина, которая согласуется с результатами в пробирке пролиферации клеток и пролиферации опухолевых клеток тканей и данных апоптоза. Хотя 5-fluouracil является наиболее авторитетных препарат монотерапия в химиотерапевтического желудка лечения рака, ответ опухоли 5-фторурацил, как сообщается, недостаточно предсказан в SCID модели мыши в точку, где даже нет противоопухолевых эффектов не наблюдалось [45]. Цисплатин и оксалиплатин, более мощными индукторами апоптоза, а также наиболее часто используемые в желудочном лечения химиотерапевтического, были выбраны все чаще в качестве агентов для сравнения с новыми агентами, которые должны быть проверены [22], [45]. На основе растворителей паклитаксел имеет больше побочных эффектов и не добавлял показателей выживаемости по сравнению с оксалиплатина в клиническом лечении рака желудка [22]. В наших исследованиях оксалиплатина не отличался статистически от эпирубицина. Поэтому Мы выбираем оксалиплатина в качестве базового агента в исследовании выживаемости животных и обнаружили, что стащить-паклитаксел увеличил медиану выживаемости мыши около 40 дней, в течение оксалиплатина, более чем в два раза эффект, чем достигается за счет оксалиплатина. Доцетаксел, как представляется, более активным таксана, с более быстрым клеточного поглощения и внутриклеточного более удержания по сравнению с паклитакселом на основе растворителя [46]. Мы провели еще одно исследование для сравнения выживаемости противоопухолевые эффекты НАБ-паклитаксела с доцетакселом и обнаружили, что средняя продолжительность жизни была слегка вытянута после того, как-паклитаксел наб лечения (93 дня против 81 дней, р = 0,0416). Наши результаты согласуются с результатами недавнего этапа испытаний рака молочной железы, которые показали, что 100 мг /м 2-паклитаксел наб была длительной медиана общей выживаемости (относительный риск 0,575, p = 0,008) по сравнению с доцетакселом [47]. На основании полученных результатов, наб-паклитаксел показали сильную противоопухолевую эффективность при экспериментальном раке желудка и, как представляется, представляют собой достаточно мощный новый химиотерапевтическое средство для клинического лечения рака желудка.
<Р> статмин является важным микротрубочек микротрубочками дестабилизацию фосфопротеином. Когда статмин фосфорилируется, его микротрубочек дестабилизирующих активность снизилась [32], [34], и это может улучшить чувствительность к таксана. Статмин фосфорилируется в основном на циклин-зависимой протеинкиназы (CDKs) сайт связывания Ser38 в митозе [32], поэтому мы сосредоточили наше выражение анализы на остаток ser38. Мы обнаружили, что лечение-паклитаксел наб повышенной фосфо-статмин экспрессию в пробирке и в естественных условиях и коррелировала с митоза арестах, ядерной фрагментации, кариопикноза и отмирания клеток. Митотическое гибель клеток происходит в этих клетках с высоким уровнем экспрессии фосфо-статмин. Чжоу и др. [33] обнаружили, что выражение статмин вниз регулируется после STMN1 нокдаун гена в печеночной клетки карциномы добавляют 7,7-кратное чувствительности к стащить-паклитаксел и 2,7-кратное чувствительности на основе растворителя для паклитаксела, но не чувствительность к доксорубицина. Молекулярная природа, что приводит к гибели клеток при длительном митоза остается плохо определены [17], [32]. Сборки веретена контрольно-пропускные пункты уже давно полагают, играют решающую роль в этом процессе [48]. В этом исследовании, стащить-паклитаксела индуцированной фосфорилирования статмин в желудочном раковых клеток, которые, как ожидается, для стабилизации микротрубочек устройства, что в свою очередь может вызвать митотические аресты и гибель клеток спусковой крючок. Хотя эти ранние и предварительные данные, некоторая поддержка фосфо-статмин регулирования паклитаксел-наб противоопухолевая активность наблюдалась и заслуживает дальнейшей оценки.
<Р> В заключение, данное исследование показывает, что монотерапия-паклитаксел стащить имели более сильную противоопухолевую активность при экспериментальном раке желудка, чем текущий стандарт химиотерапевтических агентов оксалиплатина и эпирубицина, и, казалось высшим таксана по сравнению с доцетакселом. Эта сильная противоопухолевая активность поддерживает обоснование клинической оценки НАБ-паклитаксел в качестве перспективных микротрубочек ингибирующих агента при раке желудка.
Поддержка Информация рис S1
.
Наб-паклитаксел приводит к G2-M фазы ареста в раковых клетках желудка. (A) Гистограммы показывают профили клеточного цикла AGS и NCI-N87 клеток в разное время после того, как-паклитаксел наб лечения. Клетки рака желудка культивировали в течение 24 ч, а затем обрабатывали 100 нМ-паклитаксел наб в течение 12 часов или 24 часов. Анализ клеточного цикла проводили с помощью проточной цитометрии. Результаты, показанные являются репрезентативными двух независимых экспериментов. (Б) распределение клеточного цикла для клеток рака желудка, обработанных 100 нМ-паклитаксела наб. . Символ * знаки условия, при которых разложилась клетки
DOI: 10.1371 /journal.pone.0058037.s001
(TIF) Рисунок S2
.
прогрессию клеточного цикла клеток рака желудка, обработанных оксалиплатина, эпирубицин и доцетаксел. (A) Гистограммы показывают профили клеточного цикла SNU16 и AGS клеток после оксалиплатина, эпирубицин и лечение доцетаксела. Клетки рака желудка культивировали в течение 24 ч, а затем обрабатывали 10 мкМ-паклитаксел наб, оксалиплатин, эпирубицин и доцетаксел в течение 8 часов. Клеточный цикл проводили с помощью проточной цитометрии. Результаты, показанные являются репрезентативными двух независимых экспериментов.
Смесь на основе козьего молока полезна для здоровья кишечника младенцев
Влагалищные бактерии, способствующие преждевременным родам
Исследователи нашли новый способ защиты от болезней в модели рассеянного склероза.
Технология органных чипов улучшает исследование кишечника для персонализированной медицины
У женщин больше шансов заболеть длительным COVID?
Модуляция микробиоты и восстановление эубиоза могут помочь обуздать осложнения COVID-19
Язвенный колит и отсутствие микробов в кишечнике
Язвенный колит - серьезное изнурительное воспалительное заболевание кишечника, приводящее к парализующим симптомам, которые могут серьезно повлиять на качество жизни. Исследователи из Медицинской школ
Микробы легких могут помочь предсказать исходы у тяжелобольных
Новое исследование, опубликованное в Американский журнал респираторной медицины и реанимации показывает, что регистрация того, как организмы, живущие в легких, меняются по типу и количеству, может о
Недавно обнаруженные крупные фаги стирают границу между жизнью и неживой
Новое исследование, опубликованное в журнале Природа показывает, что существуют буквально сотни вирусов, достаточно больших, чтобы поглощать бактерии, и со свойствами, которые типичны для живого орг