PLOS ONE: Hypoxie Stimule l'EMT de cellules de cancer gastrique par autocrine TGFß Signaling

Résumé

transition mésenchymateuses épithélial (EMT) est considéré comme étant en corrélation avec la malignité des cellules cancéreuses et responsable de l'invasion du cancer et des métastases. Nous avons précédemment rapporté que des métastases à distance a été associée à une hypoxie dans le cancer gastrique. Nous avons étudié donc l'effet de l'état hypoxique sur EMT de cellules de cancer gastrique. les cellules cancéreuses gastriques ont été cultivées en normoxie (21% O _{2) ou à l'hypoxie (1% d'O 2) pendant 24 h. EMT a été évaluée comme le pourcentage de cellules en forme de fuseau dans les cellules totales. Β1 pour effet de transformer le facteur de croissance (TGFβ1) ou des inhibiteurs de la tyrosine kinase sur l'OGD a été évaluée. Le niveau d'expression TGFβ1
et TGFβR
a été évaluée par le temps réel RT-PCR. La production de TGFβ1 cellules cancéreuses a été mesurée par ELISA. Hypoxie stimulée EMT de OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules, mais pas celle des cellules OCUM-2M. Le niveau d'expression de l'ARNm
TGFβ1 sous hypoxie était significativement plus élevée que celle sous normoxie dans toutes trois lignées cellulaires. Le niveau de expression TGFβR de l'ARNm a été significativement augmentée par l'hypoxie dans les cellules OCUM-2MD3, mais pas dans les cellules OCUM-2M. inhibiteur TGFβR, SB431542 ou Ki26894, supprimé de manière significative EMT de OCUM-2MD3 et OCUM-12. production TGFβ1 de OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules a été significativement augmentée en hypoxie par rapport à celle sous normoxie. Ces résultats pourraient suggérer que l'hypoxie stimule l'EMT de cellules de cancer gastrique via autocrine signalisation TGF /TGFβR}

Citation:. Matsuoka J, Yashiro M, Doi Y, Fuyuhiro Y, Y Kato, Shintoïsme O, et al. (2013) Hypoxie Stimule l'EMT de cellules de cancer gastrique par autocrine TGFß Signaling. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10.1371 /journal.pone.0062310

Editeur: Claudio M. Costa-Neto, Université de São Paulo, Brésil

Reçu le 19 Octobre 2012; Accepté le 19 Mars 2013; Publié: 17 mai 2013

Droit d'auteur: © 2013 Matsuoka et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Cette étude a été soutenu en partie par le Fonds pour la recherche et le développement national Cancer Center (23-A-9), ainsi que par des subventions-à l'aide de la recherche scientifique (KAKENHI, n. 20591573, 22390262 et 23390329) du Ministère de l'éducation, des sciences, sports, Culture et technologie du Japon. Les bailleurs de fonds n'a joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:. Les auteurs ont les intérêts suivants. KS, TS, et AM sont des employés de Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. Ki26894, qui a été utilisé dans cette étude, est un produit de Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd Il n'y a pas d'autres brevets, produits en développement ou des produits commercialisés à déclarer . Cela ne modifie pas l'adhésion des auteurs à tous les PLOS ONE politiques sur les données et les matériaux de partage, comme détaillé en ligne dans le guide pour les auteurs.

Introduction

transition mésenchymateuses épithélial (EMT) est caractérisée par des changements dans la morphologie des cellules au cours de laquelle les cellules épithéliales acquérir des propriétés mésenchymateuses tout en perdant les interactions cellule-cellule et la polarité apicobasal [1], [2]. Dans les cancers épithéliaux, EMT est reconnu comme l'un des mécanismes responsables de l'initiation des comportements invasives et métastatiques [3] - [5]

Un environnement hypoxique existe dans certaines régions de cancers solides qui montrent une croissance rapide en raison de l'angiogenèse. dans les carcinomes est hétérogène [6]. Hypoxie est considérée comme étant associée à des phénotypes de tumeurs agressives des carcinomes gastriques [7], [8], y compris l'aptitude métastatique des cellules cancéreuses [6], [9]. Les données cliniques et expérimentales fournissent aussi des preuves d'une association entre l'environnement hypoxique et de mauvais pronostic [10], [11]. Il est donc important pour le développement futur des traitements du cancer afin de clarifier le mécanisme de métastases induites par l'hypoxie.

Il a été rapporté que divers facteurs solubles, y compris le facteur de transformation-β1 de croissance (TGFβ1) [12], [ ,,,0],13], le facteur de croissance épidermique (EGF) [14], analogue à l'insuline facteur de croissance 1 (IGF-1) [15], le facteur de croissance des fibroblastes (FGF) [16], le facteur de croissance des hépatocytes (HGF) [17] ont été corrélées avec EMT . signaux TGFß ont un rôle important dans divers aspects de la propagation métastatique des cellules cancéreuses, comme la migration, l'invasion et EMT [12], [13]. Les ligands se lient à TGFß TGFß récepteur de type II (TGFβRII), qui forme alors un complexe avec les deux types TGFβR I ou II. TGFβR type I (TGFβRI) transmet des signaux dans la cellule par l'intermédiaire de seconds messagers Smad protéines [13], [18]. signaux en aval sont propagées à travers TGFβRI, qui phosphoryle les protéines Smad récepteurs réglementés [19], [20]

Plusieurs études ont rapporté qu'une condition hypoxique pourrait induire EMT des cellules cancéreuses [21] - [24]., mais le mécanisme moléculaire responsable de l'EMT dans une condition hypoxique reste incertaine. Nous avons étudié donc l'effet de l'hypoxie sur les caractéristiques morphologiques des cellules de cancer gastrique afin de clarifier les mécanismes responsables de la EMT induite par l'hypoxie.

Matériaux et méthodes

Culture cellulaire et cellulaires lignes

Sept lignées cellulaires de cancer gastrique ont été utilisées. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], KATO-III [28], et MKN-45 [29] ont été dérivées de carcinome gastrique de type diffus. MKN-74 [29] et MKN-7 [29] ont été dérivés de type intestinal. OCUM-2M, OCUM-2MD3 et OCUM-12 ont été establised dans notre laboratoire, comme indiqué précédemment [25] - [27]. En bref, OCUM-12was dérivés de ascites associés à de type diffus carcinome gastrique, et les cellules OCUM-2MD3, une lignée de cellules de fille avec un potentiel élevé de métastases péritonéales, ont été établies à partir de cellules OCUM-2M en utilisant le modèle de tumeur orthotopique, une ascite de lignée cellulaire parentale associé à un carcinome gastrique de type diffus. Les autres lignées cellulaires ont été obtenues à partir de la banque de cellules JCRB (Osaka, Japon) ou de l'American Type Culture Collection (Rockville, MD). Les cellules ont été cultivées à 37 ° C dans 21% de O _{2 (normoxie), soit 1% d'O 2 (hypoxie). conditions hypoxiques ont été maintenues à l'aide d'une chambre de l'incubateur modulaire (Hirasawa, Tokyo, Japon) avec 5% de CO 2 et 1% O 2 équilibré avec N 2 gaz. Le milieu de culture est composée de Eagle modifié par du milieu de Dulbecco (DMEM;. Nikken Bio, Osaka, Japon) avec 10% de sérum bovin fœtal (. Nichirei Bio), 100 UI /ml de pénicilline (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 ug /ml de streptomycine (ICN Biomedicals) et pyruvate de sodium à 0,5 mM (Cambrex, Walkersville, MD).}

morphologique change

les cellules cancéreuses ont été cultivées dans normoxique ou conditions hypoxiques pendant 24 h, et la morphologie des cellules a été observée au microscope. EMT a été déterminée lorsque la forme polygonale ou de la broche a été trouvée dans les cellules cancéreuses en contraste de phase microscope. La fréquence de l'EMT a été évaluée par le taux de cellules polygonales ou en forme de fuseau dans toutes les cellules cancéreuses; taux EMT = le nombre de cellules de forme polygonale ou broche /nombre total de cellules x 100 (%).

Effets de divers facteurs solubles sur les changements morphologiques

Nous avons examiné les effets de divers facteurs solubles , y compris l'EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, NJ), IGF1 (Pepro Tec), facteur de croissance des cellules endothéliales vasculaires (VEGF; R & D Systems, Minneapolis, MN), base-FGF (Sigma, Saint Louis, MO), plaquettes le facteur de croissance BB -derived homodimère (PDGF-BB; Pepro Tech), HGF (Pepro Tech), TGFβ1 (king Brewing, Kakogawa, Japon), sur la morphologie des cellules cancéreuses. Les cellules ont été cultivées dans DMEM contenant l'un des facteurs ci-dessus à la concentration requise à 37 ° C en normoxie. La morphologie cellulaire a été examinée après 24 h. Des expériences ont été effectuées pour chaque facteur en double.

Effets des anticorps neutralisants sur les changements morphologiques

Nous utilisé des anticorps neutralisants, tels que les anti-HGF anticorps (Genzyme technè, MPLS, MN, USA), un anticorps anti-TGFß (R & D Systems), anti-PDGF-BB (Genzyme), anti-FGF7 (R & D Systems), anti-VEGFR3 (R & D Systems). Les cellules ont été cultivées dans DMEM contenant l'un des anticorps ci-dessus à 100 pg /ml à 37 ° C en hypoxie. La morphologie cellulaire a été examinée après 24 h.

Effet de divers inhibiteurs de phospholylation sur les changements morphologiques

Après que les cellules atteint semi- confluence, les cellules ont été ajoutées à la TGFß ou chaque inhibiteur et on incube dans des conditions hypoxiques ou normoxie pendant 24 h. Ensuite, les résultats morphologiques ont été examinés en comparaison avec le témoin. Cinq inhibiteurs de phospholylation petites synthétiques, Ki26894 (inhibiteur TGFβRI, 10 uM; Kirin Pharma, Mishima, Japon), SB431542 (inhibiteur TGFβRI, 10 uM, Sigma, Saint Louis, MO), sunitinib (SU11248, 20 nM, un inhibiteur de tyrosine kinase contre VEGFR, PDGFR, c-KIT, FGFR2 et FLT3, LKT Laboratories, St. Pail, MN), PD173074 (inhibiteur de FGF /VEGF récepteur tyrosine kinase, 5 nM, Santa Cruz, CA), le lapatinib (GW572016, 10 nM; un inhibiteur de la tyrosine kinase contre EGFR et ErbB2, Toronto Research Chemicals), et PHA665752 (inhibiteur-MET c, 2 uM;. Pfizer, San Diego, CA, USA) ont été utilisés

quantitative en temps réel transcriptase inverse-polymérase réaction en chaîne (RT-PCR)

RT-PCR quantitative a été réalisée pour examiner TGFβ1
, TGFβRI, TGFβRII,
et expressions vimentine de l'ARNm. Les cellules cancéreuses ont été mises en incubation dans des conditions normoxiques et dans des conditions hypoxiques pendant 24 h. Après incubation, l'ARN cellulaire total a été extrait en utilisant le réactif Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA) selon les instructions du fabricant. Après élimination de l'ADN génomique par la DNase, l'ADNc a été préparé à partir de 2 ug d'ARN avec Maloney virus de la leucémie de la souris transcriptase (Invitrogen) en utilisant des amorces aléatoires (Invitrogen) inverse. Pour déterminer les changements de pliage dans chaque gène, en temps réel RT-PCR a été réalisée sur l'ABI Prism 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA), en utilisant commercialement gènes disponibles des essais d'expression pour TGFβ1
(Hs00998130,), (Hs00610319)
TGFβRI, TGFβRII
(Hs00559661), vimentine
(Hs00958116), Twist
(Hs01675818), ZEB1
(Hs 00232783), (Hs00195591)
Snail1, VEGFA
(Hs00900055). La PCR a été réalisée à 95 ° C pendant 15 s et 60 ° C pendant 60 s pendant 40 cycles. Glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH) a été utilisé comme étalon interne pour normaliser les niveaux d'ARNm des différences de concentration de l'échantillon et le chargement. Pliez les changements dans l'expression de chaque ARNm cible par rapport à GAPDH a été calculé sur la base du cycle de seuil (Ct) que 2 ^{-Δ (ACt), où ACt = Ct Target- Ct GAPDH et Δ (ACt) = ACt _{hypoxie-ACt normoxie. Les réactions de PCR quantitatives ont été réalisées en triple.}}

Western blot analyse

Pour examiner l'effet de l'hypoxie sur Smad2 phosphorylation, les cellules cancéreuses ont été incubés dans normoxique ou conditions hypoxiques pendant 24 h, respectivement. Les cellules ont été lysées dans un tampon de lyse, et des aliquotes contenant 50 ug de protéine totale ont été soumis à une électrophorèse sur gel de polyacrylamide-dodécylsulfate de sodium; les bandes de protéines ont été transférées sur une membrane de difluorure de polyvinylidène (Millipore, Billerica, MA). La membrane a été incubée dans du TBS-T (10 mM TBS et 0,05% de Tween 20) additionné de 5% de l'albumine non grasse du lait ou de 5% bovin (Sigma) à la température ambiante pendant 1 h. Ensuite, la membrane a été placée dans une solution TBS-T contenant l'anticorps primaire p-Smad2 (Ser ^{465/467; 1: 1000; Cell Signaling Technology) ou Smad2 /3 (1: 1000; Cell Signaling Technology), vimentine (1: 1000; Cell Signaling Technology), anti-βactin (1: 1000; Sigma) et on laisse réagir à 4 ° C pendant une nuit. Ensuite, chaque anticorps a été lavé trois fois avec du TBS-T pendant 10 minutes, et un anticorps secondaire marqué à la péroxydase (GE Healthcare, Buckinghamsire, UK), réactif avec l'anticorps primaire a été ajouté. Les bandes ont été détectées en utilisant un système de chimioluminescence amélioré (Wako, Osaka, Japon).}

dosage immuno-enzymatique (ELISA)

La production de TGFβ1 cellules cancéreuses a été mesurée par une enzyme de type sandwich quantitatif technique de dosage immunologique utilisant un kit ELISA Quantikine humain TGFβ1, selon les instructions manufacturer`s (R & D Systems). Les cellules cancéreuses ont été incubées sous hypoxie ou une normoxie pendant 24 h, puis le milieu a été remplacé à 3 ml DMEM dépourvu de sérum. Les cellules ont été incubées sous hypoxie ou normoxie, pendant encore 24 h. moyen conditionnel (CM) a été prélevé sur chaque plat et centrifugé à 1000 g
pendant 5 min. niveau TGFβ1 de CM sans sérum a été mesurée en utilisant le kit ELISA. ELISA détectée à la fois le TGFß actif et latent.

L'analyse statistique

Les comparaisons entre les ensembles de données ont été faites avec de l'étudiant t
-test ou Kruskal-Wallis ANOVA à une voie par rangs suivie par un test de comparaisons multiples de Dunn. Les différences ont été considérées comme étant statistiquement significative lorsque la valeur de P était <. <0,05
les h3> de

Résultats Effets de l'hypoxie sur la morphologie des cellules cancéreuses

Une condition hypoxique augmenté de manière significative le nombre des cellules polygonales ou fusiformes subissant EMT entre OCUM-2MD3 ou OCUM-12 cellules, mais pas chez les cellules KATO-III (Fig. 1A et figure OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74, ou. S1). La morphologie des cellules de OCUM-2MD3 et OCUM-12 a commencé à changer après 4 h dans la culture hypoxique. Après 12 h de culture, une augmentation du taux EMT a été observée dans les deux lignées cellulaires. Le taux de OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules EMT était le plus élevé à 24 h hypoxique culture (Fig. 1B). Étant donné que les modifications morphologiques étaient évidentes à 24 h de la culture sous hypoxie, les mécanismes moléculaires de la EMT ont été analysés à 24 h de culture dans des conditions hypoxiques en utilisant OCUM-2MD3, OCUM-12, et OCUM-2M cellules.

effets de différents facteurs de croissance sur la morphologie des cellules cancéreuses

des facteurs solubles ont été utilisés à des concentrations de 10 ou 100 ng /ml. OCUM-2MD3 et OCUM-12, les cellules sont devenues fusiforme après l'addition de TGFβ1 ou de HGF, mais pas après l'ajout de l'EGF, le FGF2, FGF7, IGF-1, le VEGF ou le PDGF-BB après 24 h sous normoxie (tableau 1). En revanche, les cellules OCUM-2M ne présentaient aucun changement morphologique après l'addition de tous les facteurs (fig. 2).

Effets d'anticorps neutralisants sur la morphologie des cellules cancéreuses en hypoxie

EMT induite par l'hypoxie a été partiellement inhibée par l'anticorps anti-TGF-β1 à 100 pg /ml, mais pas par anti-HGF anticorps (tableau 2).

Effets de l'hypoxie sur TGFβ1
, TGFβRI
, et TGFβRII
expression de l'ARNm des cellules gastriques de cancer

Le niveau de TGFß
était significativement (p < 0,001) a augmenté dans une condition hypoxique dans tous OCUM -2MD3 cellules, OCUM-12 et OCUM-2M, en comparaison avec le niveau inférieur à la normoxie (Fig. 3A). Les niveaux d'expression TGFβRI
et TGFβRII
ont été significativement augmentés dans une condition hypoxique dans les cellules OCUM-2MD3. En revanche, les niveaux de TGFβR1
et TGFβR2 de l'expression ont été significativement diminué dans une condition hypoxique dans les cellules OCUM-2M (Fig. 3B).

Effet de l'hypoxie sur production TGFβ1 libérée par les cellules gastriques de cancer

production TGFβ1 de OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules était significativement (p < 0,001) a augmenté en hypoxie par rapport à normoxie, mais pas à partir de cellules OCUM-2M (figure 3C. ).

Effets de l'hypoxie sur Smad2 phosphorylation de lignées cellulaires de cancer gastrique

en OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules, Smad2 phosphorylation a été augmentée dans une condition hypoxique, comparée à celle sous un normoxique condition. En revanche, Smad2 phosphorylation n'a pas augmenté dans une condition hypoxique dans les cellules OCUM-2M (Fig. 4).

Effets des inhibiteurs de la phosphorylation de la kinase sur EMT et l'expression de la vimentine dans l'hypoxie

Soit la les inhibiteurs de la phosphorylation TGFβR, Ki26894 et SB431542, inhibé les changements morphologiques des OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules sous une condition hypoxique, mais trois autres inhibiteurs, lapatinib, sunitinib et PHA665752, ne l'ont pas (figure 5A, 5B). D'autre part, aucun des inhibiteurs n'a eu d'effet sur la morphologie des OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules sous normoxie (données non présentées). Le niveau de vimentine
, qui a été utilisé comme marqueur d'EMT, l'expression a été significativement augmentée par l'hypoxie, et a été diminuée par l'un des inhibiteurs de TGFβR Ki26894 et SB431542 (Figure 5C). niveau de protéine vimentine a également augmenté en hypoxie, et a été diminuée par l'un des inhibiteurs de TGFβR Ki26894 et SB431542 (Figure 5D).

Effets de l'état hypoxique sur les facteurs associés à l'EMT.

hypoxique état a augmenté de manière significative VEGF-A
niveau d'ARNm dans OCUM-2M, OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules. Le niveau d'expression Twist
ou ZEB1
a été significativement augmentée par l'hypoxie dans OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules, mais a été diminuée dans les cellules OCUM-2M. L'expression accrue de Twist
ou ZEB1
a été diminué par l'un des inhibiteurs de TGFβR Ki26894 et SB431542 dans OCUM-12 cellules. état hypoxique n'a pas affecté le niveau d'expression (la figure 6) de Snail1

Discussion

Récemment, plusieurs études ont rapporté que un microenvironnement hypoxique entourant les cellules tumorales solides pourrait. contribuer au cancer progression [30] - [34]. Cependant, les mécanismes moléculaires responsables de la progression du cancer dans l'hypoxie restent floues. Il a été rapporté que l'hypoxie est l'un des déclencheurs pour EMT [35]. Dans la présente étude, un EMT état hypoxique induit dans les lignes cellulaires de cancer gastrique de type diffus OCUM-2MD3 et OCUM-12, mais pas dans les cellules de type intestinal. cancer gastrique de type diffus se caractérise par une malignité plus élevé que le cancer gastrique de type intestinal [36]. Le potentiel d'EMT des cellules cancéreuses en hypoxie pourrait être l'une des raisons pour le potentiel de malignité élevé de cancer gastrique de type diffus.

De nombreuses études ont rapporté que plusieurs molécules pourraient affecter EMT des cellules cancéreuses, y compris TGFß [23 ], [37], EGF [38], et PDGF [39]. Dans la présente étude, TGFß stimulée EMT de OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules, mais EGF et PDGF n'a pas. En outre, EMT induction sous une condition hypoxique a été significativement diminuée par les anti-TGF anticorps neutralisants ou les inhibiteurs de la phosphorylation TGFβR dans les deux OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules. Pris ensemble, ces résultats indiquent que le niveau de production de TGFß dans les cellules cancéreuses a été significativement augmentée sous hypoxie et les niveaux de phosphorylation de Smad2 et TGFβR expression a été augmentée par l'hypoxie. La vimentine est un élément caractéristique des cellules mésenchymateuses et ne sont généralement pas exprimés dans des cellules épithéliales. Parce que l'expression de vimentine
dans les cellules épithéliales joue un rôle essentiel dans EMT par l'interaction avec l'actine et d'autres filaments intermédiaires [40], la vimentine a été utilisé comme un marqueur d'EMT dans cette étude. Le niveau de expression vimentine
a été significativement augmentée par l'hypoxie, et a été diminuée par les inhibiteurs de la phosphorylation TGFβR Ki26894 et SB431542. Ces résultats suggèrent que OGD dans des conditions hypoxiques est associée à la TGFß autocrine /TGFβR de signalisation dans le cancer gastrique de type diffus. Plusieurs études ont rapporté les corrélations entre EMT et TGFß de signalisation dans l'hypoxie. [2], [21], [23], [32], [37] Dans le cancer gastrique, il a été rapporté que OGD est en corrélation avec une tumeur maligne des cellules cancéreuses et responsables de cancers envahissants et les métastases. Cependant, les mécanismes responsables de la EMT des cellules cancéreuses gastriques restent floues. Ce document précise que EMT de cellules de cancer gastrique a été induite par TGF signalisation sous hypoxie. Les inhibiteurs TGFβR pourraient donc être des agents prometteurs pour le traitement de métastases du cancer de l'estomac.

Hypoxie des cellules stimulées EMT-OCUM 2MD3, mais pas celle des cellules OCUM-2M. EMT a été impliquée dans la promotion de cancers envahissants et les métastases. Alors que OCUM-2MD3 est une lignée cellulaire "fille" de OCUM-2M [25], [34], les cellules OCUM-2MD3 ont un potentiel plus élevé pour les métastases du péritoine chez la souris nude que les cellules OCUM-2M [25], [34] . Les cellules cancéreuses libre de migrer dans la cavité peritoneale sont exposés à une hypoxie due à l'absence d'un récipient d'alimentation proximal [41]. Le niveau d'expression de l'ARNm
TGFβ1 sous hypoxie était significativement plus élevée que celle sous normoxie dans les trois lignées cellulaires. En revanche, le niveau d'expression TGFβRI
et TGFβRII
ARNm a été significativement augmentée par l'hypoxie dans les cellules OCUM-2MD3, mais pas dans les cellules OCUM-2M. Les différentes réponses de TGFβR de l'expression entre normoxie et hypoxie pourrait être l'une des principales raisons de l'EMT induite par l'hypoxie. Nous avons précédemment rapporté que les cellules de cancer de l'estomac en hypoxie ont montré EMT et les activités migratoires et invasives élevés en comparaison avec les cellules cancéreuses en normoxie [34]. La régulation à la hausse des EMT des cellules cancéreuses hypoxiques pourrait être l'une des raisons pour lesquelles le potentiel plus élevé pour les métastases au péritoine dans les cellules OCUM-2MD3 par rapport aux cellules OCUM-2M.

état hypoxique a augmenté de manière significative le niveau d'expression de Twist
et ZEB1
dans OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules, mais pas dans les cellules OCUM-2M. L'activité de l'hypoxie croissante de Twist
et ZEB1 de l'expression a diminué avec les inhibiteurs TGFβR (Ki26894 et SB431542) dans OCUM-12 cellules. EMT en hypoxie pourrait être en partie régulée par des facteurs de transcription, Twist
et ZEB1.

Bien que HGF affecté la morphologie des cellules cancéreuses dans OCUM-2MD3 et OCUM-12 cellules, EMT induite par l'hypoxie n'a pas été inhibée par anti-HGF anticorps neutralisants ou d'un inhibiteur de c-Met soit OCUM-2MD3 ou OCUM-12 cellules. production HGF n'a été détecté dans OCUM-2MD3 ou OCUM-12 cellules sous soit hypoxie et normoxie (données non présentées). La plupart d'entre HGF est dérivé de cellules de stroma dans le cancer gastrique [42]. Alors que HGF pourrait ne pas jouer un rôle important pour les EMT induite par l'hypoxie, HGF pourrait stimuler EMT des cellules cancéreuses via l'interaction de cancer stromal
.

L'EMT induite par l'hypoxie des cellules OCUM-2MD3 a été partiellement inhibée par les inhibiteurs de TGFβR mais divers autres inhibiteurs, y compris un inhibiteur de c-Met, un inhibiteur de PDGF, un inhibiteur de l'EGFR, et un inhibiteur de VEGFR, n'a eu aucun effet sur l'OGD induite par l'hypoxie dans cette étude. Ces résultats suggèrent que d'autres facteurs (s) pourrait être associé à EMT induite par l'hypoxie dans certaines cellules cancéreuses. Dans les études futures, il sera nécessaire d'examiner d'autres nouveaux facteurs qui peuvent modifier la morphologie du cancer
.

En conclusion, le autocrine TGFß /TGFβR signalisation sous hypoxie pourrait être l'un des facteurs associés avec le phénotype agressif de l'EMT dans des cellules de carcinome gastrique. les inhibiteurs de signalisation TGF /TGFβR semblent être thérapeutiquement prometteurs dans le cancer gastrique.

Renseignements à l'appui
Figure S1. changements
morphologiques des cellules gastriques dans une condition hypoxique. Dans MKN-7, MKN-45, MKN-74, et KATO-III, les changements morphologiques sont introuvables sous hypoxie
doi:. 10.1371 /journal.pone.0062310.s001
(TIF)

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