Ploche ONE: SULF2 Metylácia je spojená s In vitro Cisplatina citlivosti a klinickej účinnosti, rakovina žalúdka u pacientov liečených Modified FOLFOX režime

abstraktné

Cieľ

Biomarkery spôsobilého vyhodnotiť pacientov, ktorí sú pravdepodobne reagovať na určité chemoterapeutikami by mohlo zlepšiť klinickú účinnosť. Tieto sulfatases (SULFs) zohrávajú kľúčovú úlohu v patogenéze rôznych ľudských rakovín. Tu sme sa zamerali našu šetrenie na prognostickú a prediktívne dopad SULF2
metylácie v rakovine žalúdka.

metódami

Promoter CPG ostrov metylácie SULF2
bolo analyzovaných 100 vzoriek s karcinómom žalúdka. in vitro
citlivosť k cisplatine, docetaxel, gemcitabín, Irinotecan a pemetrexedom boli stanovené testom histoculture reakciu na liek (HDRA). Okrem toho 56 pacientov s rakovinou žalúdka zmieša s modifikovaným FOLFOX režimu (raz za dva týždne oxaliplatinou a 5-FU a kyseliny folinovej) boli retrospektívne analyzované ďalej zhodnotiť prognostický a prediktívne dopad SULF2
metylácie v rakovine žalúdka.

Výsledky

metylovaných SULF2
( SULF2M
) bola zistená u 28 pacientov, zatiaľ čo zvyšných 72 pacientov ukázali nemethylovaný SULF2
( SULF2U
, metylácie sadzba: 28%). Vzorky s SULF2U
boli citlivejší na cisplatine než tie s SULF2M
(inhibícia sadzba: 48,80% oproti 38,15%, P
= 0,02), zatiaľ čo vzorky s SULF2M
boli citlivejší na irinotekan než SULF2U
(inhibícia sadzba: 53,61% oproti 40,92%, P
= 0,01). Neboli zistené žiadne súvislosť medzi SULF2
metylácie a in vitro
citlivosť na docetaxel, gemcitabín a pemetrexedu. Bolo zistené, SULF2
metylácie mať významný vzťah s cisplatinou účinnosť ( SULF2M
: 57,14%, SULF2U
: 80,56%, P
= 0,02 ) a irinotekan účinnosť ( SULF2M
: 89,29%, SULF2U
: 62,50%, P
= 0,01). Z 56 pacientov, ktorí dostávali upravený FOLFOX režim, významná súvislosť bola zistená medzi prežitím a SULF2
stav metylácie ( SULF2M:
309 dní, 95% CI = 236 až 382 dní; SULF2U:
481 dní, 95% CI = 418 až 490 dní; P
= 0,02). Multivariačný analýza ukázala, že SULF2
metylácie bol nezávislý prognostický faktor celkového prežitia u pacientov s karcinómom žalúdka liečení chemoterapiou na báze platiny.

Záver

SULF2
metylácie je negatívne spojené s citlivosťou cisplatinou in vitro
. SULF2
metylácie môže byť nový prognostický biomarker pre pacientov s rakovinou žalúdka liečených chemoterapiou na báze platiny

Citácia :. Shen J, J Wei Wang H, Yang Y, Yue G, Wang L , et al. (2013) SULF2
metylácie je spojená s In vitro
Cisplatina citlivosti a klinickej účinnosti, rakovina žalúdka u pacientov liečených Modified FOLFOX režimu. PLoS ONE 8 (10): e75564. doi: 10,1371 /journal.pone.0075564

Editor: Zhengdong Zhang, Nanjing Medical University, Čína

prijatá: 12. júna 2013; Prijaté: 14 augusta 2013; Uverejnené: 04.10.2013

Copyright: © 2013 Shen et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bola financovaná z dotácií z Národného Natural Science Foundation Číny (Grant No. 81220108023 a 81172094) a prvej šestke Talents projekt provincii Jiangsu (Grant č 2011ws005). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

karcinóm žalúdka je jednou z najčastejších príčin úmrtí na nádorové ochorenie na celom svete [1], [2]. Multimodálne liečebné protokoly, prevažne na báze platiny a 5-fluorouracil (5-FU), bolo preukázané, že predĺženie prežitia pacienta; Avšak, s ľubovoľnou kombináciou chemoterapeutických činidiel, je rýchlosť reakcie je len približne 30% až 50% [3], [4]. V snahe zlepšiť klinickú účinnosť, je dôležité a nevyhnutné pre identifikáciu biomarkerov spôsobilého vyhodnotiť pacientov, ktorí sú pravdepodobne reagovať na určité chemoterapeutickej látky [4] - [9].

heparansulfát proteoglykány (HSPGs ) sú coreceptors pre heparín viažuci rastovými faktormi a cytokínmi distribuované na povrchu buniek a v extracelulárnej matrici. Dve izoformy extracelulárnej sulfátu heparanu 6-O-endosulfatases (SULFs), SULF1 a SULF2, boli objavené u cicavcov. Oba proteíny sú vylučované na povrchu bunky k modulácii sulfáciou HSPGs [10]. Hoci predchádzajúce správy boli jednoznačne zdôraznila kritickú úlohu, ktorú SULFs hrajú v patogenéze celého radu ľudských nádorov, názory na rolu SULFs v rozvoju rakoviny boli trochu polarizované. Niektoré dôkazy ukazujú, že SULFs sú negatívne regulátory rastu nádorových buniek, a že nadmerná expresia SULFs v nádorových bunkách inhibuje rast buniek o deregulácii niekoľko faktorov, vrátane FGF-2, HB-EGF a HGF [11] - [13]. Iné štúdie zastávajú názor, že SULFs sú pozitívne regulátory oncogenetic signálnych dráh, vrátane Wnt, BMP, ježko a GDNF [14] - [16], a zvýšená expresia SULFs je prevládajúce v rôznych druhov rakoviny, vrátane žalúdka, hepatocelulárny, pankreatické a prsníka rakoviny, non-small karcinóm pľúc (NSCLC) a nádory hlavy a krku [10], [13], [17] - [20]. Vysoká expresia SULF2 bola spojená so zlou prežitia u pacientov s hepatocelulárnym karcinómom a nemalobunkovým karcinómom pľúc [18], [20]. Dostupné dôkazy o stave a expresných úrovní metylácie SULFs
u karcinómu žalúdka, ale sú non-presvedčivé, a prognostický alebo prediktívne hodnota SULFs
pre predikciu chemosensitivity zostáva neznámy.

v tejto štúdii sme analyzovali promočného CPG ostrovný metylácie SULF2
génu kódujúceho SULF2 endosulfatase a jeho vzťahu s in vitro
citlivosti na cisplatinou, docetaxelom , gemcitabín, Irinotecan, a pemetrexed v 100 vzorkách rakovina žalúdka u ľudí. Za týmto účelom sme vykonali sériu vitro
testy citlivosti na čerstvo odobraté žalúdočné nádorové tkanivá a vyhodnotiť možné využitie SULF2
stav metylácie pre predpovedanie chemoterapiou účinnosť tam agentov. Potom sme retrospektívne analyzovali SULF2
metylácie u skupiny 56 pacientov s karcinómom žalúdka liečených s upravenou FOLFOX režimu, a dospel k záveru, že SULF2U
slúži ako nezávislý prognostický biomarkeru u pacientov s karcinómom žalúdka liečených modifikovaný FOLFOX režim.

materiály a metódy

Ethics Prehlásenie

Všetky výskum na človeku účastníkmi boli schválené Ochranné výborom Human pre výskum Drum Tower Hospital pridružená k Medical School Nanjing University a písomný informovaný súhlas bol získaný od všetkých pacientov.

pacienti a tkanivové vzorky

boli zaradení pacienti boli tí prechádza gastrektómii v odboru všeobecnej chirurgie Drum Tower nemocnice, Nanjing, Čína v období od augusta 2010 do októbra 2011. kritériá oprávnenosti pre zápis do štúdie zahrnuté nasledovné parametre: (1) staroba > 18 rokov; (2) histologicky potvrdené adenokarcinómom žalúdka mucinózního alebo pečatný prsteň bunky adenokarcinóm; (3) žiadne predchádzajúce alebo súbežná malignity s výnimkou karcinómu žalúdka; (4) bez predchádzajúcej histórie chemoterapiu alebo rádioterapiu, a to buď adjuvantnej alebo paliatívnej; a (5) zodpovedajúce funkcie všetkých dôležitých orgánov. Vzorky tkaniva boli extrahované z 100 čerstvo odobratých nádorov žalúdka. Každá nádorové tkanivo bola rozdelená do dvoch častí: (1) jedna časť sa udržiava vo vyváženom soľnom roztoku a 4 ° C Hanksův s 1% penicilín /streptomycín po odbere, a potom odoslané do laboratória v priebehu 15 minút v 4 ° C počas in vitro
vyhodnotenie chemosenzitivity testom histoculture reakciu na liek (HDRA) [21], [22]; (2) zostávajúca časť bola podaná do formalínom fixovaných parafínových (FFPE) nádorových blokov pre patologické pozorovanie a detekciu metylácie. Retrospektívne sme preskúmané lekárske záznamy pacienta a chirurgia správy odhaľujúce klinické a histopatologické dáta, vrátane pohlavia, histológie, nádoru mieste, štádium, histologického stupňa a lymfatických uzlín. Nádory boli roztriedené do skupín podľa Medzinárodnej únie proti rakovine (UICC) TNM klasifikácie. Písomný informovaný súhlas bol získaný od všetkých pacientov a protokoly pre túto štúdiu boli schválené Ochranné Výboru pre ľudské výskum veže nemocnice Drum.

HDRA

HDRA postupy boli vykonávané ako bolo oznámené predtým podľa Furukawa et al [21], [22]. Stručne povedané, čerstvé nádorové tkanivá boli dvakrát premyté vyváženým soľným roztokom Hanksův a mleté ​​na malé kúsky s hmotnosťou približne 10 mg hmotnosti a 0,5 mm v priemere, ktoré potom boli umiestnené na pripravenom kolagénu (Health Design, Rochester, NY) povrchy prichádzajúce do 24. no microplates. Optimálna koncentrácia liekov používaných na odlíšenie in vitro
citlivosť a odolnosť proti bolo 20 ug /ml cisplatiny [23], 100 ug /ml docetaxelu [22], 50 ug /ml gemcitabínu [23], 20 ug /ml irinotekanu [23], a 400 ug /ml pemetrexedu [5], podľa jeho maximálna koncentrácia v plazme u pacientov. Cisplatina, docetaxel a irinotekan boli získané z Jiangsu Hengrui Medicine Company (Jiangsu, Čína), zatiaľ čo pemetrexed a gemcitabín boli získané od Eli Lilly (Shanghai, Čína). 8 paralelných kultivačné jamky boli použité pre každú koncentráciu liečiva, ako aj na kontrolu. Doštičky boli inkubované po dobu 7 dní pri teplote 37 ° C v prítomnosti liečiv rozpustených v médiu RPMI 1640 obsahujúcom 20% fetálneho teľacieho séra a ponechaná vo zvlhčenej atmosfére obsahujúcej 95% vzduchu, 5% CO _{2. Po histoculture, 100 ul typu I kolagenázu (0,1 mg /ml, Sigma, Shanghai, Čína) a 100 ul 3- (4,5-dimetyl-2-thiazotyl) -2,5-difenyl-2H-tetrazoliumbromid ( MTT) roztoku (5 mg /ml, Sigma, Shanghai, Čína) bol pridaný do každej kultivačnej jamky a inkubuje sa po dobu ďalších 16 hodín. Po extrakcii s dimetylsulfoxid Absorbancia roztoku v každej jamke bola odpočítaná pri 540 nm.}

Vyhodnotenie citlivosti na protirakovinové činidlá vo HDRA

Absorbancia na gram kultivované nádorové tkanivá bola vypočítaná z priemernej absorbancie tkaniva od 8 paralelných kultivačných jamiek, a hmotnosť nádorové tkanivo bola stanovená pred kultúry. Miera inhibícia každého protirakovinového činidla, bola vypočítaná pomocou nasledujúceho vzorca: Inhibícia rýchlosť (%) = (1-T /C) x 100, kde T je priemerná absorbancia nádor /hmotnosť a C je priemerná absorbancie kontrolného nádoru /hmotnosť. Miera inhibícia cut-off používaných na rozlíšenie citlivej a odolné prípady boli prijaté na 30%, 40%, 50% a 60% u každého testovaného lieku. in vitro
Rýchlosť Účinnosť bola tiež odhadli na inhibičného rýchlosti cut-off nasledovne :. Miera účinnosť (%) = počet citlivých prípadov /celkový počet prípadov

pacientov chemoterapie

zo všetkých pacientov, 56 s Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) performance status (PS) ≤2 dostal upravenú FOLFOX (kombinácia 5-FU a platiny) chemoterapia po resekcii primárnych nádorov takto: oxaliplatina 85 mgm ^{-2 a folínová kyselina 200 mgm -2 ako 2 h infúzie v deň 1, nasleduje 22 h infúzia 5-FU 2000 mgm -2 v dňoch 1 a 2, každé dva týždne. Títo 56 pacienti boli ďalej sledovaní a ich doba prežitia bola vypočítaná odo dňa diagnózy k dátumu posledného nadväzujúcich alebo smrť z akejkoľvek príčiny.}

DNA Ťažba a úprava

Three 7 um rezy boli pripravené z primárneho nádoru blokov, ktoré obsahovali aspoň 80% nádorových buniek. Po hematoxylín-eozín, rakovinové časti boli microdissected a prenesie sa do mikroskúmavky. DNA bola izolovaná rutinne a potom bol chemicky modifikovaný síranu sodného, ​​previesť všetky nemethylované cytozín sa uracil pri ponechaní methylcytosines nezmenenej [18]. Potom boli skladované pri -20 ° C pre ďalšiu analýzu.

Metylácia-špecifické PCR (MSP)

MSP sa vykonáva na stanovenie metylačného statusu SULF2
použitím Prism 7300HT Sequence Detection System (Applied Biosystems ABI). Každá reakcia PCR obsahovala genómovej DNA 2 pl, SYBR Green PCR Mix (Takara, Japonsko), 10 ul, 7,7 ul vody, a primery 0,15 ul (10 pmol /l). Podmienky PCR boli 95 ° C počas 10 minút, nasledovalo 45 cyklov pri 59 ° C počas 30 s, 72 ° C počas 30 s a 95 ° C počas 30 s. Primery pre SULF2
metylovaného PCR (Takara, Japonsko) boli nasledujúce: predná časť 5 'TAAGTGTTTTTTTTATAGCGGC 3', reverzné 5'TACCGTAATTTCCGCTATC 3 '. Primery pre SULF2
nemethylovaný PCR (Takara, Japonsko) boli nasledujúce: dopredu 5 'GTTTATAAGTGTTTTTTTATAGTGGT3', reverzné 5'TACCATAATTTCCACTATCCCT 3 '. Každá šarža reakcia zahŕňala pozitívna kontrola zo metyltransferázy (M.SssI) -treated ľudskej genómovej DNA (plne metylovaných), negatívnu kontrolu zo vzoriek DNA, ktoré boli potvrdené ako nemethylovaný a ďalšie negatívne kontrola bez DNA. Všetky testy boli vykonávané v duplikátu. Výsledky boli overené pri vybraných vzoriek prostredníctvom kombinovanej bisulfitová modifikácie a bisulfitová sekvencovania.

Štatistická analýza

Hodnoty boli vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka. Rozdiely v inhibičnej ceny medzi skupinami boli hodnotené za použitia t-testu. Možné združenia SULF2 metylácie s klinickými charakteristikami a in vitro
chemosensitivity účinnosti boli analyzované pomocou Fisherovho exaktného testu pravdepodobnosti. Všetky štatistické testy boli obojstranné, a hodnota P menšie ako 0,05 boli považované za štatisticky významné. Štatistická analýza bola vykonaná pomocou SPSS, verzia 16.0.

Výsledky

Charakteristika pacientov

Charakteristiky všetkých pacientov sú uvedené v tabuľke 1. Väčšina pacientov boli muži (73%), a prevládajúce histológie bol adenokarcinóm (79%). V 35 (35%) pacientov, nádor bol umiestnený v distálnom žalúdku, v 38 (38%) v proximálnom žalúdku, a u 27 (27%) v celom žalúdku. Šesťdesiat tri (63%) pacientov malo štádium III alebo IV ochorenia. Metastázy do lymfatických uzlín boli prítomné v 75 (75%) pacientov. Methylata SULF2
( SULF2M
) bola zistená u 28 pacientov, zatiaľ čo zvyšných 72 pacientov ukázali nemethylovaný SULF2
( SULF2U
metylácie rýchlosť: 28 %). RT-PCR amplifikácie krivky SULF2M stroje a SULF2U
bolo uvedené na obrázku S1. Nebol zistený žiadny vzťah medzi SULF2
metylácie a niektorú z charakteristík pacientov, vrátane pohlavia, histológie, nádoru mieste, štádium, histologického stupňa a lymfatických uzlín.

in vitro
Účinnosť Rate testovaných liečivách

In vitro
citlivosť na cisplatinu, docetaxel, gemcitabín, Irinotecan a pemetrexedu bol úspešne testovaný vo všetkých vzorkách. Miera inhibícia znamená pre každý testovaný liek, sú uvedené v tabuľke 2. Vzorky sa SULF2U
boli citlivejšie na cisplatinu, než tie s SULF2M
(48,80% oproti 38,15%, P
= 0,02), zatiaľ čo vzorky s SULF2M
boli citlivejší na irinotekan než SULF2U
(53,61% oproti 40,92%, P
= 0,01, tabuľka 2 a obrázok 1). Nebol zistený žiadny vzťah medzi SULF2
metylácie a in vitro
citlivosť na docetaxel, gemcitabín alebo pemetrexedu (tabuľka 2). Ako je uvedené v tabuľke 3, nebol zistený žiadny vzťah medzi mierou inhibície pozorovaná pre protirakovinový činidlá a niektoré z klinických charakteristík.

Ak chcete ďalej skúmať možný vzťah medzi SULF2
metylácie a cisplatina alebo irinotekan citlivosť, bola skúmaná vitro
rýchlosť každej koncentrácie liečiva v účinnosť zriaďovanie rôzne sadzby inhibičný cut-off (tabuľka 4). Bola prijatá štyri rôzne limity: 30%, 40%, 50% a 60%. V cut-off 30% mierou inhibícia, Bolo zistené, SULF2
metylácie mať významný vzťah s cisplatinou účinnosť ( SULF2M
: 57,14%, SULF2U
: 80.56 %, P
= 0,02) a irinotekan účinnosť ( SULF2M
: 89,29%, SULF2U
: 62,50%, P
= 0,01, Obrázok 2 a tabuľka 4). V cut-off 40%, 50% a 60% miera inhibícia, tam bol trend, že SULF2M
vzorky vykázali vyššiu účinnosť irinotekan, ale nižšiu cisplatinu účinnosť ako je SULF2U
vzoriek (tabuľka 4).

Združenie SULF2
Metylácia klinickou odpoveďou na chemoterapiu

z 56 pacientov, ktorí dostávali upravený FOLFOX režim, stredná doba prežitia bola 434 dní ( rozsah: 111-641 dní). Významný asociácia bola pozorovaná medzi prežitím a mieste nádoru ( P
= 0,01). Nebola nájdená žiadna iná súvislosť medzi klinickými charakteristikami a prežitie (Tabuľka 5 a Obrázok 3). SULF2M
bola zistená u 19 pacientov, zatiaľ čo SULF2U
bola nájdená u 37 pacientov ( SULF2
metylácie rýchlosť: 34%). Významný asociácia bola pozorovaná medzi prežitím a SULF2
metylačného statusu. Medián celkového prežívania bol 309 dní (95% CI = 236 až 382 dní) u pacientov s SULF2M stroje a 481 dní (95% CI = 418 až 490 dní) pre tie s SULF2U
( P = 0,02
, obrázok 3). S použitím ako jednorozmerné a viacrozmerné Cox proporcionálne analýzy nebezpečenstvo, že vzal do úvahy vek, pohlavie, nádoru mieste, štádium, histologického stupňa, lymfatických uzlín a SULF2
metylácie ako kovariátov, nádoru mieste a SULF2
metylácie zostalo značné markery celkového prežitia u pacientov s karcinómom žalúdka liečení chemoterapiou na báze platiny (tabuľka 6).

Diskusia

Hoci predchádzajúce štúdie ukázali, že zapojenie SULF2 u rakoviny patogenézy, jeho hodnota pre chemosenzitivity predikcie zostáva nejasný. Táto štúdia sa zameriava na promótor CPG ostrovné metylácie SULF2
ako potenciálneho biomarkeru rakoviny žalúdka. Hlavným zistením tejto štúdie ukazujú, že: (i) miera SULF2M
v ľudskej rakoviny žalúdka sa pohybuje okolo 30%; (Ii) prvý dôkazy o SULF2U
je spojená s cisplatinou citlivosťou rakoviny; (Iii) dôkazy o SULF2M
je spojená s irinotekanom citlivosťou v karcinómu žalúdka; (Iv) spätná štúdie a validácia SULF2
metylácie v kohorte 56 pacientov s rakovinou žalúdka, čo nám umožnilo zistiť, že SULF2U
je nezávislý prognostický biomarker u pacientov s rakovinou žalúdka liečených s upravenou FOLFOX režimu.

v predchádzajúcich štúdiách rakoviny žalúdka, zistenia týkajúce sa úrovne stavu metylácie a expresných SULFs
boli nepresvedčivé. V jednej štúdii iba 13 čoskoro-predstaviť prsníka a rakoviny žalúdka, z ktorých väčšina bola štádiu I, boli analyzované semikvantitatívny RT-PCR za SULF1
výraz [24]. Ukázalo sa, že nízka expresia SULF1
bol prevláda v týchto dvoch typov rakoviny. V inej štúdii expresie oboch SULF1 stroje a SULF2
mRNA bola stanovená pomocou real-time RT-PCR pre veľké skupiny žalúdočné rakovinové tkanive, zistenie, že SULFs
boli vyjadrené na vyššej úrovni v karcinómu žalúdka v porovnaní s normálnymi tkanivami. V tejto štúdii sme zistili, skúmaním SULF2
metylácie v 100 vzoriek s karcinómom žalúdka, že rýchlosť SULF2M
bola približne o 30%, čo ukazuje, že prevažujú karcinómu žalúdka boli SULF2U
. Nedávne štúdie integrovaných genómovej analýzy bolo zistené, že SULF2
pôsobí ako downstream efektor p53, a že aktivácia p53 by mohlo viesť k tomu, SULF2U stroje a up-regulácia
. Možný vzťah medzi p53 a SULF2 rastového faktora signálnej dráhy navrhol možnú úlohu SULF2 v rozvoju rakoviny a výsledok pacientov s rakovinou "[25]. Vzťah medzi SULF2
unmethylation a SULF2
up-reguláciu je potrebné ďalej testovať v týchto vzorkách. Rôzne úrovne expresie a metylácie stav SULF2
medzi nádorom a normálne tkanivo tiež je potrebné ďalej overiť.

Štúdium na SULF2
metylácie ako chemosensitivity prediktor sú zriedkavé. Metylácia SULF2
promótor je spájaná s lepšou prežitia pacientov po resekcii adenokarcinóm pľúc, a tiež s marginálne zlepšenie prežitia pokročilého NSCLC pacientov, ktorí dostávali štandardnú chemoterapia (pomer rizika = 0,63, p
= 0,07) [18]. Následné štúdie preukázali, že NSCLC bunkové línie s SULF2M
bola 134-krát viac citlivá na inhibítor topoizomerázy I, ako tie s SULF2U
. V tejto štúdii sme preukázali, že gastrických nádorov s SULF2M
sú citlivejšie na Irinotecan, než tie s SULF2U
. Ďalej sme ukázali prvýkrát, že SULF2
metylácie je tiež potenciálny biomarker prediktívne pre účinnosť cisplatiny. Žalúdočné nádory s SULF2U
boli citlivejší na cisplatine než tie s SULF2M stroje a rakovina žalúdka u pacientov s SULF2U
ukázali nižšiu úmrtnosť pri chemoterapii na báze platiny. Aj keď bolo identifikovaných niekoľko prognostické markery pre cisplatinu, ako je napríklad ERCC1 [7], BRCA1 [4], [26], [27] a XRCC1 [28] - [30], so zreteľom na ceny relatívne nízkej odozvy bežne používané platiny /5FU založené na neoadjuvantná liečbu protokol pre pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka, je naliehavo potrebná identifikácia biomarkerov predvídať reakciu. Objav novej prediktívneho biomarkeru, ktorý môže byť vyskúšaná analýzou metylácie je zaujímavý a doplnkové. Dôvodom, prečo SULF2
unmethylation zvyšuje citlivosť nádoru cisplatiny môže ležať na ubiquitin konjugáciou enzýmov (UBE). Bolo oznámené, že SULF2
metylácie vedie k zvýšenej expresii UBE [18]. UBE pridal ubikvitin k určitým lyzínu a bol zapojený do opráv DNA, mutagenézy a proliferáciu buniek. Nadmerná expresia určitých UBEs, ako RAD6B, by mohlo mať za následok významnú rezistenciu k cisplatine [31]. Ďalšie štúdie by mali byť vykonané, aby vyšetrila molekulárnej mechanizmus SULF2M
indukovaná rezistencia cisplatina.

Výrazný synergický efekt cisplatiny a DNA metyltransferázy (DNMT) inhibítory 5-aza-dC (DAC) na životaschopnosť buniek bola pozorovaná u cisplatiny rezistentné AGS bunkovej línii, ale nie v cisplatinou citlivej bunkovej línie MKN28 [32]. Dáta z analýzy schopnosť tvorby kolónií ukázala, že Vyradenie DNMT1 spôsobila zvýšenie citlivosti cisplatiny [32]. Molekulárna mechanizmus zostáva nejasný. Avšak, vzťah medzi SULF2
metylácie a cisplatinou citlivosť možno čiastočne vysvetliť tento jav. Liečba rakoviny žalúdka s inhibítormi DNMT by mohlo viesť k demetyláciu SULF2
a v dôsledku toho zvýšiť citlivosť na cisplatiny. Teda, navyše k prediktívne dopad, naše dáta tiež podporuje začlenenie inhibítora DNMT v bežných liečebných protokolov pre aspoň podskupiny pacientov s karcinómom žalúdka.

Na záver, naše štúdie poskytuje nové dôkazy, že em <> SULF2
metylácie je negatívne spojené s citlivosťou cisplatinou in vitro
. SULF2
metylácie je potenciálnym prognostickým biomarker pre pacientov s rakovinou žalúdka liečených chemoterapiou na báze platiny.

Podporné informácie
Obrázok S1.
RT-PCR amplifikácie krivky SULF2M a SULF2U. Červená krivka predstavuje amplifikáciu SULF2M a modrá krivka predstavuje amplifikáciu SULF2U. Obr S1A ukazuje amplifikačnej krivky vzorky SULF2M; Obrázok S1B ukazuje amplifikačnej krivky vzorky s SULF2U
doi :. 10,1371 /journal.pone.0075564.s001
(TIF)

• Ploche ONE: Aktivácia STAT3 v rakovina žalúdka ľudských bunkách pomocou interleukínu (IL) -6-Type cytokínov Signalizačné koreluje s klinickými Implications
• Ploche ONE: Tetrandrine indukuje Mitochondrie sprostredkovaná apoptóza v rakovina žalúdka u ľudí BGC-823 Cells