PLOS ONE: Hypoxi Stimulerar EMT av Gastric cancerceller genom autokrin TGFp Signaling

Abstrakt

Epithelial mesenkymala övergång (EMT) anses vara korrelerad med malignitet av cancerceller och ansvarig för cancerinvasion och metastaser. Vi rapporterade tidigare att fjärrmetastaser var associerad med hypoxi i magcancer. Vi undersökte därför effekten av hypoxiska tillstånd på EMT av gastric cancerceller. Gastriska cancerceller odlades i normoxi (21% O _{2) eller hypoxi (1% O 2) under 24 timmar. EMT utvärderades som den procentuella andelen av spindelformade celler i totala celler. Effekt av transformerande tillväxtfaktor β1 (TGFβ1) eller tyrosinkinashämmare på EMT utvärderades. Uttrycksnivån för TGFβ1 Köpa och TGFβR
utvärderades genom realtid RT-PCR. Den TGFβ1 produktion från cancerceller mättes genom ELISA. Hypoxi stimulerade EMT av OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler, men inte det av OCUM-2M celler. Uttrycksnivån för TGFβ1
mRNA enligt hypoxi var betydligt högre än i normoxi i alla tre cellinjer. Uttrycksnivån för TGFβR
mRNA signifikant ökade med hypoxi i OCUM-2MD3 celler, men inte i OCUM-2M celler. TGFβR inhibitor, SB431542 eller Ki26894 signifikant undertryckt EMT av OCUM-2MD3 och OCUM-12. TGFβ1 produktion från OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler var signifikant ökade i hypoxi i jämförelse med det under normoxi. Dessa fynd kan tyda på att hypoxi stimulerar EMT av gastric cancerceller via autokrin TGFp /TGFβR signalering}

Citation. Matsuoka J, Yashiro M, Doi Y, Fuyuhiro Y, Kato Y, Shinto O, et al. (2013) Hypoxi Stimulerar EMT av Gastric cancerceller genom autokrin TGF-signalering. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10.1371 /journal.pone.0062310

Redaktör: Claudio M. Costa-Neto, University of São Paulo, Brasilien

emottagen: 19 oktober, 2012; Accepteras: 19 mars 2013, Publicerad: 17 maj 2013

Copyright: © 2013 Matsuoka et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

Finansiering:. Denna studie stöddes delvis av National Cancer Center Research och utvecklingsfonden (23-A-9), och av Grants-in stöd för vetenskaplig forskning (KAKENHI, nr. 20.591.573, 22.390.262 och 23.390.329) från ministeriet för utbildning, vetenskap, sport, kultur och teknik i Japan. Finansiärerna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet

Konkurrerande intressen. Författarna har följande intressen. KS, TS, och AM är anställda i Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. Ki26894, som användes i denna studie, är en produkt av Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. Det finns inga ytterligare patent, produkter under utveckling eller marknadsförda produkter att deklarera . Detta ändrar inte författarnas anslutning till alla PLOS ONE politik för att dela data och material, som beskrivs på nätet i vägledningen för författare.

Introduktion

Epithelial mesenkymala övergång (EMT) kännetecknas av förändringar i cellmorfologi under vilken epitelceller förvärva mesenkymala egenskaper samtidigt förlora cell-cell interaktioner och apicobasal polaritet [1], [2]. I epitelceller cancer är EMT erkänd som en av de mekanismer som ansvarar för att inleda de invasiva och metastatiska beteenden [3] - [5]

Det finns en hypoxisk miljö i vissa regioner av fasta cancrar som visar snabb tillväxt eftersom angiogenes. i karcinom är heterogen [6]. Hypoxi anses vara förknippad med aggressiva tumör fenotyper av gastriska karcinom [7], [8], inklusive metastatisk cancercellers förmåga [6], [9]. Kliniska och experimentella data ger också belägg för ett samband mellan hypoxisk miljö och dålig prognos [10], [11]. Det är därför viktigt för den framtida utvecklingen av cancerbehandlingar för att klargöra mekanismen för metastaser induceras av hypoxi.

Det har rapporterats att olika lösliga faktorer, bland annat transformerande tillväxtfaktor-β1 (TGFβ1) [12], [ ,,,0],13], epidermal tillväxtfaktor (EGF) [14], insulinliknande tillväxtfaktor-1 (IGF1) [15], fibroblasttillväxtfaktor (FGF) [16], hepatocyt tillväxtfaktor (HGF) [17] var korrelerade med EMT . TGFp signaler har en viktig roll i olika aspekter av metastatisk spridning av cancerceller, såsom migration, invasion, och EMT [12], [13]. De TGFp-ligander binder till TGFp-receptor typ II (TGFβRII), som sedan bildar ett komplex med antingen TGFβR typ I eller II. TGFβR typ I (TGFβRI) överför signaler i cellen via andra budbärare Smad proteiner [13], [18]. Nedströms signaler fortplantas genom TGFβRI, vilket fosforylerar receptorreglerade Smad proteiner [19], [20]

Flera studier har rapporterat att en hypoxisk tillstånd kan framkalla EMT av cancerceller [21] - [24]., men den molekylära mekanismen som ansvarar för EMT i en hypoxisk tillstånd är fortfarande oklart. Vi undersökte därför effekten av hypoxi på morfologiska egenskaperna hos gastric cancerceller för att klargöra de mekanismer som är ansvariga för hypoxi-inducerad EMT.

Material och metoder

cellodling och Cellinjer

Sju gastric cancercellinjer användes. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], var KATO-III [28], och MKN-45 [29] härrör från diffus typ magcancer. MKN-74 [29] och MKN-7 [29] härleddes från intestinal-typ. OCUM-2M, OCUM-2MD3 och OCUM-12 var establised i vårt laboratorium, som tidigare rapporterats [25] - [27]. I korthet OCUM-12was härrör från ascites i samband med diffus typ magcancer, och OCUM-2MD3 celler, en dotter cellinje med hög potential för peritoneal metastas, etablerades från OCUM-2M celler med användning av orthotopic tumörmodell, en föräldra cellinje ascites associerad med diffus-typ magkarcinom. De andra cellinjer erhölls från JCRB cellbanken (Osaka, Japan) eller the American Type Culture Collection (Rockville, MD). Cellerna odlades vid 37 ° C i 21% O _{2 (normoxi) eller 1% O 2 (hypoxi). Hypoxiska betingelser upprätthölls med hjälp av en modulär inkubator kammare (Hirasawa, Tokyo, Japan) med 5% CO 2 och 1% O 2 balanserad med N 2 gas. Odlingsmediet bestod av Dulbeccos modifierade Eagles medium (DMEM;. Nikken Bio, Osaka, Japan) med 10% fetalt bovint serum (. Nichirei Bio), 100 lU /ml penicillin (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 ^ g /ml streptomycin (ICN Biomedicals), och 0,5 mM natriumpyruvat (Cambrex, Walkersville, MD).}

morfologiska förändringar

cancer~~POS=TRUNC celler~~POS=HEADCOMP odlades under normoxiska eller hypoxiska betingelser under 24 h, och cellmorfologin observerades mikroskopiskt. EMT bestämdes när polygonal eller spindelform hittades i cancerceller genom faskontrastmikroskop. Frekvensen av EMT utvärderades genom graden av polygonala eller spindelformade celler i alla cancerceller; EMT ränta = antalet polygonala eller spindelform celler /totala antalet celler x 100 (%).

Effekter av olika lösliga faktorer på morfologiska förändringar

Vi undersökte effekterna av olika lösliga faktorer , inklusive EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, NJ), IGF1 (Pepro Tec), vaskulär endotel-tillväxtfaktor (VEGF; R &D-system, Minneapolis, MN), basic-FGF (Sigma, Saint Louis, MO), blodplättar härrörande tillväxtfaktor BB homodimer (PDGF-BB, Pepro Tech), HGF (Pepro Tech), TGFβ1 (kung Brewing, Kakogawa, Japan), på morfologin av cancerceller. Cellerna odlades i DMEM innehållande en av ovanstående faktorer vid den erfordrade koncentrationen vid 37 ° C i normoxi. Cellmorfologi undersöktes efter 24 h. Experiment utfördes för varje faktor i duplikat.

Effekter av neutraliserande antikroppar på morfologiska förändringar

Vi använde neutraliserande antikroppar, såsom anti-HGF-antikropp (Genzyme Techne, MPLS, MN, USA), anti-TGF-antikropp (R &D-system), anti-PDGF-BB (Genzyme), anti-FGF7 (R &D-system), anti-VEGFR3 (R &D-system). Celler odlades i DMEM innehållande en av ovanstående antikroppar vid 100 | ig /ml vid 37 ° C i hypoxi. Cellmorfologi undersöktes efter 24 h.

Effekt av olika phospholylation hämmare på morfologiska förändringar

Efter cellerna nådde semi-konfluens cellerna läggs till TGFp eller varje inhibitor och inkuberas under hypoxiska tillstånd eller normoxi under 24 timmar. Därefter tillsattes morfologiska fynd undersöktes i jämförelse med kontrollen. Fem små syntetiska phospholylation hämmare, Ki26894 (TGFβRI inhibitor, 10 ^ M; Kirin Pharma, Mishima, Japan), SB431542 (TGFβRI hämmare, 10 iM, Sigma, Saint Louis, MO), Sunitinib (SU11248, 20 nM, en tyrosinkinashämmare mot VEGFR, PDGFR, c-KIT, FGFR2 och FLT3, LKT Laboratories, St. Pail, MN), PD173074 (FGF /VEGF-receptor-tyrosinkinas-hämmare, 5 nM; Santa Cruz, CA), Lapatinib (GW572016, 10 nM; ett tyrosinkinashämmare mot EGFR och ErbB2, Toronto Research Chemicals), och PHA665752 (c-MET-inhibitor, 2 ^ M;. Pfizer, San Diego, CA, USA) användes

Kvantitativ realtids-omvänt transkriptas-polymeras kedjereaktion (RT-PCR) Review

Kvantitativ RT-PCR utfördes för att undersöka TGFβ1
, TGFβRI, TGFβRII, Köpa och Vimentin
mRNA uttryck. Cancerceller inkuberas under normoxiska betingelser och under hypoxiska betingelser under 24 timmar. Efter inkubering totalt cellulärt RNA extraherades med användning av Trizol-reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA) enligt tillverkarens instruktioner. Efter avlägsnande av genomiskt DNA genom DNas var cDNA framställt från 2 | j, g RNA med Maloney mus-leukemivirus omvänt transkriptas (Invitrogen) med användning av slumpmässiga primrar (Invitrogen). Att bestämma faldiga förändringar av varje gen, var realtids-RT-PCR utfördes på ABI Prism 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA), med användning av kommersiellt tillgängliga genuttryck analyser för TGFβ1
(Hs00998130,), TGFβRI
(Hs00610319), TGFβRII
(Hs00559661), vimentin
(Hs00958116), Twist
(Hs01675818), Zeb1
(Hs 00.232.783), Snail1
(Hs00195591), VEGFA
(Hs00900055). PCR utfördes vid 95 ° C under 15 s och 60 ° C under 60 s under 40 cykler. Glyceraldehyd-3-fosfatdehydrogenas (GAPDH) användes som en intern standard för att normalisera mRNA-nivåer för skillnader i provkoncentration och lastning. Vik förändringar i uttrycket av varje mål-mRNA i förhållande till GAPDH beräknades baserat på tröskeln cykeln (Ct) som 2 ^{-Δ (ΔCt), där ΔCt = Ct mål- Ct GAPDH och Δ (ΔCt) = ΔCt _{hypoxi-ΔCt normoxi. Kvantitativa PCR-reaktioner utfördes i tre exemplar.}}

Western blot-analys

För att undersöka effekten av hypoxi på Smad2 fosforylering, cancerceller inkuberades i normoxiska eller hypoxiska betingelser under 24 timmar, respektive. Cellerna lyserades i en lyseringsbuffert, och alikvoter innehållande 50 ^ g av totalt protein utsattes för natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores; proteinbanden överfördes till ett polyvinylidendifluoridmembran (Millipore, Billerica, MA). Membranet inkuberades i TBS-T (10 mM TBS och 0,05% Tween 20) kompletterat med 5% fettfri mjölk eller 5% bovint albumin (Sigma) vid rumstemperatur under 1 h. Härnäst tillsattes membranet placerades i en TBS-T-lösning innehållande den primära antikroppen p-Smad2 (Ser ^{465/467; 1: 1000; Cell Signa Technology) eller Smad2 /3 (1: 1000; Cell Signa Technology), vimentin (1: 1000; Cell Signaling Technology), anti-βactin (1: 1000; Sigma) och fick reagera vid 4 ° C över natten. Sedan sattes varje antikropp tvättades tre gånger med TBS-T under 10 min, och en peroxidas-märkt sekundär antikropp (GE Healthcare, Buckinghamsire, UK) som är reaktiv med den primära antikroppen tillsattes. De band detekterades med användning av ett förstärkt kemiluminescens-system (Wako, Osaka, Japan).}

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) Review

TGFβ1 produktion från cancerceller mättes med en kvantitativ sandwich enzym immun teknik med hjälp av Quantikine human TGFβ1 ELISA-kit, enligt tillverkarens instruktioner (R &D-system). Cancerceller inkuberades enligt hypoxi eller normoxi för 24 timmar, därefter ersattes mediet till 3 ml serumfritt DMEM. Cellerna inkuberas under hypoxi eller normoxi, för ytterligare 24 timmar. Villkorlig medium (CM) uppsamlades från varje skål och centrifugerades vid 1000 g
under 5 min. TGFβ1 nivå av serumfritt CM mättes med användning av ELISA-kit. ELISA upptäcks både aktiva och latenta TGF.

Statistisk analys

Jämförelser mellan dataset gjordes med Students t
-testet eller Kruskal-Wallis envägs ANOVA med leden följt av Dunns multipla jämförelsetest. Skillnader ansågs vara statistiskt signifikant när P-värdet var. ≪ 0,05

Resultat

Effekter av hypoxi på cancercellen morfologi

en hypoxisk tillstånd ökat signifikant antalet av polygonala eller spolformad celler som genomgår EMT bland OCUM-2MD3 eller OCUM-12 celler, men inte bland OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74, eller KATO-III-celler (Fig. 1A och Fig. S1). Cell morfologi OCUM-2MD3 och OCUM-12 började förändras efter 4 timmar i hypoxisk kulturen. Efter 12 h odling, var en ökad frekvens av EMT sett i båda cellinjerna. EMT takten OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler var högst vid 24 h hypoxisk kultur (Fig. 1B). Eftersom de morfologiska förändringar sågs vid 24 h av odling under hypoxi, var de molekylära mekanismerna för EMT analyseras vid 24 h odling under hypoxiska betingelser genom användning OCUM-2MD3, OCUM-12, och OCUM-2M-celler.

effekterna av olika tillväxtfaktorer på cancer cellmorfologi

Lösliga faktorer användes vid koncentrationer av 10 eller 100 ng /ml. OCUM-2MD3 och OCUM-12-celler blev spolformad efter tillsats av TGFβ1 eller HGF, men inte efter tillsats av EGF, FGF2, FGF7, IGF1, VEGF eller PDGF-BB efter 24 timmar under normoxi (tabell 1). Däremot OCUM-2M celler visade ingen morfologisk förändring efter tillsats av alla faktorer (Fig. 2).

Effekter av neutraliserande antikroppar på cancercellen morfologi enligt hypoxi

EMT induceras av hypoxi delvis inhiberas av anti-TGF-β1 antikropp vid 100 mikrogram /ml, men inte av anti-HGF-antikropp (tabell 2).

Effekter av hypoxi på TGFβ1
, TGFβRI
och TGFβRII
mRNA uttryck för gastric cancerceller

uttrycksnivån för TGFp
var signifikant (p < 0,001) ökade under hypoxisk villkor i alla OCUM -2MD3, OCUM-12, och OCUM-2M-celler, i jämförelse med den nivå enligt normoxi (Fig. 3A). De uttrycksnivåer av TGFβRI Köpa och TGFβRII
ökade signifikant i en hypoxisk villkor i OCUM-2MD3 celler. Däremot nivåer av TGFβR1 Mössor och TGFβR2
uttryck minskade avsevärt under en hypoxisk tillstånd OCUM-2M celler (Fig. 3B).

Effekt av hypoxi på TGFβ1 produktion frigörs från gastric cancerceller

TGFβ1 produktion från OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler var signifikant (p < 0,001) ökade i hypoxi jämfört med normoxi, men inte det från OCUM-2M celler (Fig 3C. ).

Effekter av hypoxi på Smad2 fosforylering av magcancer cellinjer

i OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler, Smad2 fosforylering ökades i en hypoxisk tillstånd, jämfört med att under en normoxiska skick. Däremot var Smad2 fosforylering inte ökat i en hypoxisk tillstånd OCUM-2M celler (Fig. 4).

Effekter av fosforylering kinashämmare på EMT och vimentin uttryck i hypoxi

Endera av den TGFβR fosforylering hämmare, Ki26894 och SB431542, hämmade de morfologiska förändringar i OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler under en hypoxisk tillstånd, men tre andra hämmare, Lapatinib, Sunitinib och PHA665752, inte (figur 5A, 5B). Å andra sidan, ingen av inhibitorerna hade någon effekt på morfologin hos OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler under normoxi (data ej visade). Uttrycksnivån för vimentin
, som användes som en EMT markör, signifikant ökade med hypoxi och minskades något av TGFβR hämmare Ki26894 och SB431542 (figur 5C). Vimentin proteinnivå ökades också i hypoxi och minskades något av TGFβR hämmare Ki26894 och SB431542 (figur 5D).

Effekter av hypoxisk tillstånd på de faktorer som är förknippade med EMT.

hypoxisk skick ökat betydligt VEGF-A
mRNA-nivån i OCUM-2M, OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler. Uttrycksnivån för Twist
eller Zeb1
var signifikant ökade med hypoxi i OCUM-2MD3 och OCUM-12-celler, men minskade i OCUM-2M celler. Det ökade uttrycket av Twist
eller Zeb1
minskades med endera av de TGFβR inhibitorer Ki26894 och SB431542 i OCUM-12-celler. Hypoxisk villkor inte påverkas på expressionsnivån av Snail1
(Figur 6).

Diskussion

På senare tid har flera studier rapporterat att en hypoxisk mikro omgivande solida tumörceller kanske bidra till cancerutveckling [30] - [34]. Men de molekylära mekanismer som ansvarar för cancerutveckling i hypoxi fortfarande oklara. Det har rapporterats att hypoxi är en av de utlösande faktorerna för EMT [35]. I den aktuella studien, en hypoxisk tillstånd inducerade EMT i diffus-typ gastric cancercellinjer OCUM-2MD3 och OCUM-12, men inte i intestinal-typ celler. Diffus typ magsäckscancer kännetecknas av högre malignitet än intestinal typ magcancer [36]. EMT potential av cancerceller under hypoxi kan vara en av anledningarna till den höga malign potential diffusa-typ magsäckscancer.

Många studier har rapporterat att flera molekyler kan påverka EMT av cancerceller, inklusive TGFp [23 ], [37], EGF [38], och PDGF [39]. I föreliggande studie, TGFp stimulerad EMT av OCUM-2MD3 och OCUM-12-celler, men EGF och PDGF inte gjorde det. Dessutom har EMT induktion i en hypoxisk tillstånd minskade signifikant genom anti-TGF neutraliserande antikropp eller TGFβR fosforylering inhibitorer i både OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler. Sammantaget indikerar dessa resultat att produktionsnivån av TGFp i cancerceller ökade signifikant i hypoxi och uttrycksnivåer av TGFβR och Smad2 fosforylering ökades med hypoxi. Vimentin är en karakteristisk beståndsdel i mesenkymala celler och är inte vanligtvis uttrycks i epitelceller. Eftersom uttrycket av vimentin
i epitelceller spelar en viktig roll i EMT genom interaktion med aktin och andra intermediära filament [40], vimentin användes som en EMT markör i denna studie. Uttrycksnivån för vimentin
signifikant ökade med hypoxi, och minskade av TGFβR fosforylering hämmare Ki26894 och SB431542. Dessa upptäckter antydde att EMT under ett hypoxiskt tillstånd är associerad med den autokrina TGFp /TGFβR signalering i diffus-typ magcancer. Flera studier har rapporterat korrelationerna mellan EMT och TGFp signalering i hypoxi. [2], [21], [23], [32], [37] I magcancer, har det rapporterats att EMT är korrelerad med malignitet av cancerceller och ansvarig för cancerinvasion och metastaser. Men de mekanismer som ansvarar för EMT av gastric cancerceller fortfarande oklara. Detta dokument klargöras att EMT av gastric cancerceller inducerades via TGFp signalering i hypoxi. TGFβR hämmare kan alltså vara lovande medel för behandling av magsäckscancer metastaser.

Hypoxi stimulerade EMT av OCUM-2MD3 celler, men inte det av OCUM-2M celler. EMT har varit inblandad i att främja cancerinvasion och metastaser. Medan OCUM-2MD3 är ett "dotter" cellinje av OCUM-2M [25], [34], OCUM-2MD3 celler har högre potential för metastas till bukhinnan i nakna möss än OCUM-2M-celler [25], [34] . Cancerceller fria att migrera i bukhålan exponeras för hypoxi på grund av avsaknaden av en proximal matningskärl [41]. Uttrycksnivån för TGFβ1
mRNA enligt hypoxi var betydligt högre än i normoxi i alla tre cellinjer. I motsats, uttrycksnivån för TGFβRI Köpa och TGFβRII
mRNA signifikant ökade med hypoxi i OCUM-2MD3 celler, men inte i OCUM-2M celler. De olika svaren från TGFβR
uttryck mellan normoxi och hypoxi kan vara en av de viktigaste orsakerna till hypoxi-inducerad EMT. Vi rapporterade tidigare att gastric cancerceller enligt hypoxi visade EMT och höga flytt och invasiva aktiviteter jämfört med cancerceller i normoxi [34]. Den uppreglering av EMT av hypoxiska cancerceller kan vara en av anledningarna till den högre potentialen för metastaser till bukhinnan i OCUM-2MD3 celler jämfört med OCUM-2M celler.

hypoxisk tillstånd ökade signifikant uttrycksnivå av Twist Mössor och Zeb1
i OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler, men inte som i OCUM-2M celler. Hypoxi ökande aktivitet Twist Mössor och Zeb1
uttryck minskade med TGFβR hämmare (Ki26894 och SB431542) i OCUM-12 celler. EMT i hypoxi kan delvis regleras av transkriptionsfaktorer, Twist Mössor och Zeb1.

Även HGF påverkade cancercellen morfologi i OCUM-2MD3 och OCUM-12 celler, hypoxiinducerad EMT inhiberades inte av anti-HGF-neutraliserande antikropp eller c-Met-inhibitor i antingen OCUM-2MD3 eller OCUM-12-celler. HGF-produktion detekterades inte i OCUM-2MD3 eller OCUM-12 celler under antingen hypoxi och normoxi (data visas ej). De flesta av HGF är härledd från stromala celler i magcancer [42]. Medan HGF kan inte spela en viktig roll för hypoxi-inducerad EMT, kan HGF stimulerar EMT av cancerceller via cancer stromal interaktion.

hypoxi-inducerad EMT av OCUM-2MD3 celler delvis hämmas av TGFβR hämmare , men flera andra hämmare, inklusive c-Met-hämmare, PDGF-hämmare, EGFR-hämmare, och VEGFR-hämmare, hade ingen effekt på den hypoxi-inducerad EMT i denna studie. Dessa fynd tyder på att andra faktorer (s) kan vara förknippade med hypoxi-inducerad EMT i vissa cancerceller. I framtida studier, kommer det att bli nödvändigt att undersöka andra nya faktorer som kan förändra cancer morfologi.

Sammanfattningsvis autokrin TGF /TGFβR signalering enligt hypoxi kan vara en av de faktorer som är förknippade med den aggressiva fenotypen av EMT i gastric karcinomceller. TGFp /TGFβR signalerings hämmare verkar vara terapeutiskt lovande i magcancer.

Bakgrundsinformation
figur S1.
morfologiska förändringar av gastric celler under en hypoxisk tillstånd. I MKN-7, MKN-45, MKN-74, och KATO-III, var morfologiska förändringar inte finns under hypoxi
doi:. 10,1371 /journal.pone.0062310.s001
(TIF) Review

• PLOS ONE: januskinas 2 Polymorphisms är förknippade med risk hos patienter med magcancer i en kinesiska befolkningen
• PLOS ONE: Multiple-till-flera relationer mellan MicroRNAs och målgener i Gastric Cancer