Ploche ONE: Tetrandrine indukuje Mitochondrie sprostredkovaná apoptóza v rakovina žalúdka u ľudí BGC-823 Cells

abstraktné

Tetrandrine, bis-benzylisoquinolinových alkaloid izolovaný od sušeného koreňa Hang-Fang-Chi ( Stephanie
tetrandra
S. Moore), bolo hlásené, že majú protirakovinové účinky na mnohých nádorov. V tejto štúdii sme skúmali tetrandrine indukovanú apoptózu v ľudskej rakovine žalúdka BGC-823 bunky in vitro stroje a in vivo
. Výsledky ukázali, že tetrandrine životaschopnosť významne inhibovala bunky v dávke a je závislý na čase a indukované apoptózy. To zvýšilo apoptózu; upregulace Bax, Bak a Bad; a zníženie expresie Bcl-2 a Bcl-XL na BGC-823 buniek. Okrem toho, tetrandrine zvýšená aktivácia kaspázy-3 a -9, uvoľňovanie cytochrómu c stroje a zosilnenie Apafi-1, čo naznačuje, že apoptóza indukovaná tetrandrine súvisel s mitochondriálnej dráhy. Medzitým predčistenia s pan-kaspasy inhibítora z-VAD-FMK v BGC-823 buniek zníženej tetrandrine indukovanú apoptózu tým, že blokuje aktiváciu kaspázy. Okrem toho, tetrandrine účinne inhibuje rast nádoru prostredníctvom indukcie apoptózy, ktorá bola overená imunohistochemické analýzou v modeli nahých myší xenoimplantátu. Celkovo vzaté, sme dospeli k záveru, že tetrandrine významne inhibujú proliferáciu buniek karcinómu žalúdka BGC-823 cez mitochondrie závislé apoptózy, ktorá môže hrať úlohu v žalúdočnej sľubné terapii rakoviny

Citácia :. Qin R, Shen H, Cao Y, Y Fang, Li H, Chen Q, et al. (2013) Tetrandrine indukuje Mitochondrie sprostredkovaná apoptóza v rakovina žalúdka u ľudí BGC-823 buniek. PLoS ONE 8 (10): e76486. doi: 10,1371 /journal.pone.0076486

Editor: Lucia R. Languino, Thomas Jefferson University, United States of America

prijatá: 16.prosince 2012; Prijaté: 27 augusta 2013; Uverejnené: 01.10.2013

Copyright: © 2013 Qin et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bol podporený z týchto grantov: granty z Národného Natural Science Foundation Číny (81070423 a 81101677), dotácií od prírodného Science Foundation v provincii Ťiang-su (BK 2010332). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

V Číne, rakovina žalúdka, jeden z najbežnejších zhubných nádorov, vyplývajúcej z nahromadenia genetických a epigenetických udalostí, má ešte stále vysokú incidenciu a úmrtnosť [1-3]. Existuje niekoľko faktorov, ktoré spôsobujú vznik karcinómu žalúdka, ako je napríklad Helicobacter pylori
infekcie, strava, fajčenie, a tak ďalej [4]. V závislosti od okolností, väčšina pacientov s karcinómom žalúdka potrebovať chirurgický zákrok, chemoterapiu a /alebo chemorádioterapiu [5]. Predchádzajúce štúdie ukázali, že rakovina žalúdka je komplexný genetické ochorenie spojené s onkogénov a nádorových supresor [6].

Tetrandrine (C _{38H 42N 2O 6, 622,730 MW ) je bis-benzylisoquinolinových alkaloid izolovaný od sušeného koreňa Hang-Fang-Chi ( Stephanie
tetrandra
S. Moore). V poslednej dobe sa rôzne biologické aktivity tetrandrine boli intenzívne študované, pretože jeho široké použitie v artritídy, arytmie, zápaly, silikózu, rôznych typov nádorov, a reverzné multirezistencii [7,8]. Uvádza sa, že tetrandrine má významný vplyv na tumory, vrátane spomalenia rastu nádoru a predĺženie doby prežitia zvierat a mieru prežitia [9-12]. Tetrandrine spôsobuje blokádu G1 fáze bunkového cyklu a indukuje apoptózu v rôznych typoch buniek. Avšak, presné mechanizmy, ktorými tetrandrine iniciuje apoptózu a inhibuje rast buniek v žalúdočných nádorových buniek zostávajú nejasné [13]. Uvádza sa, že codelivery paclitaxel (PTX) a tetrandrine nanočasticami môže efektívne zvýšiť cytotoxicitu PTX postupnou inhibíciou ROS-závislé Akt dráhy a aktiváciu apoptotických dráh na báze oxidácie terapiu proti karcinómu žalúdka [14]. Avšak, ako terapeutické činidlo, PTX má nevyhnutne závažné vedľajšie účinky, vzhľadom k jeho nešpecifické toxické účinky a špeciálnych rozpúšťadiel, a nádorové bunky sa môžu stať rezistentné voči PTX-indukovanej apoptózy [15-17]. Predchádzajúce štúdie ukázali, že tetrandrine má synergický účinok s chemoterapeutickými činidlami na apoptózy žalúdočných nádorových bunkových línií [18]. Okrem toho, derivát (H1) z tetrandrine vykazuje dobrú odolnosť proti mnohým liekom aktivitu tým, že začne vnútorné dráhu apoptózy a inhibíciu aktivácie ERK1 /2 a AKT1 /2 [19]. Tieto zistenia naznačujú, že by mohol nahradiť tetrandrine PTX ako prvý chemoterapie rakoviny žalúdka.}

Vzhľadom k tomu, tetrandrine má veľký potenciál v liečbe proti rakovine, je dôležité študovať systematicky pochopiť jeho mechanizmus. Preto sa v tejto štúdii sme skúmali možné mechanizmy tetrandrine na ľudských rakovinových bunkách žalúdka in vitro stroje a in vivo
.

materiály a metódy

materiály a činidlá

Tetrandrine bola získaná z Ťiang-Yintao Pharmaceutical Development Company (Jiangxi, Čína). Protilátky boli získané z týchto zdrojov: protilátky proti Bcl-2, Bax, Bcl-XL, kaspasy 3, -8, -9, cytochróm c
Apafi-1 a β-aktínu boli od Santy Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA); anti-Bad a Bak boli od BIOWORLD Technology (St. Louis Park, MN, USA). Reagenčné súpravy TRIzolu bol zakúpený od firmy Invitrogen (Grand Island, NY, USA). MTT (3- (4, 5-dimetyl-thiazol-2-yl) -2, 5-difenyltetrazoliumbromid) bol získaný od spoločnosti Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).

Bunková kultúra

rakovina žalúdka u ľudí bunkové línie BGC-823 bol zakúpený od Šanghaja cell Biology, čínskej akadémie vied (Shanghai, Čína). Bunky boli kultivované v Dulbeccova modifikovanom Eaglovho média (DMEM) (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA), doplnenom 10% fetálnym hovädzím sérom (Hyclone, Logan, UT, USA), 1% penicilínu, 1% streptomycínu v zvlhčenej atmosfére 95% vzduchu a 5% CO _{2 pri 37 ° C.}

životaschopnosť buniek test

životaschopnosť buniek bola meraná testom MTT. V stručnosti, bunky boli schovať do 96-jamkových doštičiek v hustote 1 x 10 ^{4 buniek /jamka. Po 36 hodinách boli bunky ošetrené s alebo bez tetrandrine v rôznych koncentráciách po dobu 24, 48 a 72 h; a fosfátom pufrovaný fyziologický roztok (PBS) slúžila ako negatívna kontrola. Potom sa 20 ul MTT roztoku farbiva (0,5 mg /ml, rozpustený v PBS a filtruje sa cez 0,2 mm membránu) bol pridaný do každej jamky a inkubuje sa pri teplote 37 ° C počas 4 hodín. Potom sa 150 ul dimetylsulfoxidu bolo pridané do každej jamky a doštičky boli inkubované pri teplote 37 ° C počas ďalších 10 min. Absorbancia bola meraná pri 490 nm za použitia 96-jamkové mikrodoštičky čítačky. IC _{50 hodnota bola definovaná ako koncentrácia liečiva, ktorá inhibuje 50% rastu buniek v porovnaní s kontrolou.}}

Western blotting

žalúdočné rakovinové bunky boli dvakrát premyté PBS, a potom 100 ul RIPA Lysis Buffer (Beyotime, Čína) bol pridaný do každej jamky pre lyžu buniek po dobu asi 20 minút. Potom sa zmes odstreďuje pri 12000 g
počas 15 minút, a supernatant sa oddelí. Koncentrácia proteínu bola detekovaná za použitia BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Čína), podľa inštrukcií výrobcu. Celkový proteín sa oddelí pomocou SDS-PAGE na 8%, 10% a 12% polyakrylamidových géloch a prenesené elektroforeticky na polyvinylidendifluoridovou (PVDF) membrány (Millipore, Bedford, MA, USA). Po blokovanie po dobu 2 hodín, alebo cez noc s 5% netučného sušeného mlieka (rozpustené v Tris-pufrovaný fyziologický roztok-Tween 20; TBST), membrány boli inkubované s primárnymi protilátkami (1: 500 - 1: 1000 zriedenie) počas 2 hodín pri teplote pri teplote miestnosti alebo cez noc pri 4 ° C a potom sa premyje trikrát TBST (5 mM Tris-HCl, pH 7,4, 136 mM NaCl, 0,1% Tween 20) pred reakciou s chrenovou peroxidázou (HRP) konjugovanou sekundárnej protilátky (1: 5000 1: 10000) po dobu 1 h pri teplote miestnosti. Po premytí trikrát po dobu 10 minút každý s TBST, boli membrány liečení ECL Western Blotting detekčného činidla.

kvantitatívnej real-time PCR

Celková bunková RNA bola izolovaná pomocou TRIzolu činidla ( Invitrogen) podľa protokolu výrobe a rozpustený v DEPC ošetrenej vode. Koncentrácia celkovej RNA bola meraná pomocou UV absorbancie spektroskopie. Reverzný transkripcie bola vykonaná za použitia RevertAid ™ First Strand cDNA Synthesis Kit (Fermentas MBI, Waltham, MA, USA) po protokolu výrobcu. Novo syntetizované cDNA bola amplifikovaná pomocou PCR (Fermentas). Sekvencia každého primeru použité v tejto štúdii sú uvedené v tabuľke 1. polymerázovej reťazovej reakčnej podmienky sú uvedené v nasledujúcom zozname: 95 ° C počas 3 min, 95 ° C počas 5 min, 58 ° C počas 30 min, a 72 ° C po dobu 30 minút a následne 40 cyklov pri 94 ° C počas 15 sekúnd a 60 ° C po dobu 1 min. Všetky testy boli vykonané v troch opakovaniach.
Génu
sense primer (5 'to 3')
antisencie primer (5 'to 3’)
bcl-2GGATCCAGGATAACGGAGGCCCAGATAGGCACCCAGGGTbaxACCAAGAAGCTGAGCGAGTGTACAAACATGGTCACGGTCTGCbclxlGGCAGGCGACGAGTTTGACCCATCCCGGAAGAGTTCATβ-actinTGGCACCCAGCACAATGAACTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCATable 1. Sekvencia primérov pre génov použitých v tejto štúdii.
CSV stiahnutie CSV

väzby annexinu V-propidium jodid test

V stručnosti, bunky boli vrúbľovať do 6-jamkových doštičiek a spracuje sa s rôznymi koncentrácia tetrandrine po dobu 24 hodín, a PBS slúžil ako negatívna kontrola. Potom boli bunky resuspendované v 500 ul chladného väzbového pufra. Bunkové suspenzie boli zafarbené proti annexinu-v a propidium jodidu (BD Pharmingen ^{TM, Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) podľa inštrukcií výrobcu, a potom sa prietokovou cytometriou analýza bola vykonaná pomocou FACS (Coulter, Becton Dickinson).}

kaspasy-3 aktivita test

Stručne, bunky boli inkubované v 6-jamkové doštičky v koncentrácii 4 x 10 ^{5 /jamka a spracuje sa s uvedenou koncentráciu liečiv. rovnaký objem PBS bola použitá ako negatívna kontrola. kaspasy-3 aktivita sa merala pomocou kaspázy-3 aktivita testovacia súprava (Beyotime, Čína) podľa návodu výrobcu. Absorbancia bola meraná pri 405 nm s použitím čítačky mikrotitračných doštičiek. Všetky experimenty boli vykonané v troch opakovaniach.}

Ethics tvrdenie

Postupy zahŕňajúce zvierat a starostlivosť o ne vykonávali v súlade s pokynmi NIH (NIH Pub. No.85-23, revidované 1996) a boli schválené výborom pre zvierat starostlivosť a používanie pridružených ľudovej nemocnice, Jiangsu univerzity.

pokusy na zvieratách

Ženský akt myši (Balb /c nu /nu), 4-6 týždňov staré, boli získané z pokusného zvieraťa centra čínskej akadémie vied (Shanghai, Čína) a udržiava sa za určitých podmienok bez patogénov v biologickom kabinete v zariadení laboratórnych zvierat Jiangsu univerzity. Zvieratá bola udržiavaná v cykle svetlo-tma 12 h. Teplota v miestnosti udržiavaná na približne 20 ° C a vlhkosť bola udržiavaná na asi 50% v izbe s filtrovaného vzduchu.

Čistenie Tetrandrine podkožných BGC-823 nádorov u myší

Pre stanovenie BALBI /c myši modelu xenoimplantátu humánneho karcinómu žalúdka, BGC-823 bunky v koncentrácii 5,0 x 106/150 ul podali do pravého boku každej Balb /c nahých myší. Približne 10 dní neskôr (veľkosť nádoru dosiahol 120-150 mm3), nahé myši boli náhodne rozdelené do troch skupín (n = 5) a vzhľadom k tomu tieto procedúry: kontrola (liečených fyziologickým roztokom), nízkou dávkou skupina (liečených 40 mg /kg tetrandrine), a skupiny s vysokou dávkou (liečených 120 mg /kg tetrandrine). BALBI /c myši boli injikované intraperitoneálne tetrandrine (200 ul, 40 mg /kg alebo 120 mg /kg), alebo rovnaký objem fyziologického roztoku, raz denne po dobu 3 týždňov, v uvedenom poradí. Veľkosť nádoru sa merala raz za 3 dni v dvoch na seba kolmých rozmeroch sa posuvné meradlá a objem nádoru (TV) bola vypočítaná podľa vzorca: TV = dĺžka (mm) x šírka ^{2 (mm 2) x 0,5 , Relatívny objem nádoru (RTV) bola vypočítaná podľa tohto vzorca: RTV = TV _{t /TV 0, kde TV 0 je objem nádoru v deň 0 a TV t je nádor objem v daný deň t. Medzitým boli zvieratá zvážená dvakrát týždenne. Na konci experimentu boli nádory vyrezané a fixované vo formalínu pre ďalšiu analýzu.}}

imunohistochemická analýza

Vzorky parafínových vyrezané z BGC-823 nahých myší bolo zafarbené s použitím nasledujúcich protilátok : Bcl-2 a Bax (Boster), Bcl-xl, aktivovanej kaspázy-3 a aktivovanej kaspázy-9 (Santa Cruz) pre imunohistochémia. Snímky boli nadobudnuté s fluorescenčným mikroskopom (Carl Zeiss).

Štatistická analýza

Všetky experimenty boli vykonané najmenej trikrát, a všetky dáta bola prezentovaná ako priemer ± štandardná odchýlka (SD). Štatistické rozdiely boli stanovené pomocou jednocestnej ANOVA za použitia programu SPSS 16.0. Hodnota p nižšia ako 0,05 bola považovaná za významnú.

Výsledky

Cytotoxický účinok na tetrandrine BGC-823 buniek

Chemická štruktúra tetrandrine je znázornené na obrázku 1A. Anti-proliferačnej účinok tetrandrine bola skúmaná v bunkách BGC-823 za použitia MTT testu. Ako je znázornené na obrázku 1B, boli bunky ošetrené po dobu 24, 48 a 72 h s rôznymi koncentráciami tetrandrine. Tetrandrine bolo zistené, že významne inhibujú rast BGC-823 buniek od dávky a je závislý na čase. BGC-823 bunky boli významne inhibovaná tetrandrine pri 10 ug /ml ( P Hotel &0,05). IC _{50 hodnota bola 6,104 ± 0,786, 4,471 ± 0,650 a 3,744 ± 0,573 po 24, 48 a 72 h ošetrenie tetrandrine, resp. Tak, 6, 8, a 10 ug /ml boli stanovené ako reprezentatívne koncentrácie v týchto štúdiách.}

Indukcia apoptózy tetrandrine

Tetrandrine-sprostredkovanej anti-rakovinové schopnosti boli hlásené byť spojená s apoptóze [9-12]. V súlade s tým sme skúmali schopnosť tetrandrine indukovanej apoptózy BGC-823 buniek s použitím prietokovej cytometrie testu. Merané prietokovou cytometriou, účinky tetrandrine na BGC-823 bunkové apoptózy sú znázornené na obrázku 2A a B, s tetrandrine ošetrenie 24 hodín pri teplote 0, 6, 8, a 10 ug /ml vedie k 4,35%, 11,4% , 17,72% a 32,34% apoptotických buniek, v danom poradí, a tetrandrine (8 ug /ml) počas 0, 12, 24, a 48 hodín vedie k 3,4%, 6,64%, 19,15% a 25,85% apoptotických buniek, v danom poradí (Obrázok 2C a D). Tieto údaje jasne ukázali, že indukovanú apoptózu v tetrandrine BGC-823 buniek od dávky a je závislý na čase. Počty apoptotických buniek sa zvýšil spolu s koncentráciou tetrandrine a dobe aplikácie.

Tetrandrine sprostredkovanej expresie Bcl-2 členmi rodiny

Pre zistenie viac špecifický mechanizmus na indukciu apoptózy v BGC -823 bunky podľa tetrandrine sme zistili expresiu proteínov apoptózy súvisiace s westernovým prenosom a ich úrovni mRNA v reálnom čase (RT) -PCR. Tu sme študovali expresiu Bax, zlý, Bak, Bcl-2 a Bcl-XL v BGC-823 buniek ošetrených tetrandrine. Po 24 hodinách expozície tetrandrine, Bax, Bad, a expresie Bak proteínu sa v závislosti od dávky zvyšuje, zatiaľ čo Bcl-2 a Bcl-xl expresie proteínu bola v závislosti od dávky sa znížil (obrázok 3A). Tiež sme zistili, že by mohli tetrandrine upregulate expresiu Bax a znižuje expresiu expresiu Bcl-2 v závislosti na čase (obrázok 3B). Na určenie, či tetrandrine malo vplyv na transkripciu génu bcl-2, Bcl-XL a Bax, ich expresie mRNA bola skúmaná pomocou RT-PCR (obrázok 3C). Výsledky RT-PCR jasne zhodovala s údajmi publikovanými na obrázku 3A.

Tetrandrine indukovanú apoptózu cez mitochondriálna dráhy v BGC-823 buniek

Ak chcete preskúmať, či tetrandrine indukovanej apoptózy bol spájaný s aktivácia kaspázy členov, sme merali expresiu kaspázy v BGC-823 buniek ošetrených rôznymi koncentráciami tetrandrine metódou Western blot. Výsledky ukázali zvýšenie v závislosti na dávke štiepeného kaspázy-3 a odštiepi sa kaspázy-9 v tetrandrine- ošetrených buniek (obrázok 4A). Avšak, nedetegovateľné hladiny štiepené kaspázy-3 a štiepi kaspázy-9 boli nájdené v bunkách v neprítomnosti liečby tetrandrine (dáta nie sú uvedené). Pre ďalšie stanovenie úlohy aktivácie kaspázy v tetrandrine indukovanej apoptóze, BGC-823 bunky boli vopred ošetrené s pan-kaspázy inhibítora z-VAD-fmk (10 uM) po dobu 4 hodín, a potom sa spracuje s 8 ug /ml tetrandrine na 24. h. V porovnaní s kontrolou, relatívnej aktivity kaspázy-3 boli v BGC 823 buniek ošetrených iba tetrandrine (obrázok 4B) zvyšuje. Navyše uvoľňovanie cytochrómu c
bolo v závislosti na dávke závislým zvýšil o tetrandrine. Reprezentatívny prietokovej cytometrie výsledok ukázal, že bunky vopred ošetrené s z-VAD-fmk silne znížená tetrandrine indukovanú apoptózu, a že bol zistený len malý počet apoptotických buniek (obrázok 4C). Ďalej sme skúmali hladinu expresie cytochrómu cytoplazmatickej c
, ktorý sa uvoľňuje z mitochondrií do cytoplazmy počas apoptózy, pôsobila na apoptotické proteázy aktivujúce faktor-1 (Apafi 1) zvýšením väzby Apaf- 1 na ATP /dATP, a indukované kaspázy-9-dependentný aktivácia kaspázy-3 [20-22]. Bolo zistené, že tetrandrine významne zvýšil expresiu cytoplazmatickej cytochrómu c stroje a Apafi-1 v BGC-823 bunkách spôsobom závislým od dávky (obrázok 4D). Spoločne tieto zistenia navrhol, že mitochondrie sprostredkovaná kaspázy kaskáda cesta bola zapojená do tetrandrine indukovanej apoptózy.

Protinádorový účinok tetrandrine na BGC-823 implantátoch u holých myší

Vzhľadom k tomu, tetrandrine bolo zistené významne spomaľuje rast BGC-823 buniek in vitro
sme ďalej vyhodnotili protinádorový účinok tetrandrine in vivo
so zavedenými modelmi štepov. Ako je znázornené na obrázku 5A, mohol tetrandrine účinne inhibovať rast nádoru po 24-dennej liečby a. Na konci 24 dní, priemerné objemy nádorov boli 493.06 mm ^{3 a 1243.00 mm 3 vo vysokej skupine s dávkou a nízkou dávkovú skupinu, v danom poradí, čo zodpovedá 80.52% a 50,9% mierou inhibícia v porovnaní s kontrolou skupinu. Navyše, hmotnosť nádoru bola znížená v dôsledku liečby tetrandrine na oboch koncentráciách (obrázok 5B &Co. tabuľka 2). Tento výsledok ukázal, že vysoká dávka tetrandrine mal silnejší protinádorový účinok než nízkou dávkou na modeli BGC-823 xenotransplantátov.
Skupina (n = 5)
objem nádoru (mm 3)
inhibičné Rate (%)
hmotnosti nádoru (g) ​​
inhibičné Rate (%)
control2531.78 ± 153.251.194 ± 0.10Tet (40 mg /kg) 1243,00 ± 55,19 ** * 50.900.641 ± 0,06 *** 46.31Tet (120 mg /kg) 493,06 ± 145,63 *** 80.520.298 ± 0,09 *** 75.04Table 2. inhibícia tetrandrine (Tet) na rast nádoru u nahých myší
*** P Hotel <.; 0,001 oproti
kontrolná skupina. CSV na stiahnutie vo formáte CSV}

Tetrandrine-indukovanú apoptózu v BGC-823 xenoimplantátům

Imunohistochémia analýza nádorového tkaniva vyrezané z BGC-823 xenografted holých myší znovu potvrdil, že apoptóza bola uskutočnená v tetrandrine liečených nádorov a že mitochondriálnej dráha odohraných významnú úlohu pri apoptóze. Tam bolo päť nahých myší v každej skupine. Pozorovali sme, že expresia Bcl-2 a Bcl-XL sa znižuje, zatiaľ čo hladiny proteínovej Bax, aktivovanej kaspázy-3 a aktivovaný kaspasy-9 boli významne zvýšená tetrandrine (obrázok 6). Všetky tieto nálezy potvrdzujú, že silne tetrandrine môže indukovať apoptózu, v súlade s in vitro
štúdii.

Diskusia

rakovina žalúdka, štvrtú najčastejšie diagnostikovaná nádor za rakovinu pľúc, prsníka, hrubého čreva, konečníka a spôsobuje takmer milión ročne úmrtí a bol druhou príčinou úmrtia súvisiace s rakovinou po celom svete [23-26]. Chirurgia, chemorádiotarapia, a molekulárnej cielené terapie boli hlavné liečebnej stratégie v liečbe rakoviny žalúdka [27]. Aj keď chirurgická resekcia je najúčinnejšia následná liečba, výsledky sú konzistentné a obmedzené recidívy a chemorezistence. Konvenčné chemoterapeutickej lieky, ako je napríklad PTX, 5-fluóruracilu sú a nádorových buniek cisplatina zabiť indukciu apoptózy a autofagie; ale nádorové bunky môžu stať rezistentné voči apoptóze vyvolanej liekmi [17,28,29].

Uvádza sa, že tetrandrine má silnú protinádorovú aktivitu ako in vitro stroje a v vivo
v mnohých nádorových bunkách, ako sú napríklad bunky karcinómu A549 ľudských pľúc, rakoviny močového mechúra, bunky karcinómu hrubého čreva, buniek hepatómy, a tak ďalej [9-12]. Predchádzajúce štúdie ukázali, že tetrandrine by mohli zohrávať sľubnú úlohu tým, že synergické interakcie s chemoterapeutikami prípadne ich synergický efekt na indukciu apoptózy a downregulating chemoterapeutických agentov gény asociované v MKN-28 bunkách a BGC-823 buniek [18]. Avšak, nebol zistený mechanizmus tetrandrine na ľudských rakovinových bunkách žalúdočnej BGC-823. V tejto štúdii sme preukázali, že tetrandrine vykazovali silnú protinádorovú aktivitu na ľudskú rakoviny žalúdka in vitro stroje a in vivo
objasnenie základné mechanizmy pôsobenia.

Po prvé, naša výsledky ukázali, že tetrandrine účinne inhibuje proliferáciu BGC-823 bunky testované MTT od dávky a je závislý na čase. Medzitým, IC _{50. rokov tetrandrine bolo približne 6,1, 4,5 a 3,7 ug /ml v BGC823 buniek po dobu 24, 48 a 72 hodinách, v danom poradí. V súlade s predchádzajúcimi štúdiami, chemoterapeutickej lieky zabiť pevných nádorov hlavne indukciou apoptózy [30-32]. Zistili sme, že apoptóza bola vyvolaná tetrandrine v závislosti od koncentrácie pomocou analýzy prietokovou cytometriou so zvýšenými skorých apoptotických buniek a neskoré apoptotických buniek v nádorových bunkách žalúdočnej BGC-823.}

v cicavčích bunkách, apoptóza môže byť spustená vonkajšie cesta aktivuje receptorom smrti a vnútorného systému upravená Bcl-2 členmi rodiny a kaspázy kaskád v mitochondrii [33,34]. V našej štúdii tetrandrine zvýšil expresiu pre-apoptotických proteínov Bax, zlý, a Bak a zníženej hladiny proteínu Bcl-2 a Bcl-XL. Preto zvýšená pomer expresie anti-apoptotického a pre proteín, ako je napríklad pomer Bax /Bcl-2, by viedlo k strate potenciálu mitochondriálnej membrány. Nefunkčnosť mitochondrie správy cytochrómu c
, ktorý sa hromadí v cytosolu a tvorí komplex s Apafi-1. Do vnútorného systému, ako efektor, kaspázy-3 sa štiepi aktiváciou kaspázy-9 [35-37]. V tejto štúdii sme ukázali, že kaspázy-9 a kaspázy-3 boli aktivované tetrandrine. Inhibítor kaspázy pán-z-VAD-fmk znižuje apoptosu v BGC-823 buniek, čo naznačuje, že mitochondriálnej systém zohráva ústrednú úlohu v tetrandrine indukovanej apoptózy.

Uvádza sa, že by mohli tetrandrine zvrátiť odolnosť proti mnohým chemoterapeutickej lieky, ako napríklad PTX a doxorubicín v KBv200 a K562 nahých myší xenograftových modely [38,39]. Tetrandrine tiež má silnú schopnosť inhibovať angiogenézu v gliómov u potkanov [40]. Okrem toho, naše výsledky ukazujú, že tetrandrine vykazovali silnú protinádorovú účinnosť inhibíciou rastu nádoru a indukciu apoptózy v zavedenej BGC-823 nahých myšiam modelu s xenoštěpem.

Naše výsledky preukázali, že významne tetrandrine indukovanú apoptózu v ľudskej rakovina žalúdka BGC-823 bunky a jej modely nahý myšou xenoimplantátových. Tetrandrine indukovaná apoptóza bola spojená s aktiváciou vnútornou apoptózy dráhy. Na základe týchto výsledkov by tetrandrine majú veľký potenciál v liečbe ľudskej rakoviny žalúdka v budúcnosti.

Poďakovanie

Radi by sme poďakovali členom klinickej medicíny Ústavu Jiangsu univerzity pre ich technickú pomoc.

• Ploche ONE: SULF2 Metylácia je spojená s In vitro Cisplatina citlivosti a klinickej účinnosti, rakovina žalúdka u pacientov liečených Modified FOLFOX režime
• Ploche ONE: Down-regulácia Claudin-18 je spojená s proliferatívnou a invazívne potenciálu rakoviny žalúdka u invazívnej fronte